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噬菌体展示

噬菌体展示的相关文献在1993年到2023年内共计409篇,主要集中在基础医学、分子生物学、生物化学 等领域,其中期刊论文313篇、会议论文19篇、专利文献81225篇;相关期刊169种,包括生物工程学报、生物化学与生物物理进展、生物技术通报等; 相关会议19种,包括中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会、中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会、2011年中国药学大会暨第11届中国药师周等;噬菌体展示的相关文献由1384位作者贡献,包括姜勇、潘卫、丁宁等。

噬菌体展示—发文量

期刊论文>

论文:313 占比:0.38%

会议论文>

论文:19 占比:0.02%

专利文献>

论文:81225 占比:99.59%

总计:81557篇

噬菌体展示—发文趋势图

噬菌体展示

-研究学者

  • 姜勇
  • 潘卫
  • 丁宁
  • 王旻
  • 胡宝成
  • 席俊
  • 严杰
  • 吴国球
  • 孙远明
  • 岳文涛
  • 期刊论文
  • 会议论文
  • 专利文献

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排序:

年份

    • 吴飞飞; 张承宇; 卢朝秀; 段涛; 申虎威
    • 摘要: 目的:制备难治性分化型甲状腺癌患者的抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的Fab片段,并验证其抗VEGF活性。方法:利用含高滴度VEGF抗体的难治性分化型甲状腺癌患者的外周血淋巴细胞构建一个噬菌体文库。采用核苷酸测序和免疫印迹法筛选特异性抗VEGF抗体的Fab片段,再使用细胞增殖法检测Fab片段的抗肿瘤活性。结果:从噬菌体库中筛选并分析6种Fab片段,均与VEGF具有结合活性,其中2种抗体Fab6(OD值为0.72±0.02)、Fab16(OD值为0.56±0.02)与VEGF有较高的结合活性,能够在体外阻断人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)中VEGF的表达。对6个克隆的重链可变区和轻链可变区序列分析表明,它们的重链可变区(VH)序列与抗原表位直接相互作用的互补决定区(CDRS)有12个显著差异。Fab2、Fab6、Fab16三个克隆片段均表现出抑制活性,差异有统计学意义。结论:噬菌体展示技术可用于筛选人源性VEGF单克隆抗体,为研究人源性VEGF单克隆抗体对难治性分化型甲状腺癌的治疗作用奠定基础。
    • 康子茜; 王加利; 和似琦; 崔鑫铭; 石冰洁; 王建勋
    • 摘要: 目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA。采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体。以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线。运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定线性范围,计算最低检测限。以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性。结果抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面。随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL。重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的。结论本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点。
    • 孔星
    • 摘要: 特异性抗体可以与蛋白相结合,监控靶点蛋白在生物体内的变化,比如质量和定位等变化,因此可以揭示蛋白在生命活动中所起的功能,在科学研究中起着关键作用。单克隆抗体因其特异性和稳定性越来越受到重视,筛选单克隆抗体有多种方法,本文以噬菌体展示技术为核心,阐述了抗CDT1蛋白(蛋白号:Q9H211)单克隆抗体的开发工艺,通过对该工艺流程的两点优化方案,构建了噬菌体scFv文库,成功地淘选到抗CDT1蛋白的噬菌体scFv,通过酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和免疫印迹检测确定其特异性和亲和性后,将此scFv转换成完整抗体IgG,可以应用于免疫印迹和免疫荧光试验,表明此工艺优化的可行性。
    • 康晓彤; 赵博
    • 摘要: 目的噬菌体展示技术(Phage display technology,PDT)是一种独立于任何免疫系统并在体外进行筛选多肽或者抗体的一种技术,可以从噬菌体抗体库中筛选得到特异性结合的单克隆抗体(monoclonal antibody)。本研究提出了一种应用于噬菌体抗体库筛选的质粒构建方法,旨在提高噬菌体展示技术的筛选效率。方法首先将编码整个抗体结合域的基因(以单链可变片段scFv的形式)融合到基因III,并在融合噬菌粒scFv-PIII间引入牛凝血酶(thrombin)酶切位点,通过SDS-PAGE及Western Blot实验验证牛凝血酶特异性洗脱效果,同时利用ELISA(酶联免疫吸附实验)及噬菌体滴度检测特异性洗脱后单链抗体的结合活性,最后根据该质粒设计一种新的模型筛选方法,验证筛选效率。结果本研究成功构建目标质粒并利用该质粒进行模型筛选,证实筛选效率得到提高。结论在构建噬菌体抗体库的噬菌粒载体上添加牛凝血酶特异性酶切位点的筛选方法,可以减少筛选轮次高效筛选出特异性噬菌体抗体。
    • 肖丽荣; 李彬; 王家伟; 成杰; 别鹏飞; 史秋梅
    • 摘要: 为快速筛选获得牛冠状病毒(BCoV)特异性抗体,本试验用重组的牛冠状病毒N蛋白免疫BALB/c小鼠,从免疫小鼠脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,分别扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,采用重叠延伸PCR法将VH、VL拼接为完整的单链抗体(scFv)基因,将scFv基因与酶切的噬菌粒连接,电转入感受态细胞中,过夜培养获得初级噬菌体抗体库,测定库容为8×10^(8)PFU。自库中随机挑取15个单克隆的噬菌体通过PCR鉴定,结果显示其中13个克隆扩增出约800 bp大小的目的片段,阳性率为86.7%,说明噬菌体抗体库构建成功。该抗体库经4轮富集淘选和酶联免疫吸附试验检测,最终获得32株与N蛋白特异性反应的噬菌体克隆。将32株阳性克隆进行PCR鉴定并测序,分析序列后发现有19株阳性单链抗体基因正确,选取阳性值较高的5株阳性单链抗体检测其噬菌体抗体结合活性,其中阳性单链抗体scFv-154与N蛋白的结合活性较高。本试验为进一步探讨单链抗体在牛冠状病毒病诊断和防控技术领域的应用提供了依据。
    • 李天宁; 邵艳宏; 朱浩; 王文皓; 刘运德; 袁玉华
    • 摘要: 目的:获得人-人嵌合型抗丙肝抗体的阳性对照品.方法:采集20例具有高抗体滴度的抗丙肝抗体阳性患者外周血,混合后分离外周血单个核细胞,TRIzol提取总RNA,逆转录合成cDNA.PCR分别扩增重链可变区和轻链可变区并以其为模板,获得ScFv,导入到PCANTAB 5E载体上构建噬菌体展示库.分别用NS3、NS4、NS5和core抗原对噬菌体库进行5轮的富集和淘洗;通过Phage ELISA的方法对单克隆菌落进行特异性鉴定,分别获得抗丙肝NS3、NS4、NS5抗体和两个抗丙肝core抗体.将ScFv的VH和VL分别克隆到pcDNA3.4载体上,构建人IgG全长抗体并通过Lipo3000转染293T细胞.收集细胞上清,经protein A纯化,保存于-80°C.结果:成功构建了抗丙肝抗体噬菌体库;筛选并表达了5个分别针对NS3、NS4、NS5和core抗原的阳性抗体,经验证表达的抗丙肝阳性抗体在-20°CC~37°CC表现稳定.多次重复冻融后不会影响抗体的使用效果.且5种抗体在国内外多种丙型肝炎检测试剂盒间测试均为阳性,具备一定的通用性.结论:获得5种人-人嵌合型抗丙肝抗体的阳性对照品且适用于多种丙型肝炎检测试剂盒.
    • 曹佳文; 曹丹燕; 熊兵
    • 摘要: 环肽药物凭借其高效的结合亲和力、靶向选择性、低毒性及代谢稳定性等良好的成药特性,逐渐成为药物研究的新兴方向.近年来,处于临床研究的环肽药物的数目持续增加.已上市的环肽药物大多来源于天然产物及其衍生物,而新进临床研究的环肽药物多数是基于理性设计及体外进化的基因编码展示技术制备获得的(如BT1718、PTG-300、POL6326等).其中噬菌体展示技术因其成熟的研究体系、成本低、操作简单等特点受到研究者的广泛关注.为更好利用噬菌体展示技术开发多样性的环肽药物,本文综述了近期该领域的研究进展,期望为获得有临床应用价值的候选环肽药物提供新的策略.
    • 刘晓芳; 刘贝; 周方月; 黄云祥; 钟引凤; 张茹云; 梁宇芳; 王丹; 付金衡
    • 摘要: 将增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP)免疫羊驼后构建纳米抗体免疫库,固相淘选eGFP纳米抗体;构建E.coli Rosetta表达载体,诱导表达纳米抗体,并鉴定其结合活性及特异性;辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标纳米抗体,确定其工作浓度及稳定性;将纳米抗体与纳米磁珠偶联应用于免疫沉淀B13-EGFP融合蛋白.四免后抗血清滴度超过1.28×106,获得库容量为1.85×108 cfu的抗eGFP纳米抗体噬菌体展示文库;原核表达10种独特基因序列的纳米抗体,均为可溶性表达;采用ForteBio Octet确定出纳米抗体4-28与eGFP的亲和常数(KD)最高,达到9.67×10-11 M;纳米抗体4-28与eGFP、绿色荧光蛋白(Green Fluo-rescent Protein,GFP)特异性结合;HRP标记纳米抗体4-28检测范围是1:10000~1:25000(浓度100~40 ng·mL-1),比市场上现有的检测二抗(稀释范围1:5000~1:20000)灵敏度更高;纳米抗体4-28偶联羧基化纳米磁珠,免疫沉淀B13-eGFP融合蛋白,实现了简单快速分离目的蛋白B13-eGFP.
    • 钟引凤; 刘晓芳; 刘贝; 黄云祥; 何庆华; 李燕萍; 涂追; 刘琼; 付金衡
    • 摘要: 制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶B(UreB)纳米抗体.用灭活的全幽门螺杆菌免疫羊驼,以重组蛋白UreB为靶分子,从噬菌体展示文库中筛选出能与重组蛋白UreB特异性结合的纳米抗体,构建原核表达载体,IPTG诱导表达,ELISA鉴定纳米抗体特异性.获得5×107 cfu的噬菌体文库,将筛选的两个OD450值较高且序列不同的纳米抗体HU2-9和HU2-36分别进行表达SDS-PAGE鉴定均为可溶性且表达量分别为92和32 mg·L-1.ELISA结果表明两个纳米抗体能特异性结合Hp菌体蛋白,并对尿素酶活性具有一定的抑制作用.成功淘选出6种独特序列的抗幽门螺杆菌UreB纳米抗体.
    • 王晓燕; 王思怡; 杨婷; 王建华
    • 摘要: 为生物传感分析选择合适的目标识别分子是提高检测灵敏度和准确度的关键.为此,人们开发了一系列诸如小分子、抗体、多肽和适配体等亲和配体.基于噬菌体展示技术筛选出数千种特异性配体,可以噬菌体为组合元件构建生物传感探针.该方法具有优异的靶向能力,并具有较强的环境耐受性.常见的M13噬菌体表面由多达2700个拷贝的主要衣壳蛋白pⅧ通过螺旋形式包裹内部的单链环状DNA而成,两端分别还有3~5个拷贝的次要衣壳蛋白pⅦ、pⅨ和pⅢ、pⅥ.通过噬菌体展示技术和化学修饰可对噬菌体进行功能化改造,M13噬菌体目前已成功应用于生物、化学、医学、材料和能源等领域.该文探讨了M13噬菌体在传感分析领域的应用,并展望了基于M13噬菌体传感探针的发展趋势.
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