CCK-8法

摘要： 以3-O-乙酰基-11-酮-β-乳香酸(AKBA)为原料,经过氯化、取代反应,合成了8个新型的AKBA酰胺类衍生物(S137、S151、S179、S184、S443、S634、S667和S673),其结构经^(1)H NMR和MS(ESI)表征。采用CCK8法测试了目标化合物对人原髓细胞白血病细胞(HL-60)、人结肠癌细胞(HCT116)和非小细胞肺癌细胞(A549)的体外抗肿瘤活性。结果表明:除S184和S443外,S137、S151、S179、S634、S667、S673对3种细胞株的活性均有一定的抑制作用,其中S137对HL-60和A549的抑制效果较好,IC_(50)分别为1.781和1.763μM,优于AKBA(IC_(50)=16.160和10.900μM);S151对HL-60抑制效果最好,IC_(50)为1.255μM,优于AKBA(IC_(50)=16.160μM);S634对HCT116的抑制效果最好,IC_(50)为1.193μM,优于AKBA(IC_(50)=13.020μM)。

摘要： 目的:研究不同浓度康莱特注射液(KLT)对人伯基特淋巴瘤Raji细胞株的增殖抑制与凋亡作用,探讨其防治恶性肿瘤的作用机制。方法:应用流式细胞术、CCK-8法等方法观察12、24、48 h不同时间点KLT对Raji细胞生长的影响。结果:流式细胞术检测发现,KLT浓度为1、10、50、100、200μL/mL作用12 h可引起Raji细胞凋亡率-0.95%、50.93%、100%、44.39%、-9.94%;CCK-8检测发现,KLT浓度为1、10、50μL/mL作用12 h可引起Raji细胞生长抑制率为55.41%、25.15%、39.94%,100、200μL/mL可促进细胞增殖率为122.62%、146.81%;KLT作用24 h后可引起Raji细胞生长抑制率为32.25%、26.24%、31.61%、129.49%、160.09%;KLT作用48 h后可引起Raji细胞生长抑制率为91.65%、81.47%、33.74%、103.75%、50.97%。结论:KLT对Raji细胞株的生长具有促进、抑制双向调节作用,并与作用时间及浓度密切相关。

摘要： 目的探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点。方法用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间。结果CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×10^(4)/孔和0.25×10^(4)/孔。CCK-8法与MTT法在BMSCs接种密度分别高于0.25×10^(4)/孔和0.5×10^(4)/孔时,两种方法检测所得OD值均提早进入平台期,易出现假S型增长曲线。而当密度分别低于0.05×10^(4)/孔和0.1×10^(4)/孔时,细胞增加缓慢,难以形成S型增长曲线,不能反映出BMSCs的增殖特性。与CCK-8法相比较,在细胞密度低于0.1×10^(4)/孔或高于2×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量无明显变化,差异无统计学意义。而细胞密度为0.25×10^(4)/孔至1×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MTT法更适用于左归丸含药血清干预BMSCs增殖和分化的研究。

摘要： 目的 研究北柴胡Bupleurum chinense DC.地上部分苯丙素及其抗细胞增殖活性。方法 采用溶剂萃取、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备型HPLC对北柴胡地上部分醇提物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用CCK-8法,研究各化合物抗MGC-803胃癌细胞增殖活性。结果 从中分离得到35种苯丙素,一些化合物对MGC-803细胞增殖具有抑制作用。结论 化合物8~9、11、13~16、18~19、21、23~24、32~35为首次从伞形科植物中分离得到,化合物4、7、10、12、20、27为首次从柴胡属植物中分离得到,化合物1、3、6、22、29、31为首次从该植物中分离得到。化合物2~3、6、9、11、16、19、21、23~24、26~30、32具有抗细胞增殖活性。

摘要： 目的:探讨人类脐带间充质干细胞来源外泌体对软骨细胞衰老的作用.方法:取分离培养获得的软骨细胞常规分组,采用不同浓度IL-1β进行干预,24h诱导培养后采用β-半乳糖苷酶染色法完成衰老测定;采用CCK-8法测定细胞存活率.结果:8组细胞进行24h培养后均伴有不同程度衰老,空白对照组细胞衰老最少(染色率为4.93％),10ng/ml IL-1β组衰老细胞数量较多,染色下多为蓝绿色(染色率为67.48％);10ng/ml IL-1β组细胞培养24h存活率低于0.1ng/ml IL-1β组、1ng/ml IL-1β组、5ng/ml IL-1β组、20ng/ml IL-1β组、40ng/ml IL-1β组、80ng/ml IL-1β组(P<0.05).结论:成功分离、培养人类脐带间充质干细胞及鼠软骨细胞,并完成细胞的鉴定;确定10ng/mLIL-1β诱导能促进软骨细胞衰老和凋亡,加剧OA的发生与发展.

摘要： 多脂鳞伞是一种较为珍贵的药食用真菌.对其化学成分及体外抗肿瘤作用进行了研究.通过U PLC-QTOF-MS法、电喷雾离子源(ESI)及负离子全扫描模式测定了人工栽培多脂鳞伞的化学成分组成;体外培养HepG-2、A549、Hela及MCF-7,用不同质量浓度多脂鳞伞乙醇提物处理细胞,应用CCK-8法及流式细胞术进行细胞毒性测试,并应用流式细胞术选择HepG-2细胞系以进一步评估其对HepG-2细胞凋亡分析.结果 表明:经UPLC-QTOF-MS分析,从多脂鳞伞子实体分析得到的化学成分与食药用菌成分数据库中的38种成分相吻合,其中棕榈酸与9E,12E-octadecadienoic acid含量最高,甾醇类化合物与多糖类化合物占比较高;多脂鳞伞乙醇提取物对HepG-2细胞毒性最强,其浓度为50μg/mL时凋亡率能够达到(23.71+1.59)％.多脂鳞伞具有多种功能性化学成分,并具有潜在的抗肿瘤应用价值,初步断定其抗肿瘤活性是功能性成分通过诱导细胞凋亡实现的.

摘要： 《细胞生物学研究方法与实验技术》是首都医科大学面向基础医学专业本科生开设的一门理论与实验相结合的课程,《Cell Counting Kit-8法测定贴壁细胞数》是其中的实验课程之一.在本次实验中,针对肝癌细胞系BEL-7402设计不同接种密度、CCK-8孵育浓度和作用时间,通过酶标分析仪检测450 nm处吸光度,然后以细胞密度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制BEL-7402细胞的生长曲线从而明确细胞的增殖情况.笔者在多年的教学实践中通过不断尝试和探索,对本次实验的课程设计,包括实验基本原理、教学目标、实验内容和教学程序等做出归纳和总结,旨在为相关教育工作者的教学实践提供参考.

摘要： 以2,4-二氯-5-硝基嘧啶为原料,经多步反应合成了8个羰基蝶啶类衍生物(TM1～TM8),其结构经1 H NMR,13 C NMR和LC-MS(ESI)表征.以Sorafenib、Axitinib与Lenvatinib为阳性对照,选取人肝癌细胞(HepG2)、乳腺癌细胞(MCF7)、人肺腺癌细胞(NCI-H1975)和人非小细胞肺癌细胞(HCC827),采用CCK8法进行体外抗肿瘤活性测试.结果表明:8-环丙基-6-溴-2-吗啉蝶啶-7(8H)-酮(TM1)对NCI-H1975细胞的抑制活性高于Sorafenib和Axitinib,IC50值为3.63μmol·L-1;对HCC827细胞的抑制活性高于Axitinib,IC50值为6.41μmol·L-1;对HepG2和MCF7细胞的抑制活性高于Lenvatinib,IC50值分别为20.96、12.63μmol·L-1.

摘要： 目的 探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对体外培养的毛乳头细胞增殖和迁移的影响.方法 首先,选择10-5 mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L、10-9 mol/L、10-10 mol/L 6个浓度的UⅡ作用于体外培养的大鼠毛乳头细胞48 h,阴性对照组为使用不含UⅡ培养基培养的毛乳头细胞.采用CCK-8法检测毛乳头细胞的增殖活性.其次,采用Transwell实验检测10-6 mol/L和10-7 mol/L的UⅡ对毛乳头细胞体外迁移的影响.同时进行划痕实验,用一次性枪头在铺满90％培养皿底的毛乳头细胞上划痕后,加入含10-6 mol/L UⅡ的DMEM培养基,分别于0 h和24 h测量毛乳头细胞爬行的距离.结果 与阴性对照组相比,UⅡ可促进毛乳头细胞增殖,其中10-6 mol/L UⅡ组增殖率高达(41±4.4)％,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell检测结果显示,10-6 mol/L和10-7 mol/L UⅡ处理组穿过Transwell滤膜的细胞数明显多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验结果显示,阴性对照组及10-6 mol/L UⅡ组24 h创面愈合指数分别为0.18±0.13、0.78±0.09,差异有统计学意义(P<0.05).结论 10-6 mol/L、10-7 mol/L和10-8 mol/L UⅡ可促进大鼠毛乳头细胞增殖,10-6 mol/L和10-7 mol/L UⅡ可促进大鼠毛乳头细胞迁移.

摘要： 本发明涉及八肽胆囊收缩素的制备方法，尤其涉及固相法和液相法相结合合成八肽胆囊收缩素的方法。主要解决现有合成方法存在中间产物分离麻烦、制备周期长且反应中容易产生副产物、成本高、产率较低等技术问题。技术方案为：合成方法包括以下步骤：1）液相法合成L-天冬氨酰-4-叔丁基酯-苯丙酰胺；2）固相法合成八肽胆囊收缩素全保护片段；3）弱酸切割全保护片段；4)液相缩合全保护片段和二肽片段得到全保护八肽胆囊收缩素；5）切割：将全保护八肽胆囊收缩素加入切割液切割，然后加入冰乙醚沉淀得到八肽胆囊收缩素粗品；6）粗品通过高相液相色谱纯化，制备，旋蒸，冻干得到八肽胆囊收缩素精品。本发明用于八肽胆囊收缩素的制备。

摘要： 本发明提供一种CCK8检测试剂盒及其应用，所述CCK8检测试剂盒包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5‑1mg/mL，EDTA 0.1‑0.5mg/mL，盐酸0.02‑0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst‑8 0.08‑0.2mg/mL，1‑Methoxy PMS0.05‑0.3mg/mL，钙盐0.1‑0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。该试剂盒应用在类器官药敏活力检测中，反应时间短，准确性和重复性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。

摘要： 本发明涉及医疗伤骨科训练技术领域，尤其涉及一种简易组配式手摸心会正骨八法教学盲法训练模型，包括骨骼模型和盲袋，所述骨骼模型上设有断裂部，断裂部所在位置的两侧骨骼模型之间通过连接圆柱连接，且相邻的骨骼模型之间设有多个仿肌肉、韧带牵拉作用的弹性橡皮条带，所述盲袋罩于骨骼模型外，且盲袋的内侧设有内衬，并且盲袋上开设有侧口，侧口的外部设有粘条。本发明使用简单，成本低，取材容易，有利于课堂教学及技能考核，有利于医学生及住院医师快速学习理解掌握正骨八法的技能，有利于训练学生手摸心会的诊疗技能。

摘要： 本发明涉及农作物种植技术领域，具体是指水稻大八寸行栽培法及秧箱、平推根式插秧法及分插机构，为了使中、低等肥力地块不靠过量用肥提高产量，有选择地使用大八寸行距进行插秧，通过增加基本苗数提高产量，肥力上等地块使用大八寸行通过增加个体生长空间，利用增加分蘖数、穗粒数和千粒重等优势达到增产，通过加强秧箱中间隔板强度从而增大个体秧箱底板宽度，使在大八寸行距区间变换的插秧机秧箱可以使用同一规格的育秧盘，为了提高现有插秧机插秧质量，提出平推根式插秧法，通过改变插秧轨迹，推动苗根部倾斜切入泥中，并在泥层下平滑运动一段距离，靠原泥层对根的夹持和覆盖使苗插牢，实现不伤苗、不漂苗、可浅插的效果，并生产出适应此方法的分插机构。

摘要： 本发明涉及八肽胆囊收缩素的制备方法，尤其涉及固相法和液相法相结合合成八肽胆囊收缩素的方法。主要解决现有合成方法存在中间产物分离麻烦、制备周期长且反应中容易产生副产物、成本高、产率较低等技术问题。技术方案为：合成方法包括以下步骤：1）液相法合成L-天冬氨酰-4-叔丁基酯-苯丙酰胺；2）固相法合成八肽胆囊收缩素全保护片段；3）弱酸切割全保护片段；4)液相缩合全保护片段和二肽片段得到全保护八肽胆囊收缩素；5）切割：将全保护八肽胆囊收缩素加入切割液切割，然后加入冰乙醚沉淀得到八肽胆囊收缩素粗品；6）粗品通过高相液相色谱纯化，制备，旋蒸，冻干得到八肽胆囊收缩素精品。本发明用于八肽胆囊收缩素的制备。

摘要： 本发明涉及化学医药技术领域，尤其涉及一种多肽及其作为CCK受体激动剂/拮抗剂的应用。实验表明，本发明提供的多肽对CCK受体具有较高的激动活性/拮抗活性。相比多肽CCK4，本发明涉及的一种多肽在体内具有更长的半衰期及疗效持续时间。实验证明本发明涉及的一种多肽对老年鼠、老年记忆缺陷型小鼠、阿尔兹海默症小鼠的空间记忆缺陷有明显改善作用，因此具有很大的应用潜力。

摘要： 本发明涉及一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽及其制备方法和应用。靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽为QGDVVALPA活性肽，氨基酸序列为：Gln‑Gly‑Asp‑Val‑Val‑Ala‑Leu‑Pro‑Ala。与现有技术相比，本发明活性肽既可以采用化学固相合成方法人工合成，也能通过酶解燕麦蛋白分离纯化后获得。本发明活性肽可靶向肠道内分泌细胞膜CaSR激活Gq信号通路，进而提高胞内钙离子浓度而显著促进肠道内分泌细胞分泌CCK；同时该活性肽具有安全无毒副作用、耐受胃肠道消化酶酶解和易吸收等优点。该活性肽非常适合作为一种功能成分或食品基料用于开发具有延缓胃排空、促进饱腹感、减肥功能的食品、保健食品和药品，具有非常重要的应用价值。

摘要： 本实用新型属于离型纸技术领域，具体涉及一种双硅CCK离型纸，包括基材层、耐热层、防静电层、覆膜层、防粘层，包括基材层、耐热层、防静电层、覆膜层、防粘层，所述基材层上开设有降噪孔，所述降噪孔为波纹型，所述基材层上设置有凸块，所述基材层的上下表面均粘接有耐热层，两个所述耐热层上均设置有防静电层，两个所述防静电层上均设置有覆膜层。本实用新型通过在基材层设置有降噪孔，且降噪孔为波纹型，可提高基材层的降噪性，通过在离型纸上设置有凸块，可增加基材层与耐热层的粘接效果，使基材层与耐热层粘接更加牢固，解决了现有的双硅CCK离型纸在使用时降噪性能差，粘接效果不好的问题。

摘要： 本实用新型公开了抗静电CCK离型纸，包括离型纸结构，所述离型纸结构包括一侧设置有耐磨层的保护膜，所述耐磨层朝向保护膜的一面设置有用于起到削弱静电产生效果的静电防护层，所述静电防护层远离保护膜的一侧复合连接于耐磨层，所述静电防护层远离耐磨层的一面设置有用于消除静电作用的静电消除层，所述静电消除层远离保护膜的一面复合于静电防护层，所述静电消除层远离耐磨层的一面设置有用于起到防水作用的防水层，所述防水层远离保护膜的一面复合于静电消除层，所述防水层远离耐磨层的一面设置有用于提升离型纸结构耐高温性能的耐高温层，该抗静电CCK离型纸，结构合理，有助于提升对静电的抵抗效果，实用性强。

摘要： 本实用新型公开了一种高强CCK离型纸用压合装置，涉及到离型纸压合装置领域，包括安装板，安装板的上表面中部固定连接有第一固定框，第一固定框的中部设置有移动框，移动框的中部设置有第一压合辊，第一压合辊的两端分别通过轴承与移动框的两侧内壁活动连接，移动框的两侧面均固定连接有第一滑块，第一固定框的两侧内壁中部均竖直开设有第一滑槽，第一滑块位于第一滑槽的内腔中并与第一滑槽相适配。本实用新型通过在移动框的上表面中部设置有螺纹杆，通过转动螺纹杆上端的转盘，可以调整第一压合辊与第二压合辊之间的压合力度，避免压力过大导致CCK离型纸被压坏或没有充分压合。