纳米抗体

摘要： 随着社会经济水平的提高,人们对动物性食品的需求量显著扩大,对其安全性的要求也越来越严格。因此,家畜疾病的科学防控就显得尤为重要。目前,我国家畜疾病尤其是传染病的防控效果并不理想,仍需要不断开发和探索新的防控产品和防控策略。纳米抗体是最小的功能性抗原结合片段,和传统抗体相比,其具有分子量小、结构简单、稳定性高、易于基因改造、抗原特异性好、组织穿透力强等优点。纳米抗体源于骆驼科动物,作为一种新型抗体,在动物疾病防治技术中的研究和应用正逐步增加。本文重点综述纳米抗体在家畜传染病中的应用和研究进展,并结合发展趋势预测未来的研究重点。

摘要： 纳米抗体来源于天然缺失轻链的重链抗体可变区,是已知最小抗原结合单元。该研究构建了抗黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))纳米抗体的单价及多价串联体,分别与绿色荧光蛋白(GFP)编码片段融合并克隆至原核表达载体p ET30。以大肠杆菌BL21(DE3)作为表达宿主,通过异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷诱导,亲和层析技术分别纯化单、双及三价抗AFB_(1)纳米抗体与GFP的融合蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明三种融合蛋白均为可溶性表达,表达量分别为6.0、7.5、4.0 mg/L。采用酶联免疫吸附法和荧光扫描法对重组融合蛋白的抗原识别活性及荧光特性进行测定。结果显示,未融合蛋白、单价及双价串联重组蛋白的半抑制浓度(IC;)分别为12.10、14.10、2.19 ng/m L,表明单价重组蛋白的IC;值与未融合蛋白相似,而双价重组蛋白的IC;值与之相比提高了5.5倍。当浓度为0.7 mg/m L时,两种重组蛋白的荧光强度均可达3000以上,荧光强度与GFP相当,且二价重组蛋白表现出更高的荧光强度;三价串联重组蛋白表现出与抗原的结合活性,但AFB_(1)的阻断活性较差,且荧光强度仅为1700左右。该研究为后续建立基于荧光信号的免疫学检测方法奠定了基础,同时也为优化免疫学检测中纳米抗体亲和活性提供了思路和借鉴。

摘要： 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种侵害猪的烈性传染病,世界动物卫生组织(OIE)规定其为必须报告的动物疫病。目前,在世界范围内仍无针对其的商品化疫苗和药物,使得综合防控面临着严峻挑战。防控非洲猪瘟疫情只能依靠准确的诊断和可靠的早期监测技术,因此,快速、准确、灵敏、方便的检测方法对于净化和预防非洲猪瘟具有重要意义。纳米抗体(Nanobody,Nb)是一种新型抗体,其结构简单、分子量小,易于改造且具有强稳定性、高特异性、高亲和力、低免疫原性、能识别隐蔽表位、组织穿透力强以及易于制备等特点,应用前景广泛,故备受关注。本文归纳总结了非洲猪瘟的检测方法和技术手段,探讨了纳米抗体在非洲猪瘟诊断中的应用现状,并对其未来发展方向做出展望。

摘要： 微囊藻毒素(MC)作为肝毒性最强的藻毒素之一,在受污染的水体中时常检出,严重威胁着人畜饮水安全,加强其检测十分重要。在前期研究中,已成功构建抗MC-LR噬菌体展示纳米抗体文库。本研究以MC-LR-OVA作为包被原,经4轮固相淘筛,获得纳米抗体M110。该抗体可识别MC-LR,且具有良好的稳定性。基于纳米抗体M110建立了检测MC-LR的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),检测的半抑制浓度IC50值为3.55 ng/mL,检测限0.65 ng/mL,线性范围1.28~9.88 ng/mL。与UPLC-MS/MS方法检测结果相关系数达0.998,提示本方法可用于水体中微囊藻毒素残留的检测。

摘要： 抗体药物是一种可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。该研究从抗体药物的结构入手,对抗体药物的药物代谢动力学基本特点进行综述,并着重介绍了其不同于小分子药物的独特代谢特征,主要包括与靶点介导的药物处置、新生儿Fc受体介导的循环再利用、糖基化修饰和电荷异质性对清除速率的影响以及与抗药物抗体相结合导致清除加快。最后总结了纳米抗体、双特异性抗体、抗体药物偶联物等新型抗体药物的药物代谢动力学研究进展。

摘要： 近日,复旦大学基础医学院应天雷教授、吴艳玲副研究员课题组与复旦大学生物医学研究院孙蕾研究员课题组合作,发现并筛选出一种抗新冠病毒的全人源纳米抗体(可制成纳米双抗药物)。该抗体可同时靶向病毒两个部位,高效中和包括奥米克戎变异株在内的各种流行变异株,并可作为雾化吸入制剂。

摘要： 纳米抗体是由骆驼科动物产生的一类天然缺失轻链的重链抗体可变区。相比较于传统单克隆抗体和多克隆抗体,其具有体积小、热稳定性强、耐有机溶剂、折叠性可逆、易于表达、高亲和力、可特异性识别独特表位等天然优势。因此,纳米抗体在生物和农业等研究领域备受关注。本文综述了纳米抗体的结构、生化特性以及在农产品真菌毒素检测中的研究进展,并对纳米抗体在农产品真菌毒素检测方向的发展前景进行了展望。

摘要： 纳米抗体(nanobody,Nb)作为目前已知的能与目标抗原结合的最小单位抗体,在生物医药、临床研究等方面具有良好的应用前景。根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)中和性纳米抗体H11-D4基因,将其克隆到pET28a表达载体上后,转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)进行诱导表达,通过镍柱纯化、质谱分析、Western Blot鉴定H11-D4的表达情况并使用中和试验验证其中和活性。研究结果显示,纳米抗体H11-D4可成功在大肠杆菌中表达,最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L^(-1),37°C诱导5 h。H11-D4抗体的分子量大小约为17.9 kD,与预测值相符。经镍柱纯化后,产量为25.16 mg·L^(-1)。透析复性后利用TritonX-114快速有效地去除了内毒素,中和试验成功验证了H11-D4的中和活性(IC50)为171.1 nmol·L^(-1),研究结果可为纳米抗体的原核表达和新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)的预防及治疗提供基础数据支撑。

摘要： 间皮素(Mesothelin)是一个潜力巨大的治疗三阴乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)的CAR-T靶点。目前,在临床试验中开发的Mesothelin CAR-T大多使用小鼠单克隆抗体SS1来源的scFv作为抗原结合结构域,易引起体内抗CAR的抗体产生,导致治疗效果不甚理想,因此,亟需开发新的抗原结合结构域构建CAR-T。该研究选择了靶向Mesothelin的纳米抗体VHH,其亲和力与SS1scFv相似,基于scFv和VHH的序列,该文分别构建了scFv CAR-T和VHH CAR-T细胞,并比较了两种CAR-T对靶点阳性TNBC细胞系的体外杀伤效果。结果显示,与临床试验中常用的scFv CAR-T相比,VHH CAR-T对TNBC细胞系的体外杀伤能力更好,且可表达更高水平的CD107a和CD69。这是目前国内外报道的第一个基于VHH序列构建的Mesothelin CAR-T,为后续靶向Mesothelin CAR-T的开发奠定了基础。

摘要： 目的筛选获取抗HER-2纳米抗体序列,偶联人IgG1 Fc片段,采用原核表达系统表达重组抗HER-2纳米抗体并验证其生物学特征。方法基于天然噬菌体纳米抗体展示库,采用生物素-链霉亲和素液相筛选法,以生物素化HER-2抗原为靶点经三轮淘选,随机挑取单克隆进行ELISA鉴定并测序。获得抗HER-2纳米抗体序列,将其偶联人IgG1 Fc片段,并将重组抗HER-2纳米抗体序列克隆至原核表达载体pET-30a,转化至表达菌Arctic Express,诱导重组抗HER-2纳米抗体表达并纯化,采用SPR、Western blot、细胞免疫荧光对纯化后的重组抗HER-2纳米抗体特征和功能进行验证。结果经淘选获得了一条抗HER-2纳米抗体序列,与人IgG1 Fc片段偶联,成功构建了原核表达载体,并表达纯化获得的重组抗HER-2纳米抗体;SPR显示其亲和力较好,Western blot表明其可与HER-2抗原结合,细胞免疫荧光实验结果提示其可与人乳腺癌细胞SKBR-3结合。结论本实验获得了亲和力、特异性均良好且具有一定生物学功能的重组抗HER-2纳米抗体,可为其后续临床应用提供基础。

摘要： 本研究以抑制绵羊肌肉生长抑制素(MSTN)的功能为出发点,通过制备MSTN纳米抗体,探究一条有效促进动物肌肉生长的新途径.利用MSTN抗原蛋白免疫骆驼构建了抗MSTN基因表达产物的噬菌体文库.绵羊MSTN的诱导表达,确定ELISA包被抗原用量.利用IPTG在大肠杆菌中诱导表达MSTN成熟肽蛋白并纯化,通过ELISA和Western blot方法检测抗原反应原性,优化亲和淘选包被抗原蛋白的浓度.

摘要： 为获得高表达且特异性针对牛病毒性腹泻病毒E2主要抗原表位的纳米抗体,构建抗BVDV纳米抗体基因文库,并利用噬菌体展示技术从库中筛选出特异结合BVDV-E2的纳米抗体,为防治BVDV奠定基础. 本实验对已构建的文库库容量进行鉴定,采用菌液PCR对抗体文库的重组率进行检测、多样性分析.利用M13K07辅助噬菌体对基因文库拯救得到噬菌体展示文库,测定其滴度.

摘要： 传统抗体类药物有诸多优势,在治疗和诊断等方面发挥了相当重要的作用.但是随着实际应用的需求,使其面临多方面的新挑战,除了其开发周期长,生产成本高外,其自身分子良较大,不稳定易降解,注射给药成为唯一途径,同时由于很多情况下需要抑制的药靶或抗原是位于细胞内,这使传统抗体难于自发实现,多需要其他载体携带其进入.单域抗体(single domain antibody,sdAb),又称纳米抗体(nanobody)或重链抗体(heavy chain antibody,hcAb),是从骆驼科动物和鲨鱼的血清中分离出的一种抗体,其单域抗体VH2分子量仅为通常抗体的1/10,晶体结构直径2.5nm,因而称之为纳米抗体(Nb),它具有高稳定性、甚至可口服吸收而不被降解,抗原结合高亲合性和可主动进入细胞内作为胞内抗体等优势,针对某些特定抗原研发小型化的基因工程抗体在基础研究、开发新药和疾病的诊断和治疗上具有广阔的应用前景.

摘要： 骆驼科动物体内存在天然缺失轻链的重链抗体(HCAbs),克隆其可变区可得到结合抗原的最小功能性片段—纳米抗体.纳米抗体具有稳定性高、免疫原性弱、渗透力强等独特的生物学特性,从而引起了生物技术的研究及疾病治疗领域的广泛关注.癌胚抗原(CEA)是肿瘤的重要标志物,抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体则在肿瘤的早期诊断和治疗中意义重大.借于CEA在肿瘤中的重要性及驼源纳米抗体的特性,制备CEA纳米抗体,凭借其高靶向性而有望成为肿瘤诊断和治疗的新方法.

摘要： 本项研究根据GenBank公布的BVDV-NADL株Erns(EO) ,E2基因的核苷酸序列，设计引物，采用PCR技术从pACNR/NADL质粒中扩增Erns,E2基因，构建原核表达质粒pET-32a-Erns,pET-32a-E2，将其转化至大肠埃希菌BL21中，经IPTG诱导，用SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白的表达情况及其反应原性。将牛病毒性腹泻病毒接种长满单层的MDBK细胞，接种72 h后，收取病毒液。将全病毒灭活，免疫双峰驼。分离外周血淋巴细胞，并提取总RNA，反转录成cDNA。采用巢式PCR技术扩增重链抗体可变区基因的核苷酸序列，构建噬菌体展示载体，经过多次连接转化TG1感受态细胞，构建初始文库。利用M13K07辅助性噬菌体超感染构建噬菌体展示anti-BVDV纳米抗体文库。研究结果表明成功构建牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白Erns,E2的原核表达载体，经诱导表达目的蛋白分别为45KD,64KD左右，经Ni-NTA蛋白纯化仪纯化蛋白，获得纯度较高的蛋白。Western blot试验表明目的蛋白具有很好的反应原性。以cDNA为模板，扩增驼源重链抗体可变区序列，构建库容量为4.32×105初始文库，并经过辅助噬菌体的超感染，成功构建噬菌体展示纳米抗体文库，库容量大小约为1.3×1011。为后续利用BVDV的囊膜蛋白Erns,E2作为抗原筛选具有高亲和力、高特异性的抗BVDV的纳米抗体奠定基础。

摘要： 基于磁珠的免疫亲和纯化方法(magnetic-bead-based immunoaffinity extraction,M-IAE)已经广泛应用于复杂食品及饲料样本中黄曲霉毒素B1的富集.然而,这种方法在应用上有其自身的缺陷,包括免疫亲和材料的富集能力差、重复使用性差等.本研究提出了一种改进的M-IAE方法富集玉米样本中的黄曲霉毒素B1。通过制备具有良好环境耐受性的纳米抗体（anti-AFB1Nbs）替代传统抗体，并且将前期合成的磁性聚丙烯羧酸分子刷（magnetic beadscarrying poly(acrylic acid)brushes，MB@PAA）作为“纳米抗体集装箱”以提高其载量，从而提高其富集黄曲霉毒素B1的能力。结果显示：MB@PAA对纳米抗体的负载量为623μg/mg，比相同尺寸的磁珠提高了19倍。同时，该MB@PAA@Nbs对黄曲霉毒素B1的饱和吸附量达到了0.23mg/g，比常规的MB@Nbs提高了35倍。此外，MB@PAA@Nbs在重复使用10次后仍然保持了80%以上的生物活性。综上所述，本研究制备的MB@PAA@Nbs复合微球对黄曲霉毒素B1展现了极高的富集能力，同时为其它分析物的富集提供了一种新的思路。

摘要： 真菌毒素为真菌的次级代谢产物,具有极强的毒性,对农作物、植物及其副产品均有一定污染,严重威胁人类的健康,为了监测和控制真菌毒素的污染,其快速检测方法已成为近年来科学界研究的重点.其中，免疫分析法具有灵敏度高、反应速度快、操作简便、成本低廉、易于开发便携式检测仪器等优点，广泛应用于真菌毒素的快速检测。然而传统免疫分析法中，不可避免使用到人工合成抗原，需要大量毒素标准物以及有机试剂，直接威胁操作人员身体健康。抗独特性抗体的应用将会在很大程度上降低免疫分析法的成本，并减少对分析人员的健康危害。

摘要： 新型小分子Nanobody单体分子量过小、亲和力较低.合适的Nanobody多聚体可能更适用于放射免疫显像.本文用99mTc标记EGFR Nanobody五聚体制备肿瘤靶向显像剂,通过体外及体内实验观察标记抗体与肿瘤细胞和移植瘤组织的结合特性,探讨MmTc-EGFR Nanobody五聚体用于肿瘤放射免疫显像的可行性.三羰基锝法标记抗EGFR Nanobody单体和五聚体,超滤离心法纯化后,放化纯大于95％.在体外细胞水平,99mTc-EGFR Nanobody单体和五聚体均可以与EGFR表达阳性的A431细胞特异性结合;99mTc-EGFR Nanobody单体结合率高于99mTc-EGFR Nanobody五聚体[(11.32±2.73)％和(5.80±0.92)％,P＜0.05].体内SPECT显像,A431移植瘤小鼠尾静脉注射99mTc-EGFR Nanobody五聚体后,肿瘤组织有较明显的放射性分布,最大T/NT2.9(1.5h);注射99mTc-EGFR Nanobody单体后移植瘤仅见模糊软组织影,最大T/NT1.2;OCM-1移植瘤小鼠尾静脉注射两种标记抗体后,肿瘤组织未见明显放射性浓聚.本实验认为99mTc-EGFR Nanobody五聚体优于单体可用于肿瘤放射免疫显像.

摘要： 新型小分子Nanobody单体分子量过小、亲和力较低.合适的Nanobody多聚体可能更适用于放射免疫显像.本文用99mTc标记EGFR Nanobody五聚体制备肿瘤靶向显像剂,通过体外及体内实验观察标记抗体与肿瘤细胞和移植瘤组织的结合特性,探讨MmTc-EGFR Nanobody五聚体用于肿瘤放射免疫显像的可行性.三羰基锝法标记抗EGFR Nanobody单体和五聚体,超滤离心法纯化后,放化纯大于95％.在体外细胞水平,99mTc-EGFR Nanobody单体和五聚体均可以与EGFR表达阳性的A431细胞特异性结合;99mTc-EGFR Nanobody单体结合率高于99mTc-EGFR Nanobody五聚体[(11.32±2.73)％和(5.80±0.92)％,P＜0.05].体内SPECT显像,A431移植瘤小鼠尾静脉注射99mTc-EGFR Nanobody五聚体后,肿瘤组织有较明显的放射性分布,最大T/NT2.9(1.5h);注射99mTc-EGFR Nanobody单体后移植瘤仅见模糊软组织影,最大T/NT1.2;OCM-1移植瘤小鼠尾静脉注射两种标记抗体后,肿瘤组织未见明显放射性浓聚.本实验认为99mTc-EGFR Nanobody五聚体优于单体可用于肿瘤放射免疫显像.

摘要： 新型小分子Nanobody单体分子量过小、亲和力较低.合适的Nanobody多聚体可能更适用于放射免疫显像.本文用99mTc标记EGFR Nanobody五聚体制备肿瘤靶向显像剂,通过体外及体内实验观察标记抗体与肿瘤细胞和移植瘤组织的结合特性,探讨MmTc-EGFR Nanobody五聚体用于肿瘤放射免疫显像的可行性.三羰基锝法标记抗EGFR Nanobody单体和五聚体,超滤离心法纯化后,放化纯大于95％.在体外细胞水平,99mTc-EGFR Nanobody单体和五聚体均可以与EGFR表达阳性的A431细胞特异性结合;99mTc-EGFR Nanobody单体结合率高于99mTc-EGFR Nanobody五聚体[(11.32±2.73)％和(5.80±0.92)％,P＜0.05].体内SPECT显像,A431移植瘤小鼠尾静脉注射99mTc-EGFR Nanobody五聚体后,肿瘤组织有较明显的放射性分布,最大T/NT2.9(1.5h);注射99mTc-EGFR Nanobody单体后移植瘤仅见模糊软组织影,最大T/NT1.2;OCM-1移植瘤小鼠尾静脉注射两种标记抗体后,肿瘤组织未见明显放射性浓聚.本实验认为99mTc-EGFR Nanobody五聚体优于单体可用于肿瘤放射免疫显像.

摘要： 本发明提供了一种抗PD‑1的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌株和应用，涉及生物医药技术领域。本发明所述抗PD‑1纳米抗体和重组纳米抗体，可以特异性识别并结合PD‑1抗原，从而阻断PD‑1/PD‑L1的结合，具有体外肿瘤细胞杀伤作用，杀伤强度与作用时间和效靶比及药物浓度有关，同时还具有体内抗肿瘤作用。

摘要： 本发明提供了一种抗HER‑2的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌株和应用，涉及生物医药技术领域。本发明提供了抗HER‑2的纳米抗体，针对HER‑2的重链，包括框架区FR和抗原决定簇互补CDR；同时将编码所述抗HER‑2的纳米抗体基因和人IgG Fc段基因融合表达的重组纳米抗体。在本发明实施例中，所述重组纳米抗体能够特异性的识别并结合HER‑2抗原，亲和力为9.34μM；同时重组纳米抗体对SKBR‑3细胞具有毒性作用，且毒性作用与重组纳米抗体的作用时间以及作用浓度有关，能够应用于肿瘤的分子诊断和抗肿瘤药物的制备。

摘要： 本发明提供了一种抗CTLA‑4的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌及其应用，属于免疫学技术领域。本发明的抗CTLA‑4的纳米抗体D11针对CTLA‑4的重链设计，抗CTLA‑4的纳米抗体D11包括框架区FR和抗原决定簇互补CDR。本发明的纳米抗体D11能够特异性识别CTLA‑4抗原。本发明将编码所述抗CTLA‑4的纳米抗体D11的编码基因和人IgG Fc段基因融合表达的重组纳米抗体，能够特异性的识别CTLA‑4抗原，能够应用于肿瘤的分子诊断和/或抗肿瘤药物的制备。

摘要： 本发明提供了一种抗LAG‑3的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌株和应用，属于免疫学技术领域。本发明所述纳米抗体来源于骆驼，包括框架区FR和抗原决定簇互补CDR，针对LAG‑3的重链。本发明基于所述抗LAG‑3的纳米抗体，将其与人IgG Fc段连接，形成重组纳米抗体，能够特异性的识别LAG‑3抗原。在本发明实施例中，将所述重组纳米抗体与T细胞和Daudi细胞进行共培养，所述重组纳米抗体杀伤肿瘤细胞的最佳浓度为200μg/mL；同时所述重组纳米抗体可促进T/CD19 CAR‑T细胞对多种肿瘤细胞的杀伤能力。

摘要： 本发明提供了一种基于羽扇豆过敏原Lup an1纳米抗体筛选双抗夹心纳米抗体对的方法，包括如下步骤：(1)胶体金的制备；(2)金标纳米抗体的制备；(3)采用免疫层析试纸条方法进行双抗夹心抗体对的筛选。本发明所述的基于羽扇豆过敏原Lup an1纳米抗体的使用胶体金免疫层析试纸条方法筛选双抗夹心纳米抗体对，能开发一种操作简便、耗时较短的双抗夹心检测体系中捕获抗体与检测抗体的筛选方法，用于后续食物中过敏原检测方法的构建。

摘要： 本发明提供了一种抗CTLA‑4的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌及其应用，属于免疫学技术领域。本发明的抗CTLA‑4的纳米抗体E5针对CTLA‑4的重链设计，抗CTLA‑4的纳米抗体E5包括框架区FR和抗原决定簇互补CDR。本发明的纳米抗体E5能够特异性识别CTLA‑4抗原。本发明将编码所述抗CTLA‑4的纳米抗体E5的编码基因和人IgG Fc段基因融合表达的重组纳米抗体，能够特异性的识别CTLA‑4抗原，能够应用于肿瘤的分子诊断和/或抗肿瘤药物的制备。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗猪圆环病毒2型Cap蛋白纳米抗体、双价中和纳米抗体及其应用。该抗猪圆环病毒2型Cap蛋白双价中和纳米抗体由两个相同氨基酸序列的单价纳米抗体组成，单价纳米抗体的可变区具有3个特定序列的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3。该抗猪圆环病毒2型Cap蛋白双价中和纳米抗体既具有优异的特异性抗原结合能力，又具有稳定的PCV2病毒中和活性；在猪圆环病毒相关疾病防治、尤其是在PCV2感染后作为治疗药物中的应用具有广泛价值。

摘要： 本发明提供了抗SARS‑CoV‑2 S蛋白的纳米抗体、重组纳米抗体、重组载体、重组菌及应用，涉及生物医药技术领域。本发明所述纳米抗体包括C4和C9，C4和C9均为驼源，可特异性识别SARS‑CoV‑2 S蛋白。本发明将所述C4和C9分别与人IgG Fc段进行融合，可获得重组C4和重组C9两种重组纳米抗体，并且经验证，所述重组C4和重组C9均能够特异性的识别SARS‑CoV‑2 S蛋白，都能够应用于新冠病毒的诊断试剂或抗病毒药物的制备。

摘要： 本发明公开了SARS‑CoV‑2中和性纳米抗体、自组装铁蛋白融合纳米抗体及制备方法和应用。本发明首先提供了氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的SARS‑CoV‑2中和性纳米抗体，将该其与铁蛋白的C端融合得到自组装铁蛋白融合纳米抗体，电镜观察证实其展示在自组装铁蛋白笼形结构表面。本发明进一步将这些纳米抗体进行突变优化以提高其表达量和表达效率并提高其对假病毒的中和活性。本发明利用原核表达系统、真核表达系统分别表达纳米抗体融合蛋白。本发明提供的自组装铁蛋白融合纳米抗体颗粒在细胞水平上对SARS‑CoV‑2假病毒具有较强的中和能力，具有成为一种低成本、高中和活性的新冠病毒诊断和治疗药物的潜力。

摘要： 本申请涉及抗体库构建技术领域，尤其涉及一种半合成纳米抗体库构建方法和纳米抗体库，所述方法包括：以CDR1、CDR2和CDR3的cDNA为模板，进行第一扩增，分别得到CDR1、CDR2和CDR3的碱基序列；将FR1、FR2、FR3和FR4的核苷酸序列与所述CDR1、所述CDR2和所述CDR3的碱基序列连接，并进行第二扩增，得到目的基因片段；将目的基因片段与第一载体连接，得到第二载体；将所述第二载体进行培养后筛选，得到含有纳米抗体库的目标载体，其中，所述目的基因片段的碱基序列连接关系包括：FR1‑CDR1‑FR2‑CDR2‑FR3‑CDR3‑FR4。通过FR1、FR2、FR3和FR4的抗体骨架与合成部分CDR区域，构建半合成的纳米抗体库，避免了现有纳米抗体需要通过抗原免疫接种获得，可用抗原直接筛选，快速获得人源纳米抗体，节省了成本和时间。