HSP90

摘要： 【目的】HSP90 是热休克蛋白家族的成员之一,在昆虫的抗逆性和变态发育中发挥重要作用,已有研究表明 HSP90能够促进家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)的增殖,但作用机制尚不清楚。本研究通过鉴定 BmHSP90 的相互作用蛋白,为其促进 BmNPV 增殖的作用机制解析提供参考。【方法】构建连接在 pIZ/V5-His 的BmHSP90;真核过表达载体,在家蚕 BmN-SWU1 细胞中转染 48 h 后,感染 BmNPV 继续培养 48 h 后收集蛋白,保留总蛋白后将这些蛋白均分两管,进行免疫共沉淀,分别用抗 HA 抗体和 IgG 抗体钓取相互作用蛋白,对蛋白胶进行硝酸银染色后,获取差异条带并做质谱分析,将质谱结果与信息分析结合进行候选互作蛋白筛选,并克隆鉴定互作蛋白。通过免疫荧光验证 HSP90 与互作蛋白的共定位情况,并进一步采用免疫共沉淀试验确定其是否存在相互作用关系。【结果】硝酸银染色结果显示,试验组与对照组在 90、70 和 60 kD 附近处存在差异条带,并验证了 90 kD 处的差异条带为诱饵蛋白;将另外两条差异带进行质谱分析,共鉴定到 7 个候选相互作用蛋白,通过分析选择其中两个候选蛋白作后续研究,分别为Tubulin-specific chaperone E(Tbce)和 Golgin subfamily A member 5(Golga5)。BmTbce 的最大开放阅读框长度为 1 728bp,编码 576 个氨基酸,BmGolga5 的最大开放阅读框长度为 1 854 bp,编码 618 个氨基酸;同源比对和系统进化树显示 BmTbce的微管结合结构域(cytoskeleton-associated protein-glycine-rich,CAP-Gly)位于 N 端且在不同物种之间保守性较高,BmGolga5 的跨膜区(transmembrane domain,TMD)位于 C 端,也较为保守;荧光共定位显示 BmHSP90 与 BmTbce 和 BmGolga5在细胞质中发生共定位,并进一步通过免疫共沉淀证明 BmHSP90;和 BmTbce;、BmHSP90;和 BmGolga5;具有相互作用关系。【结论】经过筛选与鉴定,在 BmNPV 感染家蚕细胞的过程中,与家蚕热休克蛋白 HSP90 发生相互作用的蛋白为 BmTbce 和BmGolga5。

摘要： 目的探讨低氧环境下热休克蛋白90(HSP90)对人肝细胞脂质代谢通路的影响。方法将人肝细胞株L02、HepG2、Huh7置于低氧(1%O;)不同时程(0h、24h、48h)培养,或联合HSP90抑制剂(STA9090、NB),或联合干扰HSP90α/β,或敲除HSP90α,并进行以下实验:运用尼罗红染色,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测细胞脂质蓄积情况;使用甘油三酯试剂盒检测细胞甘油三酯含量差异;通过实时荧光定量PCR检测细胞FASN的mRNA表达水平。结果低氧应激导致人肝细胞株的脂质蓄积增多(P<0.05);HSP90抑制剂导致低氧下HepG2细胞脂质蓄积减少,并影响低氧下脂质代谢途径(P<0.05);敲低HSP90导致低氧下HepG2细胞脂质蓄积减少(P<0.05)。结论低氧下HSP90参与人肝细胞脂质代谢,抑制HSP90可导致人肝细胞的脂质蓄积减少。

摘要： Objective:In various cancers,migration and invasion inhibitory protein(MIIP)is expressed at low level and is involved in cancer pathogenesis.Herein,we sought to explore the function of MIIP in clear cell renal cell carcinoma(ccRCC).Methods:CCK-8,colony formation,cell cycle,and endothelial cell tube formation assays were performed to evaluate the roles of MIIP in ccRCC proliferation and angiogenesis.To explore the underlyi ng mechanism,we con ducted RNA-sequencing,GSEA,qRT-PCR,Western blot,ELISA,cell transfection,coimmunoprecipitation,and ubiquitination assays in ccRCC cell lines.Furthermore,xenograft tumor growth in nude mice,and Ki-67 and CD31 staining in xenograft tissues were examined.Finally,the association of MIIP expression with clinical pathology and the expression status of HIF-2a and cysteine-rich 61(CYR61)were further analyzed in human RCC tissues through Western blot and immunohistochemistry.Results:Both in vitro and in vivo functional experiments indicated that forced expression of MIIP inhibited ccRCC proliferation and angiogenesis,whereas silencing MIIP either in normal HK-2 cells or in ccRCC cells had the opposite effect(P<0.05).Mechanistically,CYR61 was identified as a gene significantly downregulated by MIIP overexpression,and was required for the suppressive role of MIIP in ccRCC.MIIP was found to promote HSP90 acetylation and thus impair its chaperone function toward HIF-2a.Consequently,RACK1 binds HIF-2a and causes its ubiquitination and proteasomal degradation,thus decreasing the transcription of its target,CYR61.Finally,analyses of clinical samples demonstrated that MIIP is significantly downregulated in cancer vs.normal tissues in RCC cases,and its expression is negatively associated with histological grade,metastasis,the prognosis of patients with RCC,and the expression of HIF-2a and CYR61(P<0.05).Conclusions:MIIP is a novel tumor suppressor in ccRCC via negative regulation of HIF-2a-CYR61 axis.

摘要： 目的观察吡非尼酮(Pirfenidone)对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化小鼠模型及TGF-β1刺激的肺成纤维细胞中热休克蛋白90(HSP90)、热休克因子-1(HSF-1)表达的影响,探讨吡非尼酮改善肺纤维化的作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为四组,气管内注射3 U/kg BLM以构造肺纤维化小鼠模型;Pirfenidone治疗组在造模后第2天开始以灌胃方式给予300 mg/kg/d Pirfenidone。第21天,应用H&E、Masson染色评估小鼠肺纤维化程度,免疫组化和Western blot测定肺组织α-SMA及HSP90的含量。10 ng/ml TGF-β1单独或联合100μg/ml Pirfenidone处理肺成纤维细胞HFL-1细胞24小时后,应用Western blot检测α-SMA、HSP90、胞浆及胞核HSF-1的含量。结果BLM组小鼠的肺纤维化程度、α-SMA的表达均高于Pirfenidone治疗组。且BLM组肺组织HSP90的表达较对照组明显升高,而Pirfenidone的处理可抑制HSP90的表达。TGF-β1刺激肺成纤维细胞表达HSP90明显增多,并可诱导HSF-1由胞浆转移至胞核中。Pirfenidone可抑制上述过程。结论吡非尼酮可能通过抑制HSF-1由胞浆转移至胞核中,从而在基因水平抑制HSP90的表达而改善肺纤维化。

摘要： HSP90作为热休克蛋白家族中最重要的成员,HSP90不仅可以作为癌基因的分子伴侣发挥其重要作用,而且在肿瘤的生长,进展阶段中扮演着重要角色,HSP90在多种癌蛋白的信号通路及信号转导中起着至关重要的作用。HSP90的高表达与泌尿系统肿瘤的发生,发展也密切相关。在肾癌、膀胱癌和前列腺癌中,HSP90均高表达,并且促进这三大肿瘤的发展。抑制HSP90的水平在泌尿系统肿瘤的治疗中也具有重要的研究意义。现对HSP90的生理学特征及其在泌尿系统肿瘤中的作用机制作一综述。

摘要： 目的:检测热休克蛋白90(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂协同索拉非尼(Sorafenib)对肝癌耐药细胞的作用机制,并研究其对Sorafenib诱导肝癌耐药细胞铁死亡的增敏效应。方法:MTT法检测格尔德霉素(Geldanamycin)联用Sorafenib在抑制HepG2/Sorafenib细胞增殖中的联合效应;流式细胞术检测HepG2/Sorafenib及HepG2细胞株在Sorafenib作用下,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化,以及Geldanamycin对细胞内ROS的协同诱导效应;FerroOrange染色法检测HepG2/Sorafenib及HepG2细胞株在Sorafenib作用下,细胞内二价铁离子水平变化;RT-PCR及Western blot实验检测Geldanamycin对铁死亡相关基因SLC7A11及GPX4等转录和表达的调节作用。结果:Geldanamycin可增强HepG2/Sorafenib耐药细胞株对Sorafenib的敏感性,经30 nmol/L浓度的Geldanamycin预处理后,Sorafenib的半数抑制率IC_(50)由原来的(2.6±0.1)×10^(3) nmol/L降为(37.2±6.9)nmol/L,变化差异显著(P<0.01)。当Sorafenib浓度高于32 nmol/L后,二者的联用指数CI小于0.2,表明Geldanamycin与Sorafenib联用处理HepG2/Sorafenib耐药细胞株具有强烈的协同效应;HepG2/Sorafenib耐药细胞株经30 nmol/L Geldanamycin预处理后,其细胞内的ROS水平可重新被Sorafenib诱导,相同浓度下与无Geldanamycin处理组比较,增强了4.2倍(P<0.01);30 nmol/L Geldanamycin可显著增强Sorafenib诱导HepG2/Sorafenib细胞内二价铁离子水平提高,提示其协同Sorafenib促细胞铁死亡作用;Geldanamycin能通过Akt-Nrf2途径下调SLC7A11蛋白的转录,并影响GPX4蛋白的表达。结论:抑制Hsp90能减弱肝癌耐药细胞株对Sorafenib诱导铁死亡的耐受性,其机制可能是通过阻断Akt/Nrf2介导的SLC7A11转录下调实现的。

摘要： 热激蛋白(heat shock protein,HSPs)是一类广泛存在于植物体内的应激蛋白,在植物响应逆境过程中发挥重要作用。为进一步了解小麦HSP90-1基因并探究其相关生物学功能,搜索小麦基因组序列数据库,获得了小麦A、B、D 3个基因组上的同源序列,根据其染色体位置分别命名为TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D,通过同源克隆从12个小麦品种中得到TaHSP90-1 DNA序列。序列分析表明,TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D分别含有2 121、2 136和2 130 bp的完整开放阅读框,分别编码707、712和710个氨基酸;其蛋白序列C端均含有1个HSP90结构域,为HSP家族HSP90亚家族成员。TaHSP90-1在不同小麦品种中存在SNP位点,分别位于TaHSP90-1-B第2个内含子区域和TaHSP90-1-D启动子区域。系统进化分析表明,TaHSP90-1-A与二粒小麦处于同一分支;TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D处于同一分支。顺式作用元件分析发现,TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D启动子区域均含有干旱响应元件(MBS element)和热响应元件(HSE element)。RT-PCR结果显示,TaHSP90-1-A、TaHSP90-1-B和TaHSP90-1-D在苗期和成熟期的叶片中表达量较高。在干旱胁迫条件下,TaHSP90-1表达量在耐旱小麦品种中较高,为旱敏感小麦品种表达量的150倍;在热胁迫条件下,TaHSP90-1在热敏感与耐热小麦品种中均上调表达,其中,TaHSP90-1-A和TaHSP90-1-D在耐热小麦品种中上调表达倍数更高。

摘要： 目的研究Aha1基因在恶性黑色素瘤形成过程中的作用。方法采用定量PCR和免疫印迹的方法检测并比较小鼠B16F10移植恶性黑色素瘤及瘤旁的组织中Aha1基因的表达。在恶性黑色素瘤B16F10细胞中转染转染真核表达载体过表达Aha1基因后,使用CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡。结果Aha1在恶性黑色素瘤中的表达显著低于相应的瘤旁组织,过表达的Aha1基因导致黑色素瘤细胞的生长停滞,并促进黑色素瘤细胞B16F10的凋亡。结论低表达的Aha1基因有利于恶性黑色素瘤的形成。

摘要： 目的 研究Aha1基因在恶性黑色素瘤形成过程中的作用.方法 采用定量PCR和免疫印迹的方法检测并比较小鼠B16F10移植恶性黑色素瘤及瘤旁的组织中Aha1基因的表达.在恶性黑色素瘤B16F10细胞中转染转染真核表达载体过表达Aha1基因后,使用CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡.结果 Aha1在恶性黑色素瘤中的表达显著低于相应的瘤旁组织,过表达的Aha1基因导致黑色素瘤细胞的生长停滞,并促进黑色素瘤细胞B16F10的凋亡.结论 低表达的Aha1基因有利于恶性黑色素瘤的形成.

摘要： 热激蛋白Hsp90是广泛存在于微生物和动植物体中高度保守蛋白质之一,大量研究发现其参与生物体应答应激反应、信号转导、细胞周期调控、蛋白降解及转运等生理活动,具有重要研究价值,因此在许多物种中热激蛋白Hsp90基因家均被广泛关注和研究.但大豆中Hsp90基因家族详细信息尚不清楚,研究通过生物信息学分析发现共有13个Hsp90基因在大豆中被鉴定出来,基因序列长度2 538～9 131 bp,编码序列长度1 968～2 533 bp,外显子数为2～19个,编码蛋白质氨基酸个数为655～847,其分子质量为75.88～97.07ku,理论等电点为4.84～6.28,氨基酸序列高度保守,同源性为62％,均包含Hsp90结构域pfam00183和HATPase_C结构域pfam02518,主要分布于8条染色体;系统进化树分析结果显示大豆Hsp90家族基因分为3组;亚细胞定位预测结果显示大豆Hsp90家族基因主要位于细胞质和内质网.研究结果为进一步探索大豆Hsp90家族成员功能奠定了基础.

摘要： 本发明属于分子生物学、临床检测技术领域，具体涉及包含DNAJB6、Hsp70和Hsp90α的蛋白标志物组合，及可与其特异性结合的配体组合物，以及所述蛋白标志物组合或配体组合在Ⅱ期结肠癌预后判断试剂盒中的应用。

摘要： 本发明属于分子生物学、临床检测技术领域，具体涉及包含DNAJB6、Hsp70和Hsp90α的蛋白标志物组合，及可与其特异性结合的配体组合物，以及所述蛋白标志物组合或配体组合在Ⅱ期结肠癌预后判断试剂盒中的应用。

摘要： 本文提供式(I)化合物，

摘要： 本发明提供了HSP90抑制剂阻碍STAT3线粒体转运和治疗哮喘的新应用。具体而言，本发明提供了HSP90抑制剂在制备用于阻碍STAT3线粒体转运的制剂中的应用。本发明还提供了HSP90抑制剂在制备用于抑制2型天然淋巴样细胞的功能的制剂中的应用。本发明还提供了HSP90抑制剂在制备用于治疗哮喘或其相关疾病的药物中的应用。本发明还提供了以STAT3的线粒体转运为靶点在筛选和/或制备用于治疗哮喘或其相关疾病的药物中的应用。

摘要： 本发明涉及一种Hsp90抑制剂KU‑177的合成工艺，包括7个步骤，分别为：以焦性没食子酸和甲基化试剂为起始原料，反应生成2‑甲氧基苯‑1,3‑二醇；制备(E)‑2‑(((苄氧基)羰基)氨基)‑3‑(二甲基氨基)丙烯酸甲酯；制备(7‑羟基‑8‑甲氧基‑2‑氧代‑2‑H‑苯并吡喃‑3‑基)氨基甲酸苄酯；制备3‑(((苄氧基)羰基)氨基)‑8‑甲氧基‑2‑氧代‑2H‑苯并吡喃‑7‑乙酸基酯；制备3‑氨基‑8‑甲氧基‑2‑氧代‑2H‑苯并吡喃‑7‑乙酸乙烯酯；制备3'，6‑二甲氧基‑[1,1'‑联苯]‑3‑羧酸；最终合成KU‑177。本发明步骤简单，操作安全方便，反应效率高，易于纯化分离，条件温和，成本较低，KU‑177的反应总收率为1.15％，合成产品纯度高(>99.0％)，适用于大规模生产。

摘要： 本公开总体上涉及一种治疗癌症的方法，包括施用HSP90结合缀合物或施用两种不同的治疗剂作为联合疗法。提供了联合疗法的组分和使用联合疗法的方法。

摘要： 本发明公开了一种表达热休克蛋白Hsp70的重组乳酸乳球菌及其制备方法和应用，通过PCR扩增Hsp70基因全序列并回收纯化，之后制备pNZ8149线性化载体，将两者进行同源重组连接反应，得到重组表达质粒pNZ8149‑Hsp70；制备感受态细胞，将重组表达质粒pNZ8149‑Hsp70通过电转化转入感受态细胞，制得高效表达Hsp70的重组乳酸乳球菌。本发明利用同源重组技术构建了重组Hsp70蛋白的乳酸菌表达体系，通过快速诱导可大量表达Hsp70，由于乳酸菌本身不含内毒素，因此无需进行蛋白纯化，可将诱导表达的蛋白连同菌液一同饲喂小鼠，然后再攻毒，经检测上述含Hsp70的菌液可减轻霉菌毒素对小鼠的伤害，对攻毒后的小鼠能起到很好的保护作用。

摘要： 本发明公开了一种HSP/SAA重组蛋白及其制备方法和应用。所述HSP/SAA重组蛋白是由HSP基因与SAA基因通过BglII/BamHI同尾酶连接而成的。本发明将融合蛋白HSP以及SAA进行基因优化后，将其插入原核表达载体pET‑28a中，使两者融合表达，并且SAA表达高效，其表达水平占全菌总蛋白的25％，且表达形式为可溶性蛋白，达到了大量制备诊断用SAA蛋白的目的，且HSP/SAA重组蛋白稳定性好，有利于SAA在各种诊断试剂中的应用和制备。

摘要： 本发明公开了一种温敏雄性不育基因HSP60‑3B及其应用和育性恢复的方法；该基因HSP60‑3B的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的应用是：采用常规方法或基于CRISPR/Cas9系统，敲除、改变或抑制HSP60‑3B基因，使得常规水稻品种中的HSP60‑3B基因表达水平降低，进而获得水稻雄性不育株系。本发明通过引物扩增HSP60‑3B基因，使用遗传转化的手段，能够使突变体恢复到野生型表型。本发明获得的水稻HSP60‑3B不育系营养生长阶段没有明显异常，平均生长温度32°C至34°C条件下不育，平均温度22°C生长条件下可育。HSP60‑3B基因应用于水稻育种时，可以提高水稻生殖期花粉抗高温的能力，有稳产的作用；而HSP60‑3B不育系应用于杂交育种中，可以免除母本去雄的工作，大大提高生产效率，降低人工成本，在农业生产上具有重要的应用潜力。

摘要： 本发明公开了热激蛋白HSP90抑制剂‑坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用，所述热激蛋白HSP90抑制剂‑坦螺旋霉素在抑制草鱼呼肠孤病毒结合到细胞表面及入侵的应用。本发明通过体外细胞实验证明热激蛋白HSP90抑制剂‑坦螺旋霉素具有抗GCRV病毒作用；以及其作用方式为通过阻止GCRV病毒外衣壳蛋白与细胞表面受体结合，进而抑制病毒入胞而具有抗病毒功效。并且发明首次发现17‑AAG具有抵抗GCRV病毒感染草鱼的功能，为预防或治疗GCRV感染草鱼提供潜在策略。