中和试验

摘要： 本研究旨在开发和优化新型间接ELISA,使其成为一种简单、快速、灵敏、特异的检测抗PEDV抗体的方法,并评价其作为诊断PED方法的有效性。以Vero细胞培养全病毒抗原(LNCT2株)间接ELISA检测方法为基础,以中和试验(NT)为参照,通过受试者工作特征曲线(ROC)分析,确定截断值为0.320,敏感性为92.6,特异性为90.1%。曲线下面积(AUC)为0.949,说明间接ELISA检测具有较好的准确性。间接ELISA与中和试验呈正相关(R=0.815,P<0.05)。此外,kappa静校正结果也显示出良好的一致性。抗原包被保存板干燥后不同时间(1 d、2 W、1、2、3、4、5、6个月)的敏感性和特异性分别为100%和80%~100%。本研究开发的间接ELISA检测可作为PEDV感染的血清学调查和疾病控制的可靠检测手段,且我们的抗原包被ELISA板可在4°C保存至少6个月。

摘要： 纳米抗体(nanobody,Nb)作为目前已知的能与目标抗原结合的最小单位抗体,在生物医药、临床研究等方面具有良好的应用前景。根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)中和性纳米抗体H11-D4基因,将其克隆到pET28a表达载体上后,转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)进行诱导表达,通过镍柱纯化、质谱分析、Western Blot鉴定H11-D4的表达情况并使用中和试验验证其中和活性。研究结果显示,纳米抗体H11-D4可成功在大肠杆菌中表达,最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L^(-1),37°C诱导5 h。H11-D4抗体的分子量大小约为17.9 kD,与预测值相符。经镍柱纯化后,产量为25.16 mg·L^(-1)。透析复性后利用TritonX-114快速有效地去除了内毒素,中和试验成功验证了H11-D4的中和活性(IC50)为171.1 nmol·L^(-1),研究结果可为纳米抗体的原核表达和新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)的预防及治疗提供基础数据支撑。

摘要： 目的 针对肠道病毒A71型(EV-A71)中和实验,评估血清稀释过程中采用两倍稀释和四倍稀释时在中和抗体滴度、几何平均滴度(GMT)、血清阳性率和新感染率等方面的一致性.方法 基于2013-2018年在湖南省安化县建立的1～9岁儿童和母婴前瞻性队列,采用分层抽样法抽取92名参与者共386份血清,对其同期进行两倍稀释和四倍稀释的EV-A71抗体中和实验.使用Bland-Altman法评估抗体滴度之间一致性;采用分层分析方法评估两种稀释方法对GMT、血清阳性率和新感染率的影响.结果 两种稀释方法中和实验所得抗体滴度平均差值为0.04(95％CI:-0.02～0.10),差异无统计学意义.两者一致性限度(LOA)的上下限(-1.12,1.21)(95％CI:-1.22～-1.02;1.10～1.31)均超过了临床可接受范围(-1,1),具有统计学意义(P＜0.05).两种稀释方法在全部人群和阳性人群的GMT及以血清阳转为定义的新感染率的差异分别为2、6和2％(P值均＞0.05).与两倍稀释中和实验相比,四倍稀释中和实验所得血清阳性率高6％(95％CI:1％～11％);当分别以“4倍升高”和“阳转/4倍升高”作为新感染定义时,四倍稀释中和实验所得新感染率分别高8％(95％CI:1％～16％)和9％(95％CI:1％～17％).结论 两倍稀释和四倍稀释中和实验在估计GMT时,两者所得结果可比;但在评估人群新感染率时,两者之间的差异不可忽略.

摘要： 为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37°C孵育2 h,加入4％猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用酶标仪测定反应混合物上清液的OD540nm值判断溶血程度,计算出能够保护50％红细胞不发生溶血的最低血清稀释倍数,即为该血清的中和效价.利用该方法进一步检测了副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌等阳性血清,无交叉反应,表明该方法特异性较强;利用该方法最高能够检测到中和效价为1:1580的APP ApxI毒素抗体阳性的猪血清,表明建立的中和试验具有较高的敏感性;以BALB/c小鼠为模型的感染试验结果表明,当其血清中ApxI毒素抗体的中和效价达到1:20时能够为小鼠提供有效保护.采用建立的方法检测临床采集的103份猪血清样品,能够有效检测其中和抗体,表明该方法可以应用于临床检测可分泌ApxI毒素的APP的感染和含ApxI毒素的亚单位疫苗免疫效果评估,为评价亚单位疫苗的免疫效果和猪传染性胸膜肺炎的诊断提供了技术支持.

摘要： 目的 制备麻疹病毒抗血清,用于含麻疹病毒成分的联合减毒活疫苗的检定.方法 制备麻疹病毒Edm-3株病毒收获液,加入弗氏佐剂,对家兔和豚鼠分别经皮下多点或腹腔途径免疫3针,采血制备抗血清,经除菌过滤和补体灭活后,对抗血清进行中和效价、中和能力、细胞毒性及特异性检测.结果 用4种免疫方式制备的抗血清中和效价均高于1 ∶ 320,其中豚鼠背部皮下组中和效价为最高,达到1 ∶ 2 459;将豚鼠背部皮下组抗血清稀释至1 ∶ 320,能够完全中和每毫升2 000半数细胞培养物感染量的麻疹病毒,同时对Vero细胞、RK-13细胞、MRC-5细胞无细胞毒性,且不可中和腮腺炎病毒、风疹病毒和水痘病毒.结论 采用Edm-3株麻疹病毒收获液,通过背部皮下多点方式免疫豚鼠可制备具有较高中和效价的麻疹抗血清,可用于疫苗检定.

摘要： 目的 探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测输血前患者传染病四项(HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV)为弱阳性结果的准确性.方法 对东部战区总医院输血医学科142份传染病四项弱阳性标本,分别用中和实验对HBsAg和免疫印迹实验对抗-HCV、抗-HIV、抗-TP进行确证检测,并回顾性跟踪统计一段时间内166例初次检测为弱反应性患者的ELISA复查结果.结果 传染病四项标本ELISA方法检测的样本值与临界值(Sample/cut off,S/CO)的比值在1.0～3.0之间,其阴性率分别为41.67％、93.33％、85.71％、20.00％;S/CO值在3.0～5.0之间,其阴性率分别为13.33％、83.33％、100.00％、0.00％;S/CO值5.0～7.0以上,其阴性率分别为8.33％、75.00％、100.00％、0.00％.166例为弱反应性的标本用ELISA复查后,传染病四项转阴率分别为11.62％、55.56％、100.00％、16.67％.结论 传染病四项检测结果为弱阳存在很大比例假阳性率,且随着S/CO值的增高,假阳性比例逐渐减少且跟踪复查患者的转阴率也明显下降.

摘要： 目的 利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和商品化磁微粒化学发光法(CLIA)检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)疫苗(简称新冠疫苗)免疫后IgG抗体,并与中和试验(NT)结果进行比较,探讨两种酶免方法与中和试验结果的一致性.方法 分别用ELISA、CLIA和NT检测143个健康人接种2剂新冠疫苗免疫前和免疫后28 d的新冠抗体,计算3种方法获得的抗体阳转率、定量结果,分析定量结果之间的关系.结果 ELISA、CLIA及NT检测新冠疫苗抗体阳转率分别为97.9％、98.6％和85.3％.ELISA定量检测免疫后血浆最高稀释度的几何均数为586.6;CLIA S/CO值的均值为11.26;NT的抗体几何平均滴度为7.6;ELISA、CLIA与NT定量结果的相关系数分别为0.69(P＜0.01)和0.65(P＜0.01),ELISA与CLIA定量检测的相关系数为0.79(P＜0.01).结论 3种方法均检测到新冠疫苗免疫后抗体达到较高水平,ELISA、CLIA用于检测新冠疫苗免疫后的IgG抗体结果比较一致,同时与NT定量检测结果相关性较好.

摘要： 应用阻断ELISA与中和试验两种不同方法对断奶仔猪进行猪瘟病毒抗体检测,在所检的40份样品中85%的结果相符,且15%不相符样品中83%为阻断ELIsA检测的可疑样品,说明两种检测方法有较好的相关性.

摘要： 在黄热病毒种子批的支原体检测试验(指示细胞培养法)，需采用对支原体无抑制作用的特异性抗血清中和黄热病毒。以往使用的猴抗黄热病毒血清，因试验猴来源困难，产生的中和抗体水平较低，不能完全中和病毒，从而影响结果的判定。本研究用黄热病毒免疫产蛋鸡，从鸡蛋中提取特异性卵黄抗体IgY，应用于黄热病毒种子批的支原体细胞法检测试验，同时与其它动物类型的特异性抗血清进行了比较。结果显示抗黄热病毒IgY抗体对病毒的中和效价最高，且对试验所采用的细胞基质无毒性反应。该研究为IgY用于病毒中和试验提供了可行性依据。

摘要： 本试验用Marc-145细胞从辽西某发病猪场采集的病料中分离获得一株病毒，经血清中和试验和间接荧光抗体试验等证实其为一株PRRSV，命名为PRRSV LX株。该毒株能在Marc-145细胞上增殖并致细胞病变，该病变能被PRRSV美洲型阳性血清所抑制，不被猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒阳性血清所抑制，与美洲型PRRSV阳性血清经间接荧光抗体染色呈阳性反应，电镜下观察到直径55nm左右的病毒粒子。

摘要： 使用灭活的SARS病毒免疫SPF鸡,定期收集鸡蛋.用水稀释法提取鸡蛋中的IgY,将其进一步纯化,制备了抗SARS病毒卵黄抗体.经SDS-PAGE、Western-blot及中和试验结果表明纯化后的卵黄抗体具有较高的纯度和反应活性,中和效价可达1:640.冻干及稳定性试验的结果表明,冻干后的卵黄抗体物理性状、反应活性及稳定性良好.

摘要： 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)与中和试验(SN)方法,对伪狂犬病活疫苗免疫猪血清抗体水平进行了监测,并对免疫猪和空白对照猪进行伪狂犬病野毒抗体检测.结果表明伪狂犬病活疫苗免疫健康敏感猪7d后抗体水平开始上升,35d后达到高峰,维持时间长达2个月以上,之后逐步下降,直至试验结束(365d)PRV-Ab仍呈阳性.而空白对照猪血清自始至终PRV-Ab均为阴性,全部猪血清伪狂犬病野毒抗体皆为阴性.说明通过长时间的同栏饲养未发现同居感染和伪狂犬病野毒感染.

摘要： 以禽流感(AIV)H9N2亚型病毒株免疫SPF鸡,制备鸡抗AIV(H9N2)高免血清,将该血清提纯得到免疫球蛋白IgG.用该IgG制备疫苗免疫SPF BALB/c小鼠,取共脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,采用间接酶联免疫吸附试验检测杂交细胞培养上清液,筛选获得3株特异性单克隆抗体,分别命名为2HD、2HG、3HD.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测这些细胞系培养上清液中的抗体效价为2,小鼠腹水ELISA效价是细胞培养上清液的300~500倍.经检验表明,该单克隆抗体仅与相应的鸡抗AIV H9N2亚型独特型抗体血清发生特异性反应,而不能与鸡抗AIV的不同血清亚型(HN、HN)及法氏囊病毒(IBDV)、新城疫病毒(NDV)、产蛋下降综合征病毒(EDS)等的抗体发生反应.制备的单克隆抗体免疫SPF鸡收获的血清与H9N2亚型AIV在MDCK细胞上进行中和试验,表明鸡抗该单克隆抗体血清的中和效价较高.

摘要： 本研究用细胞中和试验的方法测定猪瘟兔化弱毒(Hog cholera lapinised virus,HCLV)疫苗阳性血清对不同野毒的体外中和效价,测定了猪体内免疫抗体与免疫保护力的关系.本研究还拟通过体外检测,以判定动物的免疫抗体水平,对制定合理的免疫程序具有重要的意义.

摘要： 用两批伪狂犬病活疫苗分别免疫40-50Kg的健康敏感猪,每批疫苗免疫四头,每头肌注一头份.分别地免疫10天、20天、后采血,分离血清.采用中和试验和乳胶凝集试验(LAT)检测血清抗体.结果:免疫十天后,伪狂犬病中和抗体效价和LAT效价的几何平均值(GMT)分别为10,2.25;12,2.25.免疫20天后,伪狂犬病中和抗体效价和LAT效价的几何平均值分别为46,6;65.4,5.4.免疫20天后的血清中和抗体效价GMT约为免疫10天后的5倍,而LAT效价增长约2.5倍.

摘要： 应用犬瘟热病毒(CDV)血清中和试验,对我国华东、西南、东北、华北等地区18个省份的犬进行了犬瘟热的血清学调查.结果表明,我国各地均有犬瘟热病存在,不同地区犬瘟热血清中和抗体水平高低不一;不同年龄阶段的犬血清抗体水平有明显差异;发病后康复犬均能维持较高的抗体水平(1:100以上);免疫后犬的抗体水平有明显上升,但有的还不能达到足够的保护力,免疫失败的现象时有发生;哺乳母犬与仔犬血清中CDV SN抗体水平呈正相关,未吃到初乳的仔犬血清CDV SN滴度极低;幼犬血清中CDV SN抗体滴度与日龄呈负相关,到45日龄时下降到1:10以下,不能抵抗自然野毒的侵袭.

摘要： 本实用新型属于一种试验剂试验中和设备，包括加工箱，所述加工箱为上壳与下壳合页连接组成，所述加工箱内的上壳部分设置有分隔板，所述分隔板内设置有定频升降机构，所述限位机构包括：滑道、滑轮、连接短杆以及安置板，所述安置板与所述连接部连接，所述连接短杆设置在所述安置板的相对两侧表面，所述滑道开在所述加工箱内侧表面，所述滑轮设置在所述连接短杆上，所述滑轮啮合在所述滑道内；所述安置板的下端面设置有搅拌电机，所述搅拌电机的输出端设置有搅拌杆，所述搅拌杆上设置有搅拌叶片，本实用新型通过驱动凸轮带动下实现了搅拌叶片的定频升降移动，使得搅拌的高度不断的变化，使得容器内搅拌的效果更好。

摘要： 一种在线样品稀释中和试验装置、是由稀释装置、中和器、指令控制装置、硅胶管和控制线组成，超纯水储瓶、样品瓶通过稀释硅胶管连接到蠕动泵、注射泵、三通混合器、电动两位四通阀、三通混合器、中和器，控制箱通过控制主线控制连接蠕动泵、注射泵、三通混合器、电动两位四通阀、中和器，通过管道和电路在线完成样品自动稀释和样品中和，在给色谱分析系统供样，完成分析。本发明有效解决了现有中和法会引入离子污染所造成的问题，在整个中和过程中不再使用吸管或容量瓶，所以减少了污染源，从而保证实验数据测量的精确值，为研究雪冰样品离子色谱分析提供了可靠的试验条件。

摘要： 本发明公开了一种溯源至新冠病毒中和试验效价的新冠病毒中和抗体乳胶法检测试纸条，其含有依次接合在底板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水纸，其中，结合垫包被有分别偶联了RBD蛋白1和羊抗鸡IgY的乳胶微球；反应膜上设置有检测限和质控线，检测限包被有RBD蛋白2，质控线包被有鸡IgY抗体。其相较于cVNT具有成本低、检测快速、灵敏、即时、无需专业操作等特点，只需在二级生物安全实验室就可完成；且相较于常规乳胶检测试纸条具备半定量优势；可有效地监测临床研究中的疫苗接种反应及作为疫苗效果的评价指标；提高新冠检出率，弥补核酸检测假阴性带来的漏检；检测新冠康感染者/康复者体内中和抗体含量，以判断是否存在再次感染风险。

摘要： 一种盐湖水中和试验装置，包括中和装置、指令控制装置、聚四氟乙烯管和控制线，中和装置是由储液罐的超纯水储瓶、样品瓶通过聚四氟乙烯管连接的2台注射泵、蠕动泵、样品过滤器、电动两位六通阀、中和器、控制器组成，储液罐是由超纯水储瓶和样品瓶组成。本发明通过管道和电路在线完成样品自动中和过程，通过操作控制器控制样品流量以及中和电流通过管道和电路完成盐湖水样品的中和。本发明通过控制电路和阀的切换完成样品的中和功能，实现了强碱性盐湖水样品呈现中性，扩大了盐湖水样品的应用范围。本发明结构简单，操作方便，实用性强，成本低，提高了该方法的重现性、精确度。

摘要： 一种在线中和试验装置，包括储液部分、中和部分、控制部分，储液部分包括超纯水储瓶和样品瓶；中和部分包括注射泵Ⅰ、注射泵Ⅱ、蠕动泵、过滤器、电动两位六通样品收集阀、中和器、电动两位六通样品浓缩阀、色谱系统；控制部分包括控制器和控制连接线；过滤器设置于注射泵Ⅱ和电动两位六通样品收集阀之间。本发明中过滤器的作用是将比较混浊的样品过滤后收集，以保证管路和中和器不堵塞。本发明结构简单，操作方便，实用性强，成本低，在大气气溶胶样品、湖水、河水样品，成分复杂的土壤样品分析试验中，在线中和样品并可通过控制电路和阀的切换来选择使用样品中和功能，降低样品的酸碱度。

摘要： 一种在线样品稀释中和试验装置、是由稀释装置、中和器、指令控制装置、硅胶管和控制线组成，超纯水储瓶、样品瓶通过稀释硅胶管连接到蠕动泵、注射泵、三通混合器、电动两位四通阀、三通混合器、中和器，控制箱通过控制主线控制连接蠕动泵、注射泵、三通混合器、电动两位四通阀、中和器，通过管道和电路在线完成样品自动稀释和样品中和，在给色谱分析系统供样，完成分析。本发明有效解决了现有中和法会引入离子污染所造成的问题，在整个中和过程中不再使用吸管或容量瓶，所以减少了污染源，从而保证实验数据测量的精确值，为研究雪冰样品离子色谱分析提供了可靠的试验条件。

摘要： 本实用新型涉及化学试验装置技术领域，具体是一种半自动化酸碱中和试验装置，包括底座，底座的顶部固定连接有支架，支架上安装有蝴蝶夹，蝴蝶夹夹持连接有滴定管，滴定管的底部设有调节阀，滴定管的下方设有杯盖，杯盖通过杯盖固定夹与支架固定连接，杯盖上设有两个通孔，通孔内设有橡胶环，滴定管的底端套接在其中一个橡胶环的内部，另一个橡胶环内套接有PH计玻璃电极，PH计玻璃电极通过连接线电连接有PH计本体，杯盖的下方设有自动升降平台，自动升降平台上设置有磁力搅拌器，磁力搅拌器顶部设置有无嘴烧杯，无嘴烧杯内部设有转子，无嘴烧杯位于杯盖的下方；本实用新型能够使滴定试验的准确性更高，且更加安全。

摘要： 一种在线中和试验装置，包括储液部分、中和部分、控制部分，储液部分包括超纯水储瓶和样品瓶；中和部分包括注射泵Ⅰ、注射泵Ⅱ、蠕动泵、过滤器、电动两位六通样品收集阀、中和器、色谱系统；控制部分包括控制器和控制连接线；过滤器设置于注射泵Ⅱ和电动两位六通样品收集阀之间。本实用新型中过滤器的作用是将比较混浊的样品过滤后收集，以保证管路和中和器不堵塞。本实用新型结构简单，操作方便，实用性强，成本低，在大气气溶胶样品、湖水、河水样品，成分复杂的土壤样品分析试验中，在线中和样品并可通过控制电路和阀的切换来选择使用样品中和功能，降低样品的酸碱度。

摘要： 一种盐湖水中和试验装置，包括中和装置、指令控制装置、聚四氟乙烯管和控制线，中和装置是由储液罐的超纯水储瓶、样品瓶通过聚四氟乙烯管连接的2台注射泵、蠕动泵、样品过滤器、电动两位六通阀、中和器、控制器组成，储液罐是由超纯水储瓶和样品瓶组成。本实用新型通过管道和电路在线完成样品自动中和过程，通过操作控制器控制样品流量以及中和电流通过管道和电路完成盐湖水样品的中和。本实用新型可通过控制电路和阀的切换完成样品的中和功能，实现了强碱性盐湖水样品呈现中性，扩大了盐湖水样品的应用范围。本实用新型结构简单，操作方便，实用性强，成本低，提高了该方法的重现性和精确度。

摘要： 一种在线样品稀释中和试验装置、是由稀释装置、中和器、指令控制装置、硅胶管和控制线组成，超纯水储瓶、样品瓶通过稀释硅胶管连接到蠕动泵、注射泵、三通混合器、电动两位四通阀、三通混合器、中和器，控制箱通过控制主线控制连接蠕动泵、注射泵、三通混合器、电动两位四通阀、中和器，通过管道和电路在线完成样品自动稀释和样品中和，在给色谱分析系统供样，完成分析。本实用新型有效解决了现有中和法会引入离子污染所造成的问题，在整个中和过程中不再使用吸管或容量瓶，所以减少了污染源，从而保证实验数据测量的精确值，为研究雪冰样品离子色谱分析提供了可靠的试验条件。