蛋白激酶类

摘要： 目的基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路,初步探究柚皮素防治大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)胰岛素抵抗的分子机制。方法SD大鼠颈背部每日皮下注射脱氢表雄酮建立PCOS模型,将造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、柚皮素组、PI3K抑制剂组、柚皮素+PI3K抑制剂组,每组15只;相同时间段取SD大鼠15只,于颈背部皮下注射油剂2 mL/kg,作为正常对照组。检测各组大鼠血糖、胰岛素、血脂、生殖激素水平,计算胰岛素抵抗指数;HE染色观察卵巢形态;免疫组化法检测磷酸化PI3K(p-PI3K)阳性表达;Western blot法检测PI3K/AKT通路磷酸化蛋白及通路相关蛋白胰岛素受体底物-1(IRS-1)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、葡萄糖转运蛋白因子-4(GLUT4)、人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因(PTEN)蛋白表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠卵巢组织出现卵泡囊性扩张、黄体数量及颗粒细胞层减少、闭锁卵泡增多等病理损伤症状,血脂、血糖、胰岛素水平升高,胰岛素抵抗增加,生殖激素分泌紊乱,PI3K/AKT通路磷酸化蛋白及通路相关蛋白IRS-1、GSK3β磷酸化蛋白表达、GLUT4蛋白表达降低,PTEN蛋白表达升高(P<0.05)。柚皮素可减轻卵泡囊性扩张等病理损伤,促进PI3K/AKT通路及通路相关蛋白IRS-1、GSK-3β磷酸化蛋白及GLUT4蛋白表达,改善生殖激素分泌紊乱现象,减轻胰岛素抵抗,降低血糖、血脂水平及PTEN蛋白表达(P<0.05)。PI3K抑制剂可减弱柚皮素的上述作用(P<0.05)。结论柚皮素可通过促进PI3K/AKT通路活化,降低血糖、血脂水平及胰岛素抵抗,改善PCOS大鼠生殖激素紊乱及卵巢多囊改变。

摘要： 几乎90%以上的宫颈癌都有高危人乳头瘤病毒(high risk human papilloma virus,HR-HPV)的持续感染,尤其当患者感染HPV16时,高级别宫颈上皮内瘤变或宫颈癌的发生风险可进一步上升。研究表明人类肿瘤中存在低氧现象,缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)与低氧微环境关系最为密切,HIF-1α的活化能促进肿瘤生长,已成为目前的研究热点。经典的磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)自噬通路抑制自噬,并且在多种人类肿瘤中表达失调,其异常活化使细胞异常增殖、分化,促进肿瘤生长。综述HPV16感染可能引起HIF-1α与PI3K/Akt自噬通路变化的不同机制,探讨HPV16相关宫颈癌中PI3K/Akt自噬通路及HIF-1α的表达意义。

摘要： 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)是一条非常经典的信号通路,在细胞的生长、增殖及凋亡过程中发挥着关键作用,可介导多种神经退行性疾病的发生,其中以阿尔茨海默病(AD)最为常见。基于PI3K/Akt信号通路的中医药防治AD研究报道层出不穷,从单味中药和中药复方2个方面,对近年来中药调节PI3K/Akt通路防治AD的研究进展进行综述,以期对未来AD的研究工作有所帮助。

摘要： 目的观察补阳还五汤对脊髓损伤(SCI)大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路及神经功能影响。方法将96只SD大鼠随机分为正常组、模型组、补阳还五汤组、阻断组,每组24只。除正常组外均采用改良Allen法建立SCI模型。补阳还五汤组于术后第2天开始用补阳还五汤浓缩液0.217 g/(kg·d)灌胃;阻断组除每日补阳还五汤浓缩液灌胃外,予雷帕霉素3 mg/kg腹腔注射;模型组、正常组予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃。共3周。每组分别随机选取6只大鼠,采用联合行为评分(CBS)评价各组大鼠脊髓神经功能恢复情况,然后处死取SCI节段组织,分别采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各实验组大鼠神经细胞巢蛋白(Nestin),以及通路中Akt、mTOR的蛋白及mRNA表达水平。结果补阳还五汤组CBS低于模型组、阻断组(P0.05)。Western blot检测结果显示,与正常组比较,模型组Akt、mTOR蛋白相对表达量均升高(P<0.05),补阳还五汤组、阻断组Nestin、Akt、mTOR蛋白相对表达量均升高(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤组Nestin、Akt、mTOR蛋白相对表达量均升高(P<0.05);与补阳还五汤组比较,阻断组Nestin、Akt、mTOR蛋白相对表达量均降低(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,模型组Akt、mTOR mRNA相对含量均升高(P<0.05),补阳还五汤组、阻断组Nestin、Akt、mTOR mRNA相对含量均升高(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤组Nestin、Akt、mTOR mRNA相对含量均升高(P<0.05);与补阳还五汤组比较,阻断组Nestin、Akt、mTOR mRNA相对含量均降低(P<0.05)。结论补阳还五汤可通过激活PI3K/Akt/mTOR通路,参与SCI神经功能的修复。

摘要： 目的研究对羟基苯甲醛对氧糖剥夺/复氧损伤小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用。方法对羟基苯甲醛(500、250、125、62.5、31.25、15.63μmol/L)给药36 h,三气培养箱培养复制bEnd.3氧糖剥夺/复氧损伤模型,设置正常组、模型组、高剂量组、低剂量组、抑制剂组。相关试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、NO、TNF-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、ATP水平及线粒体关键ATP酶(Na^(+)/K^(+)-ATPase、Mg^(2+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase、Ca^(2+)/Mg^(2+)-ATPase)活性。Western blot法检测bEnd.3细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶信号通路相关蛋白。结果细胞存活率筛选出高剂量组250μmol/L、低剂量组125μmol/L作为实验条件。与正常组比较,模型组NO、Na^(+)/K^(+)-ATPase、Mg^(2+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase、Ca^(2+)/Mg^(2+)-ATPase活性、ATP水平明显降低,TNF-α、IL-1β、IL-6、LDH水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,高剂量组和低剂量组NO、Ca^(2+)-ATPase活性明显升高,LDH水平明显降低(P<0.05);高剂量组Na^(+)/K^(+)-ATPase、Mg^(2+)-ATPase、Ca^(2+)/Mg^(2+)-ATPase活性、ATP水平明显升高,TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组磷酸化Akt、磷酸化内皮型一氧化氮合酶表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高剂量组比较,抑制剂组磷酸化Akt、磷酸化内皮型一氧化氮合酶表达明显降低(0.80±0.05 vs 0.93±0.08,1.23±0.36 vs 1.72±0.10,P<0.05)。结论对羟基苯甲醛能有效保护氧糖剥夺/复氧损伤的bEnd.3,其药理机制与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶信号通路有关。

摘要： 目的 评价蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)-PTEN诱导性激酶蛋白1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)/E3泛素连接酶(E3 ubiquitin ligases,Parkin)信号通路在氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠皮质星形胶质细胞凋亡和焦亡中的作用.方法 体外培养SD新生大鼠原代皮质星形胶质细胞,将细胞接种于6孔板或96孔板,根据随机数字表法将星形胶质细胞分为4组(n=42):对照组(C组)、氧糖剥夺组(oxygen-glucose deprivation,OGD/R组),H89+氧糖剥夺(H89+OGD/R,HO组),H89对照组(H组),H89为PKA特异性抑制剂.采用无糖培养基在无氧条件下(95％N2和5％CO2的混合气体内)孵育6 h,再放置在含有5％CO2的正常环境下培养24 h的方法 制备氧糖剥夺/复氧复糖损伤模型,HO组和H组在氧糖剥夺前1 h向培养基内加入H8910μmol/L,C组和H组PBS洗涤后置于含有5％CO2的正常培养箱中培养.根据上述各组处理后,采用膜联蛋白(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)免疫荧光双染流式细胞学法测定细胞凋亡率,采用半胱天冬酶-1裂解片段(cleaved caspase-1)/PI免疫荧光双染流式细胞学法测定细胞焦亡率,采用四甲基偶氮唑法测定细胞存活率,采用Fluo-3/AM免疫荧光法测定细胞内钙离子浓度,二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)法测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,酶联免疫吸附法检测PKA活性,蛋白免疫印迹法法检测PINK1和Parkin的表达.结果 与C组比较,OGD/R组和HO组皮质星形胶质细胞的凋亡率和焦亡率、细胞内游离钙离子浓度、ROS含量、PKA活性、PINK1和Parkin表达升高,细胞存活率下降(P0.05).结论 抑制PKA-PINK/Parkin信号通路过度活化能够减轻氧糖剥夺/复氧复糖后大鼠星形胶质细胞凋亡和焦亡.

摘要： [目的]探讨原发性胃癌组织中细胞S相激酶相关蛋白(skp2)、p27kip1蛋白表达强度与肿瘤发生、发展的关系.[方法]选取本院获取的60例胃癌组织标本作为胃癌组、60例胃癌癌旁组织标本作为对照组,采用免疫组化染色技术检测两组标本skp2蛋白、p27kip1蛋白阳性表达率,分析不同病灶大小、组织学分级、浸润程度、淋巴结转移及TNM分期胃癌组织中skp2蛋白、p27kip1蛋白阳性表达率的差异.[结果]胃癌组skp2蛋白阳性表达率为68.33％(41/60),高于对照组的23.33％(14/60),p27kip1蛋白阳性表达率为28.33％(17/60),低于对照组的73.33％(44/60),且两组比较差异均有显著性(P<0.05);不同TNM分期、是否发生淋巴结转移、不同组织学分化程度、不同肿瘤浸润程度的胃癌组织中skp2蛋白阳性表达率相比较差异有显著性(P<0.05);不同TNM分期、是否发生淋巴结转移的胃癌组织中p27kip1蛋白阳性表达率差异有显著性(P<0.05).[结论]胃癌组织中的skp2蛋白表达上调、p27kip1蛋白表达下调,其可能与胃癌的发生及发展有关.

摘要： 混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)是一种具有激酶结构域的假激酶,在程序性坏死的调控中发挥着重要作用.脑缺血后,MLKL作为受体相互作用蛋白3的底物蛋白发生寡聚化和磷酸化,继而从胞质转位至质膜,引起线粒体分裂和细胞膜破裂.MLKL还可通过诱导程序性坏死、直接激活炎性小体等途径介导脑缺血后的炎症反应,进而加重脑损伤.因此,阐明MLKL的生物学特性及其在脑缺血中的作用和机制,对脑缺血的治疗至关重要.

摘要： 目的 探讨力生长因子(MGF)对破骨细胞活性的影响及其机制.方法 使用诱导剂25 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及30 ng/ml核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)对RAW264.7前体破骨细胞系进行诱导培养,培养7d后通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法进行鉴定.取培养的破骨细胞,采用Western blot法测定45 ng/ml的MGF对破骨细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶蜃白激酶B(PI3K/AKT)信号通路及其活性的影响,即AKT、磷酸化(p)-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR和TRAP在0,4,8和12h的表达水平,同时采用RT-PCR法从分子水平测定破骨细胞TRAP在0,4,8和12h的表达水平.用20 μmol/L PI3K/AKT磷酸化抑制剂LY294002联合45 ng/ml MGF作用于破骨细胞,采用Western blot法检测AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR和TRAP在0,4,8和12h的表达水平.结果 M-CSF和RANKL对RAW264.7细胞培养7d后,能够得到大量TRAP染色阳性的破骨细胞.Western blot结果显示,MGF作用于破骨细胞后,AKT和mTOR的表达水平随作用时间无明显变化(P＞0.05),p-AKT和p-mTOR的表达水平随着作用时间的延长持续增高,分别由0h的(2.18±0.34) pg/ml和(0.83±0.10)pg/ml增加至12h的(3.86±0.36) pg/ml和(1.56±0.19)pg/ml(P＜0.05),TRAP的表达水平随作用时间显著降低,由0h的(5.66±0.47) pg/ml降至12h的(3.76±0.38)pg/ml(P＜0.05).RT-PCR法测定破骨细胞TRAP表达结果显示,MGF抑制破骨细胞TRAP的表达,由0h的1.02±0.06降至12h的0.53±0.11(P＜0.05).Western blot结果显示,LY294002联合MGF作用于破骨细胞后,AKT和mTOR的表达水平随作用时间无明显变化(P＞0.05),p-AKT和p-mTOR的表达水平显著降低,分别由0h的(3.28±-0.18)pg/ml和(3.29±0.22)pg/ml降至12h的(2.06±0.34)pg/ml和(2.04±0.20)pg/ml(P＜0.05),而TRAP的表达水平随MGF作用时间则差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MGF通过PI3K/AKT信号途径抑制破骨细胞TRAP的表达,进而抑制破骨细胞活性;LY294002抑制破骨细胞PI3K/AKT信号通路的表达,进一步验证MGF抑制破骨细胞活性的机制.这一发现可为临床预防及治疗骨质疏松症提供新的思路.

摘要： 目的 探讨Polo样激酶4(Plk4)在脑胶质瘤中的表达特征、生物学功能及其相关分子机制.方法 纳入癌症基因组图谱(TCGA)数据库(689例)、中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库(693例)中脑胶质瘤患者的胶质瘤样本的转录组和临床数据,纳入基因型和基因表达量关联(GTEx)数据库中正常脑组织标本的转录组数据(255例).比较脑胶质瘤标本与正常脑组织中,以及不同病理学分级脑胶质瘤标本中Hk4 mRNA表达量的差异;采用log-rank检验法比较Plk4 mRNA低表达组与高表达组患者总生存期的差异.取人星形胶质细胞、U87、LN229、U251及A172细胞株行相关研究.采用小干扰RNA(siRNA)转染法敲低U87和LN229细胞中Plk4的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Plk4 mRNA的表达;采用蛋白质免疫印迹法检测Plk4蛋白的表达;采用EdU实验和Transwell实验观察Plk4对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.取4周龄雌性BALB/c-nu裸鼠20只,将U87细胞注射于小鼠腹部制备胶质瘤异种荷瘤模型,观察Plk4敲低组(肿瘤内注射siRNA-Plk4,n=10)与无义序列组(肿瘤内注射无序列Plk4,n=10)治疗21 d(7次)后肿瘤体积和重量的差异.取敲低Plk4的U87细胞,采用蛋白组学和磷酸化组学的关联分析方法探讨Plk4在胶质瘤中的生物学功能及其分子机制.结果 与星形胶质细胞相比,U87、LN229、U251及A172细胞株中Plk4 mRNA的表达水平均升高;TCGA联合GTEx数据库数据分析显示,低级别胶质瘤及胶质母细胞瘤标本中Plk4 mRNA的表达量均高于正常脑组织;对CGGA数据库中标本的分析显示,Plk4mRNA的表达量随世界卫生组织(WHO)病理学分级的升高而升高;2个数据库中Plk4 mRNA高表达组患者的总生存期均短于低表达组患者.EdU实验显示,敲低Plk4表达的U87和LN229细胞的EdU阳性率均低于其无义序列细胞.Transwell实验显示,敲低Plk4表达的U87和LN229细胞的穿胶数和迁移数均低于其无义序列细胞.体内实验结果表明,Plk4敲低组的裸鼠皮下肿瘤的生长速度明显慢于无义序列组.上述数据比较差异均有统计学意义(均P＜0.01或0.05).在蛋白组学分析中,共鉴定到428个差异表达蛋白.在磷酸化组学分析中,共鉴定到1180个差异表达的磷酸化肽段,对应于728个磷酸化蛋白.将蛋白组学和磷酸化组学的结果进行关联分析后发现,蛋白组学和磷酸化组学关联上2197个蛋白,其中66个只在蛋白水平有改变,590个只在磷酸化水平有改变,25个在蛋白和磷酸化水平均有改变.对只在磷酸化水平有改变的590个蛋白进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析发现,590个蛋白的功能主要为细胞进程和生物学调控等,主要富集的通路是志贺菌病和神经退行性变途径等.结论 Plk4 mRNA在脑胶质瘤中呈高表达,可能与患者的预后有关;其机制可能通过细胞进程等信号通路促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭有关.Plk4可能是脑胶质瘤诊断和预后的分子标志物和药物治疗潜在的靶点.

摘要： 本发明公开了一种测定蛋白激酶活性的方法，其主要步骤为：选取一组不同浓度的PKA和同一浓度的ATP进行反应，得到一组PKA反应液，再分别将PKA反应液和Na

摘要： 本发明提供对酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε具有抑制活性的新型唑酮衍生物。另外，通过抑制酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε，该抑制剂提供了对于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关联的疾病的治疗和/或预防有用的医药。尤其是，该抑制剂提供了对于昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗有用的医药。一种酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂，作为有效成分，含有通式（1）表示的唑酮衍生物或其盐、或者它们的溶剂化物或它们的水合物。[式（1）中，X表示卤原子（可为氟原子、氯原子、溴原子或碘原子中的任一种）]。

摘要： 本发明涉及一种用于缓解神经元的神经突生长抑制的方法，其中所述神经元包含Nogo受体，所述方法包括使所述神经元与能够导致Nogo受体磷酸化的组合物接触，其中所述组合物包含蛋白激酶A或酪蛋白激酶。

摘要： 本发明公开了一种测定蛋白激酶活性的方法，其主要步骤为：选取一组不同浓度的PKA和同一浓度的ATP进行反应，得到一组PKA反应液，再分别将PKA反应液和Na

摘要： 本发明提供对酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε具有抑制活性的新型

摘要： 本发明提供对酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε具有抑制活性的新型唑酮衍生物。另外，通过抑制酪蛋白激酶1δ以及酪蛋白激酶1ε，该抑制剂提供了对于酪蛋白激酶1δ或者酪蛋白激酶1ε的活化机制与疾病状态相关联的疾病的治疗和/或预防有用的医药。尤其是，该抑制剂提供了对于昼夜节律周期障碍（包括睡眠障碍）、中枢神经退行性疾病、癌的治疗有用的医药。一种酪蛋白激酶1δ及酪蛋白激酶1ε抑制剂，作为有效成分，含有通式（1）表示的唑酮衍生物或其盐、或者它们的溶剂化物或它们的水合物。式（1）中，X表示卤原子（可为氟原子、氯原子、溴原子或碘原子中的任一种）。

摘要： 本发明涉及一种用于缓解神经元的神经突生长抑制的方法，其中所述神经元包含Nogo受体，所述方法包括使所述神经元与能够导致Nogo受体磷酸化的组合物接触，其中所述组合物包含蛋白激酶A或酪蛋白激酶。

摘要： 本发明提供使用吡唑并[1，5－a]嘧啶化合物抑制蛋白激酶的方法，该激酶选自AKT、关卡激酶、极光激酶、Pim激酶及酪氨酸激酶，和使用此种化合物以治疗、预防、抑制或改善一或多种与蛋白激酶相关疾病的方法。

摘要： 一种用于磷脂酰肌醇蛋白激酶类及其亚类的活性快速测定的试剂盒，其特征在于该测定试剂盒有如下组成：一块由待测的磷脂酰肌醇蛋白激酶相对应的底物和磷脂预先包埋好的96孔板；酶活性测定Tris-HCl溶液；酶反应终止与洗涤HCl液以及簿层滴样用氯仿-HCl专用液所组成。

摘要： 一种用于磷脂酰肌醇蛋白激酶类及其亚类的活性快速测定的试剂盒，其特征在于该测定试剂盒有如下组成：一块由待测的磷脂酰肌醇蛋白激酶相对应的底物和磷脂预先包埋好的96孔板；酶活性测定Tris－HCl溶液；酶反应终止与洗涤HCl液以及簿层滴样用氯仿－HCl专用液所组成。