用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物、用于抑制脑神经细胞死亡的组合物、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物、及用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的组合物

摘要

本发明提供一种以来自姜黄的成分为有效成分的、可用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症等的组合物。本发明涉及一种用于治疗阿尔茨海默氏症的组合物、用于抑制脑神经细胞死亡的组合物、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物、或者用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF‑α或IL‑1β产生的组合物，所述组合物以利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物、或选自姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种为有效成分。

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物、用于抑制脑神经细胞死亡的组合物、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物、或者用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的组合物。

背景技术

在痴呆症中，阿尔茨海默氏症是占50～75％的主要疾病。

在阿尔茨海默氏症患者的大脑内，观察到以β淀粉样蛋白为主成分的老人斑、以Tau蛋白为主成分的神经原纤维改变、神经细胞死亡等。阿尔茨海默氏症表现出以认知功能下降为代表的多种症状，但其发病的机理尚不明确，关于治疗及预防的课题诸多(非专利文献1)。

β淀粉样蛋白是阿尔茨海默氏症的致病物质之一，它的积累不仅会引起神经细胞的细胞死亡，还会激活作为巨噬细胞的一种的小胶质细胞，从而导致阿尔茨海默氏症进展。

小胶质细胞激活后，会产生前列腺素E2(PGE2)。PGE2会作用于神经细胞，进而发挥兴奋性毒性而诱导神经细胞死亡(非专利文献2)。在阿尔茨海默氏症患者的大脑内，PGE2增加，PGE2使β淀粉样蛋白进一步增加(非专利文献3)。因而，一般认为抑制由小胶质细胞产生PGE2对于抑制阿尔茨海默氏症进展是有效的。

另外，小胶质细胞激活后，会产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)。TNF-α会作用于神经细胞，进而激活诱导细胞死亡的细胞内信号传导通路，或促进β淀粉样蛋白所诱导的神经细胞死亡。因而，一般认为抑制小胶质细胞产生TNF-α、IL-1β对于抑制阿尔茨海默氏症进展是有效的。非专利文献4中公开了：在β淀粉样蛋白的存在下被激活的小胶质细胞释放TNF-α等体液因子，该体液因子诱导神经细胞的细胞死亡。

此外，还认为氧化应激很大程度上参与了阿尔茨海默氏症的产生、进展。一般认为其的机制是如下途径等：释放在神经细胞内的β淀粉样蛋白在线粒体中积累，引起氧化应激，最终导致细胞死亡(非专利文献5、6)。

另一方面，已知姜黄中包含很多生理活性物质。

例如专利文献1中记载了：来自姜黄的姜黄油包含多种没药烷型倍半萜类，能够用作癫痫等除阿尔茨海默氏症之外的中枢神经系统病症的抗惊厥药。

专利文献2中记载了：向患有淀粉样斑块聚集或原纤维化的试验对象、特别是患有阿尔茨海默氏症的试验对象给药利用超临界二氧化碳得到的包含姜黄素类的姜黄物种提取物。

专利文献3中记载了：姜黄物种的根茎及叶片的脂溶性提取物对治疗神经脑血管病症有效。根据专利文献3，该神经脑血管病症为包含阿尔茨海默氏症在内的疾病。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2014-518241号公报

专利文献2：日本特表2009-530305号公报

专利文献3：日本特表2005-516930号公报

非专利文献

非专利文献1：2010年3月医疗的鸟瞰报告～关于痴呆症(特别是阿尔茨海默型痴呆症)～(https://www.jst.go.jp/crds/report/report05/CRDS-FY2009-WR-09.html)

非专利文献2：神经化学Vol.55(No.3),2016,p42-51

非专利文献3：实验医学vol.29No.10(增刊),2011,169(1647)-173(1651)

非专利文献4：Clin Neurol 2014；54:1119-1121

非专利文献5：YAKUGAKU ZASSHI 127(8)1199-1205(2007)

非专利文献6：Journal of Neurochemistry,2006,96,1-13

发明内容

本发明的目的在于提供一种以来自姜黄的成分为有效成分的、用于预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物、用于抑制脑神经细胞死亡的组合物、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物、或者用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的组合物。

本发明人等在β淀粉样蛋白的聚集物的存在下培养巨噬细胞，结果发现，促进了PGE2、TNF-α及IL-1β的产生，而在通过水溶性的姜黄提取物、以及该提取物中所含的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B处理后的巨噬细胞中，在β淀粉样蛋白的聚集物的存在下培养时产生的PGE2、TNF-α及IL-1β得到抑制；水溶性的姜黄提取物及姜黄酮醇B具有抑制在β淀粉样蛋白存在下所培养而成的巨噬细胞的上清液对于脑神经细胞的模型细胞即人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y的细胞死亡的诱导的作用；以及水溶性的姜黄提取物具有抑制氧化应激所诱导的SHSY5Y的细胞死亡的作用，从而完成了以下的本发明。

(1)一种用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分。

(2)一种用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物，含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分。

(3)根据(2)所述的组合物，其中，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分，所述姜黄提取物含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

(4)一种用于抑制脑神经细胞死亡的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分。

(5)一种用于抑制脑神经细胞死亡的组合物，含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分。

(6)根据(5)所述的组合物，其中，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分，所述姜黄提取物含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

(7)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分。

(8)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物，含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分。

(9)根据(8)所述的组合物，其中，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分，所述姜黄提取物含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

(10)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2产生的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分。

(11)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2产生的组合物，含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分。

(12)根据(11)所述的组合物，其中，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分，所述姜黄提取物含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

(13)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的TNF-α产生的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分。

(14)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的TNF-α产生的组合物，含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分。

(15)根据(14)所述的组合物，其中，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分，所述姜黄提取物含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

(16)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的IL-1β产生的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分。

(17)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的IL-1β产生的组合物，含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分。

(18)根据(17)所述的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分，所述姜黄提取物含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

(19)根据(7)、(8)或(9)所述的组合物，其中，由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活包括：由β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞产生选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上。

(20)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的组合物，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分。

(21)一种用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的组合物，含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分。

(22)根据(21)所述的组合物，其中，含有利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物作为有效成分，所述姜黄提取物含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

(23)利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物用于制造用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物的用途。

(24)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物的用途。

(25)姜黄提取物用于制造用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的药物的用途，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(26)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的药物的用途。

(27)一种治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的方法，包括：

将利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物给药于需要治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的对象；及

在所述对象中治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症。

(28)一种治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的方法，包括：

将姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种给药于需要治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的对象；及

在所述对象中治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症。

(29)一种姜黄提取物，用于在需要治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的对象中治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(30)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，用于在需要治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的对象中治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症。

(31)根据(24)所述的用途、(26)所述的用途、(28)所述的方法、或(30)所述的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，其中，所述姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种为利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物的形式。

(32)姜黄提取物用于制造用于抑制脑神经细胞死亡的组合物的用途，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(33)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造用于抑制脑神经细胞死亡的组合物的用途。

(34)姜黄提取物用于制造用于抑制脑神经细胞死亡的药物的用途，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(35)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造抑制脑神经细胞死亡的药物的用途。

(36)一种在体内或体外抑制脑神经细胞的细胞死亡的方法，包括：

将利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物在体内或体外给药于脑神经细胞；及

抑制所述脑神经细胞的细胞死亡。

(37)一种在体内或体外抑制脑神经细胞的细胞死亡的方法，包括：

将姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内或体外给药于脑神经细胞；及

抑制所述脑神经细胞的细胞死亡。

(38)一种姜黄提取物，用于在体内或体外抑制脑神经细胞的细胞死亡，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(39)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，用于在体内或体外抑制脑神经细胞的细胞死亡。

(40)根据(33)所述的用途、(35)所述的用途、(37)所述的方法、或(39)所述的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，其中，所述姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种为利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物的形式。

(41)姜黄提取物用于制造用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物的用途，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(42)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物的用途。

(43)姜黄提取物用于制造用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的药物的用途，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(44)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的药物的用途。

(45)一种在体内或体外抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的方法，包括：

将利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物在体内或体外给药于小胶质细胞；及

抑制所述小胶质细胞的β淀粉样蛋白诱导的激活。

(46)一种在体内或体外抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的方法，包括：

将姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内或体外给药于小胶质细胞；及

抑制所述小胶质细胞的β淀粉样蛋白诱导的激活。

(47)一种姜黄提取物，用于在体内或体外抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(48)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，用于在体内或体外抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活。

(49)根据(42)所述的用途、(44)所述的用途、(46)所述的方法、或(48)所述的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，其中，所述姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种为利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物的形式。

(50)根据(41)、(42)或(49)所述的用途、(43)、(44)或(49)所述的用途、(45)、(46)或(49)所述的方法、或者(47)、(48)或(49)所述的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，其中，由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活包含：由β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞产生选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上。

(51)姜黄提取物用于制造用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的组合物的用途，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(52)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造用于由抑制β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的组合物的用途。

(53)姜黄提取物用于制造用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的药物的用途，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(54)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种用于制造用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的药物的用途。

(55)一种抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的方法，包括：

将利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物给药于需要抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的对象；及

在所述对象中，抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生。

(56)一种抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的方法，包括：

将姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种给药于需要抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的对象；及

在所述对象中，抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生。

(57)一种姜黄提取物，用于在需要抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的对象中，抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生，所述姜黄提取物是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的。

(58)姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，用于在需要抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的对象中，抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生。

(59)根据(52)所述的用途、(54)所述的用途、(56)所述的方法、或(58)所述的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种，其中，所述姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种为利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物的形式。

本说明书包含作为本申请的优先权的基础的日本专利申请号2018-124502号的公开内容。

提供一种用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物、用于抑制脑神经细胞死亡的组合物、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物、或者用于由抑制β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的组合物，所述组合物以利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种为有效成分。

附图说明

图1示出了由THP-1细胞分化而来的巨噬细胞经β淀粉样蛋白聚集物处理而激活，PGE2的产生增加；以及、50～200μg/mL的姜黄提取物、及12.5～100μM的姜黄酮醇A、姜黄酮醇B抑制PGE2的产生增加。

图2示出了由THP-1细胞分化而来的巨噬细胞经β淀粉样蛋白聚集物处理而激活，TNF-α的产生增加；以及50、100μM抑制TNF-α的产生增加。

图3示出了由THP-1细胞分化而来的巨噬细胞经β淀粉样蛋白聚集物处理而激活，IL-1β的产生增加；以及50、100μM抑制IL-1β的产生增加。

图4的结果表明由THP-1细胞分化而来的巨噬细胞在含β淀粉样蛋白聚集物培养基中培养而成的上清诱导神经细胞死亡，而在通过姜黄水提取物或姜黄酮醇B预先处理后的巨噬细胞中，含β淀粉样蛋白聚集物培养基的培养上清诱导人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y的细胞死亡的作用被抑制。

图5的结果表明人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y因氧化应激而产生的细胞死亡被姜黄水提取物所抑制。

具体实施方式

<姜黄提取物>

在本发明中，姜黄提取物是指来自姜科姜黄属的植物的植物原料利用提取溶剂而得到的提取物(姜黄萃取物)。姜黄提取物不限定于通过利用提取溶剂提取而得到的溶剂提取物，也包括将溶剂提取物用柱色谱等进一步分级精制而成的物质。本发明中使用的姜黄提取物可以为完成了提取操作(在进行分级精制的情况下，也包含分级精制操作)的提取液、从提取液去除部分溶剂而成的浓缩物、或者从提取液中除去溶剂而成的干燥物的形式。能够通过利用加热和/或减压等挥发溶剂来从提取物中除去溶剂。这些加热、减压的方法不受特别限定，能够使用例如现有公知的方法。

作为所述植物原料，可列举作为姜科姜黄属的植物的Curcuma longa(姜黄)、Curcuma aromatica(郁金)、Curcuma zedoaria(莪术)、Curcuma phaeocaulis(蓬莪术)、Curcuma kwangsiensis(广西莪术)、Curcuma wenyujin(温郁金)、和/或、Curcumaxanthorrhiza(印尼姜黄)的根茎等，特别优选Curcuma longa的根茎等。根茎可以使用从土壤中所采集的部分，能够直接使用根茎的适当的部位，或者将其切割为适当的大小或形状，或者将其制成粉碎物的形式后使用。这些植物原料可以适当干燥。

作为提取溶剂，能够使用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种。作为选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂，可以为水、亲水性有机溶剂、水与亲水性有机溶剂的混合溶剂中的任意一种。亲水性有机溶剂可以为多种亲水性有机溶剂的混合溶剂。“水”也包括热水。作为热水，能够使用例如95℃以上的热水。作为亲水性有机溶剂，可列举至少一种醇(也可以为多种醇的混合溶剂)，作为醇，不作特别限定，优选乙醇。在使用醇和水的混合溶剂作为提取溶剂的情况下，混合比不作特别限定，例如以重量比计，优选10：90～90：10的范围，更优选20：80～50：50的范围。

另外，作为提取溶剂，也能够使用超临界二氧化碳。

从植物原料中提取姜黄提取物的提取方法不作特别限定。

在本发明中，作为姜黄提取物，优选使用含有姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的、利用所述提取溶剂得到的姜黄提取物。

姜黄酮醇A及姜黄酮醇B分别为具有以下的平面结构的化合物。

[化学式1]

[化学式2]

<姜黄酮醇A及姜黄酮醇B>

本发明中使用的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种(以下，有时称为“活性化合物”)可以来自植物，也可以人工合成。例如光学活性的(+)-姜黄酮醇A能够通过BiosciBiotechnol Biochem.1993；57(7)：1137-40中记载的方法来合成。

在从姜黄提取物中分离的天然物中，姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的2-甲基-2-庚烯-4酮的部分结构上的6位碳的立体构型为S型，这是一点是公知的。但是，在本发明中，姜黄酮醇A及姜黄酮醇B只要具有上述的平面结构即可，所述立体构型可以为S型，也可以为R型，还可以为S型和R型的混合物。

本发明中使用的活性化合物更优选来自植物原料，更优选来自姜科姜黄属植物。姜科姜黄属植物及其部位的具体例如上所述。能够从姜科姜黄属植物的根茎等部位获得活性化合物。

活性化合物能够从包含其的植物原料提取。提取方法如上所述。活性化合物可以为植物提取物、特别是利用选自由水及亲水性有机溶剂构成的组中的至少一种提取溶剂得到的姜黄提取物的形式。

另外，从包含活性化合物的植物提取物中提高活性化合物的纯度而得到的组分可以用于本发明，也可以配合于本发明的组合物。例如，能够对包含活性化合物的植物提取物进行乙酸乙酯/水的液液分配，并在乙酸乙酯级分中提高活性化合物的纯度。另外，也可以将包含活性化合物的植物提取物或其级分用色谱法进行精制处理，从而得到提高纯度后的活性化合物。作为色谱法，能够使用反相柱色谱、正相薄层色谱法等。

可以通过常规方法对包含活性化合物的植物提取物或其组分施加干燥、粉末化、颗粒化、溶液化等加工。

<本发明的组合物>

本发明的组合物的一种方案涉及一种以所述姜黄提取物、或者、姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分的、用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的组合物。通过将本方案中的本发明的组合物给药于人等对象，能够在所述对象中治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症。在此，所述的各有效成分以用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的有效量而给药。作为给药途径，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。本发明的组合物在大脑内抑制被β淀粉样蛋白激活的小胶质细胞产生PGE2、TNF-α或IL-1β、及这些物质所参与的神经细胞死亡的诱导，从而能够治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症。

本发明的组合物的另一种方案涉及一种以所述姜黄提取物、或者、姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分的、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的组合物。通过将本方案中的本发明的组合物给药于人等对象，能够在所述对象中抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活。在此，所述的各有效成分以用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的有效量而给药。作为给药途径，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。推测在阿尔茨海默氏症患者的大脑内，β淀粉样蛋白激活小胶质细胞，被激活的小胶质细胞产生PGE2、TNF-α或IL-1β，从而诱导脑神经细胞死亡。通过本发明的组合物，能够抑制由β淀粉样蛋白激活小胶质细胞。

本发明的组合物的另一种方案涉及一种以所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分的、用于抑制脑神经细胞死亡的组合物。本发明人等发现，在β淀粉样蛋白存在下所培养的巨噬细胞的培养上清会诱导作为脑神经细胞或中枢神经细胞的模型细胞的人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y的细胞死亡，而在将巨噬细胞预先用所述姜黄提取物或姜黄酮醇B处理后在β淀粉样蛋白存在下培养而得到的巨噬细胞的培养上清中，诱导人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y的细胞死亡的作用得到抑制。另外，本发明人等还发现，所述姜黄提取物具有抑制氧化应激所诱导的SHSY5Y的细胞死亡的作用。这些见解支持如下结论：所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种具有抑制脑神经细胞或中枢神经细胞因氧化应激而产生的细胞死亡、或因被β淀粉样蛋白激活的小胶质细胞而导致的细胞死亡的作用。通过将本方案中的本发明的组合物给药于人等对象，能够在所述对象中抑制脑神经细胞或中枢神经细胞的细胞死亡、特别是被β淀粉样蛋白激活的小胶质细胞所产生的PGE2、TNF-α或IL-1β参与的脑神经细胞或中枢神经细胞的细胞死亡、或者氧化应激所参与的脑神经细胞或中枢神经细胞的细胞死亡。在此，所述的各有效成分以用于抑制脑神经细胞死亡或中枢神经细胞死亡的有效量而给药。作为给药途径，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。

本发明的组合物的另一种方案涉及一种以所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分的、用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的组合物。通过将本方案中的本发明的组合物给药于人等对象，能够在所述对象中抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生、特别是抑制被β淀粉样蛋白激活的小胶质细胞产生PGE2、TNF-α或IL-1β。在此，所述的各有效成分以用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的有效量而给药。作为给药途径，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。

本发明的组合物可以为医药品、饮品及食品、饲料、食品添加剂、饲料添加剂等各形式的组合物，更优选为医药品或饮品及食品。饮品及食品也包含功能性食品(Foods withFunctional Claims)、特定保健用食品、用于补充营养的补品等形式的物品。本发明的组合物优选为通过口服或鼻腔摄取或给药的组合物的形式，更优选为通过口服摄取或给药的组合物的形式。

在包含所述姜黄提取物作为有效成分的实施方式的本发明的组合物中，关于所述姜黄提取物的含量，在有效地获得治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的作用、抑制脑神经细胞死亡的作用、抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的作用、及抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的作用方面，优选地，以使本发明的组合物的每日摄取或给药量、优选每人、特别是每个成人的每日摄取或给药量中姜黄酮醇A达到80μg以上且姜黄酮醇B达到20μg以上的方式含有所述姜黄提取物。在此，作为“每日摄取或给药量”，在通过口服或鼻腔、优选通过口服摄取或给药的情况下，以本发明的组合物的量计，典型地为0.1g～500g。本发明的组合物可以持续摄取或给药，也可以按需摄取或给药。

包含所述姜黄提取物作为有效成分的实施方式的本发明的组合物可以为所述姜黄提取物自身，也可以为包含所述姜黄提取物和至少一种其它成分的组合物。本发明的组合物在包含所述姜黄提取物和至少一种其它成分的情况下，其可以为所述姜黄提取物和至少一种其它成分混合而成的组合物，也可以为所述姜黄提取物和至少一种其它成分通过适当的方式制成制剂而得到的组合物，还可以为所述姜黄提取物和至少一种其它成分制成制剂而得到的组合物进一步与其它成分混合而成的组合物。

在包含姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分的实施方式的本发明的组合物中，以使每日摄取或给药量、优选每人、特别是每个成人每日的摄取或给药量中姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的总量达到100μg以上的方式，含有选自姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中至少一种。另外，在包含姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分的实施方式的本发明的组合物中，以使每日摄取或给药量、优选为每人、特别是每个成人的每日摄取或给药量中姜黄酮醇A达到80μg以上和/或姜黄酮醇B达到20μg以上、更优选姜黄酮醇A达到80μg以上和姜黄酮醇B达到20μg以上的方式，含有选自姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。根据这些实施方式，能够有效地获得治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的作用、抑制脑神经细胞死亡的作用、抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的作用、及抑制由β淀粉样蛋白诱导的PGE2、TNF-α或IL-1β产生的作用。在此，作为“每日摄取或给药量”，在通过口服或鼻腔、优选通过口服摄取或给药的情况下，以本发明的组合物的量计，典型地为0.1g～500g。本发明的组合物可以持续摄取或给药，也可以按需摄取或给药。

包含姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种作为有效成分的实施方式的本发明的组合物可以为姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种化合物自身，也可以包含所述化合物和至少一种其它成分。本发明的组合物在包含所述化合物和至少一种其它成分的情况下，其可以为所述化合物和至少一种其它成分混合而成的组合物，也可以为所述化合物和至少一种其它成分通过适当的方式制成制剂而得到的组合物，还可以为所述化合物和至少一种其它成分制成制剂而得到的组合物进一步与其它成分混合而得到的组合物。

本发明的组合物的形状不作特别限定，可以为例如液体状、流动状、凝胶状、半固体状或固体状等中的任意形状。

作为本发明的组合物可以包含的至少一种其它成分，不作特别限定，优选地，可例示在医药品、饮品及食品、饲料、食品添加剂、饲料添加剂等最终形式中允许的可口服摄取的成分。

作为这样的其它成分，可列举例如：甜味剂、酸味剂、维生素类、矿物质类、增稠剂、乳化剂、抗氧化剂、水等。另外，也可以根据需要添加色素、香料、保存剂、防腐剂、防霉剂、及其它生理活性物质等。

作为甜味剂，可列举：葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、帕拉金糖、海藻糖、木糖等单糖或二糖、异构糖(葡萄糖果糖糖浆、果糖葡萄糖糖浆、砂糖混合异构糖等)、糖醇(赤藓糖醇、木糖醇、乳糖醇、异麦芽糖醇、山梨糖醇、还原水怡等)、蜂蜜、高甜度甜味剂(三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾、索马丁、甜菊糖、阿斯巴甜等)等。

作为酸味剂，具有柠檬酸、苹果酸、葡萄糖酸、酒石酸、乳酸、磷酸、或它们的盐等，能够利用其中的一种或两种以上。

作为维生素类，可列举：维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E、烟酸、肌醇等。

作为矿物质类，可列举：钙、镁、锌、铁等。

作为增稠剂，可列举：卡拉胶、结冷胶、黄原胶、阿拉伯胶、罗望子树胶、瓜尔胶、刺槐豆胶、刺梧桐胶、琼脂、明胶、果胶、大豆多糖类、羧甲基纤维素(CMC)等。

作为乳化剂，可列举：甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、卵磷脂、植物甾醇、皂苷等。

作为抗氧化剂，可列举：维生素C、生育酚(维生素E)、酶处理芦丁等。

所述其它成分分别能够以本领域技术人员通常用于饮品及食品、医药品等的组合物的范围内的量适当配合。

本发明的组合物和至少一种其它成分通过适当的方式制成制剂而得到的组合物的形式可以为粉末、颗粒、胶囊剂、片剂(包含糖衣片等包衣片或多层片、口腔崩解剂、咀嚼片等)等固体组合物的形式，也可以为溶液剂等液体组合物的形式。

<治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的方法>

本发明的再一种方案涉及一种治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的方法，包括：

将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种给药于需要治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的对象；及

在所述对象中治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症。

本方案的方法所使用的所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种可以为本发明的组合物的上述的形式。

作为本方案的方法中的对象，典型地为人，但也可以为人以外的哺乳动物。

在本方案的方法中，作为给药途径，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。

在本方案的方法中，作为将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种给药于对象的给药量，只要其为用于治疗、预防或改善阿尔茨海默氏症的有效量即可，不作特别限定。例如，在对象为成人的情况下，优选地，以对于每个成人每天优选使姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的总量达到100μg以上、更优选使姜黄酮醇A达到80μg以上和/或使姜黄酮醇B达到20μg以上、特别优选使姜黄酮醇A达到80μg以上和使姜黄酮醇B达到20μg以上的方式，给药所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

<抑制脑神经细胞的细胞死亡的方法>

本发明的再一种方案涉及一种在体内或体外抑制脑神经细胞的细胞死亡的方法，包括：

将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内或体外给药于脑神经细胞；及

抑制所述脑神经细胞的细胞死亡。

本方案的方法中所使用的所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种可以为本发明的组合物的上述形式。

作为本方案的方法中所使用的脑神经细胞的来源生物，典型地为人，但也可以为人以外的哺乳动物，例如大鼠、小鼠、牛等。

脑神经细胞可以为来自脑神经细胞或中枢神经细胞的细胞株，例如可以为人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y。

在本方案的方法中，作为将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体外给药于脑神经细胞的方法，可列举向培养脑神经细胞的培养基中添加适当浓度的所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种的方法。向所述培养基中添加的浓度不作特别限定，在给药所述姜黄提取物的情况下，可以优选为10μg/mL以上，更优选为20μg/mL以上，特优选为50μg/mL以上，优选为1,000μg/mL以下，更优选为500μg/mL以下。在给药姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种的情况下，姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的总添加浓度可以优选为1μM以上，更优选为10μM以上，特优选为20μM以上，最优选为50μM以上，优选为1,000μM以下，更优选为500μM以下，特别优选为200μM以下。

在本方案的方法中，作为将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内给药于脑神经细胞的方法，只要为能够将其输送至体内的脑神经细胞的方法，则不作特别限定，例如，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。在给药于体内的脑神经细胞的情况下，给药量只要为能够抑制脑神经细胞的细胞死亡的有效量即可，不作特别限定。例如，在给药于成人的情况下，优选地，以对于每个成人每天优选使姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的总量达到100μg以上、更优选使姜黄酮醇A达到80μg以上、和/或使姜黄酮醇B达到20μg以上、特别优选使姜黄酮醇A达到80μg以上和使姜黄酮醇B达到20μg以上的方式，给药所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

在本方案的方法中，将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内或体外给药于脑神经细胞之后，保持所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种与脑神经细胞的接触状态适当时间，例如5小时以上、优选为12小时以上、更优选为20小时以上、特别优选为24小时以上、优选为72小时以下、更优选为48小时以下、特别优选为36小时以下，由此能够抑制所述脑神经细胞的细胞死亡。

<抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的方法>

本发明的再一种方案涉及一种在体内或体外抑制由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞激活的方法，包括：

将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内或体外给药于小胶质细胞；及

抑制所述小胶质细胞的由β淀粉样蛋白诱导的激活。

作为本方案的方法中所使用的小胶质细胞的来源生物，典型地为人，但也可以为人以外的哺乳动物，例如大鼠、小鼠、牛等。

小胶质细胞可以为具有与小胶质细胞同等的功能的细胞，例如，由单核细胞分化来的巨噬细胞。

在本方案的方法中，作为将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体外给药于小胶质细胞的方法，可列举向培养小胶质细胞的培养基中添加适当浓度的所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种的方法。向所述培养基中添加的浓度不作特别限定，在给药所述姜黄提取物的情况下，可以优选为10μg/mL以上，更优选为20μg/mL以上，特别优选为50μg/mL以上，优选为1,000μg/mL以下，更优选为500μg/mL以下。在给药姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种的情况下，姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的总添加浓度可以优选为1μM以上，更优选为10μM以上，特别优选为20μM以上，最优选为50μM以上，优选为1,000μM以下，更优选为500μM以下，特别优选为200μM以下。

在本方案的方法中，作为将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内给药于小胶质细胞的方法，只要为能够将其输送至体内的小胶质细胞的方法，则不作特别限定，例如，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。在给药于体内的小胶质细胞的情况下，给药量只要为能够抑制小胶质细胞被β淀粉样蛋白诱导激活的有效量即可，不受特别限定。例如，在给药于成人的情况下，优选地，以对于每个成人每天优选使姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的总量达到100μg以上、更优选姜使黄酮醇A达到80μg以上和/或使姜黄酮醇B达到20μg以上、特别优选使姜黄酮醇A达到80μg以上和使姜黄酮醇B达到20μg以上的方式，给药所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

在本方案的方法中，在将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种在体内或体外给药于小胶质细胞中之后，保持所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种与小胶质细胞的接触状态适当时间，例如5小时以上、优选为12小时以上、更优选为20小时以上、特别优选为24小时以上、优选为72小时以下、更优选为48小时以下、特别优选为36小时以下，由此，能够抑制所述小胶质细胞的由β淀粉样蛋白诱导的激活。

典型地，β淀粉样蛋白为来自与小胶质细胞相同的生物物种的β淀粉样蛋白。

“小胶质细胞的由β淀粉样蛋白诱导的激活”是指：例如由β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞产生选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上，在本方案中，能够抑制这些物质的产生。

<抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的方法>

本发明的再一种方案涉及一种抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的方法，包括：

将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种给药于需要抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的对象；及

在所述对象中，抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生。

本方案的方法中所使用的所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种可以为本发明的组合物的上述形式。

作为本方案的方法中的对象，典型地为人，但也可以为人以外的哺乳动物。

在本方案的方法中，作为给药途径，优选口服给药、鼻腔给药、脑内给药或鞘内给药，更优选口服或鼻腔给药，特别优选口服给药。

在本方案的方法中，作为将所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种给药于对象的给药量，只要其为用于抑制由β淀粉样蛋白诱导的选自PGE2、TNF-α及IL-1β中的一种以上产生的有效量即可，不作特限定。例如，在对象为成人的情况下，优选地，以对于每个成人每天优选使姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的总量达到100μg以上、更优选使姜黄酮醇A达到80μg以上和/或使姜黄酮醇B达到20μg以上、特别优选使姜黄酮醇A达到80μg以上和使姜黄酮醇B达到20μg以上的方式，给药所述姜黄提取物、或者姜黄酮醇A及姜黄酮醇B中的至少一种。

实施例

<1.实验1>

1.1.姜黄提取物的制作方法

用水提取姜黄(Curcuma longa)的根茎部分，将得到的提取液减压加热干燥以除去水分，由此制备姜黄提取物。按照下述的流程使用LC/MS测定姜黄提取物中的姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的量。确认姜黄提取物中的姜黄酮醇A的量为189μg/g，姜黄酮醇B的量为24μg/g。

1.2.姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的分析

称量姜黄提取物，加入水和乙酸乙酯，将离心分离得到的上清通入活性炭柱之后，进行氮浓缩，并溶解于乙腈。将得到的液体作为测定样品，用于LC/MS分析。LC/MS分析在以下的条件下进行。

分析装置：Thermo Fisher Scientific公司Orbitrap LCMS(Orbitrap VelosPro)

流速：0.5mL/分钟

移动相：乙腈、0.1％甲酸水溶液

液相进样梯度：

[表1]

使用柱：UNISON UK-C18(250mm×4.6mm、3μm)

柱温：30℃

1.3.姜黄酮醇A及姜黄酮醇B的获取

作为姜黄酮醇A及姜黄酮醇B，购入Nagara Science株式会社的市售品，并将其溶解于二甲基亚砜以用于试验。

1.4.抑制由β-淀粉样蛋白所诱导的巨噬细胞激活的作用的评价

将人单核细胞株THP-1悬浮在RPMI1640(10％FBS)培养基中，以达到8.0×10

图1中示出了由THP-1细胞分化而来的巨噬细胞经Aβ处理而激活，PGE2的产生增加；及50～200μg/mL的姜黄提取物、12.5～100μM的姜黄酮醇A、B抑制PGE2的产生增加。图2中示出了由THP-1细胞分化而来的巨噬细胞经Aβ处理而激活，TNF-α的产生增加；及50、100μM的姜黄酮醇A、B抑制TNF-α的产生增加。图3中示出了由THP-1细胞分化而来的巨噬细胞经Aβ处理而激活，IL-1β的产生增加；及50、100μM的姜黄酮醇A、B抑制IL-1β的产生增加。

需要指出，根据所表达的标记物等，巨噬细胞可以看做与小胶质细胞基本相同，在体外试验中能够用作小胶质细胞的替代(Frontiers in Pharmacology/Neuropharmacology,E.Solito et al,2012-2|Volume3|Article14，InternationalJournal of Alzheimer’s Disease,Volume 2012,Article ID 314185,11pages等)。推测在阿尔茨海默氏症患者中，被Aβ激活的小胶质细胞产生PGE2、TNF-α、IL-1β等，进而诱导脑神经细胞死亡。因而，姜黄提取物、姜黄酮醇A及姜黄酮醇B抑制被Aβ激活的巨噬细胞产生PGE2、TNF-α、IL-1β这一上述的实验结果证明：在阿尔茨海默氏症患者中，姜黄提取物、姜黄酮醇A及姜黄酮醇B抑制被Aβ激活的小胶质细胞产生PGE2、TNF-α、IL-1β；及抑制脑神经细胞死亡的诱导。

<2.实验2>

2.1.方法

将人单核细胞株THP-1悬浮于RPMI1640(10％FBS)培养基，以达到8.0×10

WST-1测试法包括：将WST-1(2-(4-吲哚苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2H-四唑鎓，单钠盐；同仁化学研究所制造)添加于包含细胞的各孔，在二氧化碳气体培养器内培养规定时间，通过活细胞的线粒体的脱氢酶由WST-1生成水溶性甲臜，并测定所生成的甲臜的浓度。所生成的甲臜的浓度为细胞活性的指标。甲臜的浓度通过酶标仪根据测定波长450nm处的吸光度来测定(参考波长630nm)。

对照试验的流程如下所述。将由THP-1分化而来的所述巨噬细胞在不包含姜黄提取物及姜黄酮醇B的RPMI1640(10％FBS)培养基中于5％CO

2.2.结果

将结果示于图4。纵轴为测定所得的吸光度，表示细胞活性。

在对照试验(Aβ+)中，向所述巨噬细胞中添加β淀粉样蛋白，培养一定时间后，回收其培养上清并将其添加于SHSY5Y之后，诱导了细胞死亡。另一方面，在不使用β淀粉样蛋白的对照试验(Aβ-)中，未诱导细胞死亡。由此推测，在添加了β淀粉样蛋白的培养基中所培养的巨噬细胞向培养上清释放了体液因子，该体液因子诱导了脑神经细胞的细胞死亡。

而在通过姜黄提取物或姜黄酮醇B预先处理的巨噬细胞中，β淀粉样蛋白存在下的培养上清诱导脑神经细胞的细胞死亡的作用较对照试验(Aβ+)得到抑制。这表示姜黄提取物及姜黄酮醇B抑制β淀粉样蛋白存在下巨噬细胞释放所述体液因子。

<3.实验3>

3.1.方法

已知用过氧化氢H

将人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y悬浮于DMEM(10％FBS)培养基，以到达3×10

在对照试验(H

3.2.结果

将结果示于图5。纵轴为测定得到的吸光度，表示细胞活性。误差条表示标准偏差。

对对照(H

该结果表示人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y因氧化应激而产生的细胞死亡被实验1中所制备的姜黄提取物所抑制。

本说明书中引用的刊行物、专利及专利申请均直接通过引用结合于本说明书。