T载体

摘要： 为弥补传统分子生物学实验中α-互补法筛选重组子以及蛋白质的原核诱导表达两项实验相对独立、缺乏连续的不足,探索通过设计基因克隆和蛋白表达一体化的综合性实验,以强化学生对阅读框的认识。分子生物学实验中的综合性实验设计拓展了实验教学的广度与深度,为进一步提升学生的知识、能力和素养奠定基础。

摘要： This experiment aimed to improve the shortcomings of low ligation efficiency and weak positive selection in cloning PCR products with T-vector.The approach called for an addition of T-overhang to a blunt-end plasmid.Firstly,a 3′-T overhang was attached to the blunt-end pBluescript SK(+) plasmid utilizing a terminal transferase,Taq DNA polymerase.Secondly,thepBS vector was ligated by T4 DNA ligase to form thesupercoiled blunt-end pBS plasmid without a 3′-T overhang,whereas the plasmidwith a 3′-T overhang remained linear in appearance.Finally,the DNA fragment of 3 000 bp,which was pBST-vector for cloning PCR products,could be purified byagarose gel electrophoresis followed by usinga gel extraction kit.The 500 bp and 1 000 bp DNA fragments were cloned into pBS T-vector with a100% cloning efficiency.It appeared that the newly developed procedures provided a valid zero-background T-vector for cloning PCR products.%为解决平末端加T法构建的T载体,在PCR产物克隆时连接效率低、阳性克隆筛选困难的问题,本研究在利用Taq DNA聚合酶末端转移酶活性对线性化平末端pBluescript SK (+)载体3′-端进行加T反应后,使用T4 DNA连接酶处理加T后pBS载体,使3′-端未加T平末端载体重新形成超螺旋状态,而3′-端加T载体则保持线性化状态,在琼脂糖电泳时切胶回收3 000 bp处DNA片段,成为pBS-T载体.使用构建的pBS-T载体分别克隆500 bp和1 000 bp PCR片段,pBS-T载体克隆效率达到100%,实现了对PCR产物的零背景克隆.

摘要： 为研究5'-非翻译区(UTR)对沙门氏菌鞭毛主调控基因flhDC表达的影响,本研究以鼠伤寒沙门氏菌542 (STM542)基因组DNA为模板,扩增含不同长度5'-UTR的flhDC全长基因(共5种),并将其克隆至含阿拉伯糖启动子的质粒PBAD33中.通过测定含阿拉伯糖的半固体平板上包含不同长度flhDC基因的重组大肠杆菌菌落的直径,初步评估不同5'-UTR调控序列对flhDC基因表达的影响.为精确测定不同调控序列的活性差异,本实验室进一步构建了以lacZ为报告基因的T载体,并将扩增的对应于前4种flhDC基因调控序列片段克隆于构建的T载体,通过测定其β-半乳糖苷酶活性获得相应调控序列的活性参数.结果显示,在阿拉伯糖诱导下,对应于1 572 bp的flhDC基因片段的调控序列活性最低,对应于1201bp的flhDC基因片段的调控序列活性最高,本实验为进一步研究flhDC基因的调控功能奠定基础.%In order to investigate the effect of the 5'-untranslated region (UTR) on the expression activity of flagellar master regulatory gene flhDC in Salmonella.The 5 flhDC genes with different lengths of 5'-UTR were amplified from the genome DNA in Salmonella typhimurium 542,and were cloncd into plasmid of pBAD33 with Arabia suqar promoter.The motility assay was operated in E.coli which was used to evaluated the effect of the different lengths of 5'-UTR on the expression of flhDC genes.The 4 regulatory sequences corresponding to the first four different lengths flhDC genes were connected to a T-vector with lacZ report gene constructed by our laboratory and the β-galactosidase activity test were experimented in E.coli to further research their activity difference.The results of the above two experiments showed that the activity of regulatory sequence corresponding to the 1,572 bp flhDC was lowest and the regulatory sequence corresponding to the 1,201 bp flhDC was highest.This study established basis for further research on the regulation function of the flhDC gene in Salmonella.

摘要： 高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率.笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法.将含有限制酶Xcm Ⅰ酶切位点的ccdB致死基因作为插入DNA片段连接到pMD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm Ⅰ酶切即得到T-载体.该T-载体含有的ccdB致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了pMD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性.整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景.

摘要： 目的:构建基于XcmI识别序列的T载体并对与其连接的PCR片段进行优化.方法:首先将5'和3'端含有Xcm I识别序列的人组蛋白H4 cDNA定向克隆至pCDNA3.0表达载体中,再用Xcm I酶切得到基于pCDNA3.0载体骨架的T载体,为提高T载体与DNA片段的连接效率,在DNA片段PCR扩增前将其引物进行磷酸化并在PCR结束后再用Taq DNA聚合酶和dATP处理,分别将长度为312 bp和1 329bp的PCR片段T载体连接并将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,培养转化子,通过菌液PCR和琼脂糖凝胶电泳估算转化子的阳性率.结果:经Xcm I酶切后的T载体能高效地与目的DNA片段连接;除T载体本身质量外,扩增DNA片段所用引物的磷酸化与否也是影响克隆效率的重要因素之一;对较大的插入片段而言,经PCR扩增、纯化后再用Taq DNA聚合酶和dATP处理也能够显著增加连接效率.结论:克服了对蓝白筛选或插入自杀基因等实验条件的限制,可为T载体的常规制备并与目的片段进行高效地连接提供了新的线索.

摘要： 构建一种能对PCR产物进行直接克隆并展示于酵母表面的新型T载体.根据酵母表面展示载体pYD1多克隆位点序列设计出利用两端带有Xcm Ⅰ内切酶酶切位点的含有黄色荧光蛋白基因的Xcm Ⅰ酶切盒,通过NheⅠ和Xho Ⅰ酶切位点插入到pYD1载体上形成质粒pYD-YFP,并对其进行酶切鉴定和DNA测序分析,再经Xcm Ⅰ酶切后形成两端带有dT的表面展示T载体.利用PCR扩增两个含有荧光蛋白的融合蛋白PCAD-CFP和PSR-DsRed的基因并直接克隆到所构建的T载体中,检测其表达功能.酶切鉴定和DNA测序结果显示PCA D-C FP和PSR-DsRed正确插入载体上,分别转化至酿酒酵母EBY100中,激光共聚焦显微镜下观察到相应的荧光的酵母,表明克隆有融合蛋白基因片段的载体成功在酵母细胞中进行表面展示,证明了所构建的酵母表面展示T载体具有直接克隆和表面展示目的蛋白的功能.

摘要： T载体可直接用于克隆PCR产物,因此应用于大规模的基因克隆中,具有快速、高效、操作简单等优点.对T载体进行了综述,介绍了T载体在生物学众多领域的广泛应用,总结了当今T载体的技术创新和改良,特别介绍了目前最新的新型多功能T载体——定向克隆表达型T载体,并且探讨了T载体未来的发展趋势.

摘要： 目的:选择C-erbB-2(neu)基因中编码两个HLA-A2限制性CTL抗原肽表位p106-114,p369-377的基因片段,构建克隆载体pGM-neu1(包含p106-114片段)和pGM-neu2(包含p369-377片段).方法:用免疫组化方法检测小鼠Lewis肺腺癌细胞中C-erbB-2的表达,然后采用RT-PCR技术,从小鼠Lewis肺腺癌细胞总RNA中扩增编码neu1(包含p106-114片段)、neu2(包含p369-377片段)的基因片段,通过连接反应构建重组克隆载体,测序鉴定.结果:免疫组化染色检测C-erbB-2的表达,发现小鼠Lewis肺腺癌细胞有明显深棕色,表现出较强阳性,阳性信号位于细胞膜.RT-PCR扩增产物neu1、neu2基因片段大小与理论预期相符.重组克隆载体经DNA序列测定,结果与GeneBank中小鼠C-erbB-2的基因序列一致.结论:C-erbB-2在小鼠Lewis肺腺癌细胞中有较高表达,成功构建了克隆载体pGM-neu1和pGM-neu2.

摘要： 选用莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)作为检测微藻启动子功能的生物系统,以pSP124质粒为基础,雨生红球藻β -胡萝卜素酮化酶基因bktl的启动子片段(450 base pair,记作450 bp)为间隔序列,引入两个Eam 1105 Ⅰ限制性内切酶位点,构建莱茵衣藻启动子功能检测T载体.将聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得的1 986 bp的bkt1启动子片段直接克隆到T载体上,通过“珠磨法”转化到莱茵衣藻CC-849中,经Zeomycin筛选获得了TranB-0.45和TranBle转基因藻,而1 986 bp的bkt1启动子无转化子,原因可能是其含有负调控元件.PCR结果显示,ble可稳定存在于转基因藻中,bkt1启动子的450bp片段具有启动子活性,能正确表达BLE蛋白.该研究表明,莱茵衣藻和pB-0.45T载体所组成的检测系统可用于藻类启动子研究,为启动子功能的研究提供了一条新途径.%Chlamydomonas reinhardtii was employed as a bio-system for analyzing the function of algal promoter in this study. The C. reinhardtii T-vector based on pSP124 plasmid was constructed using 450 bp sequences of β-carotene ketolase gene ( bktl) promoter as insert fragment. Two Eaml 105 Ⅰ restriction sites were introduced into this T-vector. 1 986 bp sequences of bktl promoter was obtained by PCR and cloned into the C. reinhardtii T-vector directly. By "glass-bead method" , transformants of Tran and Tran Ble were generated from TAP containing 10 (μg/mL Zeomycin. However, none of Tran B-2 were observed due to some negative regulatory elements in 1 986 hp-bkt 1 promoter. Results of PCR confirmed that ble was integrated into the genome DNA of C. reinhardtii . The 450 bp sequences of bktl promoter were able to express BLE in transgenic algae, which verified that it owned promoter ability in C. reinhardtii. These results indicate that the C. reinhardtii and pB-0. 45T system for analyzing promoter function is workable. It is a new way for studying algal promoters.

摘要： [ Objective] The paper aimed to construct a new T vector based on plasmid pUC19 digested with Xcm Ⅰ. [ Method] Two complementary oligonucleotide chains containing two Xcm Ⅰ sites were synthesized. After denaturation and renaturation, the adaptor was cloned into plasmid pUC19 between the Hind Ⅲ and BamH Ⅰ sites. The new plasmid, pUC19-HB-T vector, was digested with Xcm Ⅰ to derive a T-vector with 3' end overhanging a T base. [ Result] The constructed pUCI9-HB-T vector was efficient incloning PER products, with an efficiency of 95％ at least. [ Conclusion] A new Xcm Ⅰ-based pUCI9-HB-T vector was constructed, which could be applied to cloning of PER products and other microbiology operations.%[目的]构建以pUC19质粒为基础可利用Xcm I内切酶制备的T载体.[方法]化学合成2条含有双Xcm I酶切位点的互补寡聚核苷酸链,经过变性、复性后克隆入PUC19质粒的Hind Ⅲ和BamH I位点之间,通过Xcm I酶切后得到一个线性化的带有3'末端突出一个T碱基的T载体.[结果]经TA克隆验证,制备的pUC19-HB-T载体对PCR产物的克隆率达到95%以上.[结论]构建的pUC19-HB-T载体可用于PCR产物的克隆、测序及后续分子生物学操作.

摘要： 本发明的目的在于提供一种即使用在300°C以上的温度下进行压力加工的印刷布线板的制造中，也能够剥离载体与铜箔层的带载体片的铜箔。为了达到该目的，提供一种带载体片的铜箔，其是在载体片的表面通过接合界面层具有铜箔层，且能够物理地剥离该载体片，其特征在于，该接合界面层由通过金属层和碳层的构成。而且，上述接合界面层优选由厚度为1nm～50nm的金属层与厚度为1nm～20nm的碳层构成。

摘要： 依照本发明的一种记录载体(1)包括组织在多个文件中的信息,其包括音频视频数据(11)和当启用用户交互时控制重放装置上音频视频数据重放的重放控制数据(12)。该信息还包括优先级信息(优先级),指出待存储在重放装置高速缓存(39)中文件的相对优先级。本发明还涉及用于重放记录载体的装置和用于重放记录载体的方法。

摘要： 描述了一种用于在真空腔室内运输载体的载体运输系统。所述载体运输系统包括在运输方向上延伸的轨道组件，所述轨道组件包括：设置在第一纵坐标处并在所述运输方向上延伸的第一被动磁性单元；设置在第二纵坐标处并在所述运输方向上延伸的第二被动磁性单元，其中所述第一被动磁性单元和所述第二被动磁性单元被配置为抵消所述载体的重量；以及设置在第三纵坐标处并包括多个辊的辊运输轨道，所述多个辊被配置为支撑所述载体的部分重量，其中在所述第一纵坐标与所述第二纵坐标之间的第一竖直距离大于在所述第二纵坐标与所述第三纵坐标之间的第二距离。

摘要： 描述了用于抑制载体的振动的磁性阻尼装置(100)。所述磁性阻尼装置(100)包括第一组件(110)，所述第一组件包括至少一个导电板元件(111)。附加地，所述磁性阻尼装置(100)包括磁体组件(120)，所述磁体组件具有沿减振方向(101)延伸的至少一个狭槽(123)。所述至少一个导电板元件(111)延伸至所述至少一个狭槽(123)中。另外，所述磁性阻尼装置(100)包括连接至磁性组件(120)的质量元件(130)和将所述质量元件(130)连接至所述第一组件(110)的弹簧装置(140)。另外，描述了用于承载平面物体的载体、用于输送载体的输送系统和用于非接触式地输送载体的方法。

摘要： 本发明涉及用于粘合剂的载体，其中载体被配置为附着到具有拓扑结构的表面，特别是时间可变拓扑结构，诸如人体或动物体的一部分。本发明还涉及载体的用途、激活载体的方法和制造载体的方法。

摘要： 本公开内容提供一种用于载体(220)在沉积系统中的非接触运输的设备。所述设备包括用于在运输方向(1)中移动载体(220)的驱动结构(210)，和在所述驱动结构(210)处的位置检测装置(215)。

摘要： 说明一种用于在真空腔室中定位基板载体(150)和掩模载体(160)的定位配置(100)。定位配置(100)包括第一轨道(110)，在第一方向中延伸并且经构造以用于基板载体(150)的传送，基板载体(150)经构造以用于保持基板，基板具有基板表面；第二轨道(120)，在第一方向中延伸并且经构造以用于掩模载体(160)的传送，其中第一轨道(110)和第二轨道(120)在与基板表面共面的平面中偏移偏移距离(D)；和保持配置(130)，经构造以用于保持掩模载体(160)，其中保持配置(130)布置于第一轨道(110)和第二轨道(120)之间。

摘要： 本公开提供了用于在处理腔室中的层沉积期间支撑基板载体(130)和掩模载体(140)的固持布置(100)。固持布置(100)包括可连接至基板载体(130)和掩模载体(140)中的至少一个的两个或更多个对准致动器。固持布置(100)被配置为在第一平面中或平行于第一平面支撑基板载体(130)，其中两个或更多个对准致动器中的第一对准致动器(110)被配置为至少在第一方向(1)上使基板载体(130)和掩模载体(140)相对于彼此来移动，其中两个或更多个对准致动器中的第二对准致动器(120)被配置为至少在第一方向(1)上和不同于第一方向(1)的第二方向(2)上使基板载体(130)和掩模载体(140)相对于彼此来移动，并且其中第一方向(1)和第二方向(2)在第一平面中。

摘要： 本发明提供杂质难以非特异性吸附的固相载体。一种固相载体，是键合有链状聚合物的固相载体，其特征在于，上述链状聚合物含有包括第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构，上述第1结构单元具有反应性官能团，上述第2结构单元不具有反应性官能团或者具有反应性比第1结构单元具有的反应性官能团低的反应性官能团，上述第1结构单元所含的反应性官能团的摩尔数a与上述链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)为0.01～0.7。

摘要： 一种硅块（31）载体（13），设计作为载体装置（11）的一部分，与载体下部（25）一起固定连接到硅块（31），并且与其一起移动，来通过锯削、清洁或诸如此类来机械加工。载体（13）指向硅块（31）的底面具有多个通道（29），正如连接到此处的载体下部（25），在不同的情况中，通道（29）一个置于另一个之上。水从上面引入到载体（13）中的通道（29）中并且能够延伸通过位于锯削的硅块（31）的晶片之间的载体下部（25）中的锯削槽，用于清洁目的。