香烟烟雾提取物

摘要： 目的探究香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对BEAS-2B细胞生长和炎性介质IL-6、CCL11、MCP-1、IL-13分泌的影响。方法CSE制备并质控后,用不同浓度CSE(0.1%,1%,3%)处理气道上皮细胞BEAS-2B,采用CCK-8法检测细胞增殖,以酶联免疫吸附剂测定细胞培养上清液中IL-6、CCL11、MCP-1、IL-13的表达。结果对照组与其他实验组相比,处理24 h后,3%CSE处理组的细胞增长缓慢,CSE处理时间越长(48 h与72 h),细胞生长速度越慢。3%CSE处理48 h和72 h组细胞增殖率显著降低(均P0.05)。结论香烟烟雾影响细胞生长与增殖,并抑制IL-6、CCL11和MCP-1炎症介质释放,可导致慢阻肺的发生发展。

摘要： 目的本实验旨在利用转录组测序技术探索参与香烟烟雾提取物(CSE)诱导16HBE细胞MUC5AC上调的信号通路及其分子机制,为寻找新的慢性阻塞性肺疾病(COPD)黏液高分泌药物作用靶点提供理论依据。方法利用转录组测序技术检测CSE引起16HBE细胞差异表达的基因(DEGs),通过生物信息学分析挖掘出可能参与CSE诱导16HBE细胞MUC5AC上调的信号通路及相关基因。利用RT⁃qPCR技术验证所筛选的信号通路中相关基因转录水平;利用信号通路激动剂及siRNA干扰技术分别验证该信号通路及相关基因是否参与CSE诱导的16HBE细胞MUC5AC上调过程。结果转录组测序共检测到2567个DEGs,生物信息学分析结果显示16HBE细胞中MAPK信号通路、WNT信号通路、PI3K⁃Akt等信号通路在受到CSE刺激后表达异常。RT⁃qPCR结果显示CSE刺激16HBE后WNT4、WNT5B、WNT6、WNT10A基因的转录水平较对照组分别下调了0.885、0.893、0.705、0.618倍(P<0.05),WNT9A较对照组上调3.727倍(P<0.05),与转录组测序结果一致。激活经典WNT信号通路后,16HBE细胞MUC5AC转录水平较对照组上调3.197倍(P=0.0313)。而在小分子干扰实验中,WNT5B siRNA组+CSE组MUC5AC mRNA较阴性对照+CSE组上调2.092倍(P=0.0162)。结论非经典WNT信号通路中的WNT5B在CSE刺激16HBE细胞后下调,并参与CSE诱导的MUC5AC的表达上调。

摘要： 目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)影响小鼠骨骼肌细胞生成的机制.方法:用2％马血清诱导C2C12成肌细胞分化成骨骼肌细胞复制体外骨骼肌再生模型,实验分为正常(N)组(不加任何干预培养6 d)和CSE组(加入终浓度为0.2％CSE,隔2 d换液并加CSE).通过细胞免疫荧光法检测骨骼肌细胞标志物MyHC蛋白表达,以鉴定C2C12成肌细胞是否分化形成骨骼肌细胞.Western blotting法检测MyHC和分化指标MyoD、Myogenin以及衰老因子P53、P21、P16蛋白表达,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测Ⅰ型肌纤维MyHC7 mRNA和Ⅱ型肌纤维MyHC4 mRNA表达.结果:免疫荧光显示C2C12成肌细胞分化6 d后其细胞质被染成红色,成功分化为骨骼肌细胞.与N组比较,CSE组MyHC蛋白及MyHC4mRNA、MyHC7mRNA水平下降,MyoD、Myogenin蛋白表达量降低,P53、P21、P16蛋白表达量升高.结论:CSE抑制小鼠骨骼肌细胞再生,其机制可能与肌细胞分化能力减弱、激活P53途径诱导细胞衰老有关.

摘要： 目的 研究白头翁皂苷B4对香烟烟雾(CS)诱导的慢性阻塞性肺病(COPD)及癌前病变的影响并探讨作用机制.方法 80只C57BL/6小鼠,雌雄各半,通过连续CS诱导法建立COPD小鼠模型.在造模第9周,按照体重将小鼠随机分为正常组、CS诱导组、白头翁皂苷B41.5,3和6 mg·kg-1组,阳性对照药地塞米松1.5 mg·kg-1组.熏烟前1 h给药,持续4周.造模及给药结束后,采用肺功能仪测定小鼠肺功能参数的变化;高通量蛋白芯片技术测定支气管肺泡灌洗液中炎症因子的含量;HE染色观察肺组织病理变化及上皮细胞增生情况;PCR法测定小鼠肺组织中转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)基因表达水平以及基质金属蛋白酶2(MMP2),MMP9,MMP12和MMP抑制剂(TIMP1)的表达;采用试剂盒测定小鼠血浆中髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;免疫组织化学法测定肺组织中抑癌基因(p53)、增殖细胞核抗原(ki67)以及核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)的表达;Western印迹法检测小鼠肺组织中DNA甲基转移酶(Dnmt1)、脆性组氨酸三联体(FHIT)、抑癌基因CDKN2A/P16蛋白表达水平.结果 白头翁皂苷B4能够显著降低吸气时间(Ti)、肺阻力(LR)(P<0.05),升高最大呼气流速(PEF)(P<0.05):白头翁皂苷B4可缓解炎症细胞浸润情况,并能够降低支气管肺泡灌洗液中炎症因子IL-2,IL-5,IL-18和IL-10含量(P<0.01),显著下调小鼠肺组织中炎症因子TGF-β,TNF-α和IL-1β基因表达水平(P<0.01),显著降低MMP2和MMP12基因表达,升高MMP9、TIMP1基因表达水平(P<0.01);白头翁皂苷B4给药组能够不同程度降低MDA含量及MPO活性,同时能够显著提升GSH-Px活性(P<0.05,P<0.01);免疫组织化学实验结果表明,白头翁皂苷B43和6 mg·kg-1组均能够显著上调P53蛋白表达(P<0.01);白头翁皂苷B4对Dnmt1和Cdkn2a/P16蛋白表达无影响,可显著下调FHIT蛋白表达水平(P<0.01).结论 白头翁皂苷B4对COPD小鼠肺功能具有一定程度改善作用,能够通过平衡小鼠肺组织中蛋白酶与抗蛋白酶表达,降低氧化应激水平,改善肺组织氧化应激进而起到保护作用,并有抑制癌前病变的作用趋势.

摘要： 目的 观察不同条件香烟烟雾提取物(CSE)作用于人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察CSE对可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)表达的影响.方法 选用第4代～第6代HUVECs,将其接种于培养板中,将0％、2.5％、5.0％及10.0％的CSE与HUVECs共同孵育,8 h后收集各浓度组上清液;将选出的5.0％CSE与HUVECs分别孵育0 h、4 h、8 h、12 h及24 h,分别收集各组上清液.将收集的上清液采用酶联免疫吸附法测定sEPCR表达变化.结果 不同浓度CSE作用于HUVECs 8 h后,与0％CSE比较,5.0％、10.0％CSE组sEPCR表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05).5.0％CSE与HUVECs分别孵育不同时间,8 h、12 h及24 h sEPCR表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 CSE可损伤血管内皮细胞,引起sEPCR升高,降低蛋白C/活化蛋白C活性,影响凝血功能,从而增加血栓发生率.

摘要： 目的 观察香烟烟雾提取物(CSE)对人支气管上皮细胞16HBE中肿瘤坏死因子超家族成员14(LIGHT)及其受体LTβR和HVEM基因表达的影响.方法 将体外培养的16HBE细胞分为干预组和对照组,干预组分别加1％、2％、3％、4％、5％CSE培养48 h,或以3％CSE分别培养6、12、24、36、48 h;对照组加同样体积的无血清DMEM处理.收集对照组和干预组不同浓度和不同作用时点的细胞,采用real-time PCR法检测LIGHT、LTβR、HVEM mRNA.结果 与对照组比较,干预组CSE作用16HBE细胞48 h后LIGHT LTβR mRNA表达升高,分别于3％ ～5％、2％ ～5％CSE时差异有统计学意义(P均<0.05);干预组1％ ～4％CSE作用16HBE细胞48 h后HVEM mRNA表达升高(P均<0.05),3％CSE时到达峰值,5％CSE时HVEM mRNA表达较对照组降低(P<0.05).与对照组比较,3％CSE作用16HBE细胞后各时点LIGHT、LTβR mRNA表达逐渐升高,分别于36、48 h和24、36、48 h时差异有统计学意义(P均<0.05);3％CSE作用16HBE细胞48 h时HVEM mRNA表达升高(P<0.01),其余时点表达变化不显著.结论 随着CSE浓度升高和作用时间延长,可引起16HBE细胞LIGHT、LTβR、HVEM基因表达的改变.

摘要： 目的 探讨空气颗粒物(PM)及香烟烟雾提取物(CSE)对人肺泡上皮细胞(A549细胞)和单核细胞(THP-1细胞)源性巨噬细胞功能的影响.方法 采用不同浓度的PM与CSE单独或叠加体外刺激A549细胞和THP-1细胞,应用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验检测炎症因子表达,实时聚合酶链式反应检测巨噬细胞极化标志物,免疫蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin、claudin的表达.结果 与空白对照组比较,0.5％CSE、50 mg/LPM单独刺激即可抑制A549细胞增殖;二者叠加刺激后,较CSE单独刺激组能够进一步抑制该细胞增殖活性,促进细胞凋亡;同时,在CSE存在时,PM可进一步促进A549细胞和THP-1细胞产生的炎症因子白细胞介素6及白细胞介素1β.PM单独或与CSE叠加均可降低A549细胞表达occludin.实时聚合酶链式反应结果显示,CSE与PM叠加进一步促进THP-1细胞表达CD80 mRNA.结论 PM能够进一步加重CSE暴露所导致的气道上皮抑制增殖、促进凋亡、炎症及巨噬细胞向M1型极化.

摘要： 目的 探讨右美托咪定(DEX)对慢性阻塞性肺损伤(COPD)大鼠模型的保护作用及机制.方法 气道内滴注脂多糖联合烟熏28天构建COPD大鼠模型,大鼠分为4组,即对照组、COPD组、COPD+DEX组和COPD+DEX+EX527组.检测大鼠的肺功能、肺泡灌洗液中炎症细胞和因子含量、肺组织形态结构、NLRP3炎症体和沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路相关蛋白的表达.结果 与COPD组相比较,COPD+DEX组大鼠的0.3秒用力呼气量占用力肺活量比值和呼气峰流速升高(P<0.01);肺泡平均截距降低(P<0.01);肺泡灌洗液中白细胞总数、中性粒细胞比例、IL-1β和TNF-α含量降低(P<0.01);肺组织中NL-RP3、Cleaved caspase-1和ASC蛋白的表达降低(P<0.01);肺组织中SIRT1蛋白的表达升高,Ac-FOXO1蛋白的表达降低(P<0.01).SIRT1抑制剂EX527可以不同程度的阻断DEX的上述治疗效应.结论 在COPD大鼠模型中,右美托咪定可以降低肺泡腔扩大,抑制中性粒细胞浸润和NLRP3炎性体表达,其保护作用可能与SIRT1信号通路的激活有关.

摘要： 目的:观察五味子乙素(Sch B)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期细胞模型的影响,并初步探讨其作用机制.方法:用香烟烟雾提取物(CSE)联合脂多糖(LPS)作用于肺上皮细胞株A549,制备COPD急性加重期体外模型,并给予相应浓度的五味子乙素进行干预,通过MTT法测定各组细胞存活率、RT-PCR法测定细胞炎症因子白细胞介素8(IL-8)、环氧合酶2(COX-2)的mRNA水平;ELISA法测定细胞上清中IL-8、COX-2水平;Western blot法测定细胞磷酸化NF-κB蛋白水平.结果:4％CSE联合0.1μg/ml LPS作用24 h能够促进肺上皮细胞增殖,炎症因子表达明显上升,给予Sch B能够明显抑制CSE联合LPS对细胞的增殖作用,改善细胞炎症状态;降低损伤细胞IL-8、COX-2 mRNA表达水平;减少细胞上清中IL-8、COX-2含量;降低细胞中磷酸化NF-κB的蛋白表达水平.结论:Sch B可改善CSE联合LPS引起的肺上皮细胞炎症,其作用机制可能与抑制肺上皮细胞增殖,抑制炎症因子表达,发挥抗炎作用有关.该研究为Sch B应用于COPD急性加重期的临床治疗提供实验依据.

摘要： 目的:本研究在体外采用蛋白质组学技术研究吸烟导致肺癌患者进展的分子机制。方法:通过香烟烟雾提取物长期处理A549细胞(16周)以模拟肺癌患者继续吸烟(Current-smoking组)，处理16周后换用不含香烟烟雾提取物的普通培养基继续培养8周以模拟肺癌后戒烟患者CEx-smoking组)，同时使用一直用普通培养基培养的A549细胞以模拟不吸烟的肺癌患者(Non-smoking组)作为对照组。结果:我们通过免疫组化的实验发现患者吸烟严重程度与vimentin表达正相关，与nm23-Hl及14-3-3σ的表达负相关。vimentin表达与区域淋巴结转移状况呈正相关，14-3-3σ表达与区域淋巴结转移状况呈负相关，Nm23-H1表达与区域淋巴结转移状况呈负相关。Nm23-H1及14-3-3σ表达下调、vimentin表达上调的肺癌患者，生存率明显下降。结论:本研究采用蛋白质组学技术在体外筛选到41个可能与吸烟导致肺癌进展的差异表达的蛋白质，并发现其中3个差异表达蛋白质vimentin, nm23-H1, 14-3-3a的表达与肺癌的吸烟程度、转移和预后相关，有望成为预测非小细胞肺癌转移和预后的分子标志物。

摘要： 气道慢性炎症和吸烟在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)的发生、发展过程中不是相互孤立的，而是相互促进、相互关联的。细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)为革兰阴性菌的外层结构，可直接引起呼吸道上皮损伤，是导致气道慢性炎症的主要物质，而气道上皮细胞MAPKs信号转导通路与LPS作用效应密切相关。Laan等证实：香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract，CSE)可以抑制转录因子AP-1的活性，从而下调细菌病原体诱导的中性粒细胞趋化因子的产生，虽然可导致暂时炎症反应强度降低，但这些作用可以导致细菌的定植，局部炎症持续存在，最终引发慢性肺部疾病。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor GM-CSF)和白细胞介素8(Interleukin8，IL-8)是中性粒细胞重要的调节因子，对中性粒细胞的产生和募集起关键性的作用，是气道慢性炎症疾病的重要因子。基于此，运用免疫印迹(Western blot)方法检测原代培养人体气道上皮细胞不同分组的ERK1/2、p38及JNK磷酸化水平，同时检测下游细胞因子GM-CSF和IL-8的mRNA及表达水平，旨在探讨CSE及LPS对人体气道上皮细胞MAPKs信号转导通路的影响，从而进一步探索CSE及LPS在肺部慢性炎症机制中的作用。

摘要： 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一种具有气流受限特征的肺部疾病，气流受限不完全可逆，呈进行性发展，其确切的发病机制目前尚不清楚。本文利用先进的分子生物学技术、共聚焦显微镜技术等实验技术，探讨LPS及CSE对气道上皮细胞NF-kB及AP-1活性的影响，从而进一步探索慢性阻塞性肺疾病的发病机制，为临床研究提供理论和实验依据。

摘要： 本发明公开了一种天然植物提取物微囊及含有天然植物提取物微囊的香烟滤嘴，要解决的技术问题是降低香烟烟气中的有害成分。本发明的天然植物提取物微囊由以下质量比的组分组成：天然植物提取物1-1.5份、囊材1-2份，所述天然植物为鹿蹄草、金银花、薄荷或神秘果。本发明的香烟滤嘴，丝束中添加有天然植物提取物微囊，丝束与微囊的质量比为1-100∶0.1-100。本发明与现有技术相比，从天然植物中提取出活性成分做成微囊，将这种微囊加入到卷烟滤嘴丝束中制成香烟的滤嘴棒，在吸烟过程中，可以丰富烟香，增加卷烟烟气质量和协调性，有选择性降低卷烟中的有害成分，保护吸烟者的身体健康，从而提高卷烟档次。

摘要： 本发明公开了一种牛樟菇提取物及其含有牛樟菇提取物的香烟，要解决的技术问题是增香保润，降低卷烟中的有害成分。牛樟菇提取物采用以下方法制备：将牛樟菇烘干，粉碎，加入牛樟菇粗粉质量3-10倍的热水，在80-95°C中浸提，过滤后的滤液在0.05MPa、60°C条件下减压浓缩2小时，得到牛樟菇提取物。含有牛樟菇提取物的香烟，烟丝中含有占烟丝质量0.001-10％的牛樟菇提取物。本发明与现有技术相比，烟丝中含有牛樟菇活性成分的植物提取物，溶解性好，在吸烟过程中可随主流烟气进入人体，通过血液循环被人体吸收，从而发挥其抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等作用，卷烟烟气醇和无杂气，可提高卷烟质量，从而降低烟气对人体的危害性。

摘要： 本发明公开了一种天然植物提取物微囊及含有天然植物提取物微囊的香烟滤嘴，要解决的技术问题是降低香烟烟气中的有害成分。本发明的天然植物提取物微囊由以下质量比的组分组成：天然植物提取物1-1.5份、囊材1-2份，所述天然植物为鹿蹄草、金银花、薄荷或神秘果。本发明的香烟滤嘴，丝束中添加有天然植物提取物微囊，丝束与微囊的质量比为1-100∶0.1-100。本发明与现有技术相比，从天然植物中提取出活性成分做成微囊，将这种微囊加入到卷烟滤嘴丝束中制成香烟的滤嘴棒，在吸烟过程中，可以丰富烟香，增加卷烟烟气质量和协调性，有选择性降低卷烟中的有害成分，保护吸烟者的身体健康，从而提高卷烟档次。

摘要： 本发明涉及酶处理的茶提取物的制备方法，该方法包括：使选自能产生青香型化合物的酶和/或酶群中的至少一种作用于茶提取物、茶浆料和/或茶叶；并且本发明涉及酶处理的茶天然芳香物和酶处理的茶天然芳香物浓缩提取物的制备方法，该方法还包括从所述的酶处理的茶提取物中收集茶芳香物。

摘要： 本发明涉及植物提取工艺及植物提取物应用技术领域，具体涉及一种三棱提取物的提取方法及含有该三棱提取物的香烟和精华霜，一种三棱提取物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：将三棱提取物粉碎，加入到乙醇水溶液进行提取，合并滤液，减压浓缩得到三棱提取液；将所述三棱提取液离心，离心液依次进行两次酶解处理，酶解结束后升温，得到三棱酶解液，将所述三棱酶解液进行两次柱层析吸附，收集水洗脱液，目标洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥后得到所述三棱提取物，将其加入卷烟中，可具有改善烟气状态、丰富烟香、除杂降刺等作用。经体外测试后，发现三棱提取物具有良好的清除自由基及保湿功效，也可应用于保湿抗衰老化妆品中。

摘要： 本发明公开了一种天然植物提取物微囊及含有天然植物提取物微囊的香烟滤嘴，要解决的技术问题是降低香烟烟气中的有害成分。本发明的天然植物提取物微囊由以下质量比的组分组成：天然植物提取物1-1.5份、囊材1-2份，所述天然植物为鹿蹄草、金银花、薄荷或神秘果。本发明的香烟滤嘴，丝束中添加有天然植物提取物微囊，丝束与微囊的质量比为1-100∶0.1-100。本发明与现有技术相比，从天然植物中提取出活性成分做成微囊，将这种微囊加入到卷烟滤嘴丝束中制成香烟的滤嘴棒，在吸烟过程中，可以丰富烟香，增加卷烟烟气质量和协调性，有选择性降低卷烟中的有害成分，保护吸烟者的身体健康，从而提高卷烟档次。

摘要： 本发明公开了一种天然植物提取物微囊及含有天然植物提取物微囊的香烟滤嘴，要解决的技术问题是降低香烟烟气中的有害成分。本发明的天然植物提取物微囊由以下质量比的组分组成：天然植物提取物1-1.5份、囊材1-2份，所述天然植物为鹿蹄草、金银花、薄荷或神秘果。本发明的香烟滤嘴，丝束中添加有天然植物提取物微囊，丝束与微囊的质量比为1-100∶0.1-100。本发明与现有技术相比，从天然植物中提取出活性成分做成微囊，将这种微囊加入到卷烟滤嘴丝束中制成香烟的滤嘴棒，在吸烟过程中，可以丰富烟香，增加卷烟烟气质量和协调性，有选择性降低卷烟中的有害成分，保护吸烟者的身体健康，从而提高卷烟档次。

摘要： 本发明公开了一种牛樟菇提取物及其含有牛樟菇提取物的香烟，要解决的技术问题是增香保润，降低卷烟中的有害成分。牛樟菇提取物采用以下方法制备：将牛樟菇烘干，粉碎，加入牛樟菇粗粉质量3-10倍的热水，在80-95°C中浸提，过滤后的滤液在0.05MPa、60°C条件下减压浓缩2小时，得到牛樟菇提取物。含有牛樟菇提取物的香烟，烟丝中含有占烟丝质量0.001-10％的牛樟菇提取物。本发明与现有技术相比，烟丝中含有牛樟菇活性成分的植物提取物，溶解性好，在吸烟过程中可随主流烟气进入人体，通过血液循环被人体吸收，从而发挥其抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等作用，卷烟烟气醇和无杂气，可提高卷烟质量，从而降低烟气对人体的危害性。

摘要： 本发明一种三七提取物、川芎提取物、红花提取物、葛根提取物及山楂提取物的组合药物及其制剂、应用涉及的是一种药物制剂的提取、组合方法及制备方法，更具体地说，涉及一种三七提取物、川芎提取物、红花提取物、葛根提取物、山楂提取物的组合药物的提取、组合方法及其制剂。由三七提取物、川芎提取物、红花提取物、葛根提取物与山楂提取物组成，其中三七提取物、川芎提取物、红花提取物、葛根提取物与山楂提取物重量配比为10.92-43.68:34.01-136.04:12.74-50.9:5.8-11.6:23.4。三七提取物中含总皂苷不得少于20.0％，川芎提取物中含阿魏酸不得少于0.2%，红花提取物中含羟基红花黄色素A不得少于1.0%，葛根提取物中含葛根素不得少于10.0%，山楂提取物中含山楂总黄酮不得少于5.0%。

摘要： 本发明涉及酶处理的茶提取物的制备方法，该方法包括：使选自能产生青香型化合物的酶和/或酶群中的至少一种作用于茶提取物、茶浆料和/或茶叶；并且本发明涉及酶处理的茶天然芳香物和酶处理的茶天然芳香物浓缩提取物的制备方法，该方法还包括从所述的酶处理的茶提取物中收集茶芳香物。