摘要:应用F81猫肾传代细胞,从高热、拒食和间有神经症状的死亡虎病料中分离获得1株病毒,经形态学、理化学、生物学和血清学系统鉴定,证明为1株流感病毒。采用流感病毒核蛋白基因引物,对分离病毒及该虎病料进行RT-PCR扩增和序列分析,结果从分离病毒和虎病料中均扩增出与理论值大小相符的464bp基因片段,其序列与A、B、C三型流感病毒相比较,同源性分别为:A型84.9%以上,B型35.0%左右,C型24.8%左右。该结果说明所分离病毒为A型流感病毒。命名为A/虎/哈尔滨(中国)/01/2002。用HA裂解位点区基因引物从分离病毒中扩增出582bp的片段,氨基酸序列推导结果表明该病毒HA裂解位点区由6个碱性氨基酸组成,符合高致病力流感病毒的特征。用此分离病毒静脉接种3月龄家猫3只,出现与病虎相似的临床症状,1只耐过,2只死亡,剖检变化与死虎相似,主要呈现肺炎病变,并可从病料中回收到所接种病毒。另以此分离病毒为HA抗原,进行虎与猫血清的HI抗体检测,结果康复虎血清比其病初血清、康复猫血清比其接种前血清HI抗体均有4倍以上增高,表明该病毒具有致病性,是引起该虎与实验猫发病甚至死亡的病原。从大型猫科动物虎中发现流感并从中分离获得A型流感病毒,在国内外均属首次。