肺癌A549细胞

摘要： 目的探讨丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinases1,MAPK1)基因沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法利用CRISPR/CAS9基因编辑技术构建MAPK1沉默细胞系,采用Real-time PCR和Western blot检测沉默MAPK1后mRNA和蛋白表达水平。将MAPK1沉默载体与空载体转染至肺癌A549细胞中,并分为MAPK1沉默组、空载体组和空白组。对各组的肺癌A549细胞进行培养,利用CCK-8实验检测细胞增殖能力;平板集落形成实验检测细胞集落形成能力;平板划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况以及Western blot实验检测MAPK1沉默后ERK/mTOR通路蛋白表达。结果Real-time PCR和Western blot结果表明成功构建肺癌A549细胞MAPK1沉默细胞系。MAPK1沉默使肺癌A549细胞增殖能力减弱(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.05),细胞凋亡率增加且细胞周期被阻滞于S期(P<0.05)。MAPK1沉默后,ERK/mTOR通路信号分子mTOR、PRAS40、EIF4EBP1、MEK2的总蛋白和磷酸化蛋白表达均降低(P均<0.05)。结论沉默MAPK1可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期。

摘要： 目的探讨利多卡因对肺癌A549细胞增殖、侵袭及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)信号通路的影响。方法设肺癌A549细胞组,5-氟尿嘧啶组(50μmol/L),利多卡因低剂量组(100μmol/L)、高剂量组(200μmol/L),以上各组每组设6个平行孔,培养72 h。试验结束后,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞增殖水平,transwell小室测定细胞侵袭水平,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法测定细胞AMPK、mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白,以及磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化4EBP1(p-4EBP1)蛋白表达水平。结果与肺癌A549细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、利多卡因低剂量组、利多卡因高剂量组吸光度值、存活率及mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白、p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白表达水平降低,穿膜数减少(P<0.05),AMPK mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与5-氟尿嘧啶组比较,利多卡因低、高剂量组吸光度值、存活率及mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白、p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白表达水平升高,穿膜数增加(P<0.05),AMPK mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与利多卡因低剂量组比较,利多卡因高剂量组吸光度值、存活率及mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白、p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白表达水平降低,穿膜数减少(P<0.05),AMPK mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论利多卡因对肺癌A549细胞增殖、侵袭具有明显抑制作用,其机制可能与利多卡因通过激活AMPK表达进而抑制mTOR/4EBP1信号通路的激活有关。

摘要： 目的探讨丙泊酚通过核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响。方法将肺癌A549细胞随机分为空白对照组、低浓度丙泊酚组(30μmol/L)、中浓度丙泊酚组(60μmol/L)、高浓度丙泊酚组(120μmol/L)、高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组(120μmol/L+100 nmol/L);各组进行相应处理后。四甲基偶氮唑蓝法检测肺癌A549细胞增殖;酶联免疫吸附法检测肺癌A549细胞上清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;Hoechst/碘化丙啶(PI)双重染色检测肺癌A549细胞焦亡;荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测肺癌A549细胞增殖[原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)]、焦亡[消皮素D-N端(GSDM D-N)、IL-1β]及NLRP3、ASC、Caspase-1信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。结果空白对照组细胞呈蓝色荧光;低、中、高浓度丙泊酚组红色荧光逐渐增加;与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组红色荧光较少;表明丙泊酚可促进肺癌A549细胞焦亡,NLRP3抑制剂可反转高浓度丙泊酚的作用效果。与空白对照组相比,低、中、高浓度丙泊酚组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平依次降低,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平依次升高(P<0.05);与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平升高,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论丙泊酚可能通过激活NLRP3/ASC/Caspase-1通路来抑制肺癌A549细胞增殖,促进细胞焦亡。

摘要： 目的:探讨壮药扶正方含药血清对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)与肺癌A549细胞共培养体系肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为影响及可能的作用机制。方法:采用氟波酯(PMA)联合白细胞介素-4、白细胞介素-13诱导人急性白血病单核细胞株(THP-1)建立TAMs体外模型,实时定量PCR及酶联免疫吸附试验法分析含药血清(低、中、高剂量组)及药物处理后24、48、72 h对TAMs表型调节;采用共培养体系,以肺癌A549细胞为研究对象,分别采用MTT法、实时细胞分析技术(RTCA)、Transwell法检测不同条件下A549细胞增殖、迁移及侵袭情况。结果:壮药扶正方含药血清能显著上调TMAs中M1型标志物白细胞介素-12、诱导型一氧化氮合酶表达水平,下调M2型标志物白细胞介素-10、CD206表达水平;与空白对照组比较,共培养组A549细胞增殖明显增加,细胞迁移及侵袭能力均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与共培养组比较,壮药扶正方含药血清低、中、高剂量组A549细胞增殖、迁移和侵袭作用受抑制,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:壮药扶正方含药血清在共培养体系中能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移及侵袭作用,机制可能与其调节肿瘤微环境TAMs表型有关。

摘要： 目的探讨金丝桃苷对肺癌A549细胞增殖、侵袭、凋亡及丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法将肺癌A549细胞分成对照组、顺铂组(1μg/mL)、金丝桃苷低浓度组(50μg/mL)、金丝桃苷高浓度组(100μg/mL);对照组正常培养肺癌A549细胞不进行任何干预,顺铂组、金丝桃苷低浓度组、金丝桃苷高浓度组分别给予培养肺癌A549细胞对应浓度的药物。培养48h后,细胞计数试剂盒-8、Transwell小室、流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭、凋亡能力;荧光定量PCR、蛋白印迹法分别检测MEK、ERK信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。结果与对照组比较,顺铂组、金丝桃苷低、高浓度组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高,侵袭细胞数目、MEK、ERK mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与顺铂组比较,金丝桃苷低、高浓度组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率降低,侵袭细胞数目、MEK、ERK mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与金丝桃苷低浓度组比较,金丝桃苷高浓度组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高,侵袭细胞数目、MEK、ERK mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论金丝桃苷能明显抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭,促进其凋亡;其机制可能与金丝桃苷抑制MEK/ERK信号通路的激活有关。

摘要： 针对当前电化学疗法中使用的传统化疗药物对人体正常组织毒副作用较大,中药成分对人体毒副作用小但作用效果弱等问题,选用中药单体成分二十碳五烯酸(EPA)作为抗癌药物,探究微秒脉冲电场对EPA细胞毒性效果的促进作用,以及两者联合作用对肺癌A-549细胞的毒性效果。首先,研究不同场强的脉冲电场作用下细胞膜通透性变化情况,以及不同的药物浓度(50~1 000μmol/L)、电场强度(750~2 000 V/cm)对A-549细胞活性的影响,采用PI染色法检测细胞膜通透性、CCK-8法检测细胞活性;其次,根据检测结果筛选用于后续实验的电场强度区间为1 000~1 500 V/cm, EPA浓度为100~400μmol/L;最后,设置电场联合药物组为实验组,空白对照组、纯药物组、纯电组为对照组,进行了脉冲电场联合EPA对A-549细胞毒性效果的实验研究,并且对脉冲电场联合EPA共同作用后培养24 h(48 h)时A-549细胞活性的变化情况进行了对比分析。研究表明:微秒脉冲电场能够显著增强EPA对A-549细胞的毒性效果,并且EPA浓度为300μmol/L时,脉冲电场和EPA的联合作用效果最佳。微秒脉冲电场对EPA细胞毒性的增强效果可达40%以上,为后续中药成分干预癌症的治疗提供了重要的促进手段。

摘要： 目的 研究SOCS7对肺癌A549细胞增殖的影响及可能的作用机制.方法 在肺癌A549细胞中分别采取过表达SOCS7和干扰SOCS7的方法,以细胞计数法(CCK-8)检测各实验组细胞的增殖情况;以Transwell方法检测各实验组细胞的迁移能力;以蛋白质印迹法(Western blot)检测各实验组凋亡相关基因的蛋白表达量情况;以ELISA方法检测各实验组免疫相关基因的蛋白表达情况.结果 干扰SOCS7时,转染96 h后,与对照组和转染controlsiRNA组相比,肺癌A549细胞的增殖力明显降低,迁移能力明显降低.Western blot实验结果显示细胞中Bcl-2表达量显著降低,Cleaved Caspase3表达量升高;干扰SOCS7时,转染12 h后,与对照组和转染controlsiRNA组对比,肺癌A549细胞中人肿瘤坏死因子α(Tnf-α)和IL-1表达量显著升高,IL-6无显著性变化,在转染24 h后,与对照组和转染空载体组对比,IL-6表达量显著升高.结论 干扰SOCS7能够抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,降低Bcl-2蛋白表达量,提高Caspase-3蛋白表达量,Tnf-α和IL-1表达量也显著升高,SOCS7可能通过炎症反应和Caspase-3途径来调节肺癌A549细胞的生长.

摘要： 目的 探讨苏芬太尼对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及对PI3K/Akt信号通路的调控作用.方法 采用不同浓度的苏芬太尼干预肺癌A549细胞,CCK-8法检测苏芬太尼对A549细胞活力的影响,流式细胞术检测苏芬太尼对A549细胞凋亡的影响,Transwell实验检测苏芬太尼对A549细胞迁移和侵袭能力的影响,Western blot检测A549细胞中Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9及PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达水平.结果 CCK 8实验结果显示,苏芬太尼能够显著抑制A549细胞活力,且与处理浓度呈依赖关系;流式细胞术检测结果显示,苏芬太尼能够诱导A549细胞凋亡;Transwell实验结果显示,苏芬太尼能够抑制A549细胞迁移和侵袭能力;Western blot结果显示,苏芬太尼能够上调A549细胞中Bax的表达,下调Bcb2、MMP 2、MMP-9和p-PI3K和p-Akt蛋白的表达.结论 苏芬太尼可能通过阻断PI3K/Akt信号通路抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡.

摘要： 目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p对肺癌A549细胞增殖、侵袭的影响.方法 体外培养肺癌A549细胞,分为对照组、pcDNA组(转染pcDNA)、CDKN2B-AS1组(转染pcDNA CDKN2B-AS1)和双转染组(转染pcDNA CDKN2B-AS1、pcDNA miR-98-5p).检测A549细胞中CD-KN2B-AS1、miR-98-5p表达及PCNA、MMP-9蛋白表达,检测A549细胞活性、克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数.结果 与pcDNA组相比,CDKN2B-AS1组A549细胞中CDKN2B-AS1表达水平[(2.14±0.14) vs (1.03±0.10)]、各时间点的细胞OD值、细胞克隆数[(314.60±18.13)个比(220.08±12.46)个]、克隆形成率[(85.81±3.06)％ vs (60.03±2.85)％]、侵袭细胞数[(233.30±18.98)个vs (140.84±12.30)个]及细胞中PCNA[(0.78±0.08) vs (0.48±0.07)]、MMP-9蛋白表达[(0.75±0.06) vs (0.38±0.06)]水平显著升高(均P＜0.05),miR-98-5p表达水平[(0.23±0.03)vs(0.99±0.09)]显著降低(P＜0.05);与CDKN2B-AS1组相比,双转染组A549细胞中CD-KN2B-AS1表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),miR-98-5p表达水平显著升高(P＜0.05),各时间点的细胞OD值、细胞克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数及细胞中PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05).结论 lncRNA CDKN2B-AS1通过靶向抑制miR-98-5p表达对肺癌A549细胞增殖、侵袭具有促进作用.

摘要： 目的 探讨转染Let-7a-3p对肺癌细胞能量代谢及凋亡影响及机制.方法 根据肺癌A549细胞处理不同分为A549组、Let-7a-3p组(转染Let-7a-3p mimics)、阴性对照组(negative control mimic,NC)和未转染对照(non transfected,NT)组.采用RT-qPCR法检测各组细胞Let-7a-3p的水平,CCK8法检测细胞活力,海马细胞能量代谢实时测定仪XF分析测定氧耗率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR),流失细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Let-7a-3p、Bcl-2、Caspase-3、Ras及AMPK蛋白的表达.结果 Let-7a-3p组Let-7a-3p表达水平明显上调(P0.05).CCK-8法检测结果显示,与A549及NC组比较,Let-7a-3p组活细胞相对数明显减少(P<0.01).能量代谢实时测定仪XF分析结果显示,与A549、NC组比较,转染Let-7a-3p后A549细胞的氧耗率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)减少(P<0.01).流失细胞术检测结果显示,与A549组比较,Let-7a-3p组细胞凋亡率增多(P<0.01).Western blot检测结果显示,过表达Let-7a-3p可以使A549细胞中Caspase-3与AMPK蛋白上调(P<0.01),而Bcl-2与Ras蛋白下调(P<0.01).结论 Let-7a-3p模拟物可以抑制肺癌细胞A549的活性和能量代谢并促进其凋亡.Let-7a-3p模拟物作用于癌细胞的机制可能是通过上调AMPK及Caspase-3蛋白水平,下调Bcl-2与Ras蛋白水平,从而触发能量代谢和凋亡通路,降低MMP,从而抑制ATP的产生.

摘要： 本公开涉及用于从包含生物标志物的生物标志物组与人类诊断肺癌的方法。提供多个用于诊断肺癌的方法，上述方法包括从样本中检测选自表2中所提供的多个生物标志物中的至少一种生物标志物的至少一种生物标志物值的步骤，基于至少一种上述生物标志物值，上述人类被分类为具有非小细胞肺癌的亚洲人，或确定具有肺癌的可能性。

摘要： 本发明提供一种能快速预测和提高非小细胞肺癌细胞对表皮细胞生长因子受体抑制剂敏感性的方法，通过检测细胞UPR中PERK通路的激活水平，即eIF2a蛋白的磷酸化程度和ATF4蛋白的表达水平来预测NSCLC对EGFR抑制剂的敏感性，通过抑制UPR中PERK通路的激活水平来提升肺癌细胞对EGFR抑制剂的敏感性。

摘要： 本发明提供了一种制备干细胞样肺癌细胞的方法，其中，所述方法包括鉴定待测肺癌细胞标本中是否存在干细胞样肺癌细胞的步骤：所述步骤包括检测所述待测肺癌细胞标本中是否特异表达以下差异蛋白的至少两种：蛋白激酶Ciota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1或乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2。本发明还提供了制备所述干细胞样肺癌细胞抗原负载该抗原树突状细胞的方法以及通过所述方法获得的树突细胞疫苗。通过本发明的方法，仅仅通过检测以上所述蛋白的至少两种，就能够高效准确地得到干细胞样肺癌细胞，基于所述方法所得干细胞样肺癌细胞纯度高且容易富集。

摘要： 本发明属于医药学技术领域，公开了一种小细胞肺癌数据信息检测中小细胞肺癌诊断模型构建方法，获取小细胞肺癌患者的血液样本，并对所述血液样本进行离心处理，得到血清样品于‑80°C保存；将血清样品于4°C下缓慢解冻，并对解冻后的血清样品进行代谢物提取；同时将代谢物提取样本利用超高效液相色谱HILIC柱分离，并进行进样分析；通过统计检验对分析数据进行预筛选，采用集成学习方法计算每种代谢物的权重值，并根据权重值选择候选生物标志物；对筛选得到的标志物进行验证，并结合代谢物表达水平分析结果，确定诊断生物标志物；得到基于代谢物的小细胞肺癌诊断模型。本发明成功构建了基于代谢物的小细胞肺癌诊断模型。

摘要： 本公开涉及用于从包含生物标志物的生物标志物组与人类诊断肺癌的方法。提供多个用于诊断肺癌的方法，上述方法包括从样本中检测选自表2中所提供的多个生物标志物中的至少一种生物标志物的至少一种生物标志物值的步骤，基于至少一种上述生物标志物值，上述人类被分类为具有非小细胞肺癌的亚洲人，或确定具有肺癌的可能性。

摘要： 一种治疗哺乳动物非小细胞肺癌和/或小细胞肺癌的方法，该方法包括向患者施用药学可接受量的式(1)噻吩并三唑并二氮杂

摘要： 本发明涉及川楝素在制备抑制肺癌细胞增殖和诱导肺癌细胞凋亡药物中的应用。本发明川楝素在制备抑制肺癌细胞增殖和诱导肺癌细胞凋亡药物中的应用的有效浓度为10～70μmol/L。本发明采用不同浓度的川楝素作用A549细胞48h后，MTT法检测细胞活性；光学显微镜、荧光显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡情况。Real？Time？PCR和Western？blot分别检测了Bax、Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平。实验结果充分证明了川楝素能够通过上调Bax、Fas、Cycs、Caspase3基因，下调Bcl-2基因诱导肺癌A549细胞凋亡和抑制细胞增殖。且因川楝素具有低毒环保的特性，可以考虑用来作为化疗辅助药物，从而为改善肺癌等癌症的临床治疗方法提供新依据。

摘要： 本发明属于医药技术领域，涉及一种评估小细胞肺癌疾病的新生物标志物，具体涉及区分小细胞肺癌细胞与正常肺部细胞的生物标志物。所述的标志物通过如下方法获得建立了一种测定肺成纤维细胞(MRC‑5)内鸟氨酸、1,3‑丙二胺、尸胺、腐胺、乙酰化腐胺、精脒、乙酰化精脒、二乙酰化精脒、精胺、乙酰化精胺、二乙酰化精胺、酪氨酸、多巴胺、去甲肾上腺素、色氨酸和组胺等17种生物胺含量的HILIC‑UHPLC‑MS/MS方法。应用已建立方法测定了人肺成纤维细胞(MRC‑5)与小细胞肺癌细胞(NCI‑H446)中17种生物胺的含量，可实现对肺癌细胞与正常肺细胞之间的区分，并通过独立样本t‑检验和ROC分析筛选出了13种肺腺癌标记物。该方法能够简单快速地同时测定肺成纤维细胞中的17种生物胺的含量。

摘要： 本发明属于医药技术领域，建立了一种测定肺成纤维细胞(MRC‑5)内鸟氨酸、1,3‑丙二胺、尸胺、腐胺、乙酰化腐胺、精脒、乙酰化精脒、二乙酰化精脒、精胺、乙酰化精胺、二乙酰化精胺、酪氨酸、多巴胺、去甲肾上腺素、色氨酸和组胺等17种生物胺含量的HILIC‑UHPLC‑MS/MS方法。应用已建立方法测定了人肺成纤维细胞(MRC‑5)与小细胞肺癌细胞(NCI‑H446)中17种生物胺的含量，可实现对肺癌细胞与正常肺细胞之间的区分，并通过独立样本t‑检验和ROC分析筛选出了13种肺腺癌标记物。该方法能够简单快速地同时测定肺成纤维细胞中的17种生物胺的含量。

摘要： 本发明提供一种能快速预测和提高非小细胞肺癌细胞对表皮细胞生长因子受体抑制剂敏感性的方法，通过检测细胞UPR中PERK通路的激活水平，即eIF2a蛋白的磷酸化程度和ATF4蛋白的表达水平来预测NSCLC对EGFR抑制剂的敏感性，通过抑制UPR中PERK通路的激活水平来提升肺癌细胞对EGFR抑制剂的敏感性。