cDNA文库

摘要： 采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA,运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列;通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1,鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况;利用诱饵质粒p GBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白。结果显示:成功构建重组诱饵质粒p GBKT7–STMN1,并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用,且能在酵母细胞中正常表达;筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆,经测序比对分析和点对点验证,得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白,这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程。

摘要： MYB102转录因子在番茄响应低温胁迫中起着重要作用,为了进一步探究番茄转录因子MYB102的分子作用机理,筛选其蛋白,以“Bolgogragsky”为材料,从番茄的根、茎、叶、花、果以及萼片组织中提取总RNA,以其为模板合成双链cDNA,纯化后与载体pGADT7-Rec共转化入酵母Y187感受态细胞中构建酵母双杂交cDNA文库。经测定,文库容量为2.31×10^(7) CFU,cDNA文库的转化效率为7.02×10^(6) CFU/μg,文库滴度为2.5×10^(8) CFU/mL,重组率为97%,插入的cDNA片段长度主要分布在250~2000 bp。结果表明,构建的番茄cDNA文库符合酵母双杂交文库要求,可用于筛选MYB102的互作蛋白。

摘要： 为构建捻转血矛线虫cDNA文库,进一步研究捻转血矛线虫蛋白互作机制以及为筛选捻转血矛线虫互作蛋白提供依据,本研究以捻转血矛线虫L3期幼虫为材料,利用TriZol法提取捻转血矛线虫总RNA;使用试剂盒构建捻转血矛线虫的cDNA文库,并对cDNA进行均一化处理,再将纯化后的cDNA与线性化的pGADT7-Rec重组构建的文库质粒转化至Y187酵母中,构建出酵母转录激活结构域(activationdomain,AD)文库。结果表明:本研究构建了重组率为100%,插入片段平均长度为1000 bp,工作液细胞密度大于3.5×10^(7)CFU/mL的捻转血矛线虫均一化酵母AD文库;所构建的表达文库各项指标均达标,符合酵母双杂交筛选要求。本文库为捻转血矛线虫的分子机制研究以及疫苗的开发奠定了基础。

摘要： 对基因文库的构建过程及从基因文库中筛选目的基因的方法等几个疑难问题进行了简要分析,为高中生物学中相关内容的教学提供参考.

摘要： 为筛选与羊口疮病毒(OrfV)蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,构建了羔羊睾丸(LT)细胞酵母双杂交cDNA文库.采用Trizol法提取LT细胞总RNA,运用SMART技术经LD-PCR合成全长cDNA,再经同源重组法将pGADT7-Rec载体与cDNA共转化至Y187酵母菌株,利用营养缺陷型选择性培养基(SD/-Leu)筛选阳性克隆,并鉴定文库质量.结果显示:LT细胞酵母双杂交cDNA文库构建成功,其文库滴度为2.33×10^(8) CFU?mL^(-1),文库容量达3.5×10^(9) CFU;随机挑选34个单克隆进行PCR检测,插入片段大小为250~2000 bp,平均大小约为1000 bp,文库重组率达100%.由此表明,本文库达到高质量文库条件,可作为研究OrfV与宿主细胞间互作机制的生物材料.

摘要： 从中国海南省采集澳链尾蝎(Liocheles australasiae),构建蝎毒腺cDNA文库,筛选得到一条抗菌肽基因La39,其成熟肽由18个氨基酸组成,二级结构呈现为α-helix,亲水和疏水氨基酸位于分子的对立面,形成较强的两性拓扑结构。MICs测定实验、溶血实验和抑制菌株生长实验结果表明,La39对金黄色葡萄球菌的最小抑制质量浓度为50μg/mL,对大肠杆菌无抑制活性,有溶血活性。

摘要： 为研究苦瓜果实成熟的分子调控机制,以苦瓜自交系E12201-e1为材料,取不同成熟期苦瓜果肉组织等量混合,采用All-Direct方法构建酵母双杂交cDNA文库。经质量鉴定,该文库库容为1.25×10^(7)CFU,平均插入片段大于1 200 bp,阳性率为100%,文库质量较高,符合建库标准。同时,以苦瓜果实成熟关键调控因子McRPF为诱饵,构建诱饵表达载体pGBKT7-McRPF。经鉴定该诱饵蛋白无自激活活性。利用共转化法,从文库中筛选到29个初始阳性菌落,经过DNA测序和BLAST比对分析,最终筛选得到12个可能与McRPF互作的蛋白,为进一步探究McRPF调控苦瓜果实成熟的分子机制奠定了理论基础。

摘要： 为深入挖掘匍匐翦股颖高温胁迫相关基因,本研究以高温处理的匍匐翦股颖叶片为试验材料,用Trizol法提取其总RNA,再用SMART技术进行双链cDNA的合成及回收纯化,并与pDONR222/pGADT7-DEST载体相连接,完成匍匐翦股颖酵母cDNA文库的构建。通过试验构建了质量较好的匍匐翦股颖酵母cDNA文库,文库容量为1.36×10^(7) CFU,所插入的匍匐翦股颖平均片段长度>1000 bp,选取的24个克隆经过PCR检测全部能够显示出条带,重组率为100%。通过使用SMART技术建立酵母cDNA文库的方法,获得了质量较高的匍匐翦股颖cDNA文库,为研究匍匐翦股颖相关基因的蛋白筛选试验做准备。

摘要： 大丽轮枝菌是引起棉花、马铃薯等重要作物黄萎病的土传病原真菌,其分泌的胞外蛋白是侵染寄主的重要毒力因子,因此研究胞外蛋白与寄主的相互作用具有重要意义.本研究旨在构建高效的棉花酵母双杂交cDNA文库,并通过已知大丽轮枝菌效应子VCR1互作蛋白的筛选来评价构建文库的质量.分别采用大丽轮枝菌及茉莉酸甲酯、水杨酸和乙烯处理海岛棉'海7124'以诱导其抗病基因表达,混合RNA样品构建酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达1.18×108 cfu/mL,检测重组率100％,插入片段在300～2 000 bp之间.以效应子VCR1为诱饵筛选获得27个潜在互作蛋白,并进一步确证了1个与VCR1互作的靶标蛋白.本研究构建的酵母双杂交文库将为筛选与大丽轮枝菌效应子互作的蛋白及后续互作机理研究提供重要的研究基础.

摘要： 猪流行性腹泻病毒Nsp8是RNA依赖的RNA聚合酶辅助因子,在病毒基因组复制中具有重要作用.为了从宿主细胞蛋白角度了解PEDV Nsp8蛋白的作用,本研究以PEDV感染的宿主细胞LLC-PK1为研究对象,提取LLC-PK1细胞总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,构建LLC-PK1 cDNA酵母文库,对该文库容量及质量进行鉴定.结果显示:本研究构建的LLC-PK1 cDNA文库库容量为2.1×107 CFU/mL,插入cDNA片段长度为500～2500 bp;将构建的诱饵质粒pGBKT7-Nsp8与LLC-PK1 cDNA酵母表达文库进行杂交,筛选阳性克隆菌株并测序分析,共获得了8个潜在互作蛋白;将8个蛋白分别与诱饵质粒pGBKT7-Nsp8进行酵母回复杂交验证,有4种宿主蛋白与Nsp8蛋白共转化后能在含X-α-Gal的DDO/X/A和QDO/X/A选择培养基中形成蓝色菌落;选择其中出现频率最高的LDHB蛋白与Nsp8,分别构建含有Flag标签和HA标签的真核表达载体,利用不同的标签抗体进行Co-IP鉴定,发现Nsp8与LDHB蛋白可以发生免疫共沉淀;通过激光共聚焦显微镜观察发现,Nsp8和LDHB蛋白在细胞质中存在明显共定位.本研究结果表明,Nsp8与宿主蛋白LDHB存在相互作用,推测LDHB蛋白可能通过与PEDV Nsp8蛋白在细胞质中的相互作用参与病毒复制的生物学过程.

摘要： 棉花黄萎病是一种毁灭性病害,严重影响棉花产量和纤维品质.应用抗病品种是防治黄萎病最经济、有效的措施.目前,人们对棉花抗黄萎病机理的了解还不十分清楚,且现有栽培陆地棉中缺乏高抗抗源,因此棉花抗黄萎病育种进展较慢.棉花基因组庞大而复杂,深入挖掘棉花抗病基因、研究抗黄萎病机理对于棉花抗病遗传育种具有重要意义.全长cDNA是功能基因组学和比较基因组学研究的基础,也是基因克隆的重要方法之一,尤其适用于复杂基因组的非模式植物,它是目前发现新基因的重要工具.本研究利用高抗黄萎病的海岛棉Pima90-53为材料，采用无杂菌、全程可视化定量法接菌,构建了黄萎病菌诱导下的根部全长cDNA文库,并对其进行了质量鉴定和EST序列分析.结果表明,文库的重组率为92.3%,库容量为1.1×106Pfu.mL-1，平均插入片段约1.8kb,是一个高质量的。DNA文库。随机抽取50,000个克隆测序，获得46,192个高质量的EST序列。结果显示海岛棉Pima90-53中CYS,VPE,GPXs,NPRI,AOS和MPK4基因可以被黄萎病菌显著诱导,其表达量超出对照20-80倍;而MPK3,MPK18,RPPB,EREBP-like,Catalase,SERK1,EDSI,ADH,SAG和BAK基因同样受黄萎病菌诱导表达,表达量较对照超出2-6倍.此外,AOS,MPK4,CYS和RPP8基因的表达模式在抗病Pima90-53和感病中棉所8号中存在显著差异，这些基因在中棉所8号中的表达较在Pima90-53中表现出表达量低或者表达高峰出现偏迟。所有上述类别基因可能是构成棉花抗黄萎病的重要遗传基础。

摘要： 棉花黄萎病是一种毁灭性病害,严重影响棉花产量和纤维品质.应用抗病品种是防治黄萎病最经济、有效的措施.目前,人们对棉花抗黄萎病机理的了解还不十分清楚,且现有栽培陆地棉中缺乏高抗抗源,因此棉花抗黄萎病育种进展较慢.棉花基因组庞大而复杂,深入挖掘棉花抗病基因、研究抗黄萎病机理对于棉花抗病遗传育种具有重要意义.全长cDNA是功能基因组学和比较基因组学研究的基础,也是基因克隆的重要方法之一,尤其适用于复杂基因组的非模式植物,它是目前发现新基因的重要工具.本研究利用高抗黄萎病的海岛棉Pima90-53为材料，采用无杂菌、全程可视化定量法接菌,构建了黄萎病菌诱导下的根部全长cDNA文库,并对其进行了质量鉴定和EST序列分析.结果表明,文库的重组率为92.3%,库容量为1.1×106Pfu.mL-1，平均插入片段约1.8kb,是一个高质量的。DNA文库。随机抽取50,000个克隆测序，获得46,192个高质量的EST序列。结果显示海岛棉Pima90-53中CYS,VPE,GPXs,NPRI,AOS和MPK4基因可以被黄萎病菌显著诱导,其表达量超出对照20-80倍;而MPK3,MPK18,RPPB,EREBP-like,Catalase,SERK1,EDSI,ADH,SAG和BAK基因同样受黄萎病菌诱导表达,表达量较对照超出2-6倍.此外,AOS,MPK4,CYS和RPP8基因的表达模式在抗病Pima90-53和感病中棉所8号中存在显著差异，这些基因在中棉所8号中的表达较在Pima90-53中表现出表达量低或者表达高峰出现偏迟。所有上述类别基因可能是构成棉花抗黄萎病的重要遗传基础。

摘要： 棉花黄萎病是一种毁灭性病害,严重影响棉花产量和纤维品质.应用抗病品种是防治黄萎病最经济、有效的措施.目前,人们对棉花抗黄萎病机理的了解还不十分清楚,且现有栽培陆地棉中缺乏高抗抗源,因此棉花抗黄萎病育种进展较慢.棉花基因组庞大而复杂,深入挖掘棉花抗病基因、研究抗黄萎病机理对于棉花抗病遗传育种具有重要意义.全长cDNA是功能基因组学和比较基因组学研究的基础,也是基因克隆的重要方法之一,尤其适用于复杂基因组的非模式植物,它是目前发现新基因的重要工具.本研究利用高抗黄萎病的海岛棉Pima90-53为材料，采用无杂菌、全程可视化定量法接菌,构建了黄萎病菌诱导下的根部全长cDNA文库,并对其进行了质量鉴定和EST序列分析.结果表明,文库的重组率为92.3%,库容量为1.1×106Pfu.mL-1，平均插入片段约1.8kb,是一个高质量的。DNA文库。随机抽取50,000个克隆测序，获得46,192个高质量的EST序列。结果显示海岛棉Pima90-53中CYS,VPE,GPXs,NPRI,AOS和MPK4基因可以被黄萎病菌显著诱导,其表达量超出对照20-80倍;而MPK3,MPK18,RPPB,EREBP-like,Catalase,SERK1,EDSI,ADH,SAG和BAK基因同样受黄萎病菌诱导表达,表达量较对照超出2-6倍.此外,AOS,MPK4,CYS和RPP8基因的表达模式在抗病Pima90-53和感病中棉所8号中存在显著差异，这些基因在中棉所8号中的表达较在Pima90-53中表现出表达量低或者表达高峰出现偏迟。所有上述类别基因可能是构成棉花抗黄萎病的重要遗传基础。

摘要： 棉花黄萎病是一种毁灭性病害,严重影响棉花产量和纤维品质.应用抗病品种是防治黄萎病最经济、有效的措施.目前,人们对棉花抗黄萎病机理的了解还不十分清楚,且现有栽培陆地棉中缺乏高抗抗源,因此棉花抗黄萎病育种进展较慢.棉花基因组庞大而复杂,深入挖掘棉花抗病基因、研究抗黄萎病机理对于棉花抗病遗传育种具有重要意义.全长cDNA是功能基因组学和比较基因组学研究的基础,也是基因克隆的重要方法之一,尤其适用于复杂基因组的非模式植物,它是目前发现新基因的重要工具.本研究利用高抗黄萎病的海岛棉Pima90-53为材料，采用无杂菌、全程可视化定量法接菌,构建了黄萎病菌诱导下的根部全长cDNA文库,并对其进行了质量鉴定和EST序列分析.结果表明,文库的重组率为92.3%,库容量为1.1×106Pfu.mL-1，平均插入片段约1.8kb,是一个高质量的。DNA文库。随机抽取50,000个克隆测序，获得46,192个高质量的EST序列。结果显示海岛棉Pima90-53中CYS,VPE,GPXs,NPRI,AOS和MPK4基因可以被黄萎病菌显著诱导,其表达量超出对照20-80倍;而MPK3,MPK18,RPPB,EREBP-like,Catalase,SERK1,EDSI,ADH,SAG和BAK基因同样受黄萎病菌诱导表达,表达量较对照超出2-6倍.此外,AOS,MPK4,CYS和RPP8基因的表达模式在抗病Pima90-53和感病中棉所8号中存在显著差异，这些基因在中棉所8号中的表达较在Pima90-53中表现出表达量低或者表达高峰出现偏迟。所有上述类别基因可能是构成棉花抗黄萎病的重要遗传基础。

摘要： 棉花黄萎病是一种毁灭性病害,严重影响棉花产量和纤维品质.应用抗病品种是防治黄萎病最经济、有效的措施.目前,人们对棉花抗黄萎病机理的了解还不十分清楚,且现有栽培陆地棉中缺乏高抗抗源,因此棉花抗黄萎病育种进展较慢.棉花基因组庞大而复杂,深入挖掘棉花抗病基因、研究抗黄萎病机理对于棉花抗病遗传育种具有重要意义.全长cDNA是功能基因组学和比较基因组学研究的基础,也是基因克隆的重要方法之一,尤其适用于复杂基因组的非模式植物,它是目前发现新基因的重要工具.本研究利用高抗黄萎病的海岛棉Pima90-53为材料，采用无杂菌、全程可视化定量法接菌,构建了黄萎病菌诱导下的根部全长cDNA文库,并对其进行了质量鉴定和EST序列分析.结果表明,文库的重组率为92.3%,库容量为1.1×106Pfu.mL-1，平均插入片段约1.8kb,是一个高质量的。DNA文库。随机抽取50,000个克隆测序，获得46,192个高质量的EST序列。结果显示海岛棉Pima90-53中CYS,VPE,GPXs,NPRI,AOS和MPK4基因可以被黄萎病菌显著诱导,其表达量超出对照20-80倍;而MPK3,MPK18,RPPB,EREBP-like,Catalase,SERK1,EDSI,ADH,SAG和BAK基因同样受黄萎病菌诱导表达,表达量较对照超出2-6倍.此外,AOS,MPK4,CYS和RPP8基因的表达模式在抗病Pima90-53和感病中棉所8号中存在显著差异，这些基因在中棉所8号中的表达较在Pima90-53中表现出表达量低或者表达高峰出现偏迟。所有上述类别基因可能是构成棉花抗黄萎病的重要遗传基础。

摘要： 本研究将鸭胚成纤维细胞传代两次，提取细胞总RNA;利用Clontech SMART技术，以LD-PCR合成双链cDNA;利用同源重组方法，将纯化后的双链cDNA在酵母细胞Y187内构建cDNA文库。结果表明，细胞总RNA的0D260nm／OD2802nm为2．0，文库容量达到5×106cfu，插入的双链cDNA的平均大小为0．65 Kb，文库的重组率为100％。该cDNA文库构建的成功，为筛选与小鹅瘟病毒结合的细胞蛋白奠定了基础。

摘要： 本研究将鸭胚成纤维细胞传代两次，提取细胞总RNA;利用Clontech SMART技术，以LD-PCR合成双链cDNA;利用同源重组方法，将纯化后的双链cDNA在酵母细胞Y187内构建cDNA文库。结果表明，细胞总RNA的0D260nm／OD2802nm为2．0，文库容量达到5×106cfu，插入的双链cDNA的平均大小为0．65 Kb，文库的重组率为100％。该cDNA文库构建的成功，为筛选与小鹅瘟病毒结合的细胞蛋白奠定了基础。

摘要： 本研究将鸭胚成纤维细胞传代两次，提取细胞总RNA;利用Clontech SMART技术，以LD-PCR合成双链cDNA;利用同源重组方法，将纯化后的双链cDNA在酵母细胞Y187内构建cDNA文库。结果表明，细胞总RNA的0D260nm／OD2802nm为2．0，文库容量达到5×106cfu，插入的双链cDNA的平均大小为0．65 Kb，文库的重组率为100％。该cDNA文库构建的成功，为筛选与小鹅瘟病毒结合的细胞蛋白奠定了基础。

摘要： 本研究将鸭胚成纤维细胞传代两次，提取细胞总RNA;利用Clontech SMART技术，以LD-PCR合成双链cDNA;利用同源重组方法，将纯化后的双链cDNA在酵母细胞Y187内构建cDNA文库。结果表明，细胞总RNA的0D260nm／OD2802nm为2．0，文库容量达到5×106cfu，插入的双链cDNA的平均大小为0．65 Kb，文库的重组率为100％。该cDNA文库构建的成功，为筛选与小鹅瘟病毒结合的细胞蛋白奠定了基础。

摘要： 为了探索家蚕核型多角体病毒（BmNPV）蛋白间的相互作用，采用CLONTECH SMART (switching mechanism at5′end of RNA transcript)技术，在酵母菌株Y187中构建了感染BmNPV家蚕中肠组织的cDNA文库。家蚕五龄第三天添食BmNPV，提取感染后12小时与96小时家蚕中肠组织的总RNA并混合均匀。利用经修饰的CDSⅢ引物合成 cDNA第一链，在反应体系中再加入SMARTIII-modified Oligo作为cDNA第二链合成的引物，进行长距离LD-PCR合成双链cDNA，后者经CLONTECH CHROMA SPINTE-400柱纯化后，与线性载体质粒pGADT7-Rec共转化入感受态酵母菌Y187中，二者利用酵母细胞内较高的同源重组酶活性，进行同源重组产生环形有复制活性的文库质粒，然后在缺亮氨酸(LEU)培养基板上筛选出所有克隆，即为感染BmNPV家蚕中肠组织的cDNA文库。实验结果表明：提取RNA的A260/A280=1.82，纯度较高；双链cDNA文库大于0.2 kb，且弥散较长，成瀑布条带状；该文库具有基因多样性和足够大的库容量，共获得6.8×108转化子，滴度为4.4×107cfu/ml，文库扩增后，插入cDNA的平均长度为750 bp，文库的重组率为95%。该文库的构建为筛选相互作用蛋白并进一步阐明其生理意义提供了基础。

摘要： 本发明提供一种有效地制备降低了高表达基因来源的cDNA克隆含有率的cDNA文库的方法。在使用具有寡脱氧胸苷酸的双链DNA引物、并且以mRNA为模板的cDNA文库的制备方法中，通过使具有结合到高表达的目的基因的mRNA、且阻止由逆转录酶而引起的cDNA延伸反应的特性的探针共存，从而降低cDNA文库中高表达基因来源的cDNA克隆的比例。

摘要： 本发明公开了一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将cDNA进行PCR扩增；得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离；对分离得到的cDNA单链进行复性，形成具有具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链；将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序。本发明采用的测序方法能够更为有效地提高miRNA克隆测序的效率。

摘要： cDNA文库基础上cDNA消减杂交差异显示方法，是一种分子生物学基因克隆分析方法，属于分子生物学领域。它是利用cDNA文库载体的限制性内切酶酶切位点，酶切选代表制备两文库扩增子，进行两文库扩增子间的双向一轮消减杂交，在各自一轮差异产物间进行双向二轮消减杂交，两轮差异产物标记同位素后引入mRNA差异显示技术进行差异分析。该方法为cDNA文库提供了新的应用前景，为克隆低丰度弱差异的基因提供了有效的手段。

摘要： 本发明公开了用于构建空间转录组测序文库的试剂盒及cDNA文库的构建方法。本方法通过将新鲜冷冻组织切片贴在透化芯片上进行固定及染色后置入卡夹，使用配置好的透化酶进行组织透化，然后去除组织透化液，投入一链cDNA合成混合液，进行逆转录，完成后将RNA解链再接着进行cDNA二链的合成，最后通过cDNA变性解链获取到cDNA样本进行扩增得到可用于构建二代文库的样品。该方法与传统方法相比优点在于兼容范围广，操作性强，重复性好，成本低等，主要用于空间转录组的基因表达。

摘要： 本发明公开了一种从生物中批量分离基因全长cDNA的方法。该方法包括如下步骤：1）提取生物总RNA；2）将总RNA反转录得到双链cDNA，将所述双链cDNA与文库载体连接，连接产物转化受体菌，得到全长cDNA文库；3）将cDNA文库的菌液涂在向培养基中添加抗生素后得到的平板上进行培养，获得单菌落；4）批量挑取单菌落，分别进行培养，提取质粒后用测序引物进行测序，从每个单菌落中获得所述生物的一个基因的全长cDNA序列。实验证明，本发明所提供的从生物中批量分离基因全长cDNA的方法，减少了传统方法通过EST序列进行RACE的成本，可快速分离到大量未知基因组物种的基因全长cDNA序列。本发明对反向遗传学研究中筛选基因及其功能研究具有较大的实际应用价值。

摘要： 本发明提供一种有效地制备降低了高表达基因来源的cDNA克隆含有率的cDNA文库的方法。在使用具有寡脱氧胸苷酸的双链DNA引物、并且以mRNA为模板的cDNA文库的制备方法中，通过使具有结合到高表达的目的基因的mRNA、且阻止由逆转录酶而引起的cDNA延伸反应的特性的探针共存，从而降低cDNA文库中高表达基因来源的cDNA克隆的比例。

摘要： 本发明公开了一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将cDNA进行PCR扩增；得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离；对分离得到的cDNA单链进行复性，形成具有具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链；将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序。本发明采用的测序方法能够更为有效地提高miRNA克隆测序的效率。

摘要： cDNA文库基础上cDNA消减杂交差异显示方法，是一种分子生物学基因克隆分析方法，属于分子生物学领域。它是利用cDNA文库载体的限制性内切酶酶切位点，酶切选代表制备两文库扩增子，进行两文库扩增子间的双向一轮消减杂交，在各自一轮差异产物间进行双向二轮消减杂交，两轮差异产物标记同位素后引入mRNA差异显示技术进行差异分析。该方法为cDNA文库提供了新的应用前景，为克隆低丰度弱差异的基因提供了有效的手段。

摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌全长cDNA文库构建方法及其定向筛选应用，属于基因工程技术领域。枯草芽孢杆菌B.subtilis是工业中常用的外源蛋白生产菌株，通过构建cDNA文库是筛选枯草芽孢杆菌功能基因的有效方法，本发明将外源蛋白基因与B.subtilis 168cDNA文库共表达，以pAD123质粒为模板，通过同源重组的方法替换麦芽糖诱导型启动子Pglv，该pAD123‑Pglv质粒用于表达B.subtilis全长cDNA。外源蛋白基因由pUB110质粒表达。本发明为原核生物cDNA文库的构建提供技术参考，同时为B.subtilis功能基因的筛选鉴定提供了基础。

摘要： 本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种紫红曲霉YJX‑8 cDNA文库的构建方法及利用该文库进行酯合成酶LIP05互作蛋白的筛选应用。本发明公开的紫红曲霉YJX‑8 cDNA文库的构建方法，利用依据此方法构建的文库筛选获得LIP05互作蛋白，即细胞核酸结合蛋白和真核翻译起始因子，可在转录和翻译水平上调控LIP05的表达。本发明构建的cDNA文库具有筛选互作蛋白的应用前景和实际价值。