核酸提取

摘要： 目的比较北京天根生化科技有限公司生产的大体积游离核酸提取试剂盒(磁珠法,货号:DP-710,以下简称天根)与德国Qiagen公司生产的Circulating Nucleic Acid kit(硅胶膜吸附柱法,货号:55114,以下简称Qiagen)对血浆当中游离DNA(cfDNA)的提取效果。方法收集Qiagen和天根试剂盒的基本情况,采用浙江省肿瘤医院提供的临床血浆样本,用Qiagen和天根分别提取血浆样本中的cfDNA。用超微紫外分光光度仪分析两种试剂盒提取得到cfDNA的浓度和纯度。采用人表皮生长因子受体(EGFR)突变基因检测试剂盒(多重荧光PCR法)评价两种试剂盒提取血浆中cfDNA的提取效果,通过扩增结果的Ct值分析两种不同试剂盒对人EGFR基因突变的检出率和重复性的影响。结果在cfDNA提取浓度、纯度方面,Qiagen的cfDNA提取浓度明显高于天根,且Qiagen提取得到的cfDNA纯度更优;在人EGFR突变基因阳性检出率方面,Qiagen阳性检出率为100%,天根阳性检出率为85%;在重复性方面,Qiagen试剂盒提取的cfDNA的检出结果Ct值的变异系数(CV)均小于5%,而天根试剂盒有分部分CV超过5%。结论Qiagen试剂盒在cfDNA提取浓度、纯度,人EGFR突变基因的阳性检出率、重复性方面的表现均要优于天根试剂盒。

摘要： 随着医学科学技术的发展,临床分子生物学诊断水平在不断提升,临床分子生物学检测从手工操作发展为更精准的自动化操作,可排除人为因素造成的误差及污染。根据临床实验室标准研究所(clinical and laboratory standards institute,CLSI)[1,2]以及中国合格评定国家认可委员会(China national accreditation service for conformity assessment,CNAS)[3~5]的要求,在新引入仪器进行常规应用前。

摘要： 目的:探讨保存液类型及56°C灭活前处理30~60 min对经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果的影响。方法:将灭活的呼吸道病毒作为质控品,分别以非灭活型病毒保存液和含胍盐的灭活型病毒保存液为基质,制备成两种不同保存液类型的中、低、较低浓度的临床模拟样本。分别在常温与56°C下对样本进行30~60 min的灭活前处理,然后统一采用核酸提取试剂盒(磁珠法)和呼吸道病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)对样本进行检测,并采用SPSS18.0软件分别对三个稀释梯度样本的ORF1ab、N基因Ct值进行统计学分析。结果:两种病毒保存液经磁珠法提取核酸,呼吸道病毒核酸检测的Ct值相比有统计学差异(ORF1ab基因:P0.05)。结论:含胍盐的灭活型病毒保存液可提高经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果的灵敏度,56°C灭活前处理30~60 min未对经磁珠法提取的呼吸道病毒荧光PCR检测结果产生影响。

摘要： 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)已被广泛应用于鱼类真伪鉴定。LAMP扩增成功的重要前提是获得高质量的核酸。目前为止,DNA提取方法种类繁多,但对适用于LAMP的提取方法缺乏全面的研究。该研究采用十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SDS)、Tagliavia、Heating以及2种常用市售试剂盒(Takara,Tiangen),对4种前处理的大西洋鲑鱼组织进行DNA提取,并对DNA得率、纯度、LAMP等方面进行比较分析。结果表明,这5种提取方法从不同前处理的样品中获得的DNA均可用于LAMP反应,采用琼脂糖凝胶电泳及荧光可视化检测都可观测到阳性结果。但在实时LAMP检测中,不同提取方法和不同样品前处理方式的Ct值均存在着极显著差异(P<0.01)。SDS和Tiangen这2种提取方法虽然DNA得率较低,但可获得高纯度的DNA,并在LAMP反应中有着更低的检测限。该研究结果为大西洋鲑鱼组DNA的提取和检测以及适用于LAMP技术的不同提取方法的研究提供了参考依据。

摘要： 基于固相萃取原理中磁珠核酸提取法,设计了一种可适用于多种食源性致病菌DNA提取的微流控芯片。芯片主要包含裂解腔、清洗腔、洗脱腔、抽气孔、通气孔、气动阀、毛细管阀等结构,可以完成食源性致病菌核酸提取、纯化及顺序加载等操作。为了提高核酸提取质量浓度,对芯片通道的亲水处理时间及核酸提取过程中的孵育时间、磁珠混合次数及洗脱时间进行了优化。结果显示,孵育时间为9 min、磁珠混合次数为9次、洗脱时间为20 min时,芯片上提取大肠杆菌、沙门氏菌和单增李斯特氏菌的核酸质量浓度高,能够进行PCR扩增及凝胶电泳检测。此方法具有试剂消耗少、污染概率低等优势,并为核酸提取及扩增一体化芯片研制提供支持。

摘要： 为评价不同检测试剂盒对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的检测性能,以及不同提取方法对ASFV核酸的提取效率,本研究以国家标准物质“ASFV B646L基因质粒标准物质”作为模拟样品,通过荧光定量PCR检测,比较扩增曲线、Ct值等指标,分析了4个厂家的5种试剂盒的敏感性、重复性及反应耗时等检测性能,同时比较了磁珠法与柱式法等2种核酸提取方法的提取效率。结果显示:5种试剂盒均能有效检测出不同浓度的ASFV B646L基因质粒标准物质,不同的试剂盒最低检测限不同,最低的试剂盒为5.8×10(-1)copies/μL,线性关系最优的试剂盒R^(2)=0.997,各试剂盒实际反应时间与理论时间均有差异。2种提取方法均可有效提取ASFV B646L基因质粒标准物质,其中柱式法的提取效率高于磁珠法,但柱式法的离散度大于磁珠法。综上,4个厂家的5种试剂盒及柱式法与磁珠法均可使用ASFV B646L标准物质作为基准进行试剂盒性能及提取效率评价。在实际检测中,应根据具体情况选择合适的检测试剂盒及核酸提取方法。

摘要： 深海在黑暗、高静水压、低温(黑烟囱等热液系统除外)和寡营养的极端环境下形成了特殊的生境。对深海生物/微生物的研究,不仅可以揭示各种深海生物的生理代谢特性和动态变化规律,而且有助于深海生物资源的开发利用,特别是深海微生物碳循环机制的相关研究可为全球实现碳中和目标提供新的路线图。研究深海生物的首要条件是获得大量保持原位特性的样本,然而传统深海采样手段的局限可能导致深海相关研究结果无法反映深海环境下真实的生命过程,亟需发展满足深海生物原位研究的采样方法和生态监测技术。本文对深海生物研究现状,相关科学问题和原位组学研究进展,以及原位生态监测装备研发和应用进行综述,并对深海原位生物实验室进行了展望。

摘要： 目的比较并筛选出简单、有效、经济的提取革兰氏阴性肠道致病菌核酸的方法。方法用水煮法、碱液加热裂解法、Chelex-100提取法、商品试剂盒法同时提取大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌的标准菌株的基因组DNA,用特异性引物进行PCR扩增检验DNA提取效率。结果水煮法、碱液加热裂解法、Chelex-100提取法、商品DNA试剂盒提取法都能有效提取细菌基因组DNA。经PCR扩增检验,水煮法提取的核酸检测效率最低,碱液加热裂解法、Chelex-100提取法、商品试剂盒法均能获得明亮的特异性条带。结论碱液加热裂解法对革兰氏阴性肠道致病菌的核酸提取效率高、操作简单、成本低廉,适合同时处理大量样本的口岸一线实验室使用。

摘要： 通过对比非洲猪瘟荧光定量PCR检测中两种常用的核酸提取方式,以寻找更好的检测效果,为实际检测应用提供更有力的证据及建议。经过配置不同浓度的阳性样品,分别用核酸释放法和柱式提取法对样品进行核酸提取,用同一反应体系上机扩增,最后对实验结果进行分析。结果表明:柱式提取法的敏感性要明显高于核酸释放法,更适合当前形势下的非洲猪瘟日常筛查与自检。

摘要： 目的比较不同品牌核酸提取试剂盒在自建新型冠状病毒核酸检测中的性能差异,为临床实验室自建新型冠状病毒核酸检测系统提供参考依据。方法将第3方新型冠状病毒核酸检测质控品稀释成4种浓度,采用上海之江生物科技股份有限公司(A)、重庆中元生物技术有限公司(B)、广州和信生物科技有限公司(C)及杭州博日科技有限公司(D)4个不同厂家核酸提取试剂组成的4种自建检测系统进行检测,比较其阳性检出率及批内重复性。结果在不同浓度样本中,D品牌提取试剂盒提取的样本结果阳性率最高,靶基因检出率最高;B品牌扩增结果的Ct值最小,提取产物浓度最高。结论不同品牌核酸提取试剂的提取性能在自建检测系统中存在一定差异,实验室在自建核酸检测系统时,选择核酸提取试剂盒时应进行充分验证,以保证检测结果的准确性。

摘要： 在我国,肺癌中的非小细胞肺癌是主要的一种病理类型,其所占比例约为80％-85％.目的:EGFR基因检测结果直接关系到患者的后续治疗和用药,因此一定要保证EGFR 基因检测结果的可靠性,在整个检测过程中做好质量控制是非常重要的.本文旨在探讨EGFR 检测过程中的质量控制.将从检测标本、核酸提取过程、检测方法这三个方面来讨论这个问题.EGFR 检测是分子病理技术诊断中非常重要要的一项,它的重要性也在一步的显现出来,是辅助非小细胞肺癌治疗和用药中非常重要的一环.EGFR 基因检测的质量控制不应但只从最后的结果以及检测过程中入手,从标本的选择到核酸提取再到最后的检测,每一步都应做好质量控制,整个实验室也应做好相应的室内和室间质控,从各个方面入手,才能够保证最后检测结果的真是有效性.

摘要： 我们从感染家蚕体内分离到一株质型多角体病毒并且命名为BmCPV-Suzhou，通过对该病毒纯化，核酸提取与片段分离，经过RT-PCR和克隆测序，获得BmCPV1-Suzhou全基因组10条dsRNA（S1-S10）的完整序列并上传至GenBank。序列分析表明该病毒基因组序列全长24,758 bp，每个片段具有一个完整的开放阅读框。BLAST检索显示该病毒基因组各片段与已公开的部分BmCPV片段序列具有高度的同源性，达88%以上，而编码蛋白的氨基酸序列同源性达91%以上。RNA末端比较发现每个RNA片段的5’和3’末端分别存在保守序列：5’AGUAA………A/GxC/GGUUAGCC3’，并且在不同属的病毒之间也存在着特定的保守序列。通过对S2编码的RDRP进行的生物信息学分析发现RDRP的催化中心位于497－727氨基酸残基间；在S3编码的VP3蛋白序列中位于355-357和1220-1222间有两个细胞黏附序列RGD。系统进化分析表明 BmCPV-Suzhou与BmCPV（日本H株和中国广州株）以及LdCPV1、DpCPV1聚为一类，并且与中国广州株的亲缘关系最近，说明该病毒属于1型多角体病毒，可能和BmCPV-China起源于同一病毒。

摘要： 概述了目前分子生物学方法在龙眼种质资源上的应用,包括其核酸提取的方法、分子标记(RAPD、AFLP及SRAP)等在品种鉴定、分类、遗传多样性的应用,胚胎发育、成花等功能基因的分离、鉴定及其转化研究.针对龙眼的分子生物学研究现状存在的问题包括生物技术育种和系统演化研究,提出了今后龙眼种质资源的重点和发展方向.

摘要： 本研究从草莓叶片中分离总核酸,采用多重RT-PCR同时检测草莓RNA病毒(草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒)和草莓DNA病毒(草莓镶脉病毒),并与以总RNA为模板和总DNA为模板的检测结果进行比较.电泳结果表明分离的总核酸中可见总DNA条带和完整的28S和18SrRNA条带,以总核酸为模板的多重RT-PCR检测草莓RNA病毒的结果与以总RNA为模板的RT-PCR检测结果一致,并且多重RT-PCR中草莓DNA病毒SVBV的检测结果与以总DNA为模板的检测结果一致.本研究建立了以总核酸为模板通过RT-PCR简单快速地同时检测草莓RNA病毒和DNA病毒的技术体系.

摘要： 本研究从草莓叶片中分离总核酸,采用多重RT-PCR同时检测草莓RNA病毒(草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒)和草莓DNA病毒(草莓镶脉病毒),并与以总RNA为模板和总DNA为模板的检测结果进行比较.电泳结果表明分离的总核酸中可见总DNA条带和完整的28S和18SrRNA条带,以总核酸为模板的多重RT-PCR检测草莓RNA病毒的结果与以总RNA为模板的RT-PCR检测结果一致,并且多重RT-PCR中草莓DNA病毒SVBV的检测结果与以总DNA为模板的检测结果一致.本研究建立了以总核酸为模板通过RT-PCR简单快速地同时检测草莓RNA病毒和DNA病毒的技术体系.

摘要： 本研究从草莓叶片中分离总核酸,采用多重RT-PCR同时检测草莓RNA病毒(草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒)和草莓DNA病毒(草莓镶脉病毒),并与以总RNA为模板和总DNA为模板的检测结果进行比较.电泳结果表明分离的总核酸中可见总DNA条带和完整的28S和18SrRNA条带,以总核酸为模板的多重RT-PCR检测草莓RNA病毒的结果与以总RNA为模板的RT-PCR检测结果一致,并且多重RT-PCR中草莓DNA病毒SVBV的检测结果与以总DNA为模板的检测结果一致.本研究建立了以总核酸为模板通过RT-PCR简单快速地同时检测草莓RNA病毒和DNA病毒的技术体系.

摘要： 本研究从草莓叶片中分离总核酸,采用多重RT-PCR同时检测草莓RNA病毒(草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒)和草莓DNA病毒(草莓镶脉病毒),并与以总RNA为模板和总DNA为模板的检测结果进行比较.电泳结果表明分离的总核酸中可见总DNA条带和完整的28S和18SrRNA条带,以总核酸为模板的多重RT-PCR检测草莓RNA病毒的结果与以总RNA为模板的RT-PCR检测结果一致,并且多重RT-PCR中草莓DNA病毒SVBV的检测结果与以总DNA为模板的检测结果一致.本研究建立了以总核酸为模板通过RT-PCR简单快速地同时检测草莓RNA病毒和DNA病毒的技术体系.

摘要： 本文介绍了一种简单快速地提取鞘翅目昆虫核酸的方法。以异色瓢虫和青杨脊虎天牛为实验材料，采用改良的CTAB法分别提取这两种昆虫不同部位的核酸。电泳检测和紫外分光光度分析结果显示，该方法提取的DNA和RNA具有较高的质量和纯度，其A260/A280分别为1.7-1.9和1.9-2.0:RT-PCR和ISSR-PCR分析结果表明，利用该方法提取的总RNA和总DNA可用于基因克隆和分子标记等下游技术实验。

摘要： 本文介绍了一种简单快速地提取鞘翅目昆虫核酸的方法。以异色瓢虫和青杨脊虎天牛为实验材料，采用改良的CTAB法分别提取这两种昆虫不同部位的核酸。电泳检测和紫外分光光度分析结果显示，该方法提取的DNA和RNA具有较高的质量和纯度，其A260/A280分别为1.7-1.9和1.9-2.0:RT-PCR和ISSR-PCR分析结果表明，利用该方法提取的总RNA和总DNA可用于基因克隆和分子标记等下游技术实验。

摘要： 本文介绍了一种简单快速地提取鞘翅目昆虫核酸的方法。以异色瓢虫和青杨脊虎天牛为实验材料，采用改良的CTAB法分别提取这两种昆虫不同部位的核酸。电泳检测和紫外分光光度分析结果显示，该方法提取的DNA和RNA具有较高的质量和纯度，其A260/A280分别为1.7-1.9和1.9-2.0:RT-PCR和ISSR-PCR分析结果表明，利用该方法提取的总RNA和总DNA可用于基因克隆和分子标记等下游技术实验。

摘要： 本发明涉及一种用于核酸提取的裂解液、清洗液、核酸提取试剂盒及核酸的提取方法。该核酸提取试剂盒包括裂解液，裂解液包括20mmol/L～200mmol/L的NaCl、10mmol/L～50mmol/L的Tris、10mmol/L～50mmol/L的EDTA、质量百分含量为0.1％～0.5％的十二烷基硫酸钠、质量百分含量为2％～4％的TritonX‑100、0.5mol/L～1mol/L的NaBrO3及0.5mol/L～1mol/L的异硫氰酸胍。上述核酸提取试剂盒能够提取得到较高浓度的核酸。

摘要： 本发明公开了一种用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法。本发明的核酸提取裂解液包括0.5～2M钠盐、2～5M胍盐、1～5mM金属离子络合剂、0.25％～1％非离子表面活性剂和1％～3％PEG，其中，所述PEG的分子量为6000～10000Da，优选为8000Da。本发明的裂解液配比合理，能够充分有效地裂解细胞，裂解效率高，使得细胞中的核酸能够充分释放，得到浓度和纯度更高的核酸，有利于提高核酸的质量和提取效率；并且本发明的裂解液和试剂盒在整个核酸提取过程中不需要借助蛋白酶K进行蛋白质的消化去除，以及不使用醇类沉淀核酸，获得的核酸纯度高，片段完整。

摘要： 本发明提供新的核酸提取用器具及使用其的核酸提取方法。本发明的核酸提取器具具备管，所述管在其内部依次具备：由第1油构成的第1管芯、由与油相分离的用于清洗结合了核酸的核酸结合性固相载体的第1清洗液构成的第2管芯、由第2油构成的第3管芯、由与油相分离的用于进行逆转录反应的逆转录反应液构成的第4管芯、由第3油构成的第5管芯、由与油相分离的用于使上述核酸从结合了核酸的核酸结合性固相载体溶出的溶出液构成的第6管芯、由第4油构成的第7管芯。

摘要： 本发明公开了一种核酸提取离心柱管、核酸提取装置及核酸提取方法，该离心柱管包括：离心管；裂解管，其底部具有尖刺结构；预封液组件，包括若干预封液袋；离心柱；自切换通道块，其内部具有自切换通道，自切换通道具有可切换打开/关闭的第一出口和第二出口；以及与第一出口可拆卸连接的核酸样品瓶和与第二出口可拆卸连接的废液瓶。本发明提供的核酸提取离心柱管及基于此提供的核酸提取方法，通过将核酸提取过程需使用的裂解液、结合液、漂洗液和洗脱液预封装在离心柱管内，藉由加样时的开盖工作联动实现裂解液的添加，藉由对离心力的控制，能够在各个作业过程中依次对应释放结合液、漂洗液和洗脱液，可实现核酸快速提取。

摘要： 本发明公开了一种增加核酸提取精准度的核酸提取装置，包括机壳和位于所述机壳一侧的密封门，所述密封门通过铰链与所述机壳相连接，所述机壳为侧向开口的空腔结构，且所述机壳内设有对称设置的连接柱一和连接柱二，所述连接柱一和所述连接柱二上分别均设有若干均匀分布的环状提取板，所述连接柱一和所述连接柱二通过震荡机构与所述机壳相连接，所述机壳的内壁环绕设有若干均匀分布的加热管。有益效果：通过电加热方式对提取试管进行加热；驱动电机能够带动环状提取板上的取试管进行旋转运动，达到震荡的效果，使得核酸提取装置不停的震荡，使混合液快速均匀的混合，提高了震荡效率和效果，具有较高的社会使用价值和应用前景。

摘要： 本发明公开了具体为核酸提取装置及核酸提取方法、核酸提取用试剂盒，涉及医疗器械技术领域，该核酸提取装置及核酸提取方法，包括一级滴管、二级滴管和调节限制管，二级滴管用于排出和吸附溶液，一级滴管用于控制二级滴管进行吸附和排出溶液作业，在本发明中，该核酸提取装置及核酸提取方法，通过一级滴管和二级滴管的两级布置，以及二级胶头和活动槽的活动限制，使得操作位置即一级滴管处于任何角度的倾斜时，二级滴管会受到重力始终保持垂直水平面状态，从而使得二级胶头产生的负压压力相对二级管体排口处于垂直状态，使得二级管体内部溶液从上至下能够受到相对均匀的压力，从而避免在进行排液时因倾斜导致压力不均产生残液遗留的情况发生。

摘要： 本申请公开了核酸提取基板、核酸提取设备和核酸提取方法。核酸提取基板包括：试剂部，试剂部包括至少一个试剂容纳部；预处理部，预处理部包括至少一个管槽、试剂管和预处理部振动器，试剂管容纳在至少一个管槽内，预处理部振动器配置成对试剂管进行振动；和核酸提取部，核酸提取部与预处理部分离，核酸提取部配置成对利用预处理部进行预处理后的试剂进行核酸提取。

摘要： 本发明提供了一种核酸提取用检测组件、核酸提取装置及其核酸提取方法，涉及核酸提取技术领域，包括：护套检测开关、检测销和弹性件；由于在拿取护套主体时，护套主体能够沿着第一方向推动检测销移动，当护套主体完全入位后，检测销被推动至护套检测开关的感应区域，护套检测开关感应到检测销，护套检测开关输出护套主体入位信号，后续程序即可进行，同时由于弹性件的设置，卸下护套主体时，弹性件推动检测销向远离感应区域的方向移动，护套检测开关无法感应检测销，护套检测开关输出护套主体未入位信号，以便后续护套主体拿取入位的检测，缓解了现有技术中存在的核酸提取装置无法判断护套是否取到位的技术问题。

摘要： 本发明公开了一种用于核酸提取的裂解液、核酸提取试剂盒及核酸提取方法。本发明的核酸提取裂解液包括0.5～2M钠盐、2～5M胍盐、1～5mM金属离子络合剂、0.25％～1％非离子表面活性剂和1％～3％PEG，其中，所述PEG的分子量为6000～10000Da，优选为8000Da。本发明的裂解液配比合理，能够充分有效地裂解细胞，裂解效率高，使得细胞中的核酸能够充分释放，得到浓度和纯度更高的核酸，有利于提高核酸的质量和提取效率；并且本发明的裂解液和试剂盒在整个核酸提取过程中不需要借助蛋白酶K进行蛋白质的消化去除，以及不使用醇类沉淀核酸，获得的核酸纯度高，片段完整。

摘要： 本发明涉及一种用于核酸提取的裂解液、清洗液、核酸提取试剂盒及核酸的提取方法。该核酸提取试剂盒包括裂解液，裂解液包括20mmol/L～200mmol/L的NaCl、10mmol/L～50mmol/L的Tris、10mmol/L～50mmol/L的EDTA、质量百分含量为0.1％～0.5％的十二烷基硫酸钠、质量百分含量为2％～4％的TritonX‑100、0.5mol/L～1mol/L的NaBrO3及0.5mol/L～1mol/L的异硫氰酸胍。上述核酸提取试剂盒能够提取得到较高浓度的核酸。