上皮间质转分化

摘要： 目的研究含羞草碱(L-Mim)是否通过影响Notch1/Twist1信号通路,进而抑制肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而改善大鼠肺纤维化。方法雄性SD大鼠60只,随机分为正常组(CON组)、博莱霉素(BLM)组、L-Mim5 mg· kg^(-1)剂量组和L-Mim10 mg· kg^(-1)剂量组,每组各15只。CON组不做任何处理;其余三组气管注射BLM(7500 U· kg^(-1))诱导肺纤维化大鼠模型。造模后第3天开始灌胃给药,连续给药28天后检测用力肺活量(FVC)、第0.3秒用力呼气容积(FEV)占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC%)、最大呼气流量(PEF)和最大通气量(MVV)。取左肺行HE、Masson及I型胶原(collagen I)免疫组化染色;右肺提取RNA和蛋白,real-time PCR和(或)Western Blot检测肺组织中TGF-β1、E钙黏蛋白(E-Cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Notch1、Notch1胞内域(NICD)、Hes1、Twist1、真核翻译起始因子3a(eIF3a)mRNA和蛋白的表达。结果与CON组相比,呼吸功能实验显示BLM组大鼠FVC、FEV0.3/FVC%、PEF和MVV明显降低。肺组织肺泡萎缩、塌陷并发生融合,肺泡间隔明显增宽,可见大量炎性细胞的浸润。肺间质胶原纤维沉积和collagen I的阳性表达明显增多;另外,肺组织中E-cadherin和ZO-1表达明显下降而Vimentin、N-cadherin和α-SMA的表达明显增加(P<0.01);同时,肺组织TGF-β1、Notch1、NICD、Hes1、Twist1和eIF3a的表达也明显上调(P<0.01)。与BLM组相比,不同剂量L-Mim能够明显改善大鼠的呼吸功能(FVC、FEV0.3/FVC%、PEF和MVV明显升高),显著降低肺组织炎症反应、胶原沉积和collagen I的阳性表达;另外,L-Mim还能够明显上调肺组织E-cadherin和ZO-1的表达和显著下调Vimentin、N-cadherin和α-SMA的表达;同时,L-Mim也能够明显抑制肺组织TGF-β1、Notch1、NICD、Hes1、Twist1和eIF3a的表达(P<0.05、0.01)。结论L-Mim能够逆转肺泡上皮细胞EMT、缓解肺纤维化。其机制可能与其抑制Notch1/Twist1信号通路、进而抑制eIF3a的表达有关。

摘要： 糖尿病肾病是终末期肾病的首要原因,足细胞上皮间质转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)与糖尿病肾病肾功能减退、蛋白尿的发生及进展有重要关系。中医药治疗糖尿病肾病在临床中疗效确切,但糖尿病肾病发病机制复杂,其分子机制尚未完全阐明。足细胞EMT和多条信号通路有关,如转化生长因子-β、Wnt/β-catenin、整合素连接激酶、Notch、丝裂原活化蛋白激酶、核因子-κB、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路,其中转化生长因子-β作为必需细胞因子可激活其他信号通路。信号通路将受到刺激后产生的细胞外信号分子传递进细胞核内与靶基因结合,促进足细胞EMT。中药单体、单味中药如黄芪甲苷、当归多糖、雷公藤甲素、黄芩苷、丹参和生地黄等在体内外实验中被证明对EMT具有一定的抑制作用。本文从信号通路角度,通过将中药干预足细胞EMT的文献进行整合,筛选出作用于足细胞EMT信号通路的中药并对其功效进行分析,发现益气养阴类、清热祛湿类、活血化瘀类中药在足细胞EMT中的研究较多,在糖尿病肾病治疗中可能发挥足细胞保护的机制,为糖尿病肾病的中药治疗提供思路。

摘要： 目的粒细胞集落刺激生长因子(G-CSF)近年来被证明在后发性白内障(PCO)晶状体后囊膜组织中表达。本研究旨在探讨G-CSF是否在PCO中发挥作用。方法采用浓度梯度重组G-CSF蛋白处理人晶状体上皮细胞(HLEC-B3),筛选有效、合适的作用浓度。Western blotting检测G-CSF处理HLEC-B3细胞后细胞外基质(ECM)合成、上皮间质转分化(EMT)标志基因的作用。划痕实验和Transwell实验检测G-CSF处理对HLEC-B3细胞迁移和侵袭的作用。结果80μg/L G-CSF可以促进HLEC-B3细胞增殖。G-CSF处理HLEC-B3细胞48 h后EMT和ECM合成标志基因的表达随时间明显上调。G-CSF处理HLEC-B3细胞48 h可以明显促进其侵袭,同样,G-CSF也可以明显诱导细胞迁移。结论G-CSF可以促进HLEC-B3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT和ECM合成,可能参与了PCO的发生,抑制G-CSF表达可能是控制PCO的新策略。

摘要： 目的:在体内外模型中研究草酸钙晶体诱导的肾脏自噬和上皮间质转分化(epithelial mesenchymal transition,EMT)以及自噬在EMT中的作用。方法:(1)将20只C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组。检测小鼠血肌酐及尿素氮水平;取肾组织做免疫组化及westernblot检测。(2)应用一水草酸钠刺激HK2细胞株构建细胞模型,予雷帕霉素、3MA干预后检测细胞活性、自噬及EMT蛋白表达情况。结果:(1)造模组小鼠肾脏皮髓质交界处可见大量草酸钙晶体,伴随肾小管上皮细胞损伤;肾组织westernblot检测提示:LC3B、Beclin-1、α-SMA蛋白表达显著升高,E-cadherin表达显著下调(P<0.05)。(2)一水草酸钠处理HK2细胞后由鹅卵石样变成梭形,伴随细胞损伤,成时间和剂量依赖性;(3)一水草酸钠作用12 h后自噬及EMT蛋白表达升高,24 h到达高峰,随着时间延长逐渐下降,且细胞损伤加重;加予雷帕霉素处理后,α-SMA及Vimentin的表达进一步增加,细胞死亡程度加重。结论:自噬参与并加重早期草酸钙结晶肾损伤EMT的进程;通过抑制自噬可以改善草酸钙结晶肾损伤程度。

摘要： [目的]通过检测极性蛋白-3(partitioning defective-3,PAR-3)在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)所导致的肾间质纤维化大鼠中的表达,探讨消瘀泄浊饮对肾小管上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.[方法]将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型(UUO)组、西药(贝那普利)组和中药(消瘀泄浊饮)组.从术后1 d起,每天分别给予消瘀泄浊饮药液10.4 g/(kg·d)和盐酸贝那普利溶液1 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组以等体积0.9％氯化钠注射液灌胃4周.给药结束后分别检测白蛋白(albumin,ALB)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿酸(uric acid,UA)水平;取手术侧肾组织分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及Masson染色进行相关病理检测;采用免疫荧光和免疫印迹法分别检测肾组织PAR-3的表达;采用免疫组化检测肾组织E-钙黏蛋白(E-cadherin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白的表达.[结果]与假手术组比较,模型组、西药组、中药组BUN、Scr、UA水平均增高,差异有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,中药组BUN、Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P<0.05);与西药组比较,中药组Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P<0.05).与假手术组比较,模型组大鼠肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均升高(均P<0.05);与模型组比较,西药组、中药组肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均降低(均P<0.05).与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织PAR-3水平均下降(均P<0.05);与模型组比较,中药组肾组织PAR-3表达升高(P<0.05).与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织α-SMA表达增加,E-cadherin表达减少(均P<0.05);与模型组比较,西药组、中药组大鼠肾组织α-SMA表达减少,E-cadherin表达增加(均P<0.05).[结论]UUO大鼠肾组织PAR-3表达减少,消瘀泄浊饮能通过上调肾组织PAR-3表达、阻止肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,起到改善肾间质纤维化的作用.

摘要： 目的 探索Klotho抑制高糖条件下肾小管上皮细胞(HK-2)微RNA(miR)-21a-5p表达而减轻肾小管上皮细胞间质转分化的机制.方法 将体外培养的HK-2分为低糖组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)和高渗组(30 mmol/L甘露醇);按照高糖刺激时间分为4组:0、12、24、48 h;按照是否转染pcDNA3.1-Klotho/pcDNA3.1-Vector及转染后低或高糖刺激分为4组:低糖组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组;按照转染si-Klotho/si-N egative后是否加入二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和低或高糖刺激分为6组:低糖+si-Klotho组、低糖+si-Negative组、低糖+si-Klotho+PDTC组、高糖+si-Klotho组、高糖+si-Negative组和高糖+si-Klotho+PDTC组.染色质免疫共沉淀(CHIP)分组:低糖+pcDNA3.1-Vector组、高糖+pcDNA3.1-Vector组和高糖+pcDNA3.1-Klotho组.采用实时聚合酶链式反应检测各组细胞miR-21a-5p水平;Western blot检测Klotho、纤连蛋白(FN)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、核因子κB (NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)表达水平;CHIP检测NF-κB对miR-21a-5p启动子的直接作用.两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 与低糖组比较,高糖组Klotho蛋白表达下降至60.8％ (P＜0.05),miR-21a-5p表达升高至3.203倍(P＜0.01),FN和α-SMA表达明显升高.随着高糖刺激时间延长,Klotho蛋白表达水平逐渐降低,而miR-21a-5p表达水平逐渐升高,呈现相反的变化趋势(P＜0.05).高糖组核蛋白NF-κB和miR-21a-5p表达水平是低糖组的2.934倍和3.154倍(均P＜0.01),而过表达Klotho后,NF-κB和miR-21a-5p表达水平分别下降至高糖组的50.18％和49.24％(均P＜0.05).CHIP结果显示:高糖+pcDNA3.1-Vector组与低糖+pcDNA3.1-Vector组相比,NF-κB和miR-21a-5p启动子结合显著增加至3.121倍(1.000±0.742比3.121±0.115,P＜0.01);而过表达Klotho能显著减弱高糖引起的NF-κB和miR-21a-5p启动子结合至54.21％(3.121±0.115比1.692±0.073,P＜0.01).结论 Klotho可抑制高糖条件下肾小管上皮细胞NF-κB和miR-21a-5p启动子的结合,使miR-21a-5p表达减少,从而减轻肾小管上皮细胞间质转分化.

摘要： 目的 探讨糖肾宁对KK-Ay小鼠足细胞上皮间质转分化的影响.方法 采用KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病小鼠模型,随机分为模型组、糖肾宁组及缬沙坦组,每组10只,并将10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组.各组小鼠干预给药12周后处死,心尖取血、摘取双侧肾脏,进行相应指标检测.使用酶联免疫法检测血清肌酐及尿素氮水平,PAS染色观察各组小鼠肾组织细胞外基质增生情况,免疫组化检测各组小鼠肾组织Collagen I及FN蛋白表达,WB及RT-PCR检测各组小鼠足细胞P-cadherin和FSP-1的蛋白及mRNA表达.结果 (1)与正常对照组相比,模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.05).(2)与正常对照组相比,模型组小鼠肾小球细胞外基质明显增生,基质蛋白Collagen I及FN表达上调(P<0.05);与模型组相比,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠肾小球细胞外基质增生减轻,基质蛋白Collagen I及FN表达明显下调(P<0.05).(3)与正常对照组相比,模型组小鼠足细胞P-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05),FSP-1蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05);与模型组相比,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞P-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05),FSP-1蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05).结论 糖肾宁能够抑制糖尿病肾病小鼠足细胞上皮间质转分化,可能是其减轻肾小球细胞外基质增生、延缓疾病进展的分子机制.

摘要： 目的：检测白细胞介素23(IL-23)对食管鳞癌细胞上皮间质转分化(EMT)及转移能力影响,探讨其促进食管鳞癌转移发生的潜在机制. 方法：免疫组织化学法检测食管鳞癌患者组织中IL-23表达;PCR,免疫荧光及Western blot法检测不同浓度IL-23处理后EMT变化;通过RNAi转染技术下调细胞中snaill表达及anti-IL-23中和后检测EMT程度;ELISA法检测处理前后MMP-9和VEGF-C;采用Wnt/β-catenin通路抑制剂ICG-001或者RNAi技术后,PCR和Western blot法检测EMT及转移相关蛋白;划痕实验和TranswellTM实验验证IL-23对食管鳞癌细胞迁移能力影响;构建裸鼠皮下移植瘤模型,经IL-23和ICG-001组合处理后,观察瘤体变化,并通过免疫组化法、Western blot法检测相关蛋白. 结果:10例无转移患者癌与癌旁组织中IL-23表达无差异;13例转移患者癌组织中IL-23表达明显高于癌旁组织(p=0.025);转移患者癌组织中IL-23表达强度及范围高于未转移患者，且癌旁组织中IL-23表达高于未转移(p=0.031);IL-23表达强度与年龄、性别、大小、部位、TMN分期无关，而与淋巴结和远处转移相关(p＜0.05)。IL-23上调EMT相关转录因子slug,snail1的mRNA水平，并下调负调控因子miRNA 200a。当敲低snail1水平和中和阻断均影响IL-23对E-cadherin和vimenlin的调控。经ICG-001处理后，PCR显示E-cadherin下调和MMP-9上调作用被阻断，且Western blot显示用RNAi处理,阻断了IL-23上调EMT及转移相关蛋白。划痕实验和TranswellTM实验表明IL-23增强食管鳞癌细胞迁移和浸润能力;经ICG-001不同组合处理，发现瘤体体积无明显差异，免疫组织化学染色法和Westernblot结果显示，IL-23促进体内癌细胞的迁移和浸润。 结论:IL-23通过激活Wnt/β-catenin通路促进食管鳞癌细胞EMT及转移发生;人体内IL-23主要来源于巨噬细胞及树突状细胞，因此本研究提示肿瘤治疗，特别是免疫治疗需综合考虑能够潜在促进肿瘤恶化的因素。

摘要： 目的:机械牵张气道上皮细胞可导致miR-19b表达特异性升高,以miR-19b为切入点,研究该miRNA在ALI/ARDS发生发展中对气道上皮细胞的上皮间质转分化(EMT)的影响及其机制.rn 方法:机械牵张小气道上皮细胞,实时定量荧光PCR检测miR-19b的表达,免疫印迹检测EMT指标的表达以确保建立机械牵张诱导的EMT模型.沉默及过表达miR-19b,免疫印迹检测EMT标志物,其中上皮标志物包括CK8,E-cadherin,SP-B,间质标志物包括Vimentin,N-eadherin,a-SMA,以证实miR-19b在机械牵张诱导的EMT中的作用.通过miRNA靶基因预测软件,预测PTEN是miR-19b的靶基因.沉默和过表达miR-19b,免疫印迹检测PTEN表达,以证实PTEN和miR-19b的靶对关系(为更直接说明miR-19b和PTEN的靶对关系,正开展双荧光素酶报告基因试验).为进一步证实靶基因的功能,转染高表达PTEN质粒至小气道上皮细胞,机械牵张48小时后免疫印迹检测EMT标志物.rn 结果:机械牵张小气道上皮细胞可以上调miR-19b的表达并促进EMT，即上皮标志物CK8E-cadherin. SP-B表达上调，间质标志物Vimentin, N-cadherin，a-SMA表达下调。沉默miR-19b可部分逆转机械牵张诱导的EMT，而过表达miR-196则可直接促进EMT，证实了miR-19b是参与EMT的重要分子。沉默miR-19b可致预测的靶基因PTEN上调，反之，过表达miR-19b可致PTEN下调，间接说明了miR-19b和PTEN之间的靶对关系。高表达PTEN可部分逆转机械牵张诱导的EMT。rn 结论:机械牵张小气道上皮细胞可以上调miR-19b的表达并促进上皮间质转分化;miR-l9b可通过靶向PTEN参与上皮间质转分化。

摘要： 目的：探讨游离二氧化硅(SiO2)诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)发生上皮间质转分化的细胞表面标志物蛋白表达情况. 方法：提取SPF级SD大鼠原代巨噬细胞(AM),并常规培养AM和RLE-6TN.CCK-8细胞染尘实验确定SiO2的染尘浓度,以SiO2为受试物观察RLE6TN发生上皮间质转分化的情况.实验分为4组:直接对照组、直接染尘组、间接对照组和间接染尘组,SiO2染尘Oh、24h、48h、72h,用Western blot测定RLE-6TN的E-黏钙蛋白(E-cadherin)和α平滑肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平. 结果：CCK-8细胞染尘实验确定SiO2的染尘浓度为100μgymL;随着SiO2染尘时间的延长,直接染尘和间接染尘的方式均能使E-cadherin的蛋白表达下降、α-SMA的蛋白表达上升(P＜0.05);直接染尘组与直接对照组、间接染尘组与间接对照组相比,E-cadherin的表达差异在48h和72h时均具有统计学意义(P＜0.05),α-SMA的表达差异在24h、48h和72h时均具有统计学意义(P＜0.05);间接染尘组与直接染尘组相比,24h、48h和72h时的E-cadherin差异均具有统计学意义(P＜0.05),48h和72h时的α-SMA差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：SiO2能够诱导RLE-6TN发生上皮间质转分化;间接染尘组更易于发生上皮间质转分化.

摘要： 本发明涉及一种诱导成纤维细胞转分化为类睾丸间质细胞的方法，其特征在于将所需转录因子分别克隆至慢病毒载体，包装成病毒颗粒并转染至成纤维细胞；利用过表达转录因子的方法诱导成纤维细胞转分化为诱导型睾丸间质细胞，其中所述转录因子来源于人、小鼠或大鼠，并且所述转录因子为选自由Dmrt1、Nr0b1、Sp1、Wt1、Nr4a1、Nr5a2、AP1、Creb1、Smad3、Nr5a1和Gata4组成的组中的部分或全部转录因子的组合。转分化后的细胞具有成熟睾丸间质细胞类似的雄激素合成相关基因的表达谱，并能合成和分泌睾酮。通过本发明制备的类睾丸间质细胞可用于治疗雄性性腺机能减退综合征。

摘要： 本发明提供了一种利用小分子化合物体外诱导体细胞转分化为乳腺上皮细胞的方法，抑制TGFbeta R1及其相关位点的表达，实现体外诱导体细胞转分化为乳腺上皮细胞。本发明填补了利用小分子化合物诱导成纤维细胞向乳腺上皮细胞转分化技术的一个空白；为体外研究乳腺生物反应器、乳腺发育分化、乳腺癌以及成纤维细胞转分化为其他类型的功能性细胞的研究提供研究平台。

摘要： 本发明涉及一种将成纤维细胞转分化为腺上皮细胞的方法及其培养体系和应用。本发明获得了具有子宫腺上皮特征并且对卵巢激素有反应的化学诱导的腺上皮细胞(ciGE)，它们可以在临床治疗中应用于子宫内膜替代等方面。通过仅使用化学分子诱导成纤维细胞获得ciGE具有几个优点，包括细胞渗透性，操作方便，无免疫原性和易于标准化，这些优点使其成为治疗绝对子宫因子不孕症(AUFI)等子宫疾病的临床应用的有吸引力的策略。此外，本发明发现了功能相关基因的上调，包括ciGE中的雌激素和孕酮反应基因，表明获得的ciGE为可扩增的功能性子宫腺上皮细胞。

摘要： 本发明涉及一种在体外将哺乳动物成纤维细胞转分化为视网膜色素上皮细胞的方法，所述方法包括将多种转录调控因子和报告基因转入哺乳动物成纤维细胞中，然后使用多种培养基进行培养从而获得视网膜色素上皮细胞。

摘要： 本发明涉及一种诱导成纤维细胞转分化为类睾丸间质细胞的方法，其特征在于将所需转录因子分别克隆至慢病毒载体，包装成病毒颗粒并转染至成纤维细胞；利用过表达转录因子的方法诱导成纤维细胞转分化为诱导型睾丸间质细胞，其中所述转录因子来源于人、小鼠或大鼠，并且所述转录因子为选自由Dmrt1、Nr0b1、Sp1、Wt1、Nr4a1、Nr5a2、AP1、Creb1、Smad3、Nr5a1和Gata4组成的组中的部分或全部转录因子的组合。转分化后的细胞具有成熟睾丸间质细胞类似的雄激素合成相关基因的表达谱，并能合成和分泌睾酮。通过本发明制备的类睾丸间质细胞可用于治疗雄性性腺机能减退综合征。

摘要： 本发明提供了一种利用小分子化合物体外诱导体细胞转分化为乳腺上皮细胞的方法，抑制TGFbeta R1及其相关位点的表达，实现体外诱导体细胞转分化为乳腺上皮细胞。本发明填补了利用小分子化合物诱导成纤维细胞向乳腺上皮细胞转分化技术的一个空白；为体外研究乳腺生物反应器、乳腺发育分化、乳腺癌以及成纤维细胞转分化为其他类型的功能性细胞的研究提供研究平台。

摘要： 本发明提供了一种利用转分化乳腺上皮细胞制备转基因乳腺生物反应器的方法，包括如下步骤，1)制备携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞；2)将步骤1)制备的携带外源基因的转分化乳腺上皮细胞注射到去除了乳腺芽的乳腺脂肪垫，注射细胞量为5×104‑1×106个细胞。本发明所述的方法有效的缩短了转基因乳腺生物反应器制备的周期，而且成本低，效率高，操作相对简单。外源基因对动物本身的影响较小，而且外源基因也不会遗传到后代，生物安全性也相对较高。

摘要： 本发明涉及一种将成纤维细胞转分化为腺上皮细胞的方法及其培养体系和应用。本发明获得了具有子宫腺上皮特征并且对卵巢激素有反应的化学诱导的腺上皮细胞(ciGE)，它们可以在临床治疗中应用于子宫内膜替代等方面。通过仅使用化学分子诱导成纤维细胞获得ciGE具有几个优点，包括细胞渗透性，操作方便，无免疫原性和易于标准化，这些优点使其成为治疗绝对子宫因子不孕症(AUFI)等子宫疾病的临床应用的有吸引力的策略。此外，本发明发现了功能相关基因的上调，包括ciGE中的雌激素和孕酮反应基因，表明获得的ciGE为可扩增的功能性子宫腺上皮细胞。

摘要： 本发明涉及一种在体外将哺乳动物成纤维细胞转分化为视网膜色素上皮细胞的方法，所述方法包括将多种转录调控因子和报告基因转入哺乳动物成纤维细胞中，然后使用多种培养基进行培养从而获得视网膜色素上皮细胞。

摘要： 本发明的问题在于提供一种针对干眼症等与复层扁平上皮细胞相关的疾病有效的新的治疗剂。本发明是一种包含间充质干细胞的分泌物的复层扁平上皮细胞的正常分化‑成熟促进剂。优选地，上述分泌物不含动物血清，上述间充质干细胞为来源于脂肪的间充质干细胞、来源于脐带的间充质干细胞或来源于骨髓的间充质干细胞，上述复层扁平上皮细胞为选自由角膜上皮细胞、结膜上皮细胞、表皮角化细胞、口腔上皮细胞、会厌上皮细胞、食道上皮细胞、阴道上皮细胞、声带皱襞上皮细胞、鼻腔上皮细胞以及鼻前庭上皮细胞组成的群组中的至少一种。