游离DNA

摘要： 目的 探讨利用培养液中游离DNA检测对应囊胚的13、15、16、18、21、22号染色体整倍性的效率.方法 本研究共纳入239枚囊胚,所有的胚胎均来源于PGT-A周期.囊胚活检的滋养层细胞采用SNP芯片检测胚胎的整倍性;培养液游离DNA采用无创胚胎染色体筛查(NICS)方法检测整倍性;采用盲法比较两者的结果.计算NICS在检测13、15、16、18、21、22号染色体整倍性的敏感性、特异性、诊断效率、阳性预测值和阴性预测值.结果 239枚囊胚中的209枚有NICS结果,NICS检出率为87.5％(209/239).NICS方法在检测13、15、16、18、21、22号染色体的特异性、效率比较高,均>90％,NICS结果的阴性预测值超过97％;但是敏感性波动较大(33％～100％),阳性预测值较低(<50％).结论 NICS方法可以检测囊胚整倍性.当NICS结果显示这些重要染色体(13、15、16、18、21、22号染色体)为整倍体时,对应囊胚该条染色体整倍性几率高;但是当NICS结果显示这些重要染色体为非整倍体时,对应胚胎并不一定为非整倍体.

摘要： 目的比较北京天根生化科技有限公司生产的大体积游离核酸提取试剂盒(磁珠法,货号:DP-710,以下简称天根)与德国Qiagen公司生产的Circulating Nucleic Acid kit(硅胶膜吸附柱法,货号:55114,以下简称Qiagen)对血浆当中游离DNA(cfDNA)的提取效果。方法收集Qiagen和天根试剂盒的基本情况,采用浙江省肿瘤医院提供的临床血浆样本,用Qiagen和天根分别提取血浆样本中的cfDNA。用超微紫外分光光度仪分析两种试剂盒提取得到cfDNA的浓度和纯度。采用人表皮生长因子受体(EGFR)突变基因检测试剂盒(多重荧光PCR法)评价两种试剂盒提取血浆中cfDNA的提取效果,通过扩增结果的Ct值分析两种不同试剂盒对人EGFR基因突变的检出率和重复性的影响。结果在cfDNA提取浓度、纯度方面,Qiagen的cfDNA提取浓度明显高于天根,且Qiagen提取得到的cfDNA纯度更优;在人EGFR突变基因阳性检出率方面,Qiagen阳性检出率为100%,天根阳性检出率为85%;在重复性方面,Qiagen试剂盒提取的cfDNA的检出结果Ct值的变异系数(CV)均小于5%,而天根试剂盒有分部分CV超过5%。结论Qiagen试剂盒在cfDNA提取浓度、纯度,人EGFR突变基因的阳性检出率、重复性方面的表现均要优于天根试剂盒。

摘要： 来自广州医科大学附属第三医院的陈敏教授在本时评中介绍了“双绒毛膜双胎选择性减胎术后被减胎儿的游离DNA持续周期研究”。无创产前检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)可作为双胎早期染色体非整倍体的一线筛查技术。而双胎之一死亡的发生率高达6.2%,死亡胎儿的游离DNA进入母血循环,导致NIPT产生假阳性结果。

摘要： 目的探讨利用囊胚培养液中游离DNA检测胚胎整倍性的样品留取优化方案。方法本研究共纳入239枚囊胚,所有的囊胚均来源于北京大学第三医院生殖中心胚胎植入前遗传学整倍体检测技术(PGT-A)周期。纳入患者的PGT-A指征为女方高龄(>38岁)、复发性流产、反复着床失败。胚胎在D3天更换囊胚培养液,并采取单胚胎单独培养,收集可以PGT-A活检囊胚的培养液。收集方法根据是否胚胎打孔以及胚胎培养时长分为三个阶段。PGT-A囊胚活检的滋养层细胞采用SNP芯片检测整倍性;培养液游离DNA采用二代测序方法(NGS)进行无创胚胎染色体整倍性筛查(NiPGT-A);背靠背比较两者的结果,分析NiPGT-A方法的检出率、NiPGT-A结果与PGT-A结果倍性一致性、整倍体符合率、非整倍体符合率、颗粒细胞污染率等。共有56枚PGT-A整倍性胚胎移植,分析对应胚胎的NiPGT-A结果,统计临床妊娠结局。结果239枚囊胚中209枚囊胚有NiPGT-A结果,检出率为87.5%。随着采样方法的改进,NiPGT-A结果与PGT-A结果倍性一致性、整倍体符合率逐渐提高;颗粒细胞污染率逐渐降低。239枚胚胎中有56枚PGT-A整倍体的胚胎移植,23枚胚胎的结局为活产/持续妊娠。NiPGT-A没有结果的胚胎妊娠率较高(71.4%),高于NiPGT-A为整倍体或者非整倍体胚胎的临床妊娠结局(33.3%,40.9%)。结论囊胚培养液的样品留取方法对于NiPGT-A检测至关重要,推荐D3天再次去除颗粒细胞、采集D4-D5/6天囊胚培养液,而且不要针对胚胎进行打孔处理。

摘要： 目的:探讨食管癌游离DNA(cell free DNA,cfDNA)与临床特征的相关性及其作为放疗疗效检测标志物的潜在价值。方法:选取2018年1月至2019年12月南通大学第二附属医院收治的食管癌患者60例,为食管癌组。另选本院同期60例健康体检志愿者作为对照组。采用两步法磁珠提取血浆cfDNA,分析血浆cfDNA水平与患者临床特征的相关性,并比较患者放疗前后的血浆cfDNA水平。结果:患者年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤分期、肿瘤家族史、吸烟史、饮酒史、肿瘤分化程度等与cfDNA水平比较差异无统计学意义(P>0.05),仅与肿瘤体积大小差异有统计学意义(P0.05)。结论:cfDNA水平与食管癌患者的肿瘤体积大小呈正相关,并随放射治疗呈动态变化,cfDNA可作为放疗疗效检测标志物。

摘要： 目的基于血浆游离DNA(cfDNA)探究成纤维细胞增殖通路相关的5-羟甲基胞嘧啶修饰基因对糖尿病足(Diabetic foot ulcer,DFU)和糖尿病(Diabetic mellitus,DM)患者的区分。方法收集2021年1-12月就诊于北京大学第三附属医院确诊为DFU患者血浆6例和DM患者血浆14例,提取cfDNA,使用5hmC-Seal技术建立文库后,依托Illumina高通量测序平台进行测序,筛选差异羟甲基化修饰基因(DhMGs)。采用GSVA富集分析方法对DhMGs富集分析,使用STRING数据库和Cytoscape3.9.0对GSVA富集中|log2FoldChange|变化最大的成纤维细胞增殖通路中的18个DhMGs进行分析,使用STRING数据库和Cytoscape3.9.0得到9个关键枢纽基因(Hub基因),最后使用Hub基因通过岭回归建模区分DFU组和DM组,并使用RNA-seq数据验证。结果分析得出DFU组与DM组DhMGs共有5748个,通过GSVA富集中|log2FoldChange|变化最大的成纤维细胞增殖通路中的18个DhMGs进行分析,使用STRING数据库和Cytoscape3.9.0得到9个Hub基因,使用岭回归建模得到AUC为1.000,使用RNA-seq数据对9个基因建模的AUC为0.962。结论本研究基于5hmC-Seal技术探究DFU和DM患者血浆cfDNA中5hmC变化,在5hmC的水平发现成纤维细胞增殖通路的重要性,通路中的9个基因能够预测糖尿病足患者。

摘要： 背景染色体异常是导致出生缺陷的重要因素,目前无针对性染色体非整倍体的产前筛查方法。无创产前基因检测(noninvasive prenatal test,NIPT)应用于临床除了能常规检测目标疾病外,同时也能检测出性染色体异常,包括微缺失微重复。目的探讨血浆游离DNA低深度测序技术对胎儿性染色体异常的筛查价值。方法选取2018年6月-2021年7月于解放军总医院第一医学中心妇产科实验室行NIPT孕妇11239例,年龄17~46岁,检测时孕周为12~31周。对其中42例有产前诊断报告的性染色体异常病例进行回顾性分析。结果11239例标本中NIPT筛查出性染色体异常51例,阳性率为0.45%。42例(42/51)接受羊膜腔穿刺,确诊性染色体异常22例,阳性预测值(positive predictive value,PPV)为52%(22/42);18例性染色体数目偏少(XO)确诊8例(44%),21例性染色体数目偏多(XXX、XXY、XYY)确诊12例(57%),3例性染色体其他复杂异常(合并5号染色体微缺失)确诊2例(67%)。9例(9/51)拒绝接受产前诊断。结论NIPT检测技术应用于筛查胎儿性染色体异常有一定的临床意义,可发现性染色体罕见核型及微缺失微重复,但总体假阳性率偏高。

摘要： 目的探索外周血中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)相关生物标志物与视网膜静脉阻塞(RVO)之间的相关性。方法采用病例对照研究,纳入常熟市第二人民医院眼科2020年1月至7月因RVO入院的患者作为RVO组,从临床中心的体检部门随机选取年龄和性别相匹配的志愿者作为对照组。检测所有受试者外周游离DNA(cfDNA)、髓过氧化物酶(MPO)-DNA和瓜氨酸化组蛋白H3(H3Cit)三种NETs相关标志物的水平,以及炎症因子[血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6]和凝血功能指标[血浆样本凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)]的水平,从而分析NETs与RVO的关系及潜在机制。利用相关性分析探索外周血NETs相关标志物与RVO分型、病程及远期黄斑水肿(ME)发生、炎症水平以及血栓形成的相关性,并进一步分析具有不同水平NETs相关生物标志物的RVO患者中的炎症反应程度和血栓形成标志物的差异。结果最终纳入了RVO组77例(77眼)患者及对照组受试者48例(48眼)。在RVO组患者外周血中,cfDNA、MPO-DNA和H3Cit三种NETs生物标志物均较对照组增加(均为P<0.05)。cfDNA、MPO-DNA和H3Cit诊断RVO的AUC分别为0.859、0.871和0.928(均为P<0.001)。将RVO分为CRVO和BRVO两个亚组进行对比,结果显示,CRVO组患者的cfDNA和MPO-DNA浓度均显著高于BRVO组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。相关性分析结果显示,NETs相关标志物与炎症、血栓形成均呈显著线性相关,与RVO病程及远期ME发病无关。结论NETs与RVO亚型(CRVO及BRVO)、炎症和血栓形成有关,NTEs相关标志物对RVO有潜在的诊断作用。

摘要： 目的通过生物信息学方法筛选血浆游离DNA来源的糖尿病肾病中的关键差异通路和羟甲基化修饰基因,为寻找诊断糖尿病肾病的生物标志物及阐明其潜在的分子机制奠定基础。方法利用5hmC-Seal测序方法对糖尿病和糖尿病肾病患者血浆游离DNA的5-羟甲基胞嘧啶进行富集,并通过测序得到全基因组5-羟甲基胞嘧啶,对两组患者进行差异分析得到差异羟甲基化基因,再利用差异基因的羟甲基化水平进行基因集变异分析,最后再对富集到的差异通路里的差异基因通过MCODE插件筛选关键基因,并进行单基因和多基因诊断疾病的准确性分析。结果基因集变异分析得到在糖尿病和糖尿病肾病两组患者中的差异通路:神经活性配体受体相互作用通路、肾脏上皮通路、趋化因子信号通路和已有文献报道与糖尿病肾病发病机制相关的Wnt信号通路,Wnt信号通路中富集到18个差异羟甲基化基因,通过MCODE筛选到关键模块基因有11个,分别为CTNNB1、GSK3B、CREBBP、CUL1、NFATC1、CCND3、WNT11、PRKACB、DKK1、SMAD3、CCND1,最后进行ROC分析有9个基因的诊断效能较好(AUC值≥0.8):CTNNB1、GSK3B、CREBBP、CUL1、NFATC1、WNT11、PRKACB、DKK1、CCND1。结论本研究羟甲基化测序结果表明,Wnt信号通路在糖尿病肾病发生发展中的关键作用,CTNNB1、GSK3B、CREBBP、CUL1、NFATC1、WNT11、PRKACB、DKK1、CCND1有可能成为诊断糖尿病肾病的生物标志物。

摘要： 尽管细菌感染对肝硬化的影响已被很好地描述,但3种非嗜肝病毒(NHV)感染的影响尚不清楚。NHV包括EB病毒、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒等,其引起的肝炎可导致肝损伤,可进展为肝硬化和肝衰竭。既往研究集中在嗜肝病毒对于急性失代偿期肝硬化(AD)患者的潜在作用。然而,NHV的感染也会导致急性肝衰竭,但其作用尚不清楚。

摘要： 目的：从绵羊外周血中分离提取游离的DNA(cfDNA).方法：采集绵羊血液分离出血浆,用酚氯仿法抽提游离的DNA.PCR扩增Y染色体性别决定区基因(SRY).结果：提取的6只绵羊cfDNA样本,有5只公羊样本均检测到127bp的目的条带.结论：绵羊外周血中存在游离DNA,可以应用于SRY基因片段的检测.

摘要： 目的：从绵羊外周血中分离提取游离的DNA(cfDNA).方法：采集绵羊血液分离出血浆,用酚氯仿法抽提游离的DNA.PCR扩增Y染色体性别决定区基因(SRY).结果：提取的6只绵羊cfDNA样本,有5只公羊样本均检测到127bp的目的条带.结论：绵羊外周血中存在游离DNA,可以应用于SRY基因片段的检测.

摘要： 目的：从绵羊外周血中分离提取游离的DNA(cfDNA).方法：采集绵羊血液分离出血浆,用酚氯仿法抽提游离的DNA.PCR扩增Y染色体性别决定区基因(SRY).结果：提取的6只绵羊cfDNA样本,有5只公羊样本均检测到127bp的目的条带.结论：绵羊外周血中存在游离DNA,可以应用于SRY基因片段的检测.

摘要： 目的：从绵羊外周血中分离提取游离的DNA(cfDNA).方法：采集绵羊血液分离出血浆,用酚氯仿法抽提游离的DNA.PCR扩增Y染色体性别决定区基因(SRY).结果：提取的6只绵羊cfDNA样本,有5只公羊样本均检测到127bp的目的条带.结论：绵羊外周血中存在游离DNA,可以应用于SRY基因片段的检测.

摘要： 目的：从绵羊外周血中分离提取游离的DNA(cfDNA).方法：采集绵羊血液分离出血浆,用酚氯仿法抽提游离的DNA.PCR扩增Y染色体性别决定区基因(SRY).结果：提取的6只绵羊cfDNA样本,有5只公羊样本均检测到127bp的目的条带.结论：绵羊外周血中存在游离DNA,可以应用于SRY基因片段的检测.

摘要： 目的：从绵羊外周血中分离提取游离的DNA(cfDNA).方法：采集绵羊血液分离出血浆,用酚氯仿法抽提游离的DNA.PCR扩增Y染色体性别决定区基因(SRY).结果：提取的6只绵羊cfDNA样本,有5只公羊样本均检测到127bp的目的条带.结论：绵羊外周血中存在游离DNA,可以应用于SRY基因片段的检测.

摘要： 目的：本研究拟探索检测机采血小板中游离DNA的含量，它们在不同ABO血型机采血小板制品中的分布情况，以及受机采血小板保存时间、去白细胞过滤和离心等因素的影响情况。rn 方法：尽快从机采血小板中取出标本，然后将其分成几份，并在血小板采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时分别对过滤前后，离心前后的标本分别进行DNA抽提，最后用荧光定量PCR方法对其中的人类白蛋白基因进行检测。rn 结果：ABO血型不同的机采血小板在保存时间相同的条件下，其细胞外游离DNA含量无显著差异。过滤前机采血小板在采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时时游离DNA的含量分别为13.0±6.7 WBCs/μl,25.1±12.6 WBCs/μl,43.5±28.7WBCs/μl和136.8±77.6 WBCs/μl。对于过滤后的标本，其相应值则为8.0±3.9 WBCs/μl，18.2±3.9 WBCs/μl,44.3±19.6 WBCs/μl和104.7±52.2WBCs/μl。过滤前后和不同保存时间之间，其游离DNA含量均具有显著区别(前者P<0.05，后者P<0.01)。但是过滤前后的总DNA不随保存时间而变化。rn 结论：机采血小板中含有大量细胞外游离DNA，它们在使用荧光定量PCR方法进行残留白细胞检测时会影响结果的准确性。不同血型机采血小板中游离DNA含量一致。但游离DNA含量会随着机采血小板保存时间的延长而显著上升，过滤会使其降低。

摘要： 目的：本研究拟探索检测机采血小板中游离DNA的含量，它们在不同ABO血型机采血小板制品中的分布情况，以及受机采血小板保存时间、去白细胞过滤和离心等因素的影响情况。rn 方法：尽快从机采血小板中取出标本，然后将其分成几份，并在血小板采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时分别对过滤前后，离心前后的标本分别进行DNA抽提，最后用荧光定量PCR方法对其中的人类白蛋白基因进行检测。rn 结果：ABO血型不同的机采血小板在保存时间相同的条件下，其细胞外游离DNA含量无显著差异。过滤前机采血小板在采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时时游离DNA的含量分别为13.0±6.7 WBCs/μl,25.1±12.6 WBCs/μl,43.5±28.7WBCs/μl和136.8±77.6 WBCs/μl。对于过滤后的标本，其相应值则为8.0±3.9 WBCs/μl，18.2±3.9 WBCs/μl,44.3±19.6 WBCs/μl和104.7±52.2WBCs/μl。过滤前后和不同保存时间之间，其游离DNA含量均具有显著区别(前者P<0.05，后者P<0.01)。但是过滤前后的总DNA不随保存时间而变化。rn 结论：机采血小板中含有大量细胞外游离DNA，它们在使用荧光定量PCR方法进行残留白细胞检测时会影响结果的准确性。不同血型机采血小板中游离DNA含量一致。但游离DNA含量会随着机采血小板保存时间的延长而显著上升，过滤会使其降低。

摘要： 目的：本研究拟探索检测机采血小板中游离DNA的含量，它们在不同ABO血型机采血小板制品中的分布情况，以及受机采血小板保存时间、去白细胞过滤和离心等因素的影响情况。rn 方法：尽快从机采血小板中取出标本，然后将其分成几份，并在血小板采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时分别对过滤前后，离心前后的标本分别进行DNA抽提，最后用荧光定量PCR方法对其中的人类白蛋白基因进行检测。rn 结果：ABO血型不同的机采血小板在保存时间相同的条件下，其细胞外游离DNA含量无显著差异。过滤前机采血小板在采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时时游离DNA的含量分别为13.0±6.7 WBCs/μl,25.1±12.6 WBCs/μl,43.5±28.7WBCs/μl和136.8±77.6 WBCs/μl。对于过滤后的标本，其相应值则为8.0±3.9 WBCs/μl，18.2±3.9 WBCs/μl,44.3±19.6 WBCs/μl和104.7±52.2WBCs/μl。过滤前后和不同保存时间之间，其游离DNA含量均具有显著区别(前者P<0.05，后者P<0.01)。但是过滤前后的总DNA不随保存时间而变化。rn 结论：机采血小板中含有大量细胞外游离DNA，它们在使用荧光定量PCR方法进行残留白细胞检测时会影响结果的准确性。不同血型机采血小板中游离DNA含量一致。但游离DNA含量会随着机采血小板保存时间的延长而显著上升，过滤会使其降低。

摘要： 目的：本研究拟探索检测机采血小板中游离DNA的含量，它们在不同ABO血型机采血小板制品中的分布情况，以及受机采血小板保存时间、去白细胞过滤和离心等因素的影响情况。rn 方法：尽快从机采血小板中取出标本，然后将其分成几份，并在血小板采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时分别对过滤前后，离心前后的标本分别进行DNA抽提，最后用荧光定量PCR方法对其中的人类白蛋白基因进行检测。rn 结果：ABO血型不同的机采血小板在保存时间相同的条件下，其细胞外游离DNA含量无显著差异。过滤前机采血小板在采集后的4小时内、24小时、48小时和72小时时游离DNA的含量分别为13.0±6.7 WBCs/μl,25.1±12.6 WBCs/μl,43.5±28.7WBCs/μl和136.8±77.6 WBCs/μl。对于过滤后的标本，其相应值则为8.0±3.9 WBCs/μl，18.2±3.9 WBCs/μl,44.3±19.6 WBCs/μl和104.7±52.2WBCs/μl。过滤前后和不同保存时间之间，其游离DNA含量均具有显著区别(前者P<0.05，后者P<0.01)。但是过滤前后的总DNA不随保存时间而变化。rn 结论：机采血小板中含有大量细胞外游离DNA，它们在使用荧光定量PCR方法进行残留白细胞检测时会影响结果的准确性。不同血型机采血小板中游离DNA含量一致。但游离DNA含量会随着机采血小板保存时间的延长而显著上升，过滤会使其降低。

摘要： 本发明公开了一种用于游离循环肿瘤DNA提取的增强剂、提取外周血中游离循环肿瘤DNA的试剂盒及方法。其中，该增强剂包括：1μg/μL～5μg/μL Carrier RNA、1μg/μL～5μg/μL多聚腺苷酸、1μg/μL～5μg/μL糖原、0～5μg/μL线性丙烯酰胺、1μg/μL～5μg/μL酵母tRNA、2μg/μL～10μg/μL大马哈鱼精子DNA和/或鲱鱼精子DNA和水。本发明的用于游离循环肿瘤DNA(ctDNA)提取的增强剂，可与常规的裂解结合液、洗涤缓冲液、洗脱液等结合使用，通过特异性的结合ctDNA并沉降下来，显著地提高了ctDNA的提取效率和提取产量。

摘要： 本发明公开了一种血液中游离DNA的稳定剂和用于血液中游离DNA检测的采血管，所述稳定剂包括第一溶液和第二溶液，以使得所述血液中游离DNA在常温条件下稳定存储；其中，所述第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；所述第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂。通过上述方式，本发明所提供的实施方式能够在常温条件下使血液中游离DNA稳定存储。

摘要： 本发明涉及一种游离DNA的文库构建方法，在单链游离DNA的3’端连接唯一序列标签，其中，唯一序列标签由随机序列和接头序列组成；加入PCR扩增用上游引物和下游引物进行PCR扩增，其中，上游引物为针对目标低频突变设计的引物，下游引物为与接头序列对应的引物。此外，本发明还涉及一种游离DNA中低频突变的检测方法，在单链游离DNA的3’端连接唯一序列标签，加入PCR扩增用上游引物和下游引物进行PCR扩增，上游引物和下游引物的一端分别与测序标签连接，将扩增后的DNA在Illumina平台上上机测序。本发明方法能够简单、高效的实现对cfDNA低频突变的检测，并可通过对cfDNA的检测，达到对胎儿遗传或者肿瘤细胞突变检测的目的。

摘要： 本发明公开一种提高孕妇血浆游离DNA测序文库中胎儿游离DNA占比的方法，步骤如下：提取孕妇血浆游离DNA；在孕妇血浆游离DNA的两端添加特异性序列标签获得具有孕妇个体识别标记的血浆游离DNA；对具有孕妇个体识别标记的血浆游离DNA进行PCR扩增，获得该孕妇个体血浆游离DNA的原始文库；在选定长度范围内，对孕妇该原始文库进行回收，获得用于高通量测序的回收文库或者将多个不同个体孕妇所述孕妇原始文库进行混合后构建回收文库。可对孕妇外周血胎儿游离DNA含量过低的样本进行准确检测，而且降低了每个样本的测序数据量，提高了一次测序反应的样本通量，降低了检测成本，有利于大规模推广。

摘要： 本发明公开了一种用于游离循环肿瘤DNA提取的增强剂、提取外周血中游离循环肿瘤DNA的试剂盒及方法。其中，该增强剂包括：1μg/μL～5μg/μL Carrier RNA、1μg/μL～5μg/μL多聚腺苷酸、1μg/μL～5μg/μL糖原、0～5μg/μL线性丙烯酰胺、1μg/μL～5μg/μL酵母tRNA、2μg/μL～10μg/μL大马哈鱼精子DNA和/或鲱鱼精子DNA和水。本发明的用于游离循环肿瘤DNA(ctDNA)提取的增强剂，可与常规的裂解结合液、洗涤缓冲液、洗脱液等结合使用，通过特异性的结合ctDNA并沉降下来，显著地提高了ctDNA的提取效率和提取产量。

摘要： 本发明公开一种游离DNA提取富集试剂盒，包括样本裂解液、结合液、一次洗涤液、二次洗涤液、洗脱液和纳米磁珠，样本裂解液包括无核酸酶水、试剂A和试剂B，试剂A为异硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠和高氯酸钠中至少一种，试剂B为Tween20、Triton‑X100、SDS、NP40和聚氧乙烯型非离子表面活性剂中至少一种；结合液中除样本裂解液的成份外还包括试剂C，试剂C为异丙醇和无水乙醇中至少一种；一次洗涤液成份与结合液相同；二次洗涤液为无核酸酶水、摩尔浓度为0.1‑1M氯化钠溶液、Tris缓冲液或者TE缓冲液中的一种；洗脱液为无核酸酶水，Tris缓冲液或者TE缓冲液中的一种。本发明还公开了一种游离DNA提取方法。本发明解决了现有技术中有机溶剂有一定毒性的技术问题。

摘要： 本申请涉及DNA检测技术领域，尤其涉及一种定量检测血浆或血清中游离DNA的方法、应用及检测游离DNA的试剂盒。所述方法包括以下步骤：步骤一：制备PCR扩增反应模板：取待测外周血，离心后取上层血清，经再次离心处理后取上层血清与孵育液混合，经孵育、变性后于低温下离心，取上清液作为模板；步骤二：PCR扩增反应：以步骤一模板进行荧光定量PCR扩增反应，检测扩增产物，计算游离DNA的含量。

摘要： 本发明公开了一种血液中游离DNA的稳定剂和用于血液中游离DNA检测的采血管，所述稳定剂包括第一溶液和第二溶液，以使得所述血液中游离DNA在常温条件下稳定存储；其中，所述第一溶液包括：第一缓冲液、第一抗凝剂、细胞稳定剂、代谢抑制剂和第一溶剂；所述第二溶液包括：第二缓冲液、第二抗凝剂、血液生物相容性试剂、游离DNA稳定剂、防腐剂。通过上述方式，本发明所提供的实施方式能够在常温条件下使血液中游离DNA稳定存储。

摘要： 本发明公开一种提高孕妇血浆游离DNA测序文库中胎儿游离DNA占比的方法，步骤如下：提取孕妇血浆游离DNA；在孕妇血浆游离DNA的两端添加特异性序列标签获得具有孕妇个体识别标记的血浆游离DNA；对具有孕妇个体识别标记的血浆游离DNA进行PCR扩增，获得该孕妇个体血浆游离DNA的原始文库；在选定长度范围内，对孕妇该原始文库进行回收，获得用于高通量测序的回收文库或者将多个不同个体孕妇所述孕妇原始文库进行混合后构建回收文库。可对孕妇外周血胎儿游离DNA含量过低的样本进行准确检测，而且降低了每个样本的测序数据量，提高了一次测序反应的样本通量，降低了检测成本，有利于大规模推广。

摘要： 本发明涉及一种游离DNA的文库构建方法，在单链游离DNA的3’端连接唯一序列标签，其中，唯一序列标签由随机序列和接头序列组成；加入PCR扩增用上游引物和下游引物进行PCR扩增，其中，上游引物为针对目标低频突变设计的引物，下游引物为与接头序列对应的引物。此外，本发明还涉及一种游离DNA中低频突变的检测方法，在单链游离DNA的3’端连接唯一序列标签，加入PCR扩增用上游引物和下游引物进行PCR扩增，上游引物和下游引物的一端分别与测序标签连接，将扩增后的DNA在Illumina平台上上机测序。本发明方法能够简单、高效的实现对cfDNA低频突变的检测，并可通过对cfDNA的检测，达到对胎儿遗传或者肿瘤细胞突变检测的目的。