神经样细胞

摘要： 目的:研究氯倍他索(Clo)对鼻粘膜外胚层间充质干细胞(EMSCs)向神经样细胞分化的影响.方法:贴壁筛选法分离培养EMSCs,免疫荧光法鉴定体外扩增的EMSCs;MTT法检测Clo对EMSCs增殖能力的影响;成神经样细胞诱导实验分为Clo组、音猬因子(SHH)组和空白对照组,采用全反式维甲酸(ATRA)诱导各组细胞向神经样细胞分化;倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光和免疫印迹方法检测神经元细胞相关蛋白.结果:体外分离培养的EMSCs高表达间充质干细胞和神经嵴源干细胞标志物Vimentin和Nestin.各组EMSCs成神经样细胞诱导7 d后,Clo组和SHH组EMSCs呈现双极和多极的典型神经样细胞形态并且高表达神经元细胞相关蛋白.Clo组EMSCs表达SHH和SMO的水平明显高于空白对照组,与SHH组比较差异无统计学意义(P>0.05);Clo可促进EMSCs分泌内源性脑神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF).结论:Clo可通过激活SHH信号通路和上调内源性神经营养因子水平促进EMSCs向神经样细胞分化.

摘要： 目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)、川芎嗪定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的潜能.方法 分离并培养大鼠股骨的BMSCs,细胞分4组进行药物诱导,对照组、BDNF组、川芎嗪组及BDNF联合川芎嗪组.诱导过程中用倒置显微镜观察细胞的形态变化,并应用实时荧光定量PCR技术和免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞内巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)mRNA和蛋白表达量的变化.结果 川芎嗪联合BDNF组诱导BMSCs向神经细胞分化的效率明显高于其他诱导组.结论 川芎嗪联合BDNF可以明显提高BMSCs向神经细胞分化的效率和存活率.

摘要： Objective To establish a stable experimental system to culture , purify, amplify and identify rat bone marrow mesenchy-mal stem cells(BMSCs)in vitro.Methods BMSCs were isolated from rats by wall sticking method .The cells'morphology was observed, the expressions of CD90, CD29, CD34 and CD45 were detected by immunocytochemical staining and flow cytometry .Beta mercapto ethanol and basic fibroblast growth factor were separately used to induce differentiation of BMSCs into neuron -like cells.The expressions of neural marker proteins such as Nestin , NSE and GFAP were detected by Western blot .Results The expressions of CD 90 and CD29 were positive in cul-tured BMSCs for the third generation , and the expressions of CD 34 and CD45 were negative .Compared with the non-induced BMSCs , the expressions of Nestin, NSE and GFAP of induced BMSCs were obviously higher (P<0.05).Conclusions A stable experimental method is successfully established to isolate and culture BMSCs which could also be induced into neuron -like cells.The experimental system will be the basis for further research .%目的 建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养、纯化、扩增的实验体系,并进行细胞表面抗原的鉴定及定向诱导分化检测.方法 采用全骨髓贴壁培养法分离、纯化大鼠BMSCs;观察细胞形态,采用细胞免疫化学染色及流式细胞术检测细胞表面CD90、CD29、CD34和CD45表达;分别使用β巯-基乙醇及碱性成纤维细胞生长因子诱导细胞向神经样细胞分化,采用Western印迹法检测诱导后神经标志蛋白〔神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)〕表达.结果 培养至第3代的BMSCs,CD90、CD29表达阳性,CD34和CD45表达阴性;经诱导后,神经标志蛋白表达显著增高(P<0.05).结论 全骨髓贴壁培养法可分离、培养得到高纯度、具备相关生物学特性的BMSCs,且经诱导可定向分化为神经样细胞.

摘要： 目的 探讨黄芩苷诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUMSCs)向神经细胞诱导分化的作用、条件和机制.方法 选取培养P4代的hUMSCs,根据黄芩苷给药情况分为4组:25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组和对照组.动态观察细胞形态变化,每天进行免疫组织化学染色1次,检测诱导细胞中神经干细胞标志物巢蛋白(Nestin)、星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)的表达情况.结果 黄芩苷诱导1 d,100μg/mL组可见个别细胞出现了形态改变,即胞体收缩、细胞变圆、折光度增加,随时间延长逐渐形成突起,4 d呈典型神经样细胞改变并数量逐渐增多;50μg/mL组3 d才开始出现折光度增强的类似改变,之后出现类似趋势;25μg/mL组和对照组细胞形态未见明显变化;7 d时神经样变化的细胞可见漂浮死亡现象,神经样细胞比例下降.对照组免疫组织化学染色呈阴性.结论 黄芩苷可在体外定向诱导hUMSCs向神经样细胞分化,且表达神经干细胞标志物Nestin、神经元标志物NSE以及神经胶质细胞标志物GFAP,在25～100μg/mL浓度范围内,有随浓度增加诱导作用增强的趋势.

摘要： 目的:探讨音猬因子(sonic hedgehog,SHH)基因转染对大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesen-chymal stem cell,EMSCs)分化为神经样细胞的影响.方法:利用组织贴壁法分离、培养和纯化EMSCs,SHH基因重组腺病毒转染EMSCs(SHH-EMSCs),免疫荧光染色观察转染前后EMSCs的干细胞标志蛋白巢蛋白、波形蛋白和Connexin-43,蛋白质印迹检测SHH蛋白表达.诱导分化实验分为4组:SHH-EMSCs诱导组、SHH-EMSCs正常培养组、EMSCs诱导组、EMSCs正常培养组;倒置相差显微镜观察分化过程中细胞形态变化;免疫荧光染色和蛋白质印迹检测诱导后轴突膜蛋白(GAP-43)、β-3微管蛋白(TUBB3)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达.并将SHH-EMSCs悬液注入大鼠脊髓组织内,观察该细胞在脊髓内存活和分化情况.结果:免疫荧光染色结果显示,经SHH基因转染后的EMSCs巢蛋白、波形蛋白和Connexin-43阳性率达90％;蛋白质印迹结果显示,SHH蛋白表达明显升高.SHH-EMSCs诱导组培养7 d后,细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经细胞样形态;免疫荧光染色和蛋白质印迹结果表明SHH-EMSCs诱导组GAP-43、TUBB3、MBP和Smoothen的表达水平明显高于其他3组,差异有统计学意义;GFAP在4组细胞中均为弱表达,无显著差异.SHH-EMSCs在大鼠脊髓内存活情况良好且表达TUBB3.结论:SHH基因转染的EMSCs具有更高的向神经样细胞分化效率,并可在脊髓内存活;EMSCs可望成为移植脊修复髓损伤的一种新的种子细胞.

摘要： 目的 探究人脐带间充质干细胞具有的生物学特性,并对其向神经样细胞的分化进行研究.方法检测人脐带间充质干细胞细胞表面的标记;以β巯基乙醇与丹参诱导其向神经细胞分化,并为分化细胞与未分化细胞进行免疫细胞化学鉴定.此外,半定量RT-PCR检测细胞神经相关基因表达.结果分离自人脐带的贴壁细胞在体外可以生长成类似成纤维细胞的形态,在未分化状态下可以维持稳定增殖形态,且体外增殖远超10代,这类细胞表面标记CD105、CD59、CD44、CD29有较高的表达,而造血细胞的表面标记CD117、CD45、CD34、CD33、CD28、CD14则无表达或低表达,而与其相同表达的还有移植免疫排斥相关的表面标记,如CD86、CD80、CD40.经诱导分化的细胞表达神经元标记β-Ⅲ类神经微管和神经微丝、神经干细胞标记巢蛋白、神经胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白.经过RT-PCR检测可知,经丹参诱导后的间充质干细胞表达神经干细胞的相关基因Neatin,而诱导前后间充质干细胞全部表达神经细胞基因Pleiotrophin并且在诱导后表达增强.结论人脐带间充质干细胞具有易于培养扩增的生物学特性,其表达间充质干细胞的表面标记,低或不表达造血细胞、与移植排斥有关的细胞标记.同时,其可以分化为神经样细胞并表达神经细胞的基因与相关标记,这种细胞可以作为肝细胞的一个来源,用于中枢神经系统细胞的移植.

摘要： Objective To explore the effect of Cimicifuga heracleifolia Kom. as medicinal guiding of Rehmannia decoction (CRD) contained serum on survival and differentiation of neural stem cells (NSCs) in NSCs and bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) co-culture system. Methods Firstly, the modeling of BMSCs co-cultured with NSCs was set up,then CRD contained serum was put into this co-culture syste. The cells of 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) and neuron-specific enolase (NSE), glial fibrillary acidic protein (GFAP), microtubule-associated protein (MAP2) , myelin basic protein (MBP) were stained with double immunocytochemical staining method at 3rd dayof culture. The survival rate of NSCs was detected by the flow cytometry (FCM) and expression of NSCs was detected by immunocytochemistry and Western bolt. The effect of CRD con-tained serum on survival and differentiation of NSCs was analyzed. Results Compared with the normal saline group, higher concentration and middle concentration of CRD contained serum could significantly increased the survival rate of NSCs, and the NSE, GFAP, MAP-2 and MBP activity on the 7th day in BMSCs and NSCs co-culture system (P<0.01). Conclusion CRD contained serum could promote the effective differentiation and increase the survival rate activity of NSCs and in BMSCs and NSCs co-culture system.%目的 探讨以升麻为药引子的地黄饮子(CRD)含药血清对经过骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养后的大鼠神经干细胞(NSCs)的存活和分化的影响.方法 建立BMSCs与NSCs共培养模型,在共培养体系中加入CRD含药血清,从培养第3天开始分别进行5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP-2)、少突胶质细胞特异性表达蛋白标志物(MBP)免疫细胞化学双染色.采用流式细胞仪检测NSCs的存活率,利用细胞免疫荧光和Western blot法鉴定NSCs的分化情况,比较NSCs的存活率和分化率,分析CRD含药血清对共培养后NSCs的存活及分化的影响.结果 与生理盐水对照组相比,中、高浓度CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中第7天能显著提高NSCs存活率和NSE、GFAP、MAP-2、MBP活性(P<0.01).结论 CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中能促进NSCs有效分化和提高NSCs存活率.

摘要： 目的：观察 miR-363、脱中胚蛋白（Eomes）在人脐带间充质干细胞（HUMSCs）诱导的神经样细胞中的表达变化，并探讨其意义。方法培养 HUMSCs 并应用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、视黄酸、丁基羟基茴香醚联合诱导分化为神经样细胞，采用免疫荧光化学法检测诱导前后细胞β-Ⅲ-tubulin 和 NSE 的表达；real-time PCR 检测诱导前后细胞中 miR-363和 Eomes mRNA 的表达，Western blot 检测诱导前后细胞中 Eomes 蛋白的表达；运用生物信息学方法（TargetScan 和 miRanda）对 miR-363和 Eomes 基因的靶向配对关系进行预测，采用荧光素酶报告系统进行鉴定。结果光镜下可见 HUMSCs 呈梭形均匀分布，诱导分化后细胞呈圆形、有长的突起；免疫荧光检测发现诱导14 d 的细胞β-Ⅲ-tubulin 和 NSE 表达呈阳性，神经样细胞诱导成功。HUMSCs 诱导分化前后 miR-363相对表达量分别为1．00±0．31、0．32±0．02，Eomes mRNA 相对表达量分别为1．00±0．22、15．73±0．85，Eomes 蛋白相对表达量分别为0．21±0．02、0．78±0．06，两者比较，P 均＜0．05。生物信息学软件结果显示 miR-363和 Eomes 基因靶向配对良好，荧光素酶报告系统鉴定发现 miR-363能够抑制 Eomes mRNA 表达。结论 miR-363能够靶向作用Eomes 3′UTR 负性调控 HUMSCs 神经样细胞分化后 Eomes 的表达。

摘要： 研究发现全骨髓贴壁法可分离骨髓间充质干细胞，Hayley等进一步研究证实该方法可成功分离小鼠骨髓间充质干细胞，本研究在此基础上通过连续半换液法在体外培养12天后获得较高融合度的原代梭形贴壁生长细胞，传代培养后细胞仍保持良好的贴壁生长特性及梭形形态，经流式细胞技术检测结果表明该贴壁细胞高表达表型分子CD45、CD90，极低表达CD34、CD44，可认为本研究中梭形贴壁细胞为骨髓间充质干细胞，进一步MTT实验结果提示细胞活力增殖较好，较Li等人的研究结果，本研究不仅成功实现了对骨髓间充质干细胞分离、纯化，并在一定程度上缩减了原代细胞获取时间，可为后续研究提供质量、数量较为理想的种子细胞。故本研究中采用基因修饰方法，以腺病毒为载体将GDNF基因导入骨髓间充质干细胞后发现，当MOI=IOO转染72h后荧光显微镜观察发现Ad-rGDNF-GFP转染组中细胞可成功的表达GFP，同时细胞形态保持完好，并未出现病毒转染所产生的细胞“病变”效应；荧光定量PCR检测结果表明载rGDNF重组腺病毒转染BMSCs后细胞内源性GDNF表达水平较对照组明显提高，并具有统计学差异性，结合MTT结果发现，Ad-rGDNF-GFP转染组细胞内源性GDNF表达提高后，细胞活较力对照组显著提高，这些结果表明采用重组目的基因腺病毒并以合适的MOI转染方式，可在保持细胞较好活力的前提下持续性的提高靶细胞内源性GDNF目的基因的表达水品。进一步采用免疫荧光鉴定技术发现，Ad-rGDNF-GFP转染组中细胞于转染7d后表达神经元特异性标记物NSE，细胞胞体皱缩明显，伸出神经样细胞突触结构，而对照组中骨髓间充质干细胞NSE表达阴性，且细胞仍维持原梭形或成纤维样细胞形态，表明提高内源性GDNF基因表达水平可促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化。与采用神经营养因子蛋白诱导细胞分化相比较，采周基因修饰方法可提高靶细胞内源性目的基因表达水平，无需在诱导分化过程中添加外源性诱导剂，更有助于实现对靶细胞的持续、稳定性诱导分化作用，Yang S与Ye Y等研究发现富含GDNF等多种神经样因子的脑组织萃取物或脑脊液可诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化，但诱导剂成分混杂，无法确定在骨髓间充质干细胞分化过程中起关键作用的因素，本研究中通过基因修饰方法提高细胞内源性GDNF基因表达水平后骨髓间充质干细胞可向神经样细胞自行分化，在明确分化关键因素基础上有助于对分化机制的进一步探索与研究。

摘要： 目的：观察静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)在脊髓损伤模型大鼠体内向神经样细胞转化的情况。rn 方法：体外扩增培养MSCs,流式细胞仪检测表面标志CD34和CD44的表达；采用击打法制备脊髓损伤模型；Brdu标记的MSCs经尾静脉移植入脊髓损伤模型大鼠体内,21d时,取脊髓组织进行免疫组化染色,检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达.rn 结果：体外扩增的MSCs经流式细胞仪检测不表达CD34,表达CD44;激光共聚焦显微镜下观察可见,Brdu标记的MSCs在大鼠损伤的脊组织中有NSE表达.rn 结论：移植的MSCs可迁移到损伤的脊髓组织,并可转化为神经样细胞.

摘要： 本试验以成年关中奶山羊为对象，研究了β-巯基乙醇诱导山羊骨髓间充质干细胞(goat mesenchymal stem cells，gMSCs)向神经细胞的分化。结果表明，β-巯基乙醇可以诱导山羊骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞，能够呈现神经细胞的基本形态结构，表达神经细胞的表面标志Nestin、NF-200、GFAP和NSE；但尚需进一步研究这种分化而来的神经样细胞是否具有功能。该研究结果为未来利用该类细胞作为疾病的细胞治疗模型，进而建立山羊骨髓间充质干细胞细胞系提供了新的科学依据。

摘要： 本发明公开了将非神经元细胞重编程为神经元样细胞的方法和组合物。该组合物包括神经元样特性化学诱导剂，所述神经元样特性化学诱导剂包括下述1)‑6)中的任意组合：1)环腺苷单磷酸激动剂；2)促神经发生小分子；3)糖原合成激酶抑制剂；4)TGFβ受体抑制剂；5)BET家族溴结构域抑制剂；6)选择性Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶抑制剂和/或p38丝裂原活化激酶抑制剂；所述6)是选择性组分。本申请的使非神经元真核细胞获得神经元样特性的组合物在16天的诱导时间内能够产生超过90％的TUJ1阳性细胞。通过进一步的促成熟阶段，这些化学方法诱导的神经元样细胞有着神经元特异性的表达谱，能够产生动作电位并且形成功能性突触。

摘要： 本发明公开了一种使用人源自体脂肪干细胞，经过与脐带间充质干细胞共培养以及细胞因子诱导成为神经样干细胞，可以提供给医疗机构治疗少儿脑瘫等神经细胞缺失性疾病。此发明避免了伦理问题和异体细胞移植的不安全性，分离纯化后的人源自体脂肪干细胞经转化，可获得纯度较为一致的、非基因编辑的、安全稳定且适用于大批量培养的神经类干细胞，适用于脑瘫的个体化治疗，可以为临床治疗脑瘫提供一种稳定可行的方法。

摘要： 在一个或多个实施方式中，本发明提供一种表达于成熟神经细胞的淀粉样蛋白球体的靶向分子，其通过与淀粉样蛋白球体结合而诱发细胞死亡。另外，在一个或多个实施方式中，本发明提供一种用于阻断淀粉样蛋白球体诱发的成熟神经细胞死亡的方法和物质。在一个方式中，本发明涉及Na

摘要： 本发明提供了一种柴胡皂苷α处理人神经干细胞得到神经元样细胞及其增殖的分化培养基，所述选择培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有1-500ug/mL的柴胡皂苷α、1-20体积％的胎牛血清、5-200ng/mL的人表皮生长因子和5-200ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子；还提供了使用前述分化培养基的制备该柴胡皂苷α分化试剂盒的方法；还提供了包括前述的方法获得的神经元样细胞的用于治疗神经系统疾病的药物组合物。使用本发明的选择培养基的本发明的方法能够高效分化神经干细胞，得到神经元样细胞。本发明用于治疗神经系统疾病的药物组合物能在体内修复损伤的神经细胞，并消除神经病变。

摘要： 本发明提供一种以来自姜黄的成分为有效成分的、可用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症等的组合物。本发明涉及一种用于治疗阿尔茨海默氏症的组合物、用于抑制脑神经细胞死亡的组合物、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物、或者用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF‑α或IL‑1β产生的组合物，所述组合物以利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物、或选自姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种为有效成分。

摘要： 本发明提供了一种神经生长因子在促进脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化中的应用，属于生物技术领域。本发明实验发现，经慢病毒介导的神经生长因子过表达脐带间充质干细胞在神经因子Nestin、GFAP、MAP2和Tubulin的mRNA转录上均显著增加，证明神经生长因子具有促进脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化的功能。

摘要： 本发明公开了将非神经元细胞重编程为神经元样细胞的方法和组合物。该组合物包括神经元样特性化学诱导剂，所述神经元样特性化学诱导剂包括下述1)-6)中的任意组合：1)环腺苷单磷酸激动剂；2)促神经发生小分子；3)糖原合成激酶抑制剂；4)TGFβ受体抑制剂；5)BET家族溴结构域抑制剂；6)选择性Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶抑制剂和/或p38丝裂原活化激酶抑制剂；所述6)是选择性组分。本申请的使非神经元真核细胞获得神经元样特性的组合物在16天的诱导时间内能够产生超过90％的TUJ1阳性细胞。通过进一步的促成熟阶段，这些化学方法诱导的神经元样细胞有着神经元特异性的表达谱，能够产生动作电位并且形成功能性突触。

摘要： 本发明公开了一种使用人源自体脂肪干细胞，经过与脐带间充质干细胞共培养以及细胞因子诱导成为神经样干细胞，可以提供给医疗机构治疗少儿脑瘫等神经细胞缺失性疾病。此发明避免了伦理问题和异体细胞移植的不安全性，分离纯化后的人源自体脂肪干细胞经转化，可获得纯度较为一致的、非基因编辑的、安全稳定且适用于大批量培养的神经类干细胞，适用于脑瘫的个体化治疗，可以为临床治疗脑瘫提供一种稳定可行的方法。

摘要： 本发明涉及一种诱导成纤维细胞为神经细胞样细胞的方法，属于细胞生物学领域。该发明针对当前将成纤维细胞转分化为神经细胞方法中普遍存在的需载体介导和转基因操作、实验设备和实验技术水平要求相对较高、产生的神经细胞安全性较差等问题，发明了一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞为神经细胞样细胞的方法。由于利用该方法产生的神经细胞样细胞仅通过鱼卵母细胞提取物的诱导和神经细胞定向诱导培养获得，不涉及外源基因插入，实验操作相对简单，产生的神经细胞样细胞安全性相对较好，在神经生物学和再生医学领域具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种细胞培养液及其应用以及诱导牙髓干细胞向神经样细胞分化的方法。本发明提供的细胞培养液中包括基础培养液、GDNF、Shh、EGF和cAMP。本发明提供的培养液能够用于诱导牙髓干细胞分化为神经样细胞。采用该培养液诱导DPSCs，DPSCs形态在12小时开始发生改变；而在诱导24小时后，DPSCs形态发生明显变化，细胞折光性开始增强，突起增多增长，分化为神经样细胞形态。经western bolt检测，诱导24h后，DPSCs中Nestin和MAP2的表达量显著提高。因此，本发明提供的培养液诱导DPSCs向神经样细胞分化的周期短，效率高。