副结核分枝杆菌

摘要： 为了解绵羊副结核病的病原学特征,本研究对PCR检测阳性的绵羊肠系膜淋巴结样品开展细菌分离培养,对分离株进行形态观察,结果显示肠系膜淋巴结样品经培养后出现乳白色菌落;对分离菌株进行抗酸染色镜检后确定为抗酸染色阳性杆菌;PCR扩增该菌IS900基因与亚型分型片段,结果显示,IS900基因及亚型分型检测为Ⅱ型(牛型)副结核分枝杆菌(MAP);多位点短重复序列(MLSSR)和分枝杆菌散在分布重复单位-可变数目串联重复序列(MIRU-VNTR)分子分型结果显示,MLSSR和MIRU-VNTR分子分型数字代码分别为7+555555555和32632129.以上结果表明本研究分离的MAP是一种未曾报道的新基因型菌株,为首次在我国分离的绵羊源II型MAP.本研究为进一步开展绵羊MAP病原学和流行病学调查提供了参考资料.

摘要： 羊副结核病又称羊副结核性肠炎,是一种由副结核分枝杆菌引起的羊的慢性传染病。该病的主要特征是肠壁增厚,形成皱褶,顽固性腹泻,逐渐消瘦。在我国呈散发或地方性流行,对养殖业危害较大。

摘要： 本研究通过临床病史、尸体剖检、组织病理学和抗酸染色方法综合诊断了1例绵羊副结核病.其临床症状表现为顽固性腹泻和进行性消瘦,体温无明显变化,病程1年.尸体剖检可见全身脂肪完全萎缩消失,各实质器官萎缩.空肠后段大部分、空肠中段局部、回肠和盲肠肠管明显增粗,肠壁增厚,肠黏膜增厚明显,黏膜形成明显的脑沟回样褶皱.肠壁淋巴结明显肿大.空肠黏膜固有层和黏膜下层增厚,内有大量的上皮样细胞和少量淋巴细胞增生.肝小叶内可见多个上皮样细胞和淋巴细胞增生灶.肠系膜淋巴结皮质可见上皮样细胞增生灶.在经抗酸染色淋巴结触片内的上皮样细胞胞浆内外均见散在和成簇的典型的红色小杆状副结核杆菌.

摘要： 为探索奶牛感染副结核分枝杆菌的粪便排菌情况,本试验提取血清抗体阳性奶牛的粪便DNA,通过Real-time PCR试剂盒进行核酸检测,综合分析不同感染阶段奶牛粪便中副结核分枝杆菌的排逸状况。结果显示,血清抗体阳性牛可通过粪便排放副结核分支杆菌,粪便检出率为5.82%(11/189),其中亚临床期牛的粪便检出率为2.98%(5/168),而临床期牛的粪便检出率为28.57%(6/21),且临床期粪便排放的副结核分支杆菌数量为亚临床期的32倍。鉴于感染副结核的奶牛会通过粪便排放致病菌到环境中,建议牛场标记感染牛,并在出现腹泻症状时淘汰。

摘要： 为开发高效表面展示副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.Paratuberculosis,MAP)抗原的大肠杆菌活载体疫苗,本研究将融合的目的基因map0862-2154c克隆于pET-INP载体,构建了重组质粒pET-INP-6254c.将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达后经western blot及流式细胞术等技术检测目的蛋白的表达及定位,western blot分析结果显示,诱导的全菌以及超声后的上清和沉淀在75 ku处均出现目的条带;流式细胞术结果显示,重组蛋白rMAP62-54c能够表达并展示到细胞表面.将110只BABL/c小鼠分为4组:INP-28a/BL21对照组(n=30)和INP-rMAP62-54c/BL21疫苗组(n=30)(均以5× 105 cfu/只腹腔注射免疫小鼠3次),PBS对照组(n=30)(注射等体积PBS),三免后以5×105 cfu/只MAP标准株K-10感染上述3组小鼠;空白组(n=20)(不做处理).然后通过ELISA、流式细胞术等方法定期检测各组小鼠血清IgG抗体水平、脾脏CD4+ T/CD8+T细胞含量及比值、细胞因子IFN-γ、IL-17A及IL-10水平和小鼠增重率及其肝脏、脾脏和结肠病理损伤评价免疫效果.结果 显示,重组菌INP-rMAP62-54c/BL21免疫组小鼠脾脏CD4+ T/CD8+T细胞比值自免疫2周起即显著高于两个对照组(p＜0.01);抗体检测结果显示,自小鼠免疫4周起,重组菌INP-rMAP62-54c/BL21诱导小鼠产生了高水平的特异性血清IgG抗体,与两个对照组相比差异极显著(p＜0.001);细胞因子检测结果显示,攻毒后疫苗组小鼠血清中IFN-γ、 IL-17与两个对照组相比差异极显著(p＜0.01);攻毒14周疫苗组小鼠血清中IL-10分泌量明显下降,与两个对照组相比差异显著(p＜0.05);随着攻毒时间的延长INP-rMAP62-54c/BL21疫苗组小鼠体质量保持增加趋势,而两个对照组小鼠体质量一直下降;病理组织学结果显示,疫苗组小鼠与空白组小鼠相比脏器未出现明显病变.本研究首次构建了INP-rMAP62-54c/BL21表面展示大肠杆菌,其能显著增强小鼠对MAP的抵抗能力,并且能刺激小鼠机体产生较高的细胞和体液免疫水平,该结果为新型副结核疫苗的开发奠定了基础.

摘要： 羊副结核病作为一种慢性接触性传染病,由副结核分枝杆菌引起,以病羊顽固性腹泻、渐进性消瘦为主要特征,对养羊业危害巨大.本文总结了羊副结核病的病原学、流行病学、临床症状、病理变化和诊断,并提出了综合生物安全措施,以期为养羊场(户)防控本病提供技术参考.

摘要： 副结核病也称为副结核性肠炎,是由副结核分枝杆菌感染而引起的主要以肠道疾病为主的慢性传染病,仅次于牛结核病,临床上主要表现为顽固性腹泻和渐进性消瘦,主要感染反刍动物.世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报的动物疫病,我国农业部将其列为二类动物疫病.近年来,我国副结核病的发病率呈逐渐上升的趋势,因此,也逐渐受到越来越多奶牛养殖场的重视.为进一步了解目前国内奶牛场副结核分枝杆菌的流行特点,分别从威海、枣庄、日照这3个地区各检测一个奶牛场，采样方法为：每个牛场选取产奶量下降、或者顽固性腹泻、或者消瘦的可疑泌乳奶牛30头左右，用于血清学检测,通过对3个地区的抽样调查发现，3个牛场均存在不同程度的感染，副结核抗体阳性率为10.3%~37.5%，说明目前奶牛场还是存在副结核的感染。通过粪便及奶样涂片、组织触片、冰冻切片的抗酸染色，光学显微镜下均可观察到被染成红色的短小的杆菌，单个散在或簇状聚集。通过提取样品的基因组，PCR鉴定为副结核分支杆菌阳性，进一步用双酶切鉴定分型，所分离的副结核分枝杆菌为B型副结核分枝杆菌。

摘要： 为观察重组蛋白MAP0862的免疫活性，揭示该蛋白在副结核病诊断防治中的作用，构建原核表达载体map0862-pET32a(+)。以副结核分枝杆菌P10基因组DNA为模板，经PCR方法扩增副结核分枝杆菌map0862基因片段，将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中。将重组子转化到大肠杆菌BL2l(DE3)，在E.coli中诱导表达带组氨酸标签的map0862-pET32a(+)的融合蛋白。经IPTG诱导表达出约55KD融合蛋白，用副结核阳性血清进行Western blot检测。证明MAP0862重组蛋白具有良好的免疫原性。

摘要： 为探求我区部分地区山羊副结核杆菌之感染情况，我们通过对发病地区的流行病学调查、病羊的临床症状观察、病理解剖、组织切片观察等均可见典型副结核病特征;实验室ELISA检测，结果为副结核病阳性;诊断为该地区发生副结核杆菌病疫情。根除此病，必须采取综合生物安全防控体系措施才行。

摘要： 牛副结核病是由副结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，Johne和Hothinghow于1895年首先发现此病，因此又称为Johne病。本文探讨了牛副结核病的特征、流行概况、带来的经济损失、在防疫上的问题和研究动态以及防疫对策，包括引进牛时做好疫情调查，不从疫区引进牛、加强入场检疫，禁止感染牛入场等。

摘要： 本发明涉及一种具有依赖利福平生长的特异性结核分枝杆菌(其保藏号为：CGMCC NO.1570)。还涉及依赖利福平结核分枝杆菌蛋白，其具有如序列1所示的氨基酸序列，其分子量为43894道尔顿，pI值为5.25。还涉及一种核酸，其具有如序列2所示的核苷酸序列。本发明还涉及采用人工诱导依赖利福平结核分枝杆菌，获得高表达浓度的所述依赖利福平结核分枝杆菌蛋白的方法。涉及包含所述依赖利福平结核分枝杆菌蛋白的组合物、试剂盒以及所述试剂盒在临床诊断依赖利福平结核分枝杆菌结核病、耐多药结核病及其流行病学监测调查中的应用。

摘要： 本发明提供一种用于检测结核分枝杆菌复合群或分枝杆菌属的组合物，其包含：(i)靶向IS6110的引物和/或探针，所述IS6110为结核分枝杆菌复合群-特异性基因；(ii)靶向rpoB的引物和/或探针，所述rpoB为分枝杆菌属-特异性基因；和视需要的(iii)作为内对照的靶向植物源基因的引物和/或探针。当使用本发明的组合物进行多重实时PCR时，可以通过单轮PCR测定检测结核分枝杆菌复合群和分枝杆菌属。因此，本发明实现了具有高可靠性的快速且容易的临床诊断。

摘要： 本发明涉及一种具有依赖利福平生长的特异性结核分枝杆菌(其保藏号为：CGMCC NO.1570)。还涉及依赖利福平结核分枝杆菌蛋白，其具有如序列1所示的氨基酸序列，其分子量为43894道尔顿，pI值为5.25。还涉及一种核酸，其具有如序列2所示的核苷酸序列。本发明还涉及采用人工诱导依赖利福平结核分枝杆菌，获得高表达浓度的所述依赖利福平结核分枝杆菌蛋白的方法。涉及包含所述依赖利福平结核分枝杆菌蛋白的组合物、试剂盒以及所述试剂盒在临床诊断依赖利福平结核分枝杆菌结核病、耐多药结核病及其流行病学监测调查中的应用。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种基于环介导等温扩增检测结核分枝杆菌复合群及非结核分枝杆菌复合群的引物、试剂盒；本发明中所提供的针对结核分枝杆菌特异性靶序列IS6110及分枝杆菌复合群16S rRNA所设计的引物及鉴定体系，实现了对结核分枝杆菌及NTM的区分，解决现有技术中的方法所需周期长，成本高，现场应用困难的缺陷。使用SYTO9荧光染料进行判读的方式实现了闭管情况下对结果进行判读，避免因开盖造成的气溶胶污染等问题。本方法通过搭配相应试剂可在1h左右实现从样本到结果的判读，操作简便快速，检测成本相对较低。本发明的试剂盒及方法特别适用于中小型单位及现场检测。

摘要： 本发明属于生物领域，具体涉及一种用于检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的引物探针组合物、试剂盒及方法。本发明公开了一种引物探针组合物，包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑6所示的核苷酸序列组。还公开了包括该引物探针组合物的试剂盒，以及使用该引物探针组合物或试剂盒进行结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌检测的方法。本发明公开的试剂盒基于多重的液滴数字PCR平台，其平台自身存在灵敏度高、适用多重的特性；然后通过自主引物探针对的组合优化，筛选到合理的引物探针对组合；可快速灵敏的检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。

摘要： 本发明公开了一种结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴定方法，所述方法包括以下步骤：选定同源基因和序列；获取检测菌株，分析检测菌株的基因序列；设计PCR引物和延伸引物；对PCR引物和延伸引物分组，分别得到PCR扩增引物混合液和单碱基延伸引物混合液；对检测菌株进行PCR扩增，得到目标位点的PCR产物；对PCR扩增后的反应体系进行dNTP消除，得到消化后产物；对消化后产物进行单碱基延伸反应，得到延伸产物；对延伸产物进行纯化，得到纯化延伸产物；通过核酸检测质谱仪进行芯片点样和扫描，得到检测结果；对检测结果进行分型并输出，得到分型结果，通过质谱峰鉴定菌株；通过上述方式，本发明能够更加准确的鉴定出结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌。

摘要： 本发明提供了一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂、试剂盒及结核分枝杆菌的核酸扩增方法，所述样本处理试剂包括消化液、Tris‑HCl溶液和裂解液；所述消化液为含有以下浓度组分的水溶液：二硫苏糖醇13‑14g/L；氯化钠100‑105g/L；氯化钾2‑3g/L；磷酸氢二钠14‑15.5g/L；磷酸二氢钾2‑3g/L；所述裂解液为含有以下浓度组分的水溶液：NaOH 0.08‑0.15w/v％；SDS 0.02‑0.03w/v％。所述检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂可以更快捷更有效地从痰液样本中提取结核分枝杆菌DNA，有效去除人源DNA的干扰，且在处理过程中完全灭活了结核分枝杆菌，有效的降低了人员感染的风险，更加安全高效。所述检测结核分枝杆菌核酸的试剂盒具有很好的灵敏度、特异性和准确性，可以实现结核分枝杆菌核酸的快速检测。

摘要： 本发明提供了一种结核分枝杆菌靶标莽草酸激酶(shikimate kinase，SK)的小分子抑制剂，对SK具有显著的抑制活性，SK在结核分枝杆菌中是必不可少的，因此本发明提供的棉酚这种小分子化合物有望成为抗结核分枝杆菌感染的潜在药物。

摘要： 本发明涉及用于特异性检测和任选地定量来自于个体样品的鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium spp.paratuberculosis)(MAP)的方法。为此，根据本发明的方法，通过核酸扩增和特异性寡核苷酸来检测样品中IS900域的存在。另一方面，本文提供了用于通过扩增方法对样品中MAP进行特异性检测的检验试剂盒。最后，公开了适用于特异性检测MAP的特异性寡核苷酸。

摘要： 本发明涉及用于特异性检测和任选地定量来自于个体样品的鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium spp.paratuberculosis)(MAP)的方法。为此，根据本发明的方法，通过核酸扩增和特异性寡核苷酸来检测样品中IS900域的存在。另一方面，本文提供了用于通过扩增方法对样品中MAP进行特异性检测的检验试剂盒。最后，公开了适用于特异性检测MAP的特异性寡核苷酸。