苯丙氨酸羟化酶

摘要： 目的 分析石家庄市新生儿疾病筛查诊治中心确诊的苯丙氨酸羟化酶缺乏症(PAHD)患儿中PAH基因的突变规律及特点,为石家庄市PAHD的产前诊断、治疗提供有力的科学依据.方法 收集在石家庄市新生儿疾病筛查诊治中心确诊的PAHD患儿67例作为研究对象,提取患儿及其父母外周血DNA标本进行二代测序,测序范围包括13个外显子和外显子上、下游200个碱基对的内含子,对可疑突变位点进行一代测序验证,可疑大片段缺失重复进行多重连接探针扩增验证.结果 67例PAHD患儿中61例患儿PAH基因检测到2个突变位点,3例患儿PAH基因检测到3个突变位点,3例患儿PAH基因只检测到1个突变位点.67例PAHD患儿中共检测到44种突变,134个PAH基因突变位点.高频突变位点主要是c.158G>A、c.728G>A、c.331C>T.16例经典型苯丙酮尿症患儿中c.1068C>A和c.331C>T突变频率最高(15.63％,5/32);11例轻度苯丙酮尿症患儿中c.721C>T突变频率最高(18.18％,4/22);40例轻度高苯丙氨酸血症患儿中c.158G>A突变频率最高(35.00％,28/80).检测出的134个突变位点中有3个尚未见报道,分别为c.912+5G>T、c.61-1G>A和c.630T>G.结论 石家庄市PAHD患儿PAH基因突变以复合杂合突变为主,该研究明确了石家庄市PAHD患儿基因的突变类型与特点,为深入开展PAHD的诊断及产前诊断、治疗和遗传咨询提供了有力的依据和帮助.

摘要： 目的 分析中国西北地区汉族苯丙酮尿症(PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变特征。方法 应用PCR产物直接测序法对2003年1月-2019年8月在中国西北五省区新生儿疾病筛查中心或医学遗传中心确诊的223例汉族PKU患儿及其父母的PAH基因启动子、第1-13外显子及其旁侧内含子区域进行基因突变分析。结果在西北地区223例汉族PKU患者446条PAH等位基因中检测出75种致病突变,总检出率为88.6%(395/446),突变以错义突变(66.7%)、剪切位点突变(16.0%)和无义突变(9.3%)为主;大部分突变主要分布在外显子7(29.0%)、外显子6(10.5%)、外显子3(10.3%)、外显子11(9.6%)、外显子12(8.5%)和第4内含子(6.7%)中;突变频率较高的PAH基因致病突变是R243Q(22.1%)、IVS4-1G>A(6.7%)、EX6-96A>G(6.5%)、R111X(5.4%)、R53H(4.3%)、Y356X(4.0%)、R413P(3.8%)和V399V(3.1%);西北汉族最常见PAH基因突变(R243Q)与中国北方基本一致,但显著区别于日本(R413P)、巴西(V388M)、德国(R408W)、立陶宛(R408W)和美国(R408W)等国家。研究发现7种国际上未见报道的新突变:N93fsX5、G171E、P225S、Q304K、H107R、F392I和N223I。结论 西北汉族PKU患者PAH基因致病突变构成与中国北方类似,但显著区别于部分亚洲和欧美国家,西北汉族的PAH基因突变谱具有其独特保守的地域特征,推测R243Q突变的高发在中国北方地区,而R408W突变的高发在欧洲地区。

摘要： 目的对一个苯丙氨酸羟化酶缺乏症(phenylalanine hydroxylase deficiency,PAHD)家系苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因进行突变位点检测和分析,探讨此家系发病原因。方法采用二代测序技术(next generation sequencing,NGS)和多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)对先证者及其父母的静脉血进行PAH基因组测序和外显子缺失、重复分析。结果先证者找到1个错义突变和1个剪接缺失,分别为:第6外显子c.630T>G和第2外显子c.61-1G>A,这两个变异在人类基因突变数据库(Human Gene Mutation Database,HGMD)中未见报道,根据美国医学遗传学与基因组学学会(America College of Medical Genetics and Genomics,ACMG)指南判定为临床意义未明和疑似致病性变异;信息软件REVEL预测结果为有害和未知。采用MLPA对先证者进行外显子缺失、重复分析显示PAH基因外显子拷贝数未发现异常。结论PAH基因6号外显子c.630T>G和2号外显子c.61-1G>A可能是该PAHD家系的致病突变。

摘要： 目的探讨徐州地区新生儿苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)筛查特征及构建徐州地区苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因和四氢生物蝶呤缺乏症相关基因突变谱。方法选择2015年11月至2020年3月徐州地区出生并采用串联质谱技术进行苯丙氨酸(Phe)及苯丙氨酸与酪氨酸比值(Phe/Tyr)测定的新生儿资料进行回顾性研究,应用高通量测序联合Sanger测序技术对苯丙氨酸异常患儿进行基因分析。结果共计完成450355名新生儿苯丙氨酸相关指标测定,确诊115例PKU,患儿Phe及Phe/Tyr比值显著升高,PKU发病率为1∶3916。其中PAH基因突变113例,PTS基因突变2例。PAH基因突变患儿中纯合子突变5例,PAH合并PTS双基因突变1例,PAH基因3位点突变2例。PAH基因高频突变类型为2号外显子错义突变,常见基因突变主要包括c.158G>A(p.R53H)(24.7%,56/227)、c.728G>A(p.R243Q)(15.0%,34/227)、c.611A>G(p.Y204C)(5.3%,12/227)、c.721C>T(p.R241C)(5.3%,12/227)和c.1068C>A(p.Y356X)(4.8%,11/227)。共发现3个新的PAH基因突变(c.234dupA、c.441+15C>G和c.1096C>T)及1个新的PTS基因突变(c.286G>A)。结论徐州地区PKU较常见,属于PKU高发地区,基因突变以PAH基因突变为主。

摘要： 目的 探讨徐州地区新生儿苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)筛查特征及构建徐州地区苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因和四氢生物蝶呤缺乏症相关基因突变谱.方法 选择2015年11月至2020年3月徐州地区出生并采用串联质谱技术进行苯丙氨酸(Phe)及苯丙氨酸与酪氨酸比值(Phe/Tyr)测定的新生儿资料进行回顾性研究,应用高通量测序联合Sanger测序技术对苯丙氨酸异常患儿进行基因分析.结果 共计完成450 355名新生儿苯丙氨酸相关指标测定,确诊115例PKU,患儿Phe及Phe/Tyr比值显著升高,PKU发病率为1:3 916.其中PAH基因突变113例,PTS基因突变2例.PAH基因突变患儿中纯合子突变5例,PAH合并PTS双基因突变1例,PAH基因3位点突变2例.PAH基因高频突变类型为2号外显子错义突变,常见基因突变主要包括c.158G＞A(p.R53H)(24.7％,56/227)、c.728G＞A(p.R243Q)(15.0％,34/227)、c.611A＞G(p.Y204C)(5.3％,12/227)、c.721C＞T(p.R241C)(5.3％,12/227)和 c.1068C＞A(p.Y356X)(4.8％,11/227).共发现3个新的PAH基因突变(c.234dupA、c.441+15C＞G和c.1096C＞T)及 1 个新的PTS基因突变(c.286G＞A).结论 徐州地区PKU较常见,属于PKU高发地区,基因突变以PAH基因突变为主.

摘要： 目的 研究游离DNA单分子标签检测(cell-free DNA barcode-enabled single-molecule test,cfBEST)技术用于苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)无创产前诊断的适用性和可行性.方法 研究对象为2019年7月至9月郑州大学第一附属医院进行产前诊断的4例诊断为PAH基因热点突变的苯丙酮尿症家系.采用cfBEST技术进行检测,设计巢式聚合酶链反应引物,计算孕妇血浆游离DNA突变频率和胎儿基因型,并将cfBEST技术的检测结果与介入性产前诊断结果比较.对数据采用描述性统计分析.结果 cfBEST技术检测发现,家系1中c.603T＞G和c.842+2T＞A位点的突变频率为48.40％(291/601)和9.70％(61/628),胎儿2个位点均为杂合突变型,为PKU患者.家系2中c.1238G＞C和c.842+2T＞A的突变频率分别为43.70％(786/1 798)和0％(0/1 550),胎儿2个位点均为野生型,非PKU患者,亦非携带者.家系3中,c.1045T＞G和c.728G＞A的突变频率分别为44.00％(930/2 112)和0％(0/705),胎儿2个位点均为野生型,非PKU患者,亦非携带者.家系4中,c.755G＞A和c.728G＞A的突变频率分别为45.40％(743/1 637)和4.50％(28/849),胎儿位点分别为野生型和杂合突变型,为携带者.介入性产前诊断结果与cfBEST技术检测结果完全一致.家系1选择引产,其余3个家系选择继续妊娠至足月分娩,其新生儿筛查苯丙氨酸水平均＜ 120 μmol/L,生后1、3、6月龄电话随访,均未见明显异常.结论 cfBEST技术有望应用于PKUPAH基因的无创产前诊断.但需要更大样本量的研究证实.

摘要： 目的 对高苯丙氨酸血症(hyperphenylalaninemia,HPA)干血片DNA样本进行多重扩增子高通量测序检测,研究该方法对HPA潜在病因的实验室诊断价值.方法 选取既往70例生化筛查为HPA的患儿干血片,提取DNA后使用覆盖126种遗传病130个基因的扩增子建库试剂盒建库,进行高通量测序和数据分析,获得样本基因变异信息.经一代测序验证位点准确性后,分析对样本具有诊断价值的变异位点信息进行疑似病因判定,评价高通量测序的检测和诊断效能.结果 高通量测序结果和既往部分样品的一代测序结果完全吻合.70例样本中,5例为PAH和PTPS纯合突变,53例检测出PAH或PTPS单个基因2～3个杂合突变位点,还有2例检出HPA信号通路相关的SPR基因或GCH 1基因各1个突变.检测结果中c.158G>A、c.728G>A、c.1068C>A、c.1238G>C、c.611A>G位点为PAH基因频率最高的5个突变.结论 通过高通量测序技术,可准确检测基因突变,提供病因解释,为后续召回和临床诊断提供重要参考.

摘要： 目的:探讨苯丙氨酸(PA)羟化酶(PAH)基因突变检测对苯丙酮尿症(PKU)的诊断意义及其对PKU患儿的影响.方法:选取PKU患儿135例进行临床实验,所有受试者PAH基因突变情况均采用聚合酶链式反应技术进行扩增,采用Sanger测序方法检测其突变点,PAH基因是否存在大片缺失重复采用多重连接探针扩增技术(MLPA)检测,最后将各项检测数据纳入SPSS 21.0软件处理,分析PAH突变情况及比较其PAH突变对KPU患儿智商的影响.结果:135例PKU患儿(270对PAH等位基因)中,共12例患儿有PAH基因突变,占比8.89％,突变位点共12个,其中R243Q、Y204C、R241C、IVS4-1、R413P、R111X、R261Q、W326X及Y356X等均有突变频率,各占总PAH等位基因的5.19％、5.19％、3.70％、2.96％、2.22％、1.48％和1.48％、0.74％、0.74％,而E56D、F161S、A345T等的突变频率则不明显.经SNaPShot、Sanger及MLPA检测12例PKU患儿的PAH基因突变情况发现,纯合突变占比16.67％,复合、杂合突变占比83.33％.12例PKU患儿干预后的PA低于干预前、全智商评分高于干预前,差异均具有统计学意义(P0.05).经Pearson分析发现12例PAH基因突变的PKU患儿治疗期的PHE平均控制浓度与1周岁时的IQ检测值呈负相关(r=-0.924,P<0.01).结论:在PKU患儿的临床治疗过程中科学、合理地进行PAH基因突变检测并严格控制患儿的PHE血浓度有较好的临床应用与推广价值,也是改善患儿智商的关键因素之一.

摘要： 背景 苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种常染色体隐性遗传的氨基酸代谢病,由苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)活性的部分或完全缺失引起,会使苯丙氨酸在体内蓄积,导致患儿出现神经系统等损害.PAH基因突变种类和频率存在明显的地域和种族差异.目的 分析吉林和辽宁地区苯丙酮尿症80例患儿苯丙氨酸羟化酶PAH基因的突变特征.方法 对2016 - 2018年吉林辽宁两省医院80例PKU患儿PAH基因的13个外显子及其侧翼序列,包含5'和3'端非编码区,进行一代测序点突变分析.结果 80例患儿共检出161个突变位点,占292个突变等位基因的55.14％.其中,R243Q占比最高(15.75％),IVS11-3 A>T、R413P、IVS4-1 G>A和EX6-96A>G次之,占比依次为4.11％、3.42％、3.08％和3.08％.另外5个低频突变位点Y356*、R111*、R241C、R53H a和IVS2 + 19 T>C突变频率为1％～3％.此次,我们发现PAH基因1个新的突变点F294S,位于8号外显子.结论 依据此次吉林辽宁地区80例PKU患儿PAH基因的突变特点,为该地区预防PKU出生缺陷提供理论依据.

摘要： 目的 分析中国西北地区苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变特征,为苯丙酮尿症(PKU)基因诊断及遗传咨询提供理论依据.方法 联合应用PCR产物直接测序法、基因芯片捕获和二代高通量测序技术对2003年1月—2019年12月在中国西北五省区新生儿疾病筛查中心确诊的326例PKU患儿及其父母的PAH基因启动子、第1～13外显子及其旁侧内含子区域进行基因突变分析.结果 在中国西北地区326例PKU患者652条PAH等位基因中检测出105种致病突变,总检出率为87.7％,突变以错义突变、剪切位点突变、无义突变和移码突变为主;大部分突变主要分布在E7(25.2％)、E6(11.8％)、E3(9.2％)、E12(9.2％)、E11(8.3％)、I4(5.2％)、E2(3.5％)和E5(3.5％)中;突变频率较高的PAH基因致病突变是R243Q,与中国北方、韩国比较一致,但显著区别于日本(R413P)、德国(R408W)、以色列(IVS10-11G>A)、意大利(R261Q)、巴西(V388M)和美国(R408W)等国家,其他常见突变类型还包括EX6-96A>G、IVS4-1G>A、R413P、R111X、Y356X、R53H、R241C和IVS7+2T>A;中国西北汉族与西北维吾尔族、回族相比,R243Q、R413P和EX6-96A>G突变的检出率具有显著性差异(PA、P281L和IVS11-2A>C突变频率的高位在中国维吾尔族中.

摘要： 目的:在既往PKU群体和家系基因诊断的基础上，对部分家系的再怀孕胎儿进行了苯丙氨酸羟化酶基因分析。方法:用单链DNA构象多态性、扩增产物直接测序及短串联重复序列片段长度连锁分析等方法，分析来自22个曾生育过PKU患儿的家系共35例孕8-10周胎儿绒毛DNA。结果：22个家系中确定父母双方2个突变等位基因的20个，占分析的90.9%父母双方仅确定一个突变等位基因的家系2个(X9.1%); 35例胎儿绒毛DNA分析结果判断未携带父/母突变等位基因的正常胎儿7例(20%)，携带父或母一方突变等位基因的杂合子胎儿(携带者)19例(54.3%)，携带父母双方2个突变等位基因的异常胎儿9例(25.7%)。结论:后代中正常、杂合子和病人的比例基本符合常染色体隐性遗传的自然遗传规律。综合多种方法快速基因诊断分析能为PKU家庭提供遗传线索，以助PKU家庭及时做出抉择，做好产前预防。

摘要： 目的：了解中国人苯丙氨酸羟化酶(Phenylalaninehydroxylase，PAH)基因的突变构成。rn 方法：应用PCR单链构象多态结合序列分析检测230例苯丙酮尿症患儿PAH基因全部外显子及其两侧内含子。rn 结果：①在460个PAH等位基因中检测出75种不同的突变基因，总检测率达94.6％(435/460)，其中3种突变基因(S251-R252>SfSX89、Y387D和A389G)尚未见到报道。常见的突变基因为：R243Q(21.7％)EX6—96A>GD(10.2％)、R111X(8.3％)、R413P(6.5％)和Y356X(6.1％)。较常见的突变基因为：V399V(4.1％)IVS4-1G>A(3.5％)、IVS7+2T>A(2.2％)和R241C(2.2％)。大部分突变集中在第3、5、6、7、11、和12外显子及其两侧内含子区域；②检测出10种多态性位点，突变率高的4个位点IVS3-22C>T(56.7％)、IVSl0+97G>A(75.9％)、Q232Q(89.0％)和V245V(81.9％)，提示PAH基因cDNA序列存在人种差异。rn 结论：中国人PAH基因的突变构成与欧洲人群完全不同，与亚洲其它人群有频率的差异。

摘要： 目的：研究中国人苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变的分子基础。rn 方法：应用PCR/SSCP、序列分析等技术，分析中国北方地区120个经典型苯丙酮尿症(PKU)的核心家系，对PAH基因外显子3、5、7、10、11、12进行突变基因的筛查和确定。rn 结果：在确定的31种突变中(另文报道)有10种突变首次在中国PKU人群中发现：165T、S70del、G239D、R241fsdelG、L255S、P281L、G346R、L367fsinsC、R400S和Ivsllnt2t→c。其中4种突变G239D、R241fsdelG、R400S和Ivsllnt2t→c在国际PAH数据库未见公布(至投稿日期)。新突变显示中国人PAH基因虽以点突变为主，但存在小的碱基插入、缺失以及移码突变。新突变主要发生在外显子7中(4/10)，每种突变的发生频率均很低(0.42％～1.3％)。rn 结论：中国人PAH基因存在在高度异质性和突变的多样性，外显子7是PAH基因的突变热点区域。

摘要： 苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU）是一种氨基酸代谢异常的常染色体隐性遗传病，主要是由于苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH）基因突变导致肝脏苯丙氨酸羟化酶缺乏所致。早期诊断、早期治疗是决定PKU预后的关键，因此产前及新生儿PKU筛查具有重要意义。本研究发展了一种用于人苯丙氨酸羟化酶基因突变检测的CD式微流控芯片。这种微流控芯片采用聚二甲基硅氧烷（PDMS）－玻璃双层结构。PDMS层构成12个杂交微通道，玻璃层标记水凝胶结合探针区。探针区分别标记R243Q、V245V和空白对照。

摘要： 公开了用于表达慢病毒颗粒的慢病毒载体系统。该慢病毒载体系统包括治疗载体。该慢病毒载体系统产生编码密码子优化的PAH的慢病毒颗粒，用于上调患有苯丙酮尿症(PKU)的对象的细胞中PAH的表达。

摘要： 本申请描述了一种用于递送和表达转基因的具有线性连续结构的ceDNA载体。所述ceDNA载体包含两侧是两个ITR序列的表达盒，其中所述表达盒编码转基因，所述转基因编码PAH蛋白。一些ceDNA载体进一步包含顺式调控元件，包括调控开关。本文进一步提供了使用所述ceDNA载体进行可靠的体外、离体和体内PAH蛋白的基因表达的方法和细胞系。本文提供了包含可用于在细胞、组织或受试者中表达PAH蛋白的ceDNA载体的方法和组合物，以及用表达PAH蛋白的所述ceDNA载体治疗疾病的方法。这种PAH蛋白可以表达用于治疗疾病，例如苯丙酮尿症(PKU)。

摘要： 本发明属生物工程技术领域，涉及制备重组L-苯丙氨酸羧化酶的方法。具体而言，本发明将可编码的微生物源L-苯丙氨酸羧化酶基因嵌入含合适的表达载体中构建重组质粒，转化细胞，并使用一种简单有效的亲和方法获得高产量L-苯丙氨酸羧化酶的方法。本发明所制得的L-苯丙氨酸羧化酶产量高，高活性，生产方法简便。本发明亦包括此方法中构建的新的重组质粒及转化细胞。本发明制备的L-苯丙氨酸脱氢酶可用于开发新生儿苯丙酮尿症筛查试剂，也可用来生产L-苯丙氨酸。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，提供了一种对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法及试剂盒，该方法包括以下步骤：A.利用PAH基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库；B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物；C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息。该方法及试剂盒利用高通量测序技术对多个目标区域同时进行区域测序，提高了检测效率，同时还能提高检测的准确性和灵敏度，并能进一步同时对大量样品进行多区域检测。

摘要： 本发明涉及一种苯丙氨酸羟化酶基因突变的检测方法，属于分子生物学技术领域。所述的苯丙氨酸羟化酶基因突变的检测方法，其特征在于，具体步骤为：采集被测者口腔粘膜样本，抽提基因组DNA，基因分型和结果分析。本发明的优点是：简单易行、可重复性高。

摘要： 本发明公开了一种用于检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的检测试剂盒及其检测方法。本发明具体地公开了用于检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的组合物、试剂盒、检测方法。本发明通过在同一个PCR反应体系中同时扩增靶基因和内参基因，计算靶基因和内参基因的Ct值差，综合野生型反应体系的△Ct值和突变型反应体系的△Ct值，判断基因是否发生突变。本发明选用的内参基因和检测基因位于同一条染色体上，同时使用了UNG酶/dUTP抗污染体系，降低假阳性结果的产生，具有准确性高，抗污染能力强，检测速度快，对仪器性能要求低的优点。本发明所述组合物、试剂盒及检测方法可以在体外准确地检出患者血液样本中苯丙氨酸羟化酶基因的突变。

摘要： 本发明公开一种苯丙氨酸羟化酶基因突变谱检测的特异性引物，属于分子生物学技术领域，包括13对引物，扩增区域为13个外显子及其侧翼区。本发明的基因引物具有相应的特异性，长度合适，扩增高效，不会形成二级结构和发夹结构，无假引发。利用该引物采用分层研究的方法进行先证者PAH基因突变分析，方法简单高效、经济实用。该发明为开展PKU病因分子机制研究提供了方法。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，提供了一种对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法及试剂盒，该方法包括以下步骤：A.利用PAH基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库；B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物；C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息。该方法及试剂盒利用高通量测序技术对多个目标区域同时进行区域测序，提高了检测效率，同时还能提高检测的准确性和灵敏度，并能进一步同时对大量样品进行多区域检测。

摘要： 本发明涉及一种苯丙氨酸羟化酶基因突变的检测方法，属于分子生物学技术领域。所述的苯丙氨酸羟化酶基因突变的检测方法，其特征在于，具体步骤为：采集被测者口腔粘膜样本，抽提基因组DNA，基因分型和结果分析。本发明的优点是：简单易行、可重复性高。

摘要： 本发明公开了一种苯丙氨酸羟化酶基因突变诊断专用DNA芯片。它是在玻片、硅片、膜、高分子材料上固定检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的特异DNA探针,形成中密度DNA探针阵列。本发明与现有技术相比,在一显微镜载玻片大小的载体表面,固定79×4DNA探针,因此可同时检测苯丙氨酸羟化酶已发现的中国人种所有基因突变。具有平行分析和多重分析特点。特定的洗脱条件可以区分全配杂交和单碱基失配杂交。适合于早期诊断,产前筛查苯丙酮酸尿症。