miR-363、Eomes 在人脐带间充质干细胞诱导神经样细胞中的表达及意义

摘要

目的：观察 miR-363、脱中胚蛋白（Eomes）在人脐带间充质干细胞（HUMSCs）诱导的神经样细胞中的表达变化，并探讨其意义。方法培养 HUMSCs 并应用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、视黄酸、丁基羟基茴香醚联合诱导分化为神经样细胞，采用免疫荧光化学法检测诱导前后细胞β-Ⅲ-tubulin 和 NSE 的表达；real-time PCR 检测诱导前后细胞中 miR-363和 Eomes mRNA 的表达，Western blot 检测诱导前后细胞中 Eomes 蛋白的表达；运用生物信息学方法（TargetScan 和 miRanda）对 miR-363和 Eomes 基因的靶向配对关系进行预测，采用荧光素酶报告系统进行鉴定。结果光镜下可见 HUMSCs 呈梭形均匀分布，诱导分化后细胞呈圆形、有长的突起；免疫荧光检测发现诱导14 d 的细胞β-Ⅲ-tubulin 和 NSE 表达呈阳性，神经样细胞诱导成功。HUMSCs 诱导分化前后 miR-363相对表达量分别为1．00±0．31、0．32±0．02，Eomes mRNA 相对表达量分别为1．00±0．22、15．73±0．85，Eomes 蛋白相对表达量分别为0．21±0．02、0．78±0．06，两者比较，P 均＜0．05。生物信息学软件结果显示 miR-363和 Eomes 基因靶向配对良好，荧光素酶报告系统鉴定发现 miR-363能够抑制 Eomes mRNA 表达。结论 miR-363能够靶向作用Eomes 3′UTR 负性调控 HUMSCs 神经样细胞分化后 Eomes 的表达。