内生固氮菌

摘要： 为了解苹果植株不同部位内生固氮菌的群落结构差异,本研究以苹果营养系砧木M9T337为材料,基于NifH基因采用Illumina Miseq测序技术,对苹果砧木M9T337根、枝、叶内生固氮菌的群落组成和多样性进行分析。结果表明,苹果砧木M9T337各组织部位均有丰富的内生固氮菌,不同部位内生固氮菌群的组成及丰度存在差异。苹果砧木3个部位内生固氮菌除丰富度指数外,Alpha多样性指数无显著性差异。Beta多样性分析结果表明根部与枝部内生固氮菌群落结构差异较大。在门水平上,变形菌门(Proteobacteria)是根、枝、叶部位的优势菌门。在属水平上,慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)是叶部和枝部的优势菌属,固氮螺菌属(Azospirillum)是根部的优势菌属。根部有2个特有属,枝部有2个特有属,叶部有4个特有属。此外,本研究首次发现广古菌门(Euryarchaeota)内生固氮古菌为叶部所特有。

摘要： 为探究荒漠草原灌木欧李(Cerasus humilis)根系内生细菌固氮能力和其它特性。采用无氮培养基,从欧李根内分离获得20株内生固氮菌,并结合乙炔还原法测定固氮酶活性,钼锑抗比色法测定溶磷特性,Salkowski法测定分泌植物生长素(Indole acetic acid,IAA)能力,对筛选出固氮酶活性较高的菌株进行16S rDNA序列比对,确定其分类地位。结果表明,分离的内生固氮细菌均具溶磷和分泌IAA能力。所分离菌株固氮酶活性在31.45~424.81 nmol C_(2)H_(4)·h^(-1)·mL^(-1)之间(NS 25最高),解有机磷量在26.62~99.18μg·mL^(-1)之间(YNS 4最高),溶无机磷量在1.10~20.31μg·mL^(-1)之间(WNS 21最高),分泌IAA量在3.86~47.00μg·mL^(-1)之间(NS 22最高)。10株固氮酶活性较高菌株经初步鉴定NS114-1和NS114-2为Bacillus pumilus,NS 25和NS 26为Bacillus paralicheniformis,YNS 1为Brevibacterium frigoritolerans,菌株WNS 21和NNS 15为Bacillus velezensis,NS 8为Paenibacillus catalpae,YNS 6为Cytobacillus firmus,NNS 19为Bacillus sp.。研究分离的内生固氮细菌具有溶磷和分泌IAA的能力,有望通过后续研制微生物菌剂为干旱地区植被恢复与生态重建发挥积极作用。

摘要： 氮素是植物生长必不可少的元素,植物内生固氮菌不仅能够在植物体内产生氮素以供植物利用,而且在自然界氮素循环过程中发挥积极作用,对农业可持续发展具有重要意义。近年来,植物内生固氮菌逐渐成为研究热点。由植物内生固氮菌的发现、作物共生、侵入途径、固氮机理、促生作用机制等方面系统地综述了植物内生固氮菌的研究进展,探讨了植物内生固氮菌新的研究思路以及一些尚未解决的问题,以期为植物内生固氮菌及生物固氮研究提供参考。

摘要： [目的]为了解红树植物根部内生微生物的固氮功能和获得固氮能力较高的固氮菌,本实验从红树植物-桐花树根部组织分离纯化得到具有固氮能力的菌株.[方法]以Ashby无氮培养基为选择分离条件,从表面消毒的植物根部组织分离得到内生固氮菌,并通过凯氏定氮法检测菌株的固氮能力;采用单因素法优化培养条件,获得菌株典型生长曲线.[结果]实验筛选得到固氮能力较高的一株固氮菌A1,从形态学特征等方面进行研究,为革兰氏阴性菌,菌落圆形乳白色,菌株固氮量为16.695 mg·L-1,最适生长条件:温度32°C,pH值7,NaCl浓度2％,最适碳源淀粉.[结论]本实验为培育优良的红树植物内生固氮菌与研制高效固氮菌剂应用于生产实践提供理论依据.

摘要： [目的]检测5种芦竹属菌草绿洲成熟期根样本内生固氮菌的丰度及nifH基因的表达,为nifH基因的快速定量检测及实时监测提供技术手段.[方法]采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)分析根样本内生固氮菌nifH基因的拷贝数及相对表达量.[结果]5种芦竹属菌草成熟期根样本内生固氮菌nifH基因表达量及拷贝数均有较大的差异.其中,绿洲2号nifH基因相对表达量最高,呈过表达水平,且绿洲2号样本差异达显著水平(P＜0.05),其余各样本差异不显著;固氮基因nifH的拷贝数呈逐步递减,其中绿洲1号样本nifH基因的拷贝数最高,达8.84×1011/g;绿洲5号最低,达1.54×1011/g,各样本的差异均达到显著水平.[结论]基于实时荧光定量PCR对固氮基因nifH的定量及定性分析,可为nifH基因的定量检测及表达情况提供理论依据.

摘要： [背景]我国甘蔗生产中氮肥过量施用严重,导致生产成本居高不下,充分发挥甘蔗与内生固氮菌的联合固氮作用,减少氮肥施用量,对促进我国甘蔗产业可持续发展具有重要意义.[目的]筛选优势甘蔗内生固氮菌,对其基本特性、联合固氮效率及促生长功能进行评价.[方法]从甘蔗根系分离到一株内生固氮菌GXS16,利用乙炔还原法测定固氮酶活性,通过PCR扩增nifH基因确定菌株为固氮菌;通过形态观察、Biolog检测和16S rRNA基因序列分析等对菌株进行分类;通过接种盆栽甘蔗检测菌株的促生长作用,采用15N同位素稀释法检测菌株相对固氮效率.[结果]菌株GXS16固氮酶活性为2.42 μmol-C2H4/(h·mL),根据菌株培养性状和菌体形态观察、Biolog检测、16S rRNA、nifH、acdS基因序列分析结果,菌株GXS16属于伯克氏菌属(Burkholderia);菌株GXS 16还具有1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶(1-Aminocyclopropane-1-Carboxylate Deaminase,ACC)活性及合成生长素吲哚乙酸(Indole-3-Acetic Acid,IAA)、降解无机磷的功能;接种GXS16处理甘蔗植株的株高比对照增长15％以上,干重增长20％以上,15N同位素测定显示甘蔗根、茎、叶从空气中获得氮的百分比分别为7.69％、15.64％和8.72％,效率显著优于模式菌株Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5.[结论]Burkholderia sp.GXS 16是一株高效甘蔗内生固氮菌,具有良好应用前景.

摘要： [目的]了解不同竹子内生固氮菌及其定殖土壤根区固氮菌的特征和生物多样性.[方法]以毛竹Phylloslachys edulis、狭叶青苦竹Pleioblastus chino、孝顺竹Bambusa multiplex叶部、根部及定植土壤为对象,设计nifH固氮基因引物,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)和随机克隆技术,通过聚类分析、Shannon多样性指数分析构建系统发育树.[结果]不同竹子根区土壤之间、同一竹种根部与叶部之间、不同竹种同一器官之间、根区土壤与植物之间的固氮菌群落结构差异明显,同一竹种叶部或根部的重复样品相似度均不高;根部内生固氮菌种类总体多于叶部,土壤固氮菌与根部内生固氮菌相似度高于叶部.不同竹种不同器官间固氮菌Shannon多样性指数差异显著,孝顺竹叶部(2.73)与土壤(2.70)大于根部(2.53)(P<0.05),狭叶青苦竹根部和毛竹根部大于叶部和土壤(P<0.05).植物样品随机克隆测序对比得到83株固氮菌,仅12株为可培养固氮菌株,分别属于慢生根瘤菌属Bradyrhizobium、Dechlorosoma、固氮螺菌属Azospirillum、肠杆菌属Enterobacter、Kosakonia、变形杆菌属Gammaproteobacteria、红长菌属Rubrivivax和Azohydromonas.系统发育树结果表明:3种竹子内生固氮菌明显不同于其他植物.[结论]土壤环境、竹子种类及组织器官均能影响竹子内生固氮菌的结构特征和多样性,定殖于根部的内生固氮菌多样性显著高于叶部.3种竹子内生固氮菌种类与已报道的禾本科Gramineae植物差异显著.

摘要： 高秆野生稻(Oryza alta)是一种重要的种质资源,其组织内也蕴藏着非常宝贵的功能微生物资源.本实验采用无氮培养基,从高秆野生稻中分离到43株内生固氮菌,结合乙炔还原法测定其固氮酶活性.经固氮酶基因(nifH)的PCR扩增检测,43株内生固氮菌代表菌株均能扩增出固氮酶基因片段.利用IS-PCR DNA指纹图谱和SDS-PAGE全细胞蛋白电泳图谱将获得的菌株聚类为6个类群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ).对各个类群的代表菌株(ZF3,ZF8,ZF13,ZF15,ZF24,ZF43)进行16S rRNA基因序列测定,结果表明,类群Ⅰ属于土生拉乌尔菌(Raoultella terrigena),类群Ⅱ属于类肺炎克雷伯氏菌类肺炎亚种(Klebsiella quasipnmoniae subsp.quasipneumoniae),类群Ⅲ属于越南伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis),类群Ⅳ的菌株代表肠秆菌属的一个类群(Enterobacter sp.),类群Ⅴ的菌株属于门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina),类群Ⅵ归属于固氮植物菌(Phytobacter diazotrophicus).Biolog聚类结果与IS-PCR指纹图谱类型及SDS-PAGE全细胞蛋白聚类结果一致.Biolog板测定结果显示,来自不同类群的代表菌株对碳源的利用差异显著,说明野生稻内多样的内生固氮菌从环境中获取碳源和氮素的适应能力较强.

摘要： 为探明拉巴豆植株体液对其内固氮菌抗盐碱性能力的影响,对'润高'拉巴豆植株(Dolichos lablab cv.Rungai)体液对其内生固氮菌的抗盐(NaCl)、抗酸碱能力的影响进行了研究.结果表明:1)在酸性条件下(pH＜6),拉巴豆植株体液能不同程度增强GL1、GL2、GL3、GLA四种固氮菌的抗酸能力,pH5时,4株固氮菌在含有植株体液的YMA固体培养基上生长速度分别为对照的172％、123％、128％、200％,差异显著(P＜0.05).pH11的碱性环境下,植株体液对4株固氮菌的生长均有抑制作用,其生长速度分别为对照的82％、88％、77％、84％,差异显著(P＜0.05).其他酸碱度条件下,植株体液对GL3菌株生长的影响最大.2)在盐浓度为0.1％的培养基上,植株体液对GL3、GL4菌的生长有显著的抑制作用(P＜0.05),盐浓度为6％时植株体液对GL4菌有抑制作用,菌株的生长速度仅为对照的39％,差异显著(P,＜0.05).在盐浓度为4％、5％的培养基上,植株体液对GL1菌有促生作用,菌株的生长速度为对照的145％、210％.3)耐酸碱实验中GL3菌的耐酸碱能力最强,耐盐实验中GL2菌的耐盐能力最强.4)在耐酸、碱、盐实验中植株体液分别对GL2、GL1、GL3菌的影响较强,且植株体液对4种固氮菌抗酸碱能力的影响大于对其抗盐能力的影响.

摘要： 为探讨固沙先锋植物沙蓬与其内生固氮菌的共生固氮机理,明晰固氮菌在沙蓬植株体内的时空分布特性和菌-植共生固氮系统的固氮特性,探明沙蓬-内生固氮菌协同抗逆的机理.我课题组以甘肃省民勤县巴丹吉林沙漠流动沙丘生长的沙蓬植株及根际沙土为研究材料.通过5年的研究工作探讨了沙蓬菌-植株共生固氮系统的固氮能力和氮积累特性,以及沙蓬与其内生固氮菌协同适应沙漠严酷生境的若干关键机理,并获得以下重要结论.

摘要： 本研究对分离自野生狗牙根内的内生固氮菌DQ-3(Enterobacter cloacae)进行活化,测其活性.以不浸泡菌液为对照,将长势相同的结缕草茎段分别用1×103cfu.ml-1、1×106cfu.ml-1两种浓度的菌液浸泡4h、16h后进行盆栽试验.待植株成坪后,测定颜色、分蘖数、地上地下生物量以及植株全氮量.结果表明,接种内生固氮菌对结缕草的促生效果显著.菌液浓度为1×106cfu.ml-1,浸泡时间4h对结缕草分蘖数促进最显著;菌液浓度为1×106cfu.ml-1,浸泡时间16h对颜色的影响最大;菌液浓度为1×106cfu.ml-1,浸泡时间16h对地上生物量影响最大;菌液浓度为1×103cfu.ml-1,浸泡时间为4h对地下生物量影响最大;菌液浓度为1×106cfu.ml-1,浸泡时间为16h对结缕草植株增加全氮量效果最好.综合看来,菌液浓度为1×106cfu.ml-1,浸泡时间为16h的组合对结缕草促生效果最好.

摘要： 本研究以多枝怪柳、黑果构祀、盐穗木为材料，从根、茎组织中分离、固氮酶活性测定，筛选获得137个内生固氮菌菌株。对分离固氮菌株进行16SrDNA、固氮基因nif H PCR扩增、序列测定和PCR-RFLP多态性分析，解析其遗传多样性及系统发育关系。结果显示，根据16SrDNA PCR- RFLP酶切图谱，将137个分离菌株聚类为9个类群，选取每个类群代表菌株的16SrDNA PCR产物进行序列测定和系统发育分析，菌株分属于拉恩氏菌属(Rahnella sp) ,假单胞菌属(Pseudomonas sp)、泛菌属(Pantoea sp)、芽抱杆菌属((Bacillus sp)和寡养单胞菌属(stenotrophomonas sp)，申氏杆菌属(Shinella sp)，其中拉恩氏菌属为优势菌属。分离菌株固氮酶基因nif H PCR-RFLP基因图谱中分为三个基因型，具有一定的遗传多样性特征。本研究首次对多枝怪柳、黑果构祀、盐穗木内生固氮菌及固氮酶基因nif H多样性及其系统发育进行研究，对于丰富固氮微生物物种资源库和基因库，固氮菌资源的保护和利用具有重要的作用。

摘要： 从不同生境下采集19份狗牙根材料及其原生土壤,并根据固氮酶活性的检测结果,筛选出8份材料进行扩繁,设计施尿素处理和不施尿素作为对照,测定相应原生土壤的理化性质并对酶活与土壤理化性质进行相关分析.研究结果如下:①大部分狗牙根的根、茎、叶均能分离到内生固氮菌,且从茎分离出的内生固氮菌最多；然而,根内生固氮菌的固氮酶活性要低于茎、叶.②野生状态具有不同固氮酶活性的狗牙根,其内生固氮菌于栽培时对尿素的响应不一致.③地上部内生固氮菌固氮酶活性与原生土壤有效氮呈极显著负相关.但是,进入盆栽阶段,尿素基本不影响其地上部内生固氮菌固氮酶活性.

摘要： 青香茅(Cymbopogon caesius)和五节芒(Miscanthus floridulus)属多年生禾本科植物,是饲养各种家畜的优良牧草和山坡等瘠薄地的先锋植被.选用无氮源的两种选择性培养基,结合乙炔还原法分离内生固氮菌.从两种牧草中共分离到66株内生固氮菌,其中从青香茅中分离到30株,从五节芒中分离到36株菌.应用SDS-PAGE全细胞蛋白电泳、IS-PCR(Insertion sequence-based PCR)指纹图谱、生理生化特性和16S rDNA序列分析进行鉴定,将66株内生固氮菌聚类为10个类群(Ⅰ-Ⅹ).对各类群代表菌株16S rDNA序列进行分析,这些菌株主要为洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、固氮植物菌(Phytobacter diazotrophicus)、阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae)、织片草螺菌(Herbaspirillum seropedicae)、阪崎克洛诺菌(Cronobacter sakazakii水稻肠杆菌(Enterobacter oryzae)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、溶解肠杆菌(Enterobacter dissolvens)、亚马逊固氮螺(Azospirillumamazonense)等不同种.结果表明香茅草和五节芒内生固氨菌具有较大的资源多样性.生理生化测定结果显示有些菌株具泌氨能力、产吲哚、解磷、解钾效果.接种水稻和玉米后,具有明显促作物生长作物.

摘要： 柽柳具有根系庞大、抗旱抗寒、耐盐碱、耐沙埋、耐贫瘠寿命长等特性，可作为干旱荒漠区生态防护林建设的优良造林树种。本文介绍了在水分胁迫下以分离获得的内生固氮菌DEB20菌株接种多枝怪柳对其实生苗生长及抗旱性相关的生理指标的影响，旨在明确内生固氮菌对多枝怪柳的抗旱效应，揭示内生固氮菌提高植物抗旱性的生理生化机制。

摘要： 植物内生固氮菌是近年来新发现的非豆科科植物实现生物固氮的一条新的途径。大量研究表明，内生固氮菌生活在植物体内，避免了化合态氮的抑制及土著微生物的竞争，表现出更高的固氮效率，同时还具有分泌生长素、溶磷、增强植株抗病性和抗逆境等多重促生性能，在解决植物氮素营养，增强对环境的适应性上有巨大的潜力，显示出了良好的应用前景。

摘要： 巴西学者D(o)bereiner在1958年首次在甘蔗根际分离到固氮细菌，提出禾本科植物也具有固氮能力的设想；在1975年分离到固氮螺菌（Azospirillum）并提出了联合固氮概念。研究表明固氮甘蔗品种可以从生物固氮获得到60-80%的氮素，而甘蔗通过生物固氮提供的氮素约占了植物总吸氮量的30%。甘蔗是我国最重要的糖料作物，广西又是中国甘蔗的主要产区，探讨广西气候条件下甘蔗体内的固氮菌种类、研究固氮菌的生物学特性可以更好地开发和利用甘蔗的固氮特性，为生物固氮在甘蔗的科研、生产应用上提供参考。

摘要： 在巴西,长期种植甘蔗都是只施少量的氮,但是这种种植方式并没有造成土壤中N元素流失;因此,人们认为可能是生物固氮造成这种现象.从1950年至1970年,不少研究者就从甘蔗中分离到许多固氮菌,但是一直到80年代初,人们才通过N平衡法与N15 dilution证明一些巴西甘蔗菌能通过生物固氮得到大量的氮元素.同时不少研究者也利用一些生理技术对甘蔗内生固氮作用进行研究这些研究结果更新了寻找生物固氮菌的效果.国内在甘蔗内生固氮的研究方面很少,还没有很大的进展;建议以甘蔗固氮育种与甘蔗内生固氮应用基础研究为重点,加大对甘蔗内生固氮研究的投入.

摘要： 利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法，涉及一种利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法。是要解决现有利用化学药剂杀灭白蚁的方法毒副作用大，造成严重的环境污染及人体危害的问题。方法：一、树木内生菌发酵液的制备；二、制备素琼脂平板；三、菌悬液的制备；四、半固体培养基的制备；五、取无氮半固体培养基，待冷却至50°C时加入菌悬液，混匀，倒入插有牛津杯的素琼脂平板上，待培养基凝固后拔出牛津杯，用移液枪向小孔中加入树木内生菌发酵液，在4°C冰箱中放置过夜，然后在30°C培养箱中培养16h，观察并用游标卡尺测定抑菌圈直径，即完成。本发明方法中树木内生菌代谢产物对白蚁肠道固氮菌有较好的抑制作用。

摘要： 本发明公开了一种含中药活性内生固氮培养基的固氮菌剂，采用含中药活性内生固氮培养基对复合微生物发酵菌进行发酵培养；该含中药活性内生固氮培养基的组分包括：玉米芯粉、草炭土、豆粕、轻质炭酸钙、黄芪、女贞子、刺五加、葛根、青蒿、葡萄籽和槲寄生；复合微生物发酵菌由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、啤酒酵母、扣囊拟内孢菌、绿色木霉、嗜热侧孢霉、植物乳杆菌、黑曲霉混合而成。本发明能够解决现有技术中石化农业带来的土壤肥力减退、生态破坏等问题，从而在减少化肥使用量的情况下增进土壤肥力、提高农业产出，以改善了农业生态环境、实现农业的可持续发展。

摘要： 本发明公开了一种含中药活性内生固氮培养基的固氮菌剂，采用含中药活性内生固氮培养基对复合微生物发酵菌进行发酵培养；该含中药活性内生固氮培养基的组分包括：玉米芯粉、草炭土、豆粕、轻质炭酸钙、黄芪、女贞子、刺五加、葛根、青蒿、葡萄籽和槲寄生；复合微生物发酵菌由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、啤酒酵母、扣囊拟内孢菌、绿色木霉、嗜热侧孢霉、植物乳杆菌、黑曲霉混合而成。本发明能够解决现有技术中石化农业带来的土壤肥力减退、生态破坏等问题，从而在减少化肥使用量的情况下增进土壤肥力、提高农业产出，以改善了农业生态环境、实现农业的可持续发展。

摘要： 利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法，涉及一种利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法。是要解决现有利用化学药剂杀灭白蚁的方法毒副作用大，造成严重的环境污染及人体危害的问题。方法：一、树木内生菌发酵液的制备；二、制备素琼脂平板；三、菌悬液的制备；四、半固体培养基的制备；五、取无氮半固体培养基，待冷却至50°C时加入菌悬液，混匀，倒入插有牛津杯的素琼脂平板上，待培养基凝固后拔出牛津杯，用移液枪向小孔中加入树木内生菌发酵液，在4°C冰箱中放置过夜，然后在30°C培养箱中培养16h，观察并用游标卡尺测定抑菌圈直径，即完成。本发明方法中树木内生菌代谢产物对白蚁肠道固氮菌有较好的抑制作用。

摘要： 本发明公开了一种高效分离玉米内生固氮菌的方法，属于微生物领域。本发明利用氮供应不充足条件下玉米对固氮菌的选择性富集效应，在无需外部动力条件下，利用玉米根压作用快速获得包含丰富固氮菌资源的玉米输导组织汁液，并通过对输导组织汁液的两次分离培养，最大限度保持了样本中微生物的种类和活性。本发明借助植物自身的选择富集机制，能够快速筛选到与宿主作物互利共生的高效内生固氮菌株，有效提高了固氮菌的筛选效率，操作简单，时效性好，是一种轻简、快捷、高效的固氮菌分离培养技术。

摘要： 本发明公开了一种内生固氮菌有机肥的制备方法，包括：在含水量为55%～70%的有机肥基础原料中添加占该有机肥基础原料总重量2%～10%的复合微生物发酵菌剂，并在混合均匀后进行初次发酵，从而获得初次发酵后的有机肥基础原料；在初次发酵后的有机肥基础原料中添加占该有机肥基础原料总重量3%～6%的复合微生物内生固氮菌剂，并在混合均匀后进行二次发酵；当该有机肥基础原料的温度不再升高时，将其堆放15～20天，即可制得内生固氮菌有机肥。本发明实施例的实施能够制备出减少化肥使用量的有机肥料，从而在减少化肥使用量的情况下增进土壤肥力、提高农业产出，以改善了农业生态环境、实现农业的可持续发展。

摘要： 本发明公开了一株产ACC脱氨酶并拮抗赤霉病菌的水稻内生固氮菌及其用途。该水稻内生固氮菌是伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)GDSD125，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.5038。本发明所提供的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)GDSD125 CGMCC No.5038具有较高的固氮活性，具有ACC脱氨酶活性，可以有效拮抗玉米赤霉菌(Gibberella zeae)，在固氮微生物菌剂和生物有机肥生产中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一株提高作物抗病抗逆的水稻内生固氮菌及其用途。该水稻内生固氮菌是伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)GDSD112，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.5037。本发明所提供的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)GDSD 112 CGMCC No.5037具有较高的固氮活性，具有ACC脱氨酶活性，可以有效拮抗菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)，在固氮微生物菌剂和生物有机肥生产中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明适用于有机肥制备领域，提供了一种内生固氮菌有机肥的制备方法，包括以下步骤：步骤一：对农业废弃物进行粉碎处理，之后将新鲜畜禽粪便及农业废弃物混匀后，堆入发酵池；加入复合微生物发酵菌剂，然后加水，盖上端盖进行封闭发酵；当发酵池中温度达到一定温度后，进行揭盖降温，一段时间后重新封闭发酵，反复多次，当降温至一定温度并不再升温后，即可获得初次发酵后的有机肥基础原料；步骤二：在初次发酵后的有机肥基础原料中添加复合微生物内生固氮菌剂，进行二次发酵；步骤三：将发酵好的混合物料烘干、破碎既得发酵物。

摘要： 本发明公开了一种高效分离玉米内生固氮菌的方法，属于微生物领域。本发明利用氮供应不充足条件下玉米对固氮菌的选择性富集效应，在无需外部动力条件下，利用玉米根压作用快速获得包含丰富固氮菌资源的玉米输导组织汁液，并通过对输导组织汁液的两次分离培养，最大限度保持了样本中微生物的种类和活性。本发明借助植物自身的选择富集机制，能够快速筛选到与宿主作物互利共生的高效内生固氮菌株，有效提高了固氮菌的筛选效率，操作简单，时效性好，是一种轻简、快捷、高效的固氮菌分离培养技术。