人羊膜间充质干细胞

摘要： 背景:近年来,干细胞在组织损伤修复中发挥着重要作用,其中间充质干细胞移植应用最为广泛,间充质干细胞可以通过旁分泌细胞因子促进损伤组织的修复,低氧预处理可以改善间充质干细胞的生物学特性,因而,低氧预处理的人羊膜间充质干细胞可能在组织损伤修复中起到更好的治疗作用。目的:探讨不同体积分数氧气预处理对人羊膜间充质干细胞增殖、抗凋亡能力、旁分泌作用的影响。方法:利用酶消化法获得原代人羊膜间充质干细胞,将第3代人羊膜间充质干细胞通过不同体积分数氧气进行预处理48 h,随机分为1%,3%,5%,10%低氧预处理组和常氧对照组体积分数21%氧气,倒置显微镜下观察人羊膜间充质干细胞的形态,CCK-8检测人羊膜间充质干细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测人羊膜间充质干细胞的凋亡情况,实时定量PCR法检测人羊膜间充质干细胞凋亡基因和缺氧诱导因子的表达,酶联免疫吸附法检测人羊膜间充质干细胞分泌的细胞因子水平。结果与结论:显微镜下观察不同体积分数氧气预处理组人羊膜间充质干细胞的形态无明显差异,低氧预处理能提高人羊膜间充质干细胞的增殖、抗凋亡和旁分泌细胞因子的能力,且体积分数1%氧气预处理效果优于体积分数3%,5%,10%,21%氧气预处理。

摘要： 背景:研究发现脑源性神经营养因子(BDNF)修饰的人间充质干细胞可用于治疗脊髓损伤和创伤性脑损伤等,但对阿尔茨海默病是否有疗效,既往鲜有报道.目的:观察脑源性神经营养因子修饰人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰转移酶、基底前脑神经生长因子表达的影响.方法:40只健康雄性成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、hAMSCs组、BDNF-hAMSCs组,每组10只.采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白25-35构建阿尔茨海默病模型,第14天后侧脑室注射10μL的hAMSCs或10μL的脑源性神经营养因子转染hAMSCs.移植后2周,采用Morris水迷宫测试评价大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测海马胆碱乙酰转移酶的表达,RT-PCR检测基底前脑神经生长因子mRNA的表达.结果 与结论:①Morris水迷宫测试第3,4,5天时,hAMSCs组和BDNF-hAMSCs组逃避潜伏期均低于模型组(P<0.05);测试第4,5天时,BDNF-hAMSCs组逃避潜伏期低于hAMSCs组(P<0.05);②模型组海马胆碱乙酰转移酶阳性神经元数、基底前脑神经生长因子表达量明显低于对照组(P<0.05);hAMSCs组和BDNF-hAMSCs组海马胆碱乙酰转移酶阳性神经元数、基底前脑神经生长因子表达量均高于模型组(P<0.05),并且BDNF-hAMSCs组高于hAMSCs组(P<0.05);③结果 表明,用脑源性神经营养因子修饰hAMSCs可进一步提高hAMSCs治疗阿尔茨海默病的认知功能,并且可以明显提高海马胆碱乙酰转移酶和基底前脑神经生长因子的表达水平.

摘要： 背景:研究发现脑源性神经营养因子(BDNF)修饰的人间充质干细胞可用于治疗脊髓损伤和创伤性脑损伤等,但对阿尔茨海默病是否有疗效,既往鲜有报道。目的:观察脑源性神经营养因子修饰人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰转移酶、基底前脑神经生长因子表达的影响。方法:40只健康雄性成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、hAMSCs组、BDNF-hAMSCs组,每组10只。采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白25-35构建阿尔茨海默病模型,第14天后侧脑室注射10μL的hAMSCs或10μL的脑源性神经营养因子转染hAMSCs。移植后2周,采用Morris水迷宫测试评价大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测海马胆碱乙酰转移酶的表达,RT-PCR检测基底前脑神经生长因子mRNA的表达。结果与结论:①Morris水迷宫测试第3,4,5天时,hAMSCs组和BDNF-hAMSCs组逃避潜伏期均低于模型组(P<0.05);测试第4,5天时,BDNF-hAMSCs组逃避潜伏期低于hAMSCs组(P<0.05);②模型组海马胆碱乙酰转移酶阳性神经元数、基底前脑神经生长因子表达量明显低于对照组(P<0.05);hAMSCs组和BDNF-hAMSCs组海马胆碱乙酰转移酶阳性神经元数、基底前脑神经生长因子表达量均高于模型组(P<0.05),并且BDNF-hAMSCs组高于hAMSCs组(P<0.05);③结果表明,用脑源性神经营养因子修饰hAMSCs可进一步提高hAMSCs治疗阿尔茨海默病的认知功能,并且可以明显提高海马胆碱乙酰转移酶和基底前脑神经生长因子的表达水平。

摘要： 背景:人羊膜间充质干细胞是再生医学理想的种子细胞之一,已在多种疾病治疗中显示了良好的应用前景,对人羊膜间充质干细胞制备关键技术的有效控制,保障制剂符合质量要求,是实现人羊膜间充质干细胞临床应用安全性和有效性的根本.目的:阐述人羊膜间充质干细胞制备与质量控制的关键技术,分析存在的问题和解决策略,总结质量控制关键与技术标准.方法:以"间充质干细胞、细胞培养、生物学特征、质量控制、微生物污染"和"mesenchymal stem cells,cell culture,biological characteristic,quality control,microbiology contamination"为检索词,检索中国知网、万方数据及PubMed数据库2010年1月至2021年3月期间收录的相关文献,最终纳入47篇进行分析.结果 与结论:①临床级人羊膜间充质干细胞制备过程中供者的科学选择;采集方法的稳定、规范;细胞分离、培养与体外扩增技术的优化及全过程操作标准化;细胞制备实验室环境的监测及细胞制剂质量检测关键技术均是保证临床使用安全的质量控制的关键;②无血清培养体系的建立与应用,有利于保证制剂质量;③保持人羊膜间充质干细胞生物学特征和功能活性,以及人羊膜间充质干细胞致瘤性、衰老及异常免疫反应等符合放行和复核检验质量标准,能确保人羊膜间充质干细胞制剂发挥良好临床疗效,且最大限度避免发生不良反应.

摘要： 目的观察不同浓度的丹参对人羊膜间充质干细胞(hAMCs)增殖的影响。方法分离获取人羊膜间充质干细胞,流式细胞仪检测第三代细胞表面CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD166等表达情况,并结合光镜下观察细胞形态、免疫细胞化学染色法及Western Blot法检测波形蛋白的表达情况来对细胞进行鉴定。在培养基中加入不同浓度的丹参,采用MTT法检测细胞增殖情况,细胞流式仪检测细胞周期并计算细胞的增殖指数。流式细胞仪再次检测细胞表面CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD166等表达情况,对比观察细胞的表面抗原表达变化。结果人羊膜间充质干细胞高表达CD29、CD44、CD73、CD166,低表达CD34、CD45,高表达波形蛋白。MTT法显示培养基中加入丹参后细胞倍增时间缩短,细胞周期检测结果显示培养基中加入丹参后增殖指数升高,增殖后的细胞CD166表达率升高。结论在常规的完全培养基中加入适量的丹参,可以不同程度上促进人羊膜间充质干细胞的增殖,但可能会改变细胞表面抗原的表达率。

摘要： 目的分析人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经人羊膜间充质干细胞上清(hAMSC-CM)诱导后差异表达的circBIRC6在血管新生中的作用。方法运用实时定量PCR检测HUVEC中circBIRC6的表达水平;设计针对circBIRC6的siRNA和过表达质粒,通过转染构建敲减和过表达circBIRC6的HUVEC细胞模型;通过Transwell小室迁移实验、成管实验、创愈划痕实验检测HUVEC的血管新生能力。结果hAMSC-CM诱导HUVEC中circBIRC6的表达上升;实时定量PCR验证了HUVEC敲减和过表达circBIRC6细胞模型的可靠性;在Transwell小室迁移实验、成管实验、创愈划痕实验中,敲减circBIRC6降低了HUVEC的小室细胞迁移率、总成管长度和划痕迁移率,而过表达circBIRC6则反之。结论本研究初步阐明circBIRC6促进HUVEC血管新生的作用,并揭示hAMSC-CM可能通过上调HUVEC中circBIRC6的表达进而促进血管新生。

摘要： 目的:观察低氧预处理人羊膜间充质干细胞(HP-hAMSCs)外泌体对SD大鼠唾液腺放射性功能损伤的修复作用。方法:试剂盒法分离并鉴定常氧和缺氧预处理人羊膜间充质干细胞(Nor-hAMSCs和HP-hAMSCs)外泌体。电子直线加速器18 Gy一次性照射,建立大鼠唾液腺损伤模型。72只6~8周SD大鼠,每组18只,随机分为Control组、PBS组(照射+PBS组)、NExos组(照射+NExos组)、HExos组(照射+HExos组),采用18 Gy一次性照射建立大鼠唾液腺损伤模型。放射后1 d双侧颌下腺区原位注射,分别于照射后7、14和第28天分别取6只检测大鼠体质量和唾液量,腺体经HE染色进行形态学观察。免疫组织化学染色检测水通道蛋白5(AQP5)的表达。结果:NExos组、HExos组大鼠体重、唾液量均高于PBS组。HExos组唾液量高于NExos组,在第7、28天HExos组大鼠体质量高于NExos组且差异有统计学意义(P<0.05)。颌下腺组织HE染色显示:HExos组的腺体修复能力最强。颌下腺组织AQP5表达的定量分析结果表明:HExos组及NExos组较PBS组在第14、28天光密度值增加(P<0.05),且HExos组高于NExos组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HP-hAMSCs外泌体能有效修复放射性损伤唾液腺的唾液分泌功能。

摘要： 背景:干细胞移植治疗为许多疑难疾病带来了希望,但移植细胞存活数量少及分泌功能差,很难发挥治疗效用,致使该技术在临床应用受阻。低氧预处理可有效改善植入细胞的增殖活性、抗凋亡能力、分泌功能等生物学特性,因而,低氧预处理的人羊膜间充质干细胞有望在组织损伤修复中发挥更好的治疗作用。目的:探讨低氧预处理对人羊膜间充质干细胞生物学特征的影响。方法:利用机械法和酶消化法分离人羊膜间充质干细胞并传至第3代,将其低氧预处理(体积分数为3%O2)48 h,设置常氧(体积分数为21%O2)对照组,通过CCK-8及Edu增殖实验检测两组人羊膜间充质干细胞增殖活性及DNA合成率。将两组细胞用无血清培养基培养24 h后,Annexin V-FITC/PI实验检测细胞凋亡情况,收集上清液,采用血管生成蛋白芯片(Proteome Profiler)检测上清液中分泌的血管生成相关因子水平。结果与结论:低氧预处理不影响人羊膜间充质干细胞的干细胞特性,能提高人羊膜间充质干细胞的增殖活性;在无血清培养条件下,低氧预处理使人羊膜间充质干细胞的抗凋亡作用得到增强,同时分泌了更多量的血管相关生成因子。

摘要： 背景:干细胞移植治疗为许多疑难疾病带来了希望,但移植细胞存活数量少及分泌功能差,很难发挥治疗效用,致使该技术在临床应用受阻.低氧预处理可有效改善植入细胞的增殖活性、抗凋亡能力、分泌功能等生物学特性,因而,低氧预处理的人羊膜间充质干细胞有望在组织损伤修复中发挥更好的治疗作用.目的:探讨低氧预处理对人羊膜间充质干细胞生物学特征的影响.方法:利用机械法和酶消化法分离人羊膜间充质干细胞并传至第3代,将其低氧预处理(体积分数为3％ O2)48 h,设置常氧(体积分数为21％O2)对照组,通过CCK-8及Edu增殖实验检测两组人羊膜间充质干细胞增殖活性及DNA合成率.将两组细胞用无血清培养基培养24 h后,Annexin V-FITC/PI实验检测细胞凋亡情况,收集上清液,采用血管生成蛋白芯片(Proteome Profiler)检测上清液中分泌的血管生成相关因子水平.结果 与结论:低氧预处理不影响人羊膜间充质干细胞的干细胞特性,能提高人羊膜间充质干细胞的增殖活性;在无血清培养条件下,低氧预处理使人羊膜间充质干细胞的抗凋亡作用得到增强,同时分泌了更多量的血管相关生成因子.

摘要： 目的 探究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)旁分泌对人成骨细胞生物活性的影响.方法 酶消化法提取原代hAMSCs,并检测细胞表面标记物表达.收取hAMSCs 24 h培养上清与新鲜培养液1∶1配比作为条件培养基(condition medium,hAMSC-CM),以新鲜培养液作为阴性对照,作用于人成骨样细胞系MG63,观察对细胞生物活性的影响.MTT法检测连续1～4d细胞增殖情况;Transwell小室测定细胞2.5 h迁移情况,苏木素-伊红染色后拍照计数;对硝基苯磷酸二钠(pNPP)法检测培养5d后细胞内ALP表达.结果 hAMSCs呈典型的成纤维样细胞形态,细胞表面阳性表达CD29、CD105、CD49d、CD44;阴性表达CD34、CD45、CD31和HLADR.hAMSC-CM在第1～3天均可显著促进MG63增殖(P＜0.05);hAMSC-CM显著增强MG63迁移能力(P＜0.05);hAMSC-CM培养组细胞中ALP表达显著强于对照组(P＜0.05).结论 hAMSCs可通过CM介导的旁分泌作用增强成骨细胞生物活性.

摘要： 目的：为研究人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)移植后对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肝细胞生长因子(HGF)、沉默信息调节因子1(SIRT-1)、周期性蛋白依赖性激酶抑制因子(p27kip1)mRNA及其蛋白表达的影响,探索人羊膜间充质干细胞治疗肝损伤的作用机制.rn 方法：采用胰蛋白酶-胶原酶消化法从羊膜组织中分离间充质干细胞,通过流式细胞术和免疫荧光等方法进行鉴定.模型组按浓度为20μl/g剂量的四氯化碳和橄榄油混合液诱导小鼠肝纤维化,治疗组经小鼠尾静脉注射人羊膜间充质干细胞约1×106个/ml.分别取模型组和细胞移植的治疗组小鼠肝组织采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot法检测人羊膜间充质干细胞移植前后HGF、SIRT-1、α-SMA、P27kip1mRNA相对表达量及其蛋白表达情况.rn 结果：从羊膜中分离得到纯度较高的间充质干细胞,免疫荧光检测表面标记波形丝蛋白(Vimentin)和阶段特异表达抗原4(SSEA-4)均呈阳性;hAMSCs表达CD29、CD49d、CD73表面抗原,不表达骨髓间充质表面抗原CD34、CD45和人类白细胞抗原DR位点(HLA-DR);经实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测发现治疗组HGF和SIRT-1 mRNA表达量显著高于模型组;而α-SMA和P27kip1rnRNA和蛋白表达量明显低于模型组.rn 结论：人羊膜间充质干细胞可以改善四氯化碳诱导产生的肝纤维化,抑制肝细胞凋亡,促进肝细胞有丝分裂,对肝损伤有一定的修复作用,为组织工程和再生医学的临床应用提供实验基础.

摘要： 目的:研究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cell,hAMSCs)对H2O2和顺铂所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)的治疗作用与可能机制.方法:H2O2灼伤和顺铂制各POF模型.hAMSCs腹腔注射移植,称重测卵巢指数,ELISA法检测激素含量,病理组织学检查组织病理与蛋白表达,定量PCR检测基因表达,G显带技术分析小鼠染色体核型.结果:①细胞移植第7和14天,hAMSCs组小鼠动情周期恢复率分别为33.33％和83.33％,明显高于模型组.第14天,hAMSCs组小鼠卵巢指数明显高于模型,达正常水平.hAMSCs组小鼠血清雌二醇含量逐渐上升恢复正常,FSH含量则降至正常.hAMSCs组POF小鼠与正常雄鼠合笼后,生育率为100％,明显高于模型组,新生小鼠生长良好,且有生育力.hAMSCs移植后,可见损伤的卵巢间质中存在PKH26标记的红色荧光hAMSCs.hAMSCs组卵巢组织结构明显改善,可见较多不同发育时期各级卵泡,模型组闭锁卵泡多,无成熟卵泡.⑧hAMSCs和正常组卵巢组织中FSHR、VEGF和IGF-1蛋白表达高于模型组,而TNF-α和IL-1β蛋白水平较低.且FOXL2、OCT4、GDF-9和LIF mRNA表达也高丁模型组.结论:hAMSCs移植对H2O2和顺铂所致POF具有明显治疗作用,其作用机制涉及卵巢组织FSHR、IGF-1、VEGF蛋白表达增加,FOXL2、OCT4、GDF-9和LIF mRNA表达上调,TNF-α和IL-1β蛋白表达下降.

摘要： 人羊膜间充质干细胞具有高度自我更新能力和多向分化潜能，而细胞机械性能的变化与其分化方向密切相关。为此，本文对人羊膜间充质干细胞进行体外诱导，观察其成骨分化过程中的机械性能变化，以期全面了解人羊膜间充质干细胞成骨分化的过程。

摘要： 本申请属于干细胞技术领域，具体涉及一种羊膜间充质干细胞培养基和培养羊膜间充质干细胞的方法。本发明所提供的羊膜间充质干细胞培养基包含碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍生细胞生长因子、珠子参皂苷和香菇多糖，各组分之间合理配伍，可促进细胞的增殖，提高羊膜间充质干细胞的表达率和细胞纯度，并在较短的时间内获得足够的干细胞数量，适用于羊膜间充质干细胞的二维或三维培养，满足研发需求。

摘要： 本发明涉及一种用于培养间充质干细胞的培养基，更特别涉及一种用于培养间充质干细胞的培养基组合物，并且涉及一种使用所述培养基组合物培养间充质干细胞的方法，所述培养基组合物含有基础培养基、L-抗坏血酸2-磷酸盐、胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、非必需氨基酸(NEAAs)、胰岛素、N-乙酰基-L-半胱氨酸、氯化钙和氢化可的松。根据本发明，可短时间内获得干细胞治疗所需的很多间充质干细胞，并且间充质干细胞的分化能力也有所改进因而它们可用于干细胞治疗。

摘要： 本发明公开了一种基于人羊膜及羊膜间充质干细胞的仿生羊膜及其制备方法和应用，该仿生羊膜具有hAAM‑AAM‑hAAM的夹心结构，hAAM为人脱细胞羊膜，AAM为通过hAMSCs与BD基质胶制备的人工羊膜，两个hAAM的网状纤维面均处于内侧，AAM处于两个hAAM之间，且AAM中的hAMSCs通过细胞‑基质连接结构定植于两层hAAM的网状纤维面的网孔中。本发明的仿生羊膜能够形成与新鲜羊膜力学特性较为接近的充分的生物力学强度，具有很好的弹性、抗拉力和延展性。

摘要： 本申请属于干细胞技术领域，具体涉及一种羊膜间充质干细胞培养基和培养羊膜间充质干细胞的方法。本发明所提供的羊膜间充质干细胞培养基包含碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍生细胞生长因子、珠子参皂苷和香菇多糖，各组分之间合理配伍，可促进细胞的增殖，提高羊膜间充质干细胞的表达率和细胞纯度，并在较短的时间内获得足够的干细胞数量，适用于羊膜间充质干细胞的二维或三维培养，满足研发需求。

摘要： 本发明涉及一种用于培养间充质干细胞的培养基，更特别涉及一种用于培养间充质干细胞的培养基组合物，并且涉及一种使用所述培养基组合物培养间充质干细胞的方法，所述培养基组合物含有基础培养基、L-抗坏血酸2-磷酸盐、胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、非必需氨基酸(NEAAs)、胰岛素、N-乙酰基-L-半胱氨酸、氯化钙和氢化可的松。根据本发明，可短时间内获得干细胞治疗所需的很多间充质干细胞，并且间充质干细胞的分化能力也有所改进因而它们可用于干细胞治疗。

摘要： 本发明公开了一种基于人羊膜及羊膜间充质干细胞的仿生羊膜及其制备方法和应用，该仿生羊膜具有hAAM‑AAM‑hAAM的夹心结构，hAAM为人脱细胞羊膜，AAM为通过hAMSCs与BD基质胶制备的人工羊膜，两个hAAM的网状纤维面均处于内侧，AAM处于两个hAAM之间，且AAM中的hAMSCs通过细胞‑基质连接结构定植于两层hAAM的网状纤维面的网孔中。本发明的仿生羊膜能够形成与新鲜羊膜力学特性较为接近的充分的生物力学强度，具有很好的弹性、抗拉力和延展性。

摘要： 本发明涉及一种用于直接分化胚胎干细胞来源间充质干细胞的培养基、用其制备间充质干细胞的方法、由此制备的间充质干细胞以及包括其的细胞治疗剂，根据一方面的培养基组合物和方法，不仅可以在短时间内以高产率制备间充质干细胞，而且由于没有胚状体形状的步骤，因此制备工艺简单，并且可以获得具有均质性的细胞，从而具有可以在比现有方法更短的时间内提供细胞治疗剂的效果。

摘要： 本发明的目的在于，提供包含治疗效果好的MSC的细胞制剂。提供一种活化的MSC的制造方法，包括使用具有由纤维构成的三维结构的细胞培养载体在含有哺乳动物胎儿附属物来源的活化剂的培养基中培养MSC的工序。此外，还提供选自由p16

摘要： 本发明涉及评估间充质干细胞(MSC)群体的伤口愈合效力的方法。此外，本发明涉及选择用于在cGMP条件下产生干细胞群体的MSC的方法，选择用于产生用于后续药物施用的干细胞群体的MSC群体的方法。此外，本发明涉及选择用于生成主细胞库的MSC群体的方法，以及鉴定适合作为用于产生用于药物用途的MSC群体的起始材料的组织的方法。所述方法包括测定培养基中由MSC分泌至培养基中的选自血管生成素1(Ang‑1)、转化生长因子β(TGF‑β)、血管内皮生长因子(VEGF)和肝细胞生长因子(HGF)的至少两种蛋白质的水平。

摘要： 本发明的目的在于，提供一种对各种疾病发挥优异的治疗效果的新的间充质干细胞及含有该间充质干细胞的新的药物组合物、以及它们的制备方法。本发明为一种ROR1阳性的间充质干细胞。上述ROR1阳性的间充质干细胞优选为CD29、CD73、CD90、CD105及CD166阳性，优选源自脐带或脂肪。