固相载体、配体键合固相载体、靶物质的检测或分离方法、固相载体的制造方法以及配体键合固相载体的制造方法

摘要

本发明提供杂质难以非特异性吸附的固相载体。一种固相载体，是键合有链状聚合物的固相载体，其特征在于，上述链状聚合物含有包括第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构，上述第1结构单元具有反应性官能团，上述第2结构单元不具有反应性官能团或者具有反应性比第1结构单元具有的反应性官能团低的反应性官能团，上述第1结构单元所含的反应性官能团的摩尔数a与上述链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)为0.01～0.7。

说明书

技术领域

本发明涉及固相载体、配体键合固相载体、靶物质的检测或分离方法、固相载体的制造方法、以及配体键合固相载体的制造方法。

背景技术

在用于诊断癌症、感染病等疾病的诊断试剂、诊断试剂盒中，使用磁性粒子等固相载体。这样的固相载体通常与抗体、寡核苷酸等配体键合使用。这些抗体、寡核苷酸等与特定的抗原、核酸等特异性键合。由此，能够检测试样中的诊断标记物的有无、浓度等。另外，利用同样的方法也能够分离癌细胞这样的特定细胞等。

随着固相载体的改进、发展，检测灵敏度逐年提高，能够检测的诊断标记物、能够分离的细胞种类越来越多。例如，专利文献1中，记载了用能够与探针键合的聚合物层覆盖表面的载体粒子。该聚合物由在侧链具有羧基的单体单元和在侧链具有2,3-二羟丙基的单体单元构成。

另外，专利文献2中，记载了表面键合有多嵌段乙烯基聚合物即嵌段共聚物的聚合物粒子。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特开2007－224213号公报

专利文献2:日本特表2009－542862号公报

发明内容

然而，对于专利文献2中记载的技术，本发明人进行了试验，结果明确了杂质对载体的非特异性吸附比预想的多，用于与配体键合的反应性官能团的很多基团吸附了杂质。本发明人认为这是由于成为非特异性吸附的因素的反应性官能团在嵌段共聚物中局部存在而引起的。

本发明想要解决的课题在于提供杂质难以非特异性吸附的固相载体。

在如上所述的背景下，本发明人进行了深入研究，结果发现键合有如下链状聚合物的固相载体难以非特异性吸附杂质，从而完成了本发明，所述链状聚合物含有包括具有反应性官能团的第1结构单元和特定的第2结构单元的无规聚合物结构、且第1结构单元所含的反应性官能团的摩尔数a与链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)为0.01～0.7。

即，本发明提供以下的＜1＞～＜5＞。

＜1＞一种固相载体，是键合有链状聚合物的固相载体，其特征在于，上述链状聚合物含有包括第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构，上述第1结构单元具有反应性官能团，上述第2结构单元不具有反应性官能团或者具有反应性比第1结构单元具有的反应性官能团低的反应性官能团，且上述第1结构单元所含的反应性官能团的摩尔数a与上述链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)为0.01～0.7。

＜2＞一种配体键合固相载体，是配体与上述＜1＞的固相载体键合而成的。

＜3＞一种检测或分离试样中的靶物质的方法，其特征在于，使用上述＜2＞的配体键合固相载体。

＜4＞一种固相载体的制造方法，其特征在于，包括以下的工序1和工序2。

(工序1)准备至少表面具有聚合引发基团的载体的工序。

(工序2)以上述聚合引发基团为起点，以上述第1结构单元所含的反应性官能团的摩尔数a与上述链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)成为0.01～0.7的方式形成链状聚合物的工序，其中，上述链状聚合物含有包括第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构，上述第1结构单元具有反应性官能团，上述第2结构单元不具有反应性官能团或者具有反应性比第1结构单元具有的反应性官能团低的反应性官能团。

＜5＞一种配体键合固相载体的制造方法，其特征在于，包括使利用上述＜4＞的制造方法制造的固相载体的第1结构单元所含的反应性官能团与配体键合的工序。

根据本发明，能够提供杂质难以非特异性吸附的固相载体。特别是对于本发明的固相载体而言，杂质难以非特异性吸附于用于与配体键合的反应性官能团。

附图说明

图1是电泳照片。该图示出了对实施例和比较例的磁性粒子的非特异性吸附抑制效果进行比较实验而得的结果。

具体实施方式

以下，对本发明进行详细说明。应予说明，本说明书中，a～b等表示数值范围的记载与a以上且b以下的含义相同，a和b包含在该范围内。

＜固相载体＞

本发明的键合有链状聚合物的固相载体，其特征在于，上述链状聚合物含有包括第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构，上述第1结构单元具有反应性官能团，上述第2结构单元不具有反应性官能团或者具有反应性比第1结构单元具有的反应性官能团低的反应性官能团，且上述第1结构单元所含的反应性官能团的摩尔数a与上述链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)为0.01～0.7。

(第1结构单元)

第1结构单元具有反应性官能团(以下，将第1结构单元具有的反应性官能团也称为第1反应性官能团)。作为第1结构单元，优选在侧链具有第1反应性官能团的结构单元。第1反应性官能团的个数在1个上述结构单元中优选为1～3个，更优选为1个。

作为第1结构单元，优选来自具有第1反应性官能团的烯键式不饱和单体的结构单元。这里，烯键式不饱和单体是指具有乙烯基、烯丙基、(甲基)丙烯酰氧基、(甲基)丙烯酰胺基等烯键式不饱和键的单体。

另外，作为第1结构单元，例如可举出来自(甲基)丙烯酸或其盐的结构单元、来自具有第1反应性官能团的(甲基)丙烯酸酯系单体的结构单元、来自具有第1反应性官能团的(甲基)丙烯酰胺系单体的结构单元、来自具有第1反应性官能团的苯乙烯系单体的结构单元。其中，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选来自(甲基)丙烯酸或其盐的结构单元、来自具有第1反应性官能团的(甲基)丙烯酸酯系单体的结构单元、来自具有第1反应性官能团的(甲基)丙烯酰胺系单体的结构单元，更优选来自具有第1反应性官能团的(甲基)丙烯酸酯系单体的结构单元、来自具有第1反应性官能团的(甲基)丙烯酰胺系单体的结构单元。

另外，第1反应性官能团只要能够与配体反应就没有特别限定，可举出羧基、对甲苯磺酰基、氨基、环氧基、酰基、叠氮基、马来酰亚胺基、活性酯基，这些中可以具有1种，也可以具有2种以上。这些中，从键合的配体难以脱离的观点，从使用蛋白质、核酸等生物分子作为配体时能够利用配体本来具有的官能团与固相载体键合的观点考虑，优选羧基、对甲苯磺酰基、氨基、环氧基，从能够简便且迅速地使配体键合于固相载体的观点等考虑，更优选羧基。

另外，从配体键合量的观点、兼顾检测的高灵敏度化和低噪化的观点考虑，相对于固相载体的固体成分1g的第1反应性官能团的含量优选为1μmol以上，更优选为10μmol以上，进一步优选为20μmol以上，特别优选为25μmol以上，另外，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选为500μmol以下，更优选为400μmol以下，进一步优选为200μmol以下，进一步优选为180μmol以下，特别优选为135μmol以下。

第1反应性官能团的含量例如在第1反应性官能团为羧基时，可以利用电导率测定法等测定，具体而言，可以基于后述的实施例中记载的方法测定。另外，在第1反应性官能团为对甲苯磺酰基时，可以通过测定被导入固相载体的对甲苯磺酰基的紫外可见光吸收等而求出，在第1反应性官能团为氨基时，可以通过使氨基与3-(2-吡啶二硫代)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯反应后，还原，测定游离的硫代吡啶基的吸光度等而求出。

从配体键合量的观点、抑制非特异性吸附的观点考虑，作为上述固相载体的表面积除以第1反应性官能团的含量而得的值，优选为/反应性官能团以上，更优选为/反应性官能团以上，进一步优选为/反应性官能团以上，特别优选为/反应性官能团以上，另外，优选为/反应性官能团以下，更优选为/反应性官能团以下，进一步优选为/反应性官能团以下，进一步优选为/反应性官能团以下，特别优选为/反应性官能团以下。

这里，本说明书中，将固相载体的表面积除以第1反应性官能团的含量而得的值也称为“占有面积(parking area)”。占有面积是表示1分子的反应性官能团在固相载体表面所占的面积的指标，一般而言，配体的键合量与占有面积的数值成反比例，占有面积越大配体键合量越少。另外，上述固相载体的表面积表示键合链状聚合物前的载体的表面积。

作为第1结构单元的优选的具体例，可举出下述式(1)表示的结构单元。

〔式(1)中，

R¹表示氢原子或者甲基，

R²表示-O-*、-(C＝O)-O-*、-(C＝O)-NR⁴-*(R⁴表示氢原子或者碳原子数1～10的有机基团，*表示与式(1)中的R³键合的位置)或者亚苯基，

R²为-(C＝O)-O-*时，R³表示氢原子或者具有第1反应性官能团的有机基团，R²为-O-*、-(C＝O)-NR⁴-*或者亚苯基时，R³表示具有第1反应性官能团的有机基团。〕

式(1)中，作为R²，从提高与水的亲和性，抑制非特异性吸附的观点考虑，优选-(C＝O)-O-*、-(C＝O)-NR⁴-*。

R⁴表示氢原子或者碳原子数1～10的有机基团。

作为R⁴表示的有机基团的碳原子数，优选为1～8，更优选为1～6，特别优选为1～3。另外，作为上述有机基团，优选为烃基，更优选为脂肪族烃基。脂肪族烃基可以为直链状或支链状，具体而言，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等烷基。

如上所述的R⁴中，优选氢原子。

另外，作为R³表示的具有反应性官能团的有机基团，优选下述式(2)表示的有机基团。应予说明，R³中的第1反应性官能团与上述同样。

*-R⁵-Y>

〔式(2)中，

R⁵表示2价的有机基团，

Y表示第1反应性官能团，

*表示与式(1)中的R²键合的位置。〕

作为R⁵表示的2价的有机基团，可举出2价的烃基，在碳原子数2以上的2价的烃基的碳-碳原子间具有选自醚键、亚氨基、酰胺键和酯键中的1种以上的基团。

2价的有机基团为2价的烃基时，作为其碳原子数，优选为1～10，更优选为1～8，特别优选为1～6。另一方面，2价的有机基团为在碳原子数2以上的2价的烃基的碳-碳原子间具有选自醚键、亚氨基、酰胺键和酯键中的1种以上的基团时，作为该基团中的2价的烃基的碳原子数，优选为2～10，更优选为2～8，特别优选为2～6。

作为R⁵中的“2价的烃基”，优选2价的脂肪族烃基。该2价的脂肪族烃基可以为直链状或支链状。

作为上述2价的脂肪族烃基，优选链烷二基，具体而言，可举出甲烷-1,1-二基、乙烷-1,1-二基、乙烷-1,2-二基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、丁烷-1,2-二基、丁烷-1,3-二基、丁烷-1,4-二基、戊烷-1,4-二基、戊烷-1,5-二基、己烷-1,5-二基、己烷-1,6-二基等。

另外，作为在碳原子数2以上的2价的烃基的碳-碳原子间具有选自醚键、亚氨基、酰胺键和酯键中的1种以上的基团，从简便地得到链状聚合物的观点等考虑，优选在碳原子数2以上的2价的烃基的碳-碳原子间具有酯键的基团，更优选-R^a-O(C＝O)-R^b-*表示的2价的基团(R^a和R^b各自独立地表示碳原子数2～4的链烷二基，*表示与式(2)中的Y的键合位置)。作为链烷二基的碳原子数，优选为2或者3，更优选为2。链烷二基可以为直链状或支链状，例如可举出乙烷-1,2-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基。

作为上述R²与R³的组合，优选R²为-(C＝O)-O-*且R³为氢原子或者具有反应性官能团的有机基团的组合、R²为-(C＝O)-NR⁴-*且R³为具有反应性官能团的有机基团的组合，更优选R²为-(C＝O)-O-*或者-(C＝O)-NR⁴-*且R³为具有反应性官能团的有机基团的组合。

作为第1结构单元的含量，相对于无规聚合物结构总量，优选为1～70质量％，更优选为5～70质量％，特别优选为5～35质量％。

第1结构单元的含量例如利用NMR等测定即可。

(第2结构单元)

第2结构单元不具有反应性官能团或者具有反应性比第1结构单元具有的反应性官能团低的反应性官能团(以下，将该反应性官能团也称为第2反应性官能团)。

上述第2反应性官能团的反应性比第1反应性官能团低。对于该反应性，亲和常数或者反应速率常数是指标。具体而言，第2反应性官能团与配体的亲和常数或者反应速率常数比第1反应性官能团与配体的亲和常数或者反应速率常数低时，可以说第2反应性官能团的反应性比第1反应性官能团的反应性低。从这样的观点考虑，由于第2反应性官能团与第1反应性官能团不同，所以第2反应性官能团当然可以具有低的反应性，例如，通过由第2结构单元的侧链的结构引起的空间位阻可以抑制第2反应性官能团的反应性。另外，通过与第2结构单元的侧链连接的其它原子也可以减少第2反应性官能团的亲核性或者亲电性。

作为第2结构单元，优选来自不具有反应性官能团或者具有第2反应性官能团的烯键式不饱和单体的结构单元。这里，烯键式不饱和单体是指具有乙烯基、烯丙基、(甲基)丙烯酰氧基、(甲基)丙烯酰胺基等烯键式不饱和键的单体。

作为第2结构单元，例如可举出来自不具有反应性官能团或者具有第2反应性官能团的(甲基)丙烯酸酯系单体的结构单元、来自不具有反应性官能团或者具有第2反应性官能团的(甲基)丙烯酰胺系单体的结构单元、来自不具有反应性官能团或者具有第2反应性官能团的苯乙烯系单体的结构单元。其中，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选来自不具有反应性官能团或者具有第2反应性官能团的(甲基)丙烯酸酯系单体的结构单元、来自不具有反应性官能团或者具有第2反应性官能团的(甲基)丙烯酰胺系单体的结构单元。

作为第2结构单元，优选具有亲水性基团的结构单元，更优选在侧链具有亲水性基团的结构单元。亲水性基团的个数在1个上述结构单元中优选为1～3个，更优选为1个。

应予说明，本说明书中，亲水性是指具有与水的亲和力强的性质。

上述亲水性基团在水系中性条件下时可以带电荷，在该条件下时也可以不带电荷。

作为在水系中性条件下时带电荷的亲水性基团，可举出季铵基(三甲基氯化铵基等)等碱性基团；磷酸基、磺基等酸性基团；具有两性离子结构的基团。应予说明，第2结构单元具有这样的在水系中性条件下时带电荷的亲水性基团时，可以形成盐，也可以具有相反离子。

作为在水系中性条件下时不带电荷的亲水性基团，可举出羟基、烷氧基、聚氧亚烷基、磺酰基、亚磺酰基、叔氨基。作为烷氧基，优选碳原子数1或者2的烷氧基。例如可举出甲氧基、乙氧基等。

作为上述聚氧亚烷基，优选-(R^cO)_q-表示的基团(R^c表示链烷二基，q表示2～100的整数。应予说明，q个R^c可以相同也可以不同)。

R^c表示的链烷二基的碳原子数优选为2～4，更优选为2或者3，特别优选为2。

另外，R^c表示的链烷二基可以为直链状或支链状，具体而言，可举出乙烷-1,2-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基等。这些中，优选乙烷-1,2-二基。

q表示2～100的整数，优选为3～80的整数，更优选为4～60的整数，进一步优选为5～40的整数，进一步优选为6～30的整数，特别优选为7～20的整数。

第2结构单元可以具有上述亲水性基团中的1种，也可以具有2种以上。

这些中，作为亲水性基团，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选羟基、具有两性离子结构的基团、聚氧亚烷基、磷酸基，更优选羟基、具有两性离子结构的基团、聚氧亚烷基，进一步优选羟基、具有两性离子结构的基团，特别优选具有两性离子结构的基团。亲水性基团为具有两性离子结构的基团时，即便含有比率(a/b)超过0.3时，也能有效抑制非特异性吸附。

作为上述具有两性离子结构的基团，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选具有季铵盐型阳离子性官能团和选自-(C＝O)O^-、-SO₃^-和-O-(O＝P-O^-)-O-中的1价或2价的阴离子性官能团的有机基团，更优选下述式(3)或者(4)表示的有机基团，特别优选下述式(3)表示的有机基团。

〔式(3)中，

R⁶和R⁷各自独立地表示单键或者碳原子数1～10的2价的有机基团，

R⁸表示-(C＝O)O^-或者-SO₃^-，

R⁹和R¹⁰各自独立地表示甲基或者乙基。〕

〔式(4)中，

R¹¹和R¹²各自独立地表示单键或者碳原子数1～10的2价的有机基团，

R¹³、R¹⁴和R¹⁵各自独立地表示甲基或者乙基。〕

式(3)中的R⁶和R⁷、式(4)中的R¹¹和R¹²各自独立地表示单键或者碳原子数1～10的2价的有机基团，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选碳原子数1～10的2价的有机基团，更优选碳原子数1～10的2价的烃基，在碳原子数2～10的2价的烃基的碳-碳原子间具有选自醚键、酰胺键和酯键中的1种以上的基团，特别优选碳原子数1～10的2价的烃基。

2价的有机基团为2价的烃基时，作为其碳原子数，优选为1～8，更优选为1～6，进一步优选为1～4，特别优选为1～3。另一方面，2价的有机基团为在2价的烃基的碳-碳原子间具有选自醚键、酰胺键和酯键中的1种以上的基团时，作为该基团中的2价的烃基的碳原子数，优选为2～8，更优选为2～6，进一步优选为2～4，特别优选为2或者3。

作为R⁶、R⁷、R¹¹和R¹²中的“2价的烃基”，优选2价的脂肪族烃基。该2价的脂肪族烃基可以为直链状或支链状。

作为上述2价的脂肪族烃基，优选为链烷二基，具体而言，可举出甲烷-1,1-二基、乙烷-1,1-二基、乙烷-1,2-二基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、丁烷-1,2-二基、丁烷-1,3-二基、丁烷-1,4-二基、戊烷-1,4-二基、戊烷-1,5-二基、己烷-1,5-二基、己烷-1,6-二基等。

作为式(3)中的R⁸，优选-(C＝O)O^-。

作为式(3)中的R⁹和R¹⁰、式(4)中的R¹³、R¹⁴和R¹⁵，优选甲基。

另外，作为第2结构单元的优选的具体例，可举出下述式(5)表示的结构单元。

〔式(5)中，

R¹⁶表示氢原子或者甲基，

R¹⁷表示-O-*、-(C＝O)-O-*、-(C＝O)-NR¹⁹-*(R¹⁹表示氢原子或者碳原子数1～10的有机基团，*表示与式(5)中的R¹⁸键合的位置)或者亚苯基，

R¹⁸表示具有两性离子结构的基团、具有羟基的有机基团、或者具有聚氧亚烷基的有机基团。〕

式(5)中，作为R¹⁷，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选-(C＝O)-O-*、-(C＝O)-NR¹⁹-*。

R¹⁹表示氢原子或者碳原子数1～10的有机基团。

作为R¹⁹表示的有机基团的碳原子数，优选为1～8，优选为1～6，特别优选为1～3。另外，作为上述有机基团，优选为烃基，更优选为脂肪族烃基。脂肪族烃基可以为直链状或支链状，具体而言，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等烷基。

在如上所述的R¹⁹中，优选氢原子。

R¹⁸表示的具有两性离子结构的基团与上述具有两性离子结构的基团同样。

作为R¹⁸表示的具有羟基的有机基团，可举出下述式(6)表示的基团。

*-R²⁰-OH>

〔式(6)中，

R²⁰表示2价的有机基团，

*表示与式(5)中的R¹⁷键合的位置。〕

作为R²⁰表示的2价的有机基团，可举出2价的烃基，在碳原子数2以上的2价的烃基的碳-碳原子间具有选自醚键、酰胺键和酯键中的1种以上的基团，优选2价的烃基。

2价的有机基团为2价的烃基时，作为其碳原子数，优选为1～8，更优选为1～6，进一步优选为1～4，特别优选为1～3。另一方面，2价的有机基团为在碳原子数2以上的2价的烃基的碳-碳原子间具有选自醚键、酰胺键和酯键中的1种以上的基团时，作为该基团中的2价的烃基的碳原子数，优选为2～8，更优选为2～6，进一步优选为2～4，特别优选为2或者3。

作为R²⁰中的“2价的烃基”，优选2价的脂肪族烃基。该2价的脂肪族烃基可以为直链状或支链状。

作为上述2价的脂肪族烃基，优选为链烷二基，具体而言，可举出甲烷-1,1-二基、乙烷-1,1-二基、乙烷-1,2-二基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、丁烷-1,2-二基、丁烷-1,3-二基、丁烷-1,4-二基、戊烷-1,4-二基、戊烷-1,5-二基、己烷-1,5-二基、己烷-1,6-二基等。

作为R¹⁸表示的具有聚氧亚烷基的有机基团，优选-(R^cO)_q-R^d表示的基团(R^d表示碳原子数1～4的烷基。应予说明，R^c和q与上述含义相同，R^c表示链烷二基，q表示2～100的整数)。

R^d表示的烷基的碳原子数优选为1～3，更优选为1或者2。另外，R^d表示的烷基可以为直链状或支链状，具体而言，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，特别优选甲基。

作为第2结构单元的含量，相对于无规聚合物结构总量，优选为30～99质量％，更优选为35～95质量％，特别优选为65～95质量％。

第2结构单元的含量例如利用NMR等测定即可。

上述无规聚合物结构可以具有第1结构单元和第2结构单元以外的结构单元。另外，与本发明的固相载体键合的链状聚合物可以具有上述无规聚合物结构以外的聚合物结构。例如，作为链状聚合物，除**-(第1结构单元)-ran-(第2结构单元)-表示的无规聚合物以外，还可举出**-(其它的聚合物结构)-(第1结构单元)-ran-(第2结构单元)-表示的聚合物、**-(第1结构单元)-ran-(第2结构单元)-(其它的聚合物结构)-表示的聚合物(**表示固相载体表面侧的键合位置，ran表示与其相邻的2种结构单元为无规聚合物结构)。这些中，优选**-(第1结构单元)-ran-(第2结构单元)-表示的无规聚合物、**-(其它的聚合物结构)-(第1结构单元)-ran-(第2结构单元)-表示的聚合物。

另外，作为上述其它的聚合物结构，优选由第2结构单元构成的嵌段聚合物结构。

另外，链状聚合物优选为利用烯键式不饱和键的聚合而形成的链状聚合物，更优选为链状的乙烯基聚合物。

另外，只要链状聚合物的一个末端与固相载体键合即可，可以直接键合也可以介由连接基团键合，但优选介由2价的连接基团与固相载体键合。该2价的连接基团通过共价键键合于固相载体的表面，与链状聚合物也通过共价键键合，优选通过酯键或酰胺键键合于固相载体的表面，从键合稳定且通过水解也容易选择性切断的观点考虑，更优选通过酯键键合于固相载体的表面。

另外，作为2价的连接基团，优选为含有聚合引发基团的残基的2价的连接基团。作为聚合引发基团，优选为能够进行活性聚合的聚合引发基团，更优选为活性自由基聚合引发基团，进一步优选为原子转移自由基聚合引发基团、可逆加成断裂链转移聚合引发基团、介由硝基氧的自由基聚合的聚合引发基团，特别优选为原子转移自由基聚合引发基团。作为含有原子转移自由基聚合引发基团的残基的2价的连接基团，可举出下述式(7-1)或者(7-2)表示的2价的基团。

〔上述式中，

R²⁵和R²⁹表示-O-、-S-或者-NR³¹-(R³¹表示氢原子或者碳原子数1～3的烷基)，

R²⁶和R³⁰各自独立地表示单键或者亚苯基，

R²⁷和R²⁸各自独立地表示氢原子、烷基或者芳基，

**表示与链状聚合物的末端键合的位置。〕

作为R²⁵和R²⁹，从键合稳定且通过水解也容易选择性切断的观点考虑，优选-O-。另外，作为R³¹表示的烷基，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基。

另外，作为R²⁶和R³⁰，优选单键，作为R²⁷和R²⁸，优选烷基。

作为R²⁷和R²⁸表示的烷基的碳原子数，优选为1～8，更优选为1～4，特别优选为1或者2。烷基可以为直链状或支链状，具体而言，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等。

作为R²⁷和R²⁸表示的芳基的碳原子数，优选为6～12。作为芳基的优选的具体例，可举出苯基。

另一方面，链状聚合物的另一个末端没有特别限定，优选为卤素原子。作为卤素原子，可举出溴原子、氯原子、氟原子等。

另外，本发明的固相载体，第1反应性官能团的摩尔数a与上述链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)为0.01～0.7。利用该构成抑制非特异性吸附。

对于含有比率(a/b)，从容易键合配体的观点考虑，优选为0.025以上，更优选为0.05以上，另外，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选为0.6以下，更优选为0.4以下，进一步优选为0.35以下，特别优选为0.25以下。

另外，链状聚合物具有亲水性基团时，对于链状聚合物所含的亲水性基团的摩尔数c与链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(c/b)，从容易键合配体的观点考虑，优选为0.3以上，更优选为0.4以上，进一步优选为0.6以上，特别优选为0.75以上，另外，从聚合物合成容易的观点考虑，优选为0.99以下，更优选为0.95以下，特别优选为0.9以下。

另外，摩尔数a～c均是指每1条链状聚合物所含的摩尔数，通过X射线光电子能谱分析、链状聚合物的NMR分析、与每1g固相载体键合的链状聚合物的重量、链状聚合物的分子量和反应性官能团量等能够计算。具体而言，可以基于后述的实施例中记载的方法进行测定。

作为本发明的固相载体，优选上述链状聚合物键合于固相载体的至少表面而成的固相载体。

另外，优选链状聚合物在固相载体表面上形成聚合物刷子。从抑制非特异性吸附的观点、配体键合量的观点和兼具检测的高灵敏度化和低噪化的观点考虑，对于本发明的固相载体的表面，上述链状聚合物所占有的密度优选为0.1条/nm²以上，更优选为0.3条/nm²以上，进一步优选为0.5条/nm²以上，另外，从聚合物刷子的形成简便的观点考虑，优选为2条/nm²以下，更优选为1.5条/nm²以下，进一步优选为1.3条/nm²以下，特别优选为1.2条/nm²以下。

上述链状聚合物的密度例如可以通过下述式计算。具体而言，通过水解等使链状聚合物从固相载体游离，基于后述的实施例中记载的方法测定。

链状聚合物的密度(条/nm²)＝与1g载体键合的链状聚合物的条数(条)/1g载体的总表面积(nm²)

应予说明，上述1g载体的总表面积是指键合链状聚合物前的载体的总表面积。

另外，作为链状聚合物的数均分子量(Mn)，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选为1000～100000，更优选为3000～50000，进一步优选为5000～30000。

另外，作为链状聚合物的重均分子量(Mw)，从抑制非特异性吸附的观点考虑，优选为1000～100000，更优选为3000～50000。

另外，作为分子量分布(Mw/Mn)，从抑制非特异性吸附和提高与固相载体键合的配体的活性的观点考虑，优选为1.0～2.5，更优选为1.0～2.0，进一步优选为1.0～1.8，更进一步优选为1.0～1.5。

应予说明，数均分子量、重均分子量是指通过水解等使链状聚合物从固相载体游离，并用凝胶渗透色谱测定的以聚乙二醇换算的平均分子量。应予说明，也可以利用如后述的实施例中记载的方法测定导入反应性官能团前的链状聚合物的分子量，由该分子量、导入了反应性官能团的结构单元的摩尔数和用于导入反应性官能团的化合物的结构来进行计算。

构成本发明固相载体的链状聚合物以外的部分(支撑体部分、载体部分)可以为有机物，也可以为金属、金属氧化物等无机物，没有特别限定，优选本发明的固相载体除含有链状聚合物以外，还含有树脂作为支撑体。由此，能够容易地导入链状聚合物。

作为树脂，可以为由琼脂糖、葡聚糖、纤维素等多糖类构成的天然高分子，也可以为合成高分子。

另外，本发明的固相载体的形态没有特别限定，粒子、块(monolith)、膜、纤维、片、板等均可，从靶物质的检测或分离的容易性的观点考虑，优选为粒子，更优选为磁性粒子。应予说明，采用粒子作为形态时，还能够增大链状聚合物的聚合物密度。另外，磁性粒子的制造方法在日本特开2007-224213号公报中有详细描述。

本说明书中“磁性粒子”是指具有磁性体的粒子。本发明的固相载体即便为磁性粒子的形态也具有高的水分散性。另外，为磁性粒子时，由于不使用离心分离器等而使用磁铁等就能够分离，所以能够使固相载体与试样的分离简单化或者自动化。

另外，磁性体可以为铁磁性、顺磁性、超顺磁性中的任一种，从使利用磁场的分离和移除磁场后的再分散容易的观点考虑，优选超顺磁性。作为磁性体，可举出铁氧体、氧化铁、铁、氧化锰、锰、氧化镍、镍、氧化钴、钴等金属或者合金。

另外，作为磁性粒子，具体而言，可举出在以下的(i)～(iv)的任一粒子的至少表面键合上述链状聚合物而成的磁性粒子。优选为多孔或者非多孔的磁性聚合物粒子。

(i)磁性体微粒分散在含有树脂等非磁性体的连续相中的粒子

(ii)以磁性体微粒的2次凝聚体为芯且以树脂等非磁性体为壳的粒子

(iii)以具有由树脂等非磁性体构成的核粒子和设置于该核粒子的表面的含有磁性体微粒的磁性体层(2次凝聚体层)的母粒子为芯且在该母粒子的最外层设有树脂等非磁性体层作为壳(以下，也称为最外层壳)的粒子

(iv)可以在粒子的最外层设置树脂等非磁性体层作为壳的、在由树脂、二氧化硅等构成的多孔粒子的孔内分散有磁性体微粒的粒子

应予说明，(i)～(iv)的粒子均是公知的，可以基于常规方法制造。

作为上述(iii)的核粒子和(iv)的多孔粒子中的树脂，可举出来自从单官能性单体和多官能性单体中选择的1种或者2种以上的树脂。

作为上述单官能性单体，例如可举出苯乙烯、α-甲基苯乙烯、卤代苯乙烯等单官能性芳香族乙烯基系单体；(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸十八酯、(甲基)丙烯酸环己酯、(甲基)丙烯酸异冰片酯等单官能性(甲基)丙烯酸酯系单体。

作为上述多官能性单体，例如可举出二乙烯基苯等多官能性芳香族乙烯基系单体；乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯、二季戊四醇六(甲基)甲基丙烯酸酯、(甲基)丙烯酸烯丙酯等多官能性(甲基)丙烯酸酯系单体；丁二烯、异戊二烯等共轭二烯烃等。

另外，作为上述(i)和(ii)中的树脂以及上述(iii)和(iv)的最外层壳中的树脂，优选至少表面具有选自缩水甘油基、氨基和羟基中的1种或2种以上的官能团的树脂。上述官能团可以利用树脂表面的化学修饰而导入，也可以通过至少含有1种或者2种以上具有上述官能团的单体的单体组合的聚合而导入。作为上述化学修饰，例如可举出通过缩水甘油基的水解而生成羟基、通过硝基的还原而生成氨基。作为具有上述官能团的单体组合，更优选至少包含含有缩水甘油基的单体的单体组合(以下，将上述最外层壳中的树脂为利用至少包含含有缩水甘油基的单体的单体组合而形成的树脂的粒子也称为含有缩水甘油基的磁性粒子)。应予说明，也可以进一步含有选自上述单官能性单体和多官能性单体中的1种或者2种以上。

作为含有缩水甘油基的单体，可举出(甲基)丙烯酸缩水甘油酯、烯丙基缩水甘油醚等。作为含有氨基的单体，可举出(甲基)丙烯酸2-氨基乙酯等。作为含有羟基的单体，可举出1,4-环己烷二甲醇单(甲基)丙烯酸酯等。

另外，本发明的固相载体为粒子时的平均粒径(体积平均粒径)优选为0.1～500μm，更优选为0.2～50μm，进一步优选为0.3～10μm。通过成为这样的范围，在固相载体为磁性粒子时，聚磁速度变快，操作性被改善，另外，配体键合量变大，检测灵敏度等良好。另外，平均粒径的变异系数为20％以下左右即可。

另外，比表面积为1.0～2.0m²/g左右即可。

应予说明，上述平均粒径和比表面积可以利用激光衍射·散射粒径分布测定等进行测定。

另外，本发明的固相载体例如可以像以下的式子这样示意性地表示(ran表示与其相邻的2种结构单元为无规聚合物结构)。

＜固相载体的制造方法＞

本发明的固相载体可以适当地组合常规方法进行制造，作为本发明的固相载体的制造方法，从使链状聚合物相对于固相载体的表面所占有的密度高密度化而进一步抑制非特异性吸附的观点、使分子量分布窄的链状聚合物与固相载体键合而进一步抑制非特异性吸附的观点以及提高与固相载体键合的配体的活性的观点等考虑，优选包括以下的工序1和工序2的方法。

(工序1)准备至少表面具有聚合引发基团的载体(以下，也称为含聚合引发基团的载体)的工序

(工序2)以上述聚合引发基团为起点，以上述第1结构单元所含的反应性官能团的摩尔数a与上述链状聚合物所含的全部结构单元的摩尔数b的含有比率(a/b)成为0.01～0.7的方式形成链状聚合物的工序，其中，该链状聚合物含有包括第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构，该第1结构单元具有反应性官能团，该第2结构单元不具有反应性官能团或者具有反应性比第1结构单元具有的反应性官能团低的反应性官能团，

作为上述制造方法，具体而言，可举出以下的方法＜PR-1＞～＜PR-3＞。应予说明，将由第2结构单元构成的嵌段聚合物结构等其它的聚合物结构导入链状聚合物时，在上述工序2之前和/或之后，按照常规方法实施导入该聚合物结构的方法即可。

＜PR-1＞包括以下工序的方法：(工序1)准备含聚合引发基团的载体，(工序2-1-1)以上述聚合引发基团为起点，将衍生第2结构单元的单体聚合而形成聚合物，(工序2-1-2)向构成该工序所得到的聚合物的第2结构单元的一部分的侧链随机导入第1反应性官能团，形成具有第1反应性官能团的第1结构单元。

＜PR-2＞包括以下工序的方法：(工序1)准备含聚合引发基团的载体，(工序2-2)以上述聚合引发基团为起点，使衍生第1结构单元的单体与衍生第2结构单元的单体无规共聚。

＜PR-3＞包括以下工序的方法：(工序1)准备含聚合引发基团的载体，(工序2-3-1)以上述聚合引发基团为起点，使具有羟基或氨基的单体与不具有羟基和氨基的单体无规共聚而形成无规聚合物结构，(工序2-3-2)向该工序所得到的无规聚合物结构中的具有羟基或氨基的结构单元导入第1反应性官能团，形成具有第1反应性官能团的第1结构单元。

举出键合有具有羧基、氨基或者对甲苯磺酰基作为第1反应性官能团的链状聚合物的固相载体的制造方法为例，对这些方法进行说明。

(工序1)

含聚合引发基团的载体例如可以通过使至少表面具有选自羟基、氨基、环氧基和羧基中的1种或2种以上(以下，也将其统称为羟基等)的原料载体(以下，也称为原料载体)与具有聚合引发基团的化合物接触，将上述羟基等所含的氢原子转换成聚合引发基团而得到(以下，将该反应也称为聚合引发基团导入反应)。应予说明，上述原料载体中，至少表面具有羟基的原料载体例如可以通过使上述含有缩水甘油基的磁性粒子与无机酸、有机酸等酸接触，从而将缩水甘油基开环等而得到。

另外，含聚合引发基团的载体也能够通过将包含具有聚合引发基团的单体的单体组合进行聚合而得到。作为具有聚合引发基团的单体，可举出甲基丙烯酸2-(2-溴异丁酰氧基)乙酯等。

作为上述具有聚合引发基团的化合物，优选为具有能够活性聚合的聚合引发基团的化合物，更优选为具有活性自由基聚合引发基团的化合物，进一步优选为具有原子转移自由基聚合引发基团的化合物、具有可逆加成断裂链转移聚合引发基团的化合物、具有介由硝基氧的自由基聚合的聚合引发基团的化合物，特别优选为具有原子转移自由基聚合引发基团的化合物。作为具有原子转移自由基聚合引发基团的化合物，例如可举出2-溴异丁酰溴，4-(溴甲基)苯甲酸、2-溴异丁酸乙酯、2-溴丙酰溴、对甲苯磺酰氯等。

在聚合引发基团导入反应中，具有聚合引发基团的化合物的合计使用量相对于原料载体，通常为0.001～100质量倍左右，优选为0.01～50质量倍左右。

聚合引发基团导入反应优选在三乙胺、N,N-二甲基-4-氨基吡啶、二异丙基乙基胺、吡啶等碱性催化剂存在下进行。应予说明，可以单独使用这些碱性催化剂中的1种或者组合2种以上使用。

碱性催化剂的合计使用量相对于具有聚合引发基团的化合物，通常为1～10摩尔当量左右，优选为1～5摩尔当量左右。

另外，聚合引发基团导入反应优选在溶剂存在下进行。作为溶剂，可举出四氢呋喃、1,4-二烷、1,3-二烷等醚系溶剂；二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等质子性溶剂，这些溶剂可以单独使用1种或者组合2种以上使用。

另外，聚合引发基团导入反应的反应时间通常为30分钟～24小时左右，反应温度在溶剂的沸点以下适当地选择即可。

(工序2-1-1、工序2-2和工序2-3-1)

工序2-1-1是以聚合引发基团为起点，将衍生第2结构单元的单体(以下，也称为单体(11))聚合而形成聚合物的工序。

工序2-2是以聚合引发基团为起点，使衍生第1结构单元的单体(以下，也称为单体(12))与衍生第2结构单元的单体(以下，也称为单体(13))无规共聚的工序。

工序2-3-1是以聚合引发基团为起点，使具有羟基或氨基的单体(以下，也称为单体(14))与不具有羟基和氨基的单体(以下，也称为单体(15))无规共聚而形成无规聚合物结构的工序。

作为工序2-1-1中使用的单体(11)，例如可举出衍生具有能够导入羧基、氨基或者对甲苯磺酰基的亲水性基团(例如羟基等，以下相同)的第2结构单元的单体。

作为单体(11)，优选具有羟基的单体。作为具有羟基的单体，可例示2-羟乙基(甲基)丙烯酸酯、2-羟乙基(甲基)丙烯酰胺、2-羟丙基(甲基)丙烯酸酯、2-羟丙基(甲基)丙烯酰胺、2-羟丁基(甲基)丙烯酸酯、2-羟丁基(甲基)丙烯酰胺、甘油1-(甲基)丙烯酸酯、甘油1-(甲基)丙烯酰胺等。

应予说明，可以单独使用这些中的1种或者组合2种以上使用。

作为工序2-2中使用的单体(12)，例如可举出具有羧基、氨基或者对甲苯磺酰基的单体。例如可举出(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸盐、(甲基)丙烯酸氨基乙酯、琥珀酸2-(甲基)丙烯酰氧基乙酯等。应予说明，制造键合有具有环氧基作为第1反应性官能团的链状聚合物的固相载体时，使用(甲基)丙烯酸缩水甘油酯等即可。

应予说明，可以单独使用这些中的1种或者组合2种以上使用。

作为工序2-2中使用的单体(13)，除具有羟基的单体、具有聚氧亚乙基的单体、具有含两性离子的基团的单体、具有磷酸基的单体、具有季铵基的单体等具有亲水性基团的单体以外，还可例示二甲基(甲基)丙烯酰胺、二甲基氨基丙基(甲基)丙烯酰胺、异丙基(甲基)丙烯酰胺、二乙基(甲基)丙烯酰胺等显示亲水性的单体。

作为具有羟基的单体，可举出与上述单体(11)同样的单体。作为具有聚氧亚乙基的单体，可例示甲氧基聚乙二醇单(甲基)丙烯酸酯、甲氧基聚乙二醇单(甲基)丙烯酰胺等。作为具有含两性离子的基团的单体，可例示[2-((甲基)丙烯酰氧基)乙基](氧负离子羰基甲基)二甲基铵、[2-((甲基)丙烯酰氧基)乙基](氧负离子羰基乙基)二甲基铵、[2-((甲基)丙烯酰氧基)乙基](氧负离子羰基丙基)二甲基铵、[2-((甲基)丙烯酰氧基)乙基]二甲基-(3-磺酸甲基)氢氧化铵、[2-((甲基)丙烯酰氧基)乙基]二甲基-(3-磺酸乙基)氢氧化铵、[2-((甲基)丙烯酰氧基)乙基]二甲基-(3-磺酸丙基)氢氧化铵、O-[2-((甲基)丙烯酰氧基)乙基磷酸]胆碱等。作为具有磷酸基的单体，可例示2-磷酸乙基(甲基)丙烯酸酯(2-phosphoric ethyl(meth)acrylate)、2-磷酸乙基(甲基)丙烯酰胺(2-phosphoric ethyl(meth)acrylamide)等。作为具有季铵基的单体，可例示等。

应予说明，可以单独使用这些中的1种或者组合2种以上使用。

工序2-3-1中使用的单体(14)是具有羟基或氨基的单体。作为具有羟基的单体，可举出与上述单体(11)同样的单体。作为具有氨基的单体，可举出(甲基)丙烯酸氨基乙酯等。

应予说明，可以单独使用这些中的1种或者组合2种以上使用。

工序2-3-1中使用的单体(15)是不具有羟基和氨基的单体。具体而言，是具有羟基和氨基以外的亲水性基团的单体。例如，可例示具有聚氧亚乙基的单体、具有含两性离子的基团的单体、具有磷酸基的单体等。作为具有聚氧亚乙基的单体、具有含两性离子的基团的单体、具有磷酸基的单体，可举出与上述单体(13)同样的单体。

应予说明，可以单独使用这些中的1种或者组合2种以上使用。

单体(11)～(15)的各使用量相对于与载体表面键合的聚合引发基团，通常分别为5～10000摩尔当量左右，优选分别为10～5000摩尔当量左右。

工序2-1-1、工序2-2和工序2-3-1中的聚合反应的聚合方法根据聚合引发基团的种类选择即可，从简便且容易得到目标物的观点考虑，优选活性聚合，更优选活性自由基聚合，进一步优选原子转移自由基聚合(ATRP聚合)、可逆加成断裂链转移聚合(RAFT聚合)、介由硝基氧的自由基聚合(NMP)，特别优选原子转移自由基聚合。通过用原子转移自由基聚合进行聚合，能够使链状聚合物与种类广泛的载体简便地键合，并且对得到的固相载体赋予生物体适应性、高压缩弹性、低摩擦特性、尺寸排除特性，且使链状聚合物相对于固相载体的表面所占有的密度高密度化，因此难以非特异性吸附。

另外，通过原子转移自由基聚合进行工序2-1-1、工序2-2和工序2-3-1中的聚合反应时，从反应效率的观点考虑，优选在过渡金属化合物和配位体的存在下进行反应。

作为过渡金属化合物，优选铜化合物。作为铜化合物，除溴化亚铜(I)、溴化铜(II)、氯化亚铜(I)、氯化铜(II)等卤化铜以外，还可举出三氟甲磺酸亚铜(I)、三氟甲磺酸铜(II)等。应予说明，可以单独使用这些中的1种或者组合2种以上使用。过渡金属化合物的合计使用量在反应体系中通常为1～10000ppm左右。

作为配位体，优选在同一分子内含有2个以上的氮原子的配位体。作为在同一分子内含有2个以上的氮原子的配位体，可举出三(2-吡啶基甲基)胺、联吡啶、联吡啶衍生物、三[2-(二甲基氨基)乙基]胺等。应予说明，可以单独使用这些中的1种或者组合2种以上使用。配位体的合计使用量相对于过渡金属化合物通常为0.5～10摩尔当量左右。

另外，从反应效率的观点考虑，优选在还原剂、溶剂存在下进行工序2-1-1、工序2-2和工序2-3-1中的聚合反应。

作为还原剂，可举出抗坏血酸、葡萄糖、肼、铜等，这些还原剂可以单独使用1种或者组合2种以上使用。

作为溶剂，可举出水系溶剂、有机溶剂。具体而言，可举出水；二甲基甲酰胺等酰胺系溶剂；甲醇、乙醇等醇系溶剂；茴香醚等醚系溶剂等，这些溶剂可以单独使用1种或者组合2种以上使用。特别优选聚合反应在水系溶剂中进行。水系溶剂使操作简便且反应体系的制备容易。在水系溶剂中进行原子转移自由基聚合时，优选水系溶剂为缓冲液。应予说明，缓冲剂的优选浓度为10～100mM。

另外，作为聚合反应的反应体系的pH，优选为3～10，更优选为7～9。聚合反应的反应时间通常为30分钟～12小时左右，反应温度只要在溶剂的沸点以下适当地选择即可。聚合反应即便在25～60℃左右的温和的条件下也能进行。

(工序2-1-2和工序2-3-2)

工序2-1-2是通过加成反应、取代反应、缩合反应或者脱保护反应等向构成工序2-1-1中得到的聚合物的第2结构单元的一部分的侧链随机导入第1反应性官能团，形成具有第1反应性官能团的第1结构单元的工序。由此，第2结构单元的一部分被转换成第1结构单元，因此得到第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构。

工序2-3-2是通过加成反应、取代反应、缩合反应或者脱保护反应等向工序2-3-1中得到的无规聚合物结构中的具有羟基或氨基的结构单元导入第1反应性官能团，形成具有第1反应性官能团的第1结构单元的工序。由此，具有羟基或氨基的结构单元被转换成第1结构单元，因此得到第1结构单元和第2结构单元的无规聚合物结构。

作为导入羧基的方法，例如可举出使羧酸酐与来自单体(11)、(14)的羟基或氨基进行加成反应的方法。

作为羧酸酐，例如可举出琥珀酸酐、马来酸酐、戊二酸酐、邻苯二甲酸酐、六氢邻苯二甲酸酐等。其中，从与羟基、氨基的反应容易进行的观点考虑，优选琥珀酸酐。

羧酸酐等的合计使用量相对于来自单体(11)的结构单元，通常为0.01～0.99摩尔当量左右，相对于来自单体(14)的结构单元，通常为1～100摩尔当量左右。

另外，工序2-1-2和工序2-3-2优选在与工序1同样的碱性催化剂、溶剂存在下进行。工序2-1-2和工序2-3-2的反应时间通常为30分钟～24小时左右，反应温度只要在溶剂的沸点以下适当地选择即可。

应予说明，形成链状聚合物的方法，导入羧基、氨基或者对甲苯磺酰基的方法不限定于上述方法。例如，工序2-1-2可以首先向第2结构单元的侧链随机导入具有反应性官能团前体(例如酰氯)的分子(例如琥珀酰二氯)，接着将该前体转换成反应性官能团(例如羧基)。另外，例如在PR-3的工序2-3-1～2-3-2中，可以将具有通过水解生成反应性官能团的官能团(例如酯基)和亲水性基团(例如羟基)的单体(例如甲基丙烯酸2-羟乙酯)聚合而形成聚合物，接着，将该官能团部分水解，由此向构成聚合物的结构单元的一部分的侧链随机导入反应性官能团(例如羧基)。

而且，如上所述得到的本发明的固相载体难以非特异性吸附杂质。特别是用于与配体键合的反应性官能团难以非特异性吸附杂质。另外，配体容易与反应性官能团键合。

因此，通过将本发明的固相载体作为亲和载体，能够广泛用于以酶联免疫分析、放射免疫分析、化学发光免疫分析等利用了抗原抗体反应的免疫分析，免疫沉淀，竞争免疫分析；蛋白质、核酸等的检测；细胞、蛋白质、核酸等生物体相关物质的生物分离；药物探索；生物传感器等为代表的体外诊断、生物化学领域中的研究等。本发明的固相载体特别适合用于免疫分析或者核酸检测。

＜配体键合固相载体＞

本发明的配体键合固相载体是使配体与本发明的固相载体键合而成的。

上述配体只要是与靶物质键合的分子即可，例如可举出抗体；抗原(包括半抗原等不完全抗体)；DNA、RNA等核酸；核苷酸；核苷；寡核苷酸；蛋白A、蛋白G、(链霉)亲和素、酶、凝集素、淋巴因子等蛋白质；胰岛素等肽；氨基酸；肝素、寡糖等糖或者多糖；糖蛋白；脂质；糖脂；生物素等维生素；药物；基质；激素；神经递质；病毒；细胞等。

这些中，从制成适合于诊断药用等的配体键合固相载体的观点考虑，优选抗体、抗原。抗体、抗原只要是与靶物质键合的抗体、抗原即可，例如可举出抗(抗纤溶酶)抗体、抗D-二聚体抗体、抗FDP抗体、抗tPA抗体、抗(凝血酶·抗凝血酶复合物)抗体、抗FPA抗体等凝血纤溶相关检查用抗体或者与其对应的抗原；抗BFP抗体、抗CEA抗体、抗AFP抗体、抗TSH抗体、抗铁蛋白抗体、抗CA19-9抗体等肿瘤相关检查用抗体或者与其对应的抗原；抗载脂蛋白抗体、抗β2-微球蛋白抗体、抗α1-微球蛋白抗体、抗免疫球蛋白抗体、抗CRP抗体等血清蛋白相关检查用抗体或者与其对应的抗原；抗HCG抗体等内分泌功能检查用抗体或者与其对应的抗原；抗地高辛抗体、抗利多卡因抗体等药物分析用抗体或者与其对应的抗原；HBs抗原、HCV抗原、HIV-1抗原、HIV-2抗原、HTLV-1抗原、支原体抗原、弓形虫抗原、链球菌溶血素O抗原等感染病相关检查用抗原或者与其对应的抗体；DNA抗原、人热变性IgG等自身免疫相关检查用抗原或者与其对应抗体等。应予说明，抗体可以为多克隆抗体，也可以为单克隆抗体。

另外，检测核酸时，作为配体，优选使用寡核苷酸。

配体键合固相载体可以通过使配体与利用本发明的固相载体的制造方法制造的固相载体的第1结构单元所含的反应性官能团键合而制造。

配体的键合只要参考日本特开2007-224213号公报等的记载按照常规方法进行即可，优选用共价键法进行。例如，反应性官能团为羧基、配体具有氨基时，可以使用脱水缩合剂键合。

本发明的配体键合固相载体可广泛用于在体外诊断、生物化学领域中的研究等。本发明的配体键合固相载体特别适合用于免疫分析或者核酸检测。

＜靶物质的检测或分离方法＞

本发明的检测或分离试样中的靶物质的方法，其特征在于，使用本发明的配体键合固相载体。

靶物质只要是与配体键合的靶物质即可，具体而言，可举出抗原；单克隆抗体，多克隆抗体等抗体(包括半抗原等不完全抗体)；细胞(正常细胞以及大肠癌细胞、血中循环癌细胞等癌细胞)；DNA，RNA等核酸；核苷酸；核苷；寡核苷酸；蛋白A，蛋白G，(链霉)亲和素，酶，凝集素，淋巴因子等蛋白质；肽，氨基酸，糖、多糖(肝素，寡糖等)，糖蛋白，脂质，糖脂，维生素，激素，病毒等生物体相关物质，也可以是成为创新药物目标的药物、生物素等小分子化合物。应予说明，靶物质可以被荧光物质等标记。

应予说明，试样只要是含有上述靶物质的物质或者具有含有靶物质的可能性的物质即可，具体而言，可举出发酵培养基、细胞溶解物、原核细胞、真核细胞、病毒粒子的悬浮液、组织液、体液、尿、血液、血浆、血清、淋巴液、细胞提取液、粘液、唾液、粪便、生理分泌物、细胞分泌液、含有靶物质的缓冲溶液等。

本发明的检测或分离方法除使用本发明的配体键合固相载体以外，参考日本特开2007-224213号公报、WO2011/034115等的记载按照常规方法进行即可。例如可举出以下的方法，其包括：通过混合等使本发明的配体键合固相载体与含有靶物质的试样接触的工序(接触工序)；和使用磁铁等将在该接触工序中捕捉了靶物质的配体键合固相载体从试样中分离的工序(分离工序)。应予说明，在该分离工序后，也可以包括检测靶物质的工序，或者使配体与靶物质解离的工序。

实施例

以下，举出实施例对本发明进行详细说明，但本发明不限于这些实施例。实施例中的各分析条件如下所示。

＜分析条件1：体积平均粒径＞

各粒子的体积平均粒径利用激光衍射·散射粒径分布测定装置(BeckmanCoulter LS13 320)测定。

＜分析条件2：链状聚合物的分子量测定＞

链状聚合物的分子量通过使用氢氧化钠水溶液进行水解使链状聚合物从粒子游离后测定。

即，在4g氢氧化钠水溶液(1N，pH14)中分散1g粒子，在25℃搅拌3小时，使链状聚合物从粒子游离。利用磁力分离粒子，回收溶解有链状聚合物的上清液。接下来，向该链状聚合物溶液中加入1M的盐酸进行中和使溶液的pH成为7。为了用于计算链状聚合物的重量，预先由加入的1M盐酸的重量计算生成的氯化钠的重量，通过将中和后的溶液冷冻干燥而制成粉末，得到含有氯化钠的链状聚合物。另外，为了用于计算链状聚合物的重量，预先测定粉末的重量。

将上述粉体作为检体，使用TOSOH公司制TSKgel G3000PWXL柱和日本分光公司制Chrom NAV色谱数据工作站程序，利用凝胶渗透色谱(Gel PermeationChromatography：GPC)按照以下的条件测定，由此测定在粒子表面形成的链状聚合物的Mn和Mw。

(测定条件)

流量：0.8mL/分钟

洗脱溶剂：0.2M磷酸钠缓冲液(pH7.0)

柱温：25℃

标准物质：TOSOH公司制TSKgel标准聚环氧乙烷SE试剂盒及和光纯药工业公司制聚乙二醇4000

＜分析条件3：链状聚合物在粒子表面所占的聚合物密度＞

根据下述式，由从粒子游离的链状聚合物的重量、链状聚合物的数均分子量和粒子的表面积计算聚合物密度。

〔链状聚合物在粒子表面所占的密度(条/nm²)〕＝〔与1g粒子键合的链状聚合物的条数(条)〕/〔每1g粒子的总表面积(nm²)〕

应予说明，与1g粒子键合的链状聚合物的条数和1g粒子的总表面积的计算方法如下。

(与1g粒子键合的链状聚合物的条数)

根据下述式(α)计算与每1g粒子键合的链状聚合物重量，由得到的值根据下述式(β)和(γ)计算与每1g粒子键合的链状聚合物的条数。

(α)：与每1g粒子键合的链状聚合物重量(mg)＝冷冻干燥后的粉末的重量(mg)－氯化钠的重量(mg)

(β)：与每1g粒子键合的链状聚合物的条数(mol)＝{与每1g粒子键合的链状聚合物重量(mg)÷链状聚合物的数均分子量(g/mol)}÷1000

(γ)：与每1g粒子键合的链状聚合物的条数(条)＝与每1g粒子键合的链状聚合物的条数(mol)×6.02×10²³(阿伏伽德罗数)

(每1g粒子的总表面积)

根据下述式(δ)～(θ)计算。应予说明，式(ε)中的粒子的比重由聚合物的比重、磁性体的比重以及聚合物和磁性体在粒子中所占的的比率来计算。

(δ)：每1个粒子的体积(μm³)＝4/3×π×{粒子的体积平均半径(μm)}³

(ε)：每1个粒子的质量(g)＝每1个粒子的体积(μm³)×粒子的比重(g/μm³)

(ζ)：每1g粒子的粒子数(个)＝1g/每1个粒子的质量(g)

(η)：每1个粒子的表面积(nm²)＝4×π×{粒子的半径(nm)}²

(θ)：每1g粒子的总表面积(nm²)＝每1个粒子的表面积(nm²)×每1g粒子的粒子数(个)

＜分析条件4：反应性官能团(羧基)含量＞

利用电导率测定法(Metrohm公司，794Basic Titrino)测定从粒子游离的链状聚合物所含的反应性官能团(羧基)的含量，求出相对于1g粒子固体成分的反应性官能团(羧基)的含量。

＜分析条件5：占有面积＞

占有面积是用键合链状聚合物前的粒子的表面积除以上述反应性官能团(羧基)含量而求出的。

＜分析条件6：含有比率(a/b)＞

用以下的方法计算摩尔数a和摩尔数c，接下来，将摩尔数a和摩尔数c合计而计算摩尔数b，由该值求出含有比率(a/b)。

(摩尔数a)

摩尔数a＝每1g粒子的反应性官能团(羧基)量(mol)/每1g粒子的聚合物条数(条)

(摩尔数c)

利用下述式(A)、(B)和(C)计算。

(A)：每1g粒子的第1结构单元的重量(g)＝每1g粒子的反应性官能团(羧基)量(mol)×第1结构单元的分子量(g/mol)

(B)：每1g粒子的第1结构单元以外的结构单元的重量(g)＝每1g粒子的链状聚合物的重量(g)－每1g粒子的第1结构单元的重量(g)

(C)：摩尔数c＝{每1g粒子的第1结构单元以外的结构单元的重量(g)/第1结构单元以外的结构单元的分子量(g/mol)}/每1g粒子的聚合物条数(条)

〔合成例1表面具有羟基的磁性粒子的制作〕

将过氧化二(3,5,5-三甲基己酰)的75％溶液(“PEROYL355-75(S)”，日油株式会社制)2g与十二烷基硫酸钠的1质量％水溶液20g混合，用超声波分散机进行微细乳化。将其投入装有聚苯乙烯粒子(数均粒径：0.77μm)13g和水41g的反应器中，在25℃搅拌12小时。

接下来，在另一容器中，用十二烷基硫酸钠(以下，称为“SDS”)的0.1质量％水溶液400g使苯乙烯96g和二乙烯基苯4g乳化，将其投入上述反应器中，在40℃搅拌2小时后，升温至75℃进行8小时聚合。冷却至室温后，通过离心分离仅取出粒子，将该粒子水洗，干燥。将该粒子作为核粒子(数均粒径：1.5μm)。

接下来，在另一容器中，向油性磁性流体(“EXP系列，EMG”，株式会社Ferrotec制)中加入丙酮使粒子析出沉淀后，将其干燥，由此得到具有疏水化处理过的表面的铁氧体系的磁性体微粒(平均一次粒径：0.01μm)。

接下来，用混合机将上述核粒子15g和上述疏水化处理过的磁性体微粒15g充分混合，使用Hybridization System NHS-0型(株式会社奈良机械制作所制)，以叶片(搅拌叶片)的圆周速度100m/秒(16200rpm)将该混合物处理5分钟，得到表面具有由磁性体微粒构成的磁性体层的母粒子(数均粒径：2.0μm)。

接下来，将SDS的0.50质量％水溶液250g投入500mL可分离式烧瓶中，接下来，加入上述具有磁性体层的母粒子10g，用均化器分散后，加热至60℃并保持温度。

接下来，在另一容器中，加入SDS的0.50质量％水溶液75g、甲基丙烯酸甲酯(以下，称为“MMA”)13.5g、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(以下，称为“TMP”)1.5g和过氧化二(3,5,5-三甲基己酰)的75％溶液(“PEROYL355-75(S)”，日油株式会社制)0.3g使其分散而得到预乳液。经2小时将该预乳液全部滴加到保持在60℃的上述500mL可分离式烧瓶中。滴加结束后，保持在60℃，搅拌1小时。

其后，在另一容器中，加入SDS的0.50质量％水溶液37.5g、甲基丙烯酸缩水甘油酯(以下，称为“GMA”)6.56g、TMP0.94g和过氧化二(3,5,5-三甲基己酰)的75％溶液(“PEROYL355-75(S)”，日油株式会社制)0.15g使其分散而得到预乳液。经1小时20分钟将该预乳液全部滴加到保持在60℃的上述500mL可分离式烧瓶中。其后升温至75℃后，进一步持续聚合2小时，结束反应。接着，向该500mL可分离式烧瓶中加入1mol/L的硫酸水溶液10mL，在60℃搅拌6小时。接下来，利用磁力将上述500mL可分离式烧瓶中的粒子分离后，使用蒸馏水反复清洗。

经过以上步骤，得到表面具有羟基的磁性粒子。

〔合成例2表面具有原子转移自由基聚合引发基团的磁性粒子的制作〕

将合成例1中得到的表面具有羟基的磁性粒子10g投入烧瓶中，在氮气流下，加入脱水四氢呋喃32mL和三乙胺7.5mL，进行搅拌。将该烧瓶浸入冰浴中，经30分钟滴加2-溴异丁酰溴6.3mL。在室温下反应6小时后，利用磁力将烧瓶内的粒子分离后，将粒子再分散于丙酮。进一步进行多次磁力分离和再分散后，将粒子分散于SDS的0.10质量％水溶液中。利用荧光X射线分析，检测原子转移自由基聚合引发基团(2-溴异丁酰基)所含的Br。

经过以上步骤，得到表面具有原子转移自由基聚合引发基团(2-溴异丁酰基)的磁性粒子。将该粒子命名为粒子(A)。

〔实施例1 表面键合有具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物的链状聚合物的磁性粒子的制作1〕

按照以下的合成路径，制作标题的磁性粒子(应予说明，式中的ran表示与其相邻的2种结构单元为无规聚合物结构。以下相同)。以下示出具体的步骤。

使合成例2中得到的粒子(A)6g分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)18mL，向其中加入2-羟乙基丙烯酰胺3g以及含有0.05mol/L三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L溴化铜(II)的混合水溶液1.20mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液3mL，进行密封开始反应。在45℃搅拌4小时后，开封暴露于空气中使反应停止。利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于水中。

经过以上步骤，得到表面键合有由来自2-羟乙基丙烯酰胺的重复单元构成的链状聚合物的磁性粒子。将该粒子命名为粒子(B)。

接下来，使粒子(B)1g分散于二甲基亚砜5mL，向其中加入将三乙胺0.2mL和琥珀酸酐溶解于二甲基亚砜4.8mL而得的溶液，在25℃反应4小时。为了制作链状聚合物中的反应性官能团(羧基)的量不同的粒子，按照0.01g、0.02g、0.04g、0.08g和0.16g这5份琥珀酸酐的添加量进行该反应。

其后，利用磁力分离粒子后，分散于水中。

经过以上步骤，得到表面键合有具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物的链状聚合物的磁性粒子。按照反应性官能团量(羧基量)少的顺序将得到的粒子命名为粒子(C)～(G)。

〔实施例2 表面键合有具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物的链状聚合物的磁性粒子的制作2〕

按照以下的合成路径，制作标题的磁性粒子。以下示出具体的步骤。

使合成例2中得到的粒子(A)2g分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)/乙醇＝1/1(v/v)的混合溶液6mL，向其中加入2-羟乙基丙烯酰胺和琥珀酸2-甲基丙烯酰氧基乙酯总计1g，进一步加入含有0.05mol/L的三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L的溴化铜(II)的混合水溶液0.40mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液1mL，进行密封开始反应。为了制作链状聚合物中的反应性官能团(羧基)的量不同的粒子，按照1/1(w/w)、4/1(w/w)和9/1(w/w)这3种2-羟乙基丙烯酰胺/琥珀酸2-甲基丙烯酰氧基乙酯的混合比率进行该反应。在45℃搅拌4小时后，开封暴露于空气中使反应停止。

其后，利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于水中。

经过以上步骤，得到表面键合有具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物的链状聚合物的磁性粒子。按照反应性官能团量(羧基量)少的顺序将得到的粒子命名为粒子(H)～(J)。

〔实施例3 表面键合有具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物的链状聚合物的磁性粒子的制作3〕

按照以下的合成路径，制作标题的磁性粒子。以下示出具体的步骤。

使合成例2中得到的粒子(A)2g分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)6mL，向其中加入N-甲基丙烯酰氧基乙基-N,N-二甲基铵-α-N-甲基羧基甜菜碱和2-羟乙基丙烯酰胺总计0.5g，进一步加入含有0.05mol/L的三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L的溴化铜(II)的混合水溶液0.40mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液1mL，进行密封开始反应。按照1/1(w/w)和4/1(w/w)这2种N-甲基丙烯酰氧基乙基-N,N-二甲基铵-α-N-甲基羧基甜菜碱/2-羟乙基丙烯酰胺的混合比率进行该反应。在45℃搅拌4小时后，开封暴露于空气中使反应停止。

其后，利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于水中。

接下来，使得到的粒子1.5g分散于二甲基亚砜8mL，向其中加入将三乙胺0.3mL和琥珀酸酐1.5g溶解于二甲基亚砜7.2mL而得的溶液。在25℃反应4小时而导入反应性官能团(羧基)后，利用磁力分离粒子，使粒子分散于水中。

经过以上步骤，得到表面键合有具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物的链状聚合物的磁性粒子。按照反应性官能团量(羧基量)少的顺序将得到的粒子命名为粒子(K)～(L)。

〔实施例4 表面键合有包含具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物结构的链状聚合物的磁性粒子的制作〕

按照以下的合成路径，制作标题的磁性粒子。以下示出具体的步骤。

使合成例2中得到的粒子(A)2g分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)6mL，向其中加入N-甲基丙烯酰氧基乙基-N,N-二甲基铵-α-N-甲基羧基甜菜碱0.5g以及含有0.05mol/L的三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L的溴化铜(II)的混合水溶液0.40mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液1mL，进行密封开始反应。在45℃搅拌4小时后，开封暴露于空气中使反应停止。利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)6mL。

接下来，加入N-甲基丙烯酰氧基乙基-N,N-二甲基铵-α-N-甲基羧基甜菜碱/2-羟乙基丙烯酰胺＝1/1(w/w)总计0.5g以及含有0.05mol/L三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L溴化铜(II)的混合水溶液0.40mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液1mL，进行密封开始反应。在45℃搅拌1时间后，开封暴露于空气中使反应停止。利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于水中。

接下来，使得到的粒子1.5g分散于二甲基亚砜8mL，向其中加入将三乙胺0.3mL和琥珀酸酐1.5g溶解于二甲基亚砜7.2mL而得的溶液。在25℃反应4小时而导入反应性官能团(羧基)后，利用磁力分离粒子，使粒子分散于水中。

经过以上步骤，得到表面键合有包含具有反应性官能团(羧基)的亲水性无规共聚物结构的链状聚合物的磁性粒子。将得到的粒子命名为粒子(M)。

〔比较例1 不具有链状聚合物的含有反应性官能团(羧基)的磁性粒子的制作〕

使合成例1中得到的表面具有羟基的磁性粒子1g分散于1,3-二氧戊环4.8mL，向其中加入将三乙胺0.2mL和琥珀酸酐0.08g溶解于1,3-二氧戊环4.8mL而得的溶液。在25℃反应4小时后，利用磁力分离粒子，使粒子分散于水中。

经过以上步骤，得到不具有链状聚合物的含有反应性官能团(羧基)的磁性粒子。将得到的粒子命名为粒子(X)。

〔比较例2 表面键合有嵌段共聚物的链状聚合物的磁性粒子的制作〕

使合成例2中得到的粒子(A)2g分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)6mL，向其中加入N-甲基丙烯酰氧基乙基-N,N-二甲基铵-α-N-甲基羧基甜菜碱0.5g以及含有0.05mol/L的三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L的溴化铜(II)的混合水溶液0.40mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液1mL，进行密封开始反应。在45℃搅拌4小时后，开封暴露于空气中使反应停止。利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)6mL。

接下来，加入2-羟乙基丙烯酰胺0.5g以及含有0.05mol/L的三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L的溴化铜(II)的混合水溶液0.40mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液1mL，进行密封开始反应。在45℃搅拌一定时间(1小时或者30分钟)后，开封暴露于空气中使反应停止。利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于水中。

接下来，使得到的粒子1.5g分散于二甲基亚砜8mL，向其中加入将三乙胺0.3mL和琥珀酸酐1.5g溶解于二甲基亚砜7.2mL而得的溶液。在25℃反应4小时而导入反应性官能团(羧基)后，利用磁力分离粒子，使粒子分散于水中。

经过以上步骤，得到表面键合有嵌段共聚物的链状聚合物的磁性粒子。对于得到的粒子，将上述一定时间为1小时而得到的粒子命名为粒子(Y)，将30分钟得到的粒子命名为粒子(Z)。

〔比较例3 表面键合有不具有羧基的亲水性链状均聚物的磁性粒子的制作〕

使合成例2中得到的粒子(A)6g分散于磷酸钠缓冲液(50mM，pH7.8)18mL，向其中加入2-羟乙基丙烯酰胺3g以及含有0.05mol/L的三(2-吡啶基甲基)胺和0.05mol/L的溴化铜(II)的混合水溶液1.20mL。接着，加入L-抗坏血酸的0.2mol/L水溶液3mL，进行密封开始反应。在45℃搅拌4小时后，开封暴露于空气中使反应停止。利用磁力分离粒子，除去未反应的单体、催化剂等，使得到的粒子分散于水中。

经过以上步骤，得到表面键合有由来自2-羟乙基丙烯酰胺的重复单元构成的链状聚合物的磁性粒子。将该粒子命名为粒子(W)。

对于上述各实施例和比较例中得到的粒子(C)～(M)、(X)～(Z)、(W)，根据上述的分析条件，测定体积平均粒径、链状聚合物的分子量等。将结果示于表1～2。

〔试验例〕

将粒子(C)～(M)和(W)～(Z)1mg分别投入到2mL的Eppendorf管中，用PBS(-)缓冲液清洗。向各粒子加入Jurkat细胞破碎液(含有蛋白质杂质100μg)100μL，进行30分钟培养。利用磁力分离粒子而除去上清液，用TBS-T(0.05质量％Tween20)缓冲液将粒子清洗5次。接下来，向各粒子加入十二烷基苯磺酸钠水溶液(0.5质量％)，从粒子剥离非特异性吸附的蛋白质杂质。利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳目视观察确认非特异性吸附的蛋白质杂质的量。将结果示于图1。

然后，在考虑了反应性官能团量(羧基量)的基础上，按照以下的基准对各粒子的非特异性吸附抑制效果进行评价。将结果示于表2。

(评价基准)

AA：观察不到蛋白质杂质的吸附，非常良好

A：尽管反应性官能团量大，但几乎没有观察到蛋白质杂质的吸附，良好

B：确认了蛋白质杂质的吸附少，且考虑到反应性官能团量，认为大量反应性官能团吸附了蛋白质杂质，稍微不良

C：清楚地确认了蛋白质杂质的吸附，不良

表1

表2

如图1和表2所示，实施例的各粒子与比较例1的粒子相比，均大大抑制了蛋白质杂质的非特异性吸附。推测该结果是由于表面键合了亲水性的链状聚合物而产生的。

另外，实施例的粒子(C)、(D)、(E)、(H)、(I)、(K)、(L)和(M)与比较例2的粒子相比，尽管反应性官能团量(羧基量)相同或者在此之上，却大大抑制了蛋白质杂质的非特异性吸附。另一方面，实施例的粒子(F)、(G)和(J)与比较例2的粒子相比，尽管反应性官能团量(羧基量)为2倍以上，但几乎没有观察到蛋白质杂质的非特异性吸附。即，可以说实施例的粒子(F)、(G)和(J)与比较例2的粒子相比，对反应性官能团的非特异性吸附少。

另外，实施例的粒子中，含有比率(a/b)为0.35以下的粒子(粒子(C)、(D)、(E)、(H)、(I)、(K)和(M))均非常有效地抑制了蛋白质杂质的非特异性吸附。

另外，对于实施例的粒子(K)～(M)，即便在含有比率(a/b)较高而超过0.3的情况下，也有效地抑制了蛋白质杂质的非特异性吸附。推测该结果是因链状聚合物所含的甜菜碱骨架而产生的。