蜕膜

摘要： 反复妊娠丢失(recurrent pregnancy loss,RPL)的发生率约为1%~5%。近年研究发现,母胎界面免疫微环境对妊娠结局有重要影响。蜕膜自然杀伤(decidual natural killer,dNK)细胞作为母胎界面重要的免疫细胞,可产生多种细胞因子,调节滋养细胞侵袭,促进子宫螺旋动脉重塑,参与妊娠早期母胎界面免疫耐受的建立,从而维持妊娠。而RPL患者的dNK细胞呈高活跃状态,其活性及功能发生改变,可能影响妊娠的免疫环境,进而导致妊娠失败。目前,通过改善dNK细胞活性及功能进而影响母胎界面微环境的治疗包括静脉滴注丙种球蛋白或脂肪乳、粒细胞集落刺激因子、糖皮质激素、间充质干细胞、枸橼酸西地那非和西罗莫司等,已成为RPL治疗中的新研究方向。

摘要： 目的:研究Notch信号通路相关受体Notch1、Notch2、Notch3、Notch4及配体Delta样典型Notch配体1、3、4(DLL1、DLL3、DLL4)、Jagged1、Jagged2在复发性流产(RSA)患者绒毛及蜕膜组织中的表达情况。方法:收集行人工流产术的RSA患者(RSA组)及正常早孕终止妊娠患者(正常组)绒毛及蜕膜组织标本各15例,并提取组织中总RNA及蛋白,实时定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测两组绒毛及蜕膜组织中Notch1、Notch2、Notch3、Notch4及DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1、Jagged2在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果:与正常组相比,RSA组绒毛中Notch1、Notch2、Notch4、DLL4、Jagged1、Jagged2在mRNA及蛋白水平表达均降低(均P0.05);与正常组相比,RSA组蜕膜中Notch1、Notch2、Notch4、DLL1、DLL4、Jagged1、Jagged2在mRNA及蛋白水平表达均降低(均P0.05)。结论:Notch信号通路部分相关受体及配体在RSA患者绒毛及蜕膜组织中呈现病理性差异表达,提示Notch信号通路与RSA发病相关,从妊娠建立伊始即参与了RSA发生。

摘要： 子宫内膜容受性在胚胎植入中起关键作用,约2/3的胚胎植入失败是由于子宫内膜容受性不佳。白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是子宫内膜容受性的重要生物学标志物之一,其在种植窗子宫内膜腺上皮高表达,参与调控胚胎植入过程中子宫上皮细胞的信号转导,将子宫内膜从非接受状态转化为接受状态。LIF表达异常可使子宫内膜容受性受损,与不孕症的发生密切相关,且其表达具有类固醇激素依赖性,并受多种细胞因子和生长因子调控。综述LIF在子宫内膜容受性的建立、胚胎植入、子宫内膜蜕膜化过程中的表达、相关信号转导通路及影响因素的研究进展,以期为子宫内膜容受性的诊治提供新的思路。

摘要： 人类生殖过程涉及各种复杂因素,其中胚胎能否着床是受孕过程中的关键步骤。顺利的着床需要有正常生命力的胚胎在适当的时间植入具有接受性的子宫内膜,且胚胎与内膜达到同步交流状态。着床过程中任何一个环节出现差错都会影响妊娠率,而子宫内膜容受性下降可能是导致不孕的主要原因之一。着床初期子宫内膜上皮细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)为后续胚胎的植入做准备,随后子宫内膜间质细胞发生蜕膜化为胚胎提供良好的发育环境。这提示EMT与蜕膜化是维持子宫内膜容受状态的基本条件,而良好的子宫内膜容受性是胚胎植入并充分发育的生物学基础。

摘要： 目的:探讨反复不明原因自然流产患者血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平及临床意义.方法:选择2018年10月-2021年9月本院收治的148例反复不明原因自然流产患者为流产组,正常早期妊娠人工流产者80例为对照组,检测两组血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平并分析与血清孕酮(P)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、白介素2(IL-2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的相关性,及对反复不明原因自然流产患者的诊断价值.结果:流产组血清(0.33±0.04)、绒毛(0.30±0.03)和蜕膜(0.28±0.02)miR-129-5p表达水平均低于对照组(1.12±0.11、1.35±0.13、1.13±0.12),血清P、hCG、VEGF水平均低于对照组,IL-2水平高于对照组(均P<0.05).Pearson相关分析显示,流产组血清、绒毛和蜕膜miR-129-5p表达水平与血清P、hCG、VEGF均呈正相关,与IL-2水平呈负相关(均P<0.05).受试者工作特征曲线分析显示,血清、绒毛、蜕膜miR-129-5p诊断反复不明原因自然流产的曲线下面积分别为0.820、0.912、0.856,截断值分别为0.60、0.83、0.72,敏感度分别为74.8%、81.0%、71.6%,特异度分别为81.2%、89.6%、91.7%.结论:反复不明原因自然流产患者血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平均异常降低,且与炎症反应、抑制血管生成指标相关,对诊断反复不明原因自然流产有一定临床价值.

摘要： 目的探讨早孕绒毛及蜕膜组织中白细胞介素6(IL-6)对吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响。方法收集行人工流产终止妊娠的37例正常早孕妇女的绒毛及蜕膜组织,用Western blot法检测两种组织中IDO及信号转导及转录激活因子-1(STAT1)蛋白的表达;在早孕绒毛、蜕膜组织中加入不同浓度(0、50×10-6及100×10-6 mg/L)的IL-6培养24 h,检测两种组织中IDO、蛋白质酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)、蛋白质酪氨酸磷酸酶-2(SHP-2)及STAT1蛋白的表达。结果早孕绒毛及蜕膜组织中均检测到IDO和STAT1蛋白的表达;在培养的正常早孕绒毛和蜕膜组织中,IL-6能上调IDO、SHP-1、SHP-2及STAT1蛋白的表达,且IL-6浓度与IDO、SHP-1、SHP-2及STAT1蛋白的表达呈正相关(P<0.05)。结论IL-6的浓度能影响体外培养的早孕绒毛及蜕膜组织中IDO蛋白的表达。

摘要： 目的 探讨早孕期蜕膜免疫细胞谱变化及稽留流产对妊娠免疫细胞谱的影响.方法 选取2017年9月至2018年9月深圳中山泌尿外科医院收治的行人工流产的正常早孕患者(人工流产组,n=34),行清宫术的稽留流产患者(稽留流产组,n=17)及同期于本院IVF助孕成功的正常妇女(正常内膜组,n=27)作为研究对象.运用免疫组化及数字化分析系统定量检测正常妇女子宫内膜及流产组蜕膜组织中各免疫细胞的检测阳性率.结果 早孕期妊娠前后的免疫细胞谱有如下改变:妊娠早期人工流产组蜕膜CD56+自然杀伤(NK)细胞、CD68+巨噬细胞、CD83+成熟树突状细胞数均显著高于正常内膜组(P＜0.001),而CD8+T细胞、Foxp3+调节性T(Treg)细胞及CD1a+未成熟树突状细胞在两组之间则无显著差异(P＞0.05).在不良妊娠结局稽留流产组患者蜕膜组织中CD68+巨噬细胞、CD8+T细胞及Foxp3+调节性T(Treg)细胞数均显著高于人工流产组(P＜0.05),而CD56+自然杀伤(NK)细胞、CD83+成熟树突状细胞及CD1a+未成熟树突状细胞与人工流产组相比无显著差异(P＞0.05).结论 早孕期蜕膜中NK细胞、巨噬细胞及成熟树突状细胞的适度增加有利于母胎免疫耐受的形成,但异常高表达的蜕膜巨噬细胞、CD8+T细胞及Foxp3+Treg细胞可能与不良妊娠结局有关.

摘要： 目的 检测妊娠早期绒毛及蜕膜组织中Storkhead box1 (STOX1) mRNA和蛋白表达.方法 绒毛和蜕膜组织来自60例不同孕龄的健康孕妇(6～11孕周),按孕周分为6组,每组10例,分别采用免疫组织化学法、逆转录聚合酶链反应法和Western blotting法检测STOX1的定位、mRNA及蛋白表达水平.结果 在妊娠早期各孕周绒毛和蜕膜组织中均可检测到STOX1的表达.在绒毛滋养层,mRNA表达在孕6周时最低,随孕周增加表达逐渐上升,孕11周最高,各相邻孕周间差异无统计学意义(P＞0.05),但间隔孕周之间差异有统计学意义(P＜0.05),蛋白表达与mRNA表达趋势相似.蜕膜组织中,mRNA与蛋白均稳定表达,各孕周间无明显差异.结论 STOX1在妊娠早期绒毛和蜕膜层表达不同,提示其可能参与了正常妊娠早期滋养层的发育和子宫内膜蜕膜化的调控.

摘要： 核编码的甘氨酰-tRNA合成酶(Glycyl-tRNA Synthetase,GlyRS)是细胞质和线粒体蛋白质翻译所必需的,GlyRS除了在蛋白翻译中的作用外,它还参与基因转录、炎症和细胞增殖等其他生物学过程.本研究从mRNA水平和蛋白水平检测了GlyRS在小鼠早期妊娠1～8 d模型、人工诱导蜕膜化模型和体外诱导人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中的表达规律.结果表明:GlyRS mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠1～4 d的腔上皮和腺上皮中表达,在小鼠早期妊娠5～8 d主要在胚胎和蜕膜区表达;随着蜕膜化程度增加,表达量逐渐增加;在人工诱导蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA和蛋白表达情况类似,表达量均明显高于对照组.在体外诱导的人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA表达量随着诱导天数的增加而增加,均显著高于对照组.以上结果表明GlyRS参与小鼠早期妊娠及子宫蜕膜化的过程.

摘要： 目的 探讨BUB3及Bub1相关蛋白(BubR1)在复发性流产(RM)患者绒毛及蜕膜组织中的表达及其与RM的关系.方法 选取2016年3月～2018年3月于广州市花都区人民医院就诊的50例稽留流产孕妇作为病例组,另选取同期50例正常人工流产妇女作为对照组.收集受试者的年龄、体重指数(BMI)、孕次、产次、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等一般资料;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和蛋白免疫印迹(WB)法检测胚胎绒毛组织(VT)、蜕膜组织(DT)中BUB3及BubR1 mRNA和蛋白水平;采用Logistic回归分析RM发生的影响因素.结果 两组的年龄、BMI、产次、TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);病例组的VT、DT中BUB3及BubR1 mRNA和蛋白表达水平低于对照组,孕次多于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).多因素分析结果显示,孕次(β=0.461,OR=1.586,95％CI=1.253～2.007)、BUB3 mRNA(β=0.710,OR=2.035,95％CI=1.602～2.585)、BubR1 mRNA(β=1.304,OR=3.685,95％CI=2.884～4.708)为发生RM的独立危险因素(P<0.05).结论 BUB3及BubR1 mRNA和蛋白水平在RM患者VT、DT中均降低,BUB3及BubR1 mRNA是RM发生的独立危险因素,可能作为RM潜在的诊断指标.

摘要： 目的 探讨中药复方宫清颗粒诱导药流人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡的作用机制，寻找宫清颗粒防治药物流产后异常子宫出血(简称药流后出血)的作用靶点。方法 将120例受试者随机分为宫清药流组(A组)、茜芷药流组(B组)、单纯药流组(C组)及人流组(D组)，各30例，收集各组绒毛、蜕膜组织，TUNEL法检测细胞凋亡率(AR)，免疫组化法检测Fas、FasL、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达。结果 A组绒毛与蜕膜组织细胞AR、Fas、FasL、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达明显升高，与其它三组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。结论 中药复方宫清颗粒能促进Fas/FasL介导的凋亡信号转导，激活Caspase级联反应，诱导人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡，促进绒毛与蜕膜组织完全排出，进而防治药流后出血。

摘要： 本发明公开了用于治疗肿瘤的壁蜕膜间充质干细胞培养基、共培方法，所述用于治疗肿瘤的壁蜕膜间充质干细胞培养基含有壁蜕膜间充质干细胞和选择培养基，所述壁蜕膜间充质干细胞对多种肿瘤细胞具有归巢作用、抑制增殖作用和调节细胞周期作用。

摘要： 本发明公开一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法，包括以下操作步骤：(1)取正常妊娠第4天小鼠的子宫组织的组织块；(2)将组织块行消化处理后，得到小鼠子宫原代基质细胞的单细胞悬液；(3)将单细胞悬液培养至细胞密度达到75‑85％汇合后，换液，去除杂细胞后，向其中加入诱导培养基，诱导小鼠子宫原代基质细胞发生蜕膜化。本发明提供的一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法，操作简单，可使得分离出的小鼠子宫原代基质细胞具有较高的存活率，同时启动蜕膜化的成功率较高，为研究人员对蜕膜化机制的研究奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种壁蜕膜间充质干细胞的制备方法、复苏方法，其中，所述制备方法包括采用含有体积浓度40～60％Tryple‑EDTA酶和8～12mg/mlⅡ型胶原酶的高糖DMEM培养基作为组织消化液来消化组织块，有利于壁蜕膜间充质干细胞爬出组织进行贴壁生长；采用含有体积浓度8～12％血清替代物、0.5～1mol/ml L‑谷氨酰胺、18～25ng/ml碱性成纤维细胞生长因子、16～22ng/ml表皮生长因子和6～12ng/ml干细胞生长因子的DMEM无血清培养基作为选择培养基来终止消化，以及重悬从壁蜕膜间充质干细胞，有利于提高壁蜕膜间充质干细胞纯度，加速壁蜕膜间充质干细胞生长，实现壁蜕膜间充质干细胞的体外快速扩增。

摘要： 本发明提供一种壁蜕膜亚全能干细胞的制备方法和应用，涉及细胞工程技术领域。本发明的制备方法包括以下步骤：预处理：清洗壁蜕膜组，离心，去除上清液；消化：将壁蜕膜组织剪碎，加入组织消化液进行消化，消化完成分离上清液和沉淀，将沉淀重悬得悬液；所述组织消化液中包括Tryple酶、生理盐水、I型胶原酶和Ⅱ型胶原酶，所述Tryple酶的体积浓度为40～60％，I型胶原酶的质量浓度为0.8～1.2mg/mL，Ⅱ型胶原酶的质量浓度为0.8～1.2mg/mL；分离：向悬液中加入淋巴细胞分离液，离心，分层后分离出单个核细胞，离心，保留沉淀，加入培养液，混匀，即得壁蜕膜亚全能干细胞分离液。本发明可以成功从壁蜕膜组织中提取亚全能干细胞，细胞活性好、分化能力强。

摘要： 本申请公开了从造血干细胞体外诱导扩增蜕膜样自然杀伤细胞的方法，包括：将CD34+造血干细胞在体外进行四个阶段的培养，其中阶段I为CD34+造血干细胞的扩增，阶段II为诱导CD34+造血干细胞向NK细胞前体的分化，阶段III为诱导NK细胞前体向NK细胞的分化，阶段IV为诱导NK细胞扩增及成熟，收集CD3‑CD56+NK细胞，从而得到蜕膜样自然杀伤细胞，其中所述培养以含有细胞因子组合I的新鲜基础培养基开始，在培养的阶段I、II、III和IV分别使用含有细胞因子组合I、组合II、组合III和组合IV的新鲜基础培养基进行半量换液培养，其中所述细胞因子组合I为Flt3L和SCF；组合II为Flt3L，SCF和IL‑15；组合III为Flt3L，SCF和IL‑15；组合IV为IL‑15。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人蜕膜MDSCs的分离方法，该分离方法包括步骤：蜕膜组织采集、蜕膜组织进一步清洗、剪碎、消化、终止消化、过滤、单个核细胞获得、细胞贴壁、收集未贴壁细胞、MDSCs分离和流式检测。本发明使用较温和的Ⅳ型胶原酶进行原代消化分离，与胰酶相比，胶原酶仅对细胞间质有消化作用，避免了胰酶消化时对细胞膜蛋白的破坏作用；消化过程中加入I型DNA酶防止DNA导致的细胞凝集，且对细胞无损伤；通过使用CD33磁珠分选获得高纯度的CD33+MDSCs，与流式分选相比，磁珠分选可以在短时间内获得大量高纯度的细胞，操作简单，避免长时间操作对细胞活性的影响和污染几率的增加。

摘要： 本发明公开了一种分离蜕膜低密度中性粒细胞及正常密度中性粒细胞的方法，首先设计一系列不同浓度梯度的percoll悬液初步将正常密度中性粒细胞及低密度中性粒细胞分离开后，再结合磁珠分选以达到纯化正常密度中性粒细胞和低密度中性粒细胞目的，本发明首次在蜕膜组织中进行不同密度中性粒细胞的分离，快速将蜕膜中的低密度中性粒细胞和正常密度中性粒细胞进行分离纯化，便于研究不同亚群中性粒细胞在早期胚胎发育中的作用。

摘要： 本发明公开了一种制备蜕膜间充质干细胞的方法，涉及蜕膜间充质干细胞制备技术领域，包括以下步骤：(1)、采集；(2)、清洗；(3)、分离；(4)、病毒检测；(5)、消化；(6)、培养；(7)、扩增传代；(8)、收集测活；(9)、冻存。该制备蜕膜间充质干细胞的方法在采集母体胎盘前通过采集母体血液并进行传染病毒检测的方式，便于规避生产存在传染病的蜕膜间充质干细胞，通过消化、培养、扩增传代和收集冻存的方式便于大量培养蜕膜间充质干细胞，并且采用台盼蓝染色的方式便于检测沉淀物中存活的间充质干细胞，以便于及时分离除去失活细胞，并且还可以采用细胞快速分析仪检测法检测并确保蜕膜间充质干细胞的细胞质量。

摘要： 本实用新型涉及生物设备技术领域，尤其为一种分离胎盘壁蜕膜和胎盘绒毛膜的分离装置，包括操作底座，所述操作底座的上侧设置有分离罐，所述分离罐的内部中间处设置有筛网筒，所述分离罐的内部并且位于筛网筒的外侧套接有升降板，所述分离罐的顶部中间处设置有连接安装板，所述连接安装板的左右两侧设置有罐盖，所述筛网筒的内部设置有搅拌粉碎组件，所述分离罐的左右两侧并且与升降板对应设置有升降调节组件，通过设置的主动锥齿轮能够跟随搅拌轴转动，主动锥齿轮与从动锥齿轮啮合连接，从而能够带动连接轴和第二粉碎刀片转动从两侧对胎盘组织进行切割粉碎，搅拌轴动也会带动第一粉碎刀片转动，从而能够使胎盘组织粉碎的更彻底。

摘要： 本实用新型涉及一种分离胎盘壁蜕膜和胎盘绒毛膜的分离装置，包括：外罩，内部设有第一容腔；筛体，转动地设于所述容腔内，并且所述筛体的底部高于所述第一容腔的底壁，所述筛体内设有第二容腔，所述第二容腔的侧壁具有筛孔；搅拌器，设于所述筛体内。上述的分离胎盘壁蜕膜和胎盘绒毛膜的分离装置通过将胎盘组织放入筛体的第二容腔内，在筛体和搅拌器旋转时，搅拌器可以将胎盘组织进行搅拌切碎，筛体转动时，利用离心力将壁蜕膜从筛体的筛孔中甩出，由于绒毛膜的厚度较大，绒毛膜不会被甩出筛体外，从而可以方便、快速地将胎盘壁蜕膜和胎盘绒毛膜分离。