细胞外信号调节MAP激酶类

摘要： 目的探讨分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响机制。方法本研究起止时间2018年11月至2019年6月。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人结直肠癌细胞HCT8、SW480、RKO中SFRP1的mRNA表达;将pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)、pcDNA 3.1-SFRP1组(转染pcDNA 3.1-SFRP1)、pcDNA 3.1-SFRP1+DMSO组[转染pcDNA 3.1-SFRP1,再用二甲基亚砜(DMSO)处理]、pcDNA 3.1-SFRP1+IGF组[转染pcDNA 3.1-SFRP1,再用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路激活剂(IGF1)处理],均用脂质体法转染至HCT8细胞。蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中SFRP1、波形蛋白(Vimentin)、纤维黏连蛋白(FN)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、MAPK/ERK信号通路关键基因(Ras)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白表达;迁徙实验(Transwell)检测细胞的迁移侵袭。结果与正常结肠上皮细胞HCoEpiC相比,人结直肠癌细胞HCT8、SW480、RKO中SFRP1的表达显著降低[mRNA(1.00±0.06)比(0.36±0.03)、(0.62±0.05)、(0.59±0.05);蛋白(1.00±0.04)比(0.24±0.02)、(0.48±0.04)、(0.47±0.04),均P<0.05]。过表达SFRP1可抑制HCT8细胞的迁移(120±11)比(65±6)和侵袭(98±8)比(47±4),并下调Vimentin(0.96±0.05)比(0.23±0.02)、FN(1.00±0.07)比(0.51±0.04)、MMP-9(0.98±0.08)比(0.35±0.03)、N-cadherin(1.01±0.09)比(0.43±0.04),上调E-cadherin(0.99±0.06)比(3.71±0.27),抑制MAPK/ERK信号通路关键蛋白Ras(0.97±0.07)比(0.34±0.03)、mTOR(1.03±0.07)比(0.42±0.04)、p-ERK1/2(0.98±0.08)比(0.29±0.03)和ERK(1.01±0.06)比(0.31±0.03)的表达。激活MAPK/ERK信号通路可逆转过表达SFRP1对结直肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论SFRP1可抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与失活MAPK/ERK信号通路相关,将可为SFRP1用于结直肠癌的治疗提供依据。

摘要： 目的明确白细胞介素8(IL-8)在胆道闭锁(BA)患儿中的表达水平及其与肝门空肠吻合术(Kasai术)后胆管炎间的关系,探索调控IL-8的上游信号通路。方法(1)纳入33例BA患儿(BA组,其中胆管炎组18例,无胆管炎组15例),6例胆道扩张患儿(胆道扩张组)以及36例体检健康婴幼儿(正常对照组)。获取全部BA患儿和健康婴幼儿血清样本,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-8和表皮生长因子(EGF)表达水平。取6例BA和6例胆道扩张患儿肝组织标本,免疫组化染色检测磷酸化胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)活化情况。(2)体外培养人正常肝细胞L-02,给予磷酸盐缓冲液(PBS)和25、50、100μg/L EGF干预24 h,定量聚合酶链反应(qPCR)检测IL-8水平。细胞系HIBEpic、L-02、LX-2分别给予PBS和100μg/L EGF干预24 h,qPCR检测IL-8水平。L-02细胞经100μg/L EGF和(或)5 mmol/L的ERK通路抑制剂KO-947干预后,检测ERK1/2活化情况和IL-8表达水平。结果(1)BA组血清IL-8水平高于正常对照组,胆管炎组术前血清IL-8水平高于无胆管炎组(P0.05),L-02细胞IL-8表达升高(P<0.01)。100μg/L的EGF还可诱导L-02细胞p-ERK1/2大量表达,添加KO-947干预可逆转上述改变。结论BA患儿术前血清IL-8表达显著升高,与Kasai术后胆管炎关系密切,EGF可通过ERK1/2信号通路促进肝细胞IL-8表达升高。

摘要： 目的 研究螺旋藻多糖(SPP)对人急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat的杀伤作用.方法 取对数生长期Jurkat细胞,分为对照组和1 g/L、2 g/L、5 g/L SPP组.采用MTT法检测SPP对Jurkat细胞增殖的影响,Western blot法检测凋亡蛋白caspase-3、细胞膜表面受体CD45、CD71以及细胞内部信号分子p-ERK、p-JNK、t-ERK和t-JNK蛋白表达水平.结果 1 g/L、2 g/L和5 g/L SPP组细胞增殖抑制率依次升高,分别为53.286％±3.112％、80.075％±4.240％和86.430％±4.614％.2 g/L、5 g/L SPP组cleaved caspase-3蛋白表达水平高于对照组,5 g/L SPP组高于1 g/L SPP组(P<0.05).1 g/L、2 g/L SPP组CD45蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),CD71蛋白表达水平与对照组差异无统计学意义;5 g/L SPP组CD45蛋白表达水平均高于对照组、1 g/L和2 g/L SPP组;CD71蛋白表达水平低于对照组(P<0.05),与1 g/L和2 g/L SPP组差异无统计学意义.对照组、1 g/L SPP组、2 g/L SPP组和5 g/L SPP组p-ERK蛋白表达水平依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义;各组间t-ERK、p-JNK和t-JNK蛋白表达水平差异均无统计学意义.结论 SPP对Jurkat细胞具有杀伤作用,其机制可能是SPP通过影响细胞膜表面受体CD45和CD71的表达,将凋亡信号传递到细胞内部,通过活化ERK,最终活化caspase-3,诱导细胞凋亡.

摘要： 目的 评价预输注青年大鼠血浆对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍的影响及细胞外调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路在其中的作用.方法 SPF级健康雄性Wistar大鼠120只,18月龄,体重550～ 650 g,采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、七氟烷麻醉组(S组)、青年大鼠血浆组(P组)和ERK抑制剂SL327组(SL组).P组和SL组尾静脉注射经过处理的3月龄青年大鼠血浆100 μ1/次,C组和S组尾静脉注射等容量生理盐水,2次/周,共4周.注射完毕后S组、P组和SL组大鼠吸入3％七氟烷麻醉3h,麻醉前SL组尾静脉注射ERK抑制剂SL32750 mg/kg.于麻醉前1d和麻醉后3、7d行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能;随后处死大鼠分离海马组织,采用Western blot法测定磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化CREB(p-CREB)、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达水平,透射电镜下观察海马神经元超微结构并记录突触数量.结果 与C组比较,其余3组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调,突触数量减少(P＜0.05).与S组比较,P和SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达上调,突触数量增加(P＜0.05).与P组比较,SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调,突触数量减少(P＜0.05).结论 预输注青年大鼠血浆减轻可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍,其机制与激活ERK-CREB信号通路,改善海马突触可塑性有关.

摘要： 目的 评价瑞芬太尼对肠缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡时丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠36只,体重200～250 g,2月龄,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼组(R组).采用夹闭大鼠肠系膜上动脉1h恢复灌注的方法制备大鼠肠缺血再灌注损伤模型.R组缺血前30 min静脉输注瑞芬太尼0.2μg·kg-1·min-15 min,静脉输注生理盐水5 min,重复循环3次.于再灌注2h时采集大鼠右心室血样测定血清二胺氧化酶(DAO)浓度,随后处死大鼠取小肠组织,观察病理学结果并进行Chiu评分;TUNEL法计数凋亡肠上皮细胞,采用Western blot法检测肠组织磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、p-p38 MAPK的表达,活化型半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)和核蛋白NF-κB p65的表达,计算p-ERK/ERK比值、p-JNK/JNK比值和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值.结果 与Sham组比较,I/R组大鼠肠黏膜Chiu评分、血清DAO浓度、肠上皮细胞凋亡率、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、cleaved caspase-3、NF-κB p65表达水平升高、R组大鼠肠黏膜Chiu评分升高(P＜0.05),血清DAO、肠上皮细胞凋亡率、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、cleaved caspase-3和NF-κB p65表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R组比较,R组大鼠肠黏膜Chiu评分、肠上皮细胞凋亡率、血清DAO浓度下降,p-ERK/ERK比值、cleaved caspase-3、NF-κB p65表达水平降低(P＜0.05).结论 瑞芬太尼抑制肠缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡的机制与促进ERK活化有关.

摘要： 目的 研究Sprouty在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达及其与病情严重度的相关性.方法 2018年5-11月于南方医科大学皮肤病医院收集15例寻常型银屑病皮损及10例正常对照皮肤标本,采用免疫组化检测银屑病皮损与对照皮肤组织中Sprouty1、2和4蛋白的分布,Western印迹检测Sprouty1、2和4蛋白的表达,逆转录PCR(RT-PCR)检测Sprouty1、2和4 mRNA的表达.采用Pearson相关分析检验Sprouty蛋白表达量与银屑病皮损面积和严重程度指数(PA SI)相关性.结果 免疫组化显示,银屑病皮损和对照皮肤均有Sprouty1、2和4表达,Sprouty1在对照皮肤颗粒层细胞的细胞膜和细胞质呈强表达,在银屑病皮损颗粒层的细胞膜少量表达,Sprouty4在银屑病组中的表达强于对照组,Sprouty2在两组中均少量表达.RT-PCR和Western印迹显示,银屑病组和对照组皮肤中均有Sprouty1 mRNA和蛋白的表达,银屑病组Sprouty1 mRNA(0.844±0.169)和蛋白(0.148±0.141)的表达均明显低于对照组(分别为0.972±0.105和0.413±0.108),两组比较,均P＜0.05;且银屑病组Sprouty1蛋白表达量与PASI评分呈负相关(r=-0.628,P=0.012).银屑病组Sprouty4蛋白和mRNA表达量分别为1.306±0.283、1.727±1.017,均明显高于对照组(0.584±0.304和0.714±0.615),差异均有统计意义(t值分别为6.063和2.814,均P＜0.05),且银屑病组Sprouty4蛋白表达量与PASI评分呈正相关(r=0.812,P＜0.001);两组均少量表达Sprouty2蛋白和mRNA,组间差异无统计学意义(均P＞ 0.05),且蛋白表达量与PASI评分无显著相关性(r=0.436,P=0.104).结论 银屑病皮损中Sprouty1、4蛋白表达水平与PASI评分存在相关性,提示二者与银屑病的发病相关.

摘要： 目的 探讨高尿酸在体外对心肌细胞活力的影响及其相关机制.方法 实验分为空白对照组(Con组)、高尿酸组(HUA组)、抗氧化剂组(NAC组)、ERK抑制剂组(PD98059组)、P38抑制剂组(SB203580组)、高尿酸+抗氧化剂组(NAC+HUA组)、高尿酸+ERK抑制剂组(PD98059+HUA组)、高尿酸+P38抑制剂组(SB203580+HUA组)以及高尿酸+抗氧化剂+ERK抑制剂组(NAC+PD98059+HUA组),采用MTT法检测心肌细胞活力,免疫荧光染色及流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞外信号调节激酶(ERK)及P38的蛋白表达水平.结果 经高尿酸处理后,心肌细胞活力在尿酸为0.15 g/L时下降最为明显.与Con组比较,HUA组的氧化压力明显上升;与HUA组比较,NAC+HUA组的氧化压力下降(P<0.05).与Con组相比,HUA组心肌细胞活力水平明显下降;与HUA组相比,NAC+HUA组、PD98059+HUA组及SB203580+HUA组的心肌细胞活力均上升(P<0.05).与Con组比较,HUA组ERK和P38的磷酸化水平明显增加;与HUA组相比,SB203580+HUA组的P38磷酸化水平明显下降而NAC+HUA组、PD98059+HUA组、NAC+PD98059+HUA组的ERK和P38的磷酸化水平均明显下降(P<0.05).结论 高尿酸在体外通过氧化应激激活ERK/P38信号通路抑制心肌细胞活力.

摘要： 目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂对间歇低氧大鼠海马CA1区神经细胞自噬相关蛋白表达及认知功能的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠96只,采用随机数字法分为正常对照组(UC组)、5％间歇低氧组(5％IH组)、ERK抑制剂组(U0126组),每组又分为7、14、21、28d4个时间点,每个时间点8只大鼠.应用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞线粒体、自噬体等超微结构的改变;免疫组织化学法检测海马CA1区ERK1/2、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达;TUNEL检测海马CA1区神经细胞凋亡情况;Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆功能.结果 与UC组比较,5％IH组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞ERK1/2蛋白表达明显增加(P＜0.05);与5％IH组比较,U0126组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞ERK1/2蛋白表达明显降低(15.48±2.00 vs 27.91±2.15,15.51±1.93 vs 35.86±2.58,15.57±2.09 vs 47.04±3.96,15.43±1.97vs59.03±4.09,P＜0.05).与UC组比较,5％IH组和U0126组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞Beclin-1和LC3蛋白表达及神经元凋亡指数明显增加(P＜0.05);与5％IH组比较,U0126组7、14、21、28 d海马CAl区神经细胞Beclin-1和LC3蛋白表达及神经元凋亡指数明显降低(P＜0.05).与UC组比较,5％IH组和U0126组大鼠7、14、21、28 d逃避潜伏期明显延长,跨越目标象限时间明显缩短(P＜0.05);与5％IH组比较,U0126组大鼠7、14、21、28 d逃避潜伏期明显缩短,跨越目标象限时间明显延长(P＜0.05).结论 ERK抑制剂U0126通过阻断ERK信号通路抑制大鼠海马神经细胞自噬的激活,进而减轻神经细胞损伤,改善认知功能.

摘要： 目的 评价艾司洛尔对大鼠脑缺血再灌注时磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK) 1/2表达的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠48只,8月龄,体重200～250 g,按照随机数字表法分为3组(n=16):假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和艾司洛尔组(E组).采用夹闭双侧颈总动脉20 min,恢复灌注10 min,重复3次的方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型.E组于缺血前30 min静脉输注艾司洛尔200 g·kg-1·min-1,输注时间1h,输注30 min后制备模型;I/R组于缺血前30 min静脉输注等容量生理盐水;Sham组大鼠只分离双侧颈总动脉而不夹闭,于分离双侧颈总动脉后输注等容量生理盐水.于缺血前和再灌注1、3和7d时采用Morris水迷宫实验测试认知功能,随后处死大鼠取海马,确定湿重/干重(W/D)比值,采用EB法检测大鼠血脑屏障通透性,采用RT-PCR法检测海马ERK1/2 mRNA的表达,采用Western blot法检测p-ERK1/2的表达.结果 与Sham组比较,I/R组和E组再灌注1、3和7d时逃避潜伏期及游泳距离延长,海马W/D比值和脑EB含量升高,海马ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,E组再灌注1、3和7d时逃避潜伏期及游泳距离缩短,海马W/D比值和脑EB含量降低,海马ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2表达下调(P＜0.05).结论 艾司洛尔减轻脑缺血再灌注损伤,改善大鼠认知功能的机制与抑制p-ERK1/2表达上调有关.

摘要： 本发明公开了式1.0的ERK抑制剂及其药学上可接受的盐和溶剂化物。Q是可以具有桥环或者稠合环的哌啶或者哌嗪环。哌啶环在环内可以具有双键。所有其它取代基如本文中所定义。还公开了利用式1.0化合物治疗癌症的方法。

摘要： 本发明公开了细胞凋亡信号调节激酶抑制剂及其应用。如通式I所示化合物、其互变异构体或其药学上可接受的盐：本发明提供了一类结构新颖的化合物，药效学实验证明：本发明的化合物对ASK1受体有较好的抑制能力，能体外有效抑制纤维化的形成，且对正常细胞毒性较低。因此，本发明的化合物可以用于治疗多种纤维化及相关性疾病。

摘要： 本发明涉及一种如通式(I)所示的化合物；该化合物具有细胞凋亡信号调节激酶(“ASK1”)抑制活性，因此可用于对肾病、糖尿病性肾病和肾脏纤维化等疾病的治疗。

摘要： 本发明涉及一种如通式(I)所示的化合物；该化合物具有细胞凋亡信号调节激酶(“ASK1”)抑制活性，因此可用于对肾病、糖尿病性肾病和肾脏纤维化等疾病的治疗。

摘要： 本发明涉及式(I)化合物：其中变量如上文所定义。所述化合物具有细胞凋亡信号调节激酶(“ASK1”)抑制活性，并且因此适用于治疗ASK1介导的病况，包括自身免疫病症；炎性疾病；心血管疾病；糖尿病；糖尿病性肾病；心‑肾疾病，包括肾脏疾病；纤维化疾病；呼吸道疾病；COPD；特发性肺纤维化；急性肺损伤；急性肝脏疾病和慢性肝脏疾病；以及神经变性疾病。

摘要： 本发明公开了式1.0的ERK抑制剂及其药学上可接受的盐和溶剂化物。Q是可以具有桥环或者稠合环的哌啶或者哌嗪环。哌啶环在环内可以具有双键。所有其它取代基如本文中所定义。还公开了利用式1.0化合物治疗癌症的方法。

摘要： 本发明公开了细胞凋亡信号调节激酶抑制剂及其应用。如通式I所示化合物、其互变异构体或其药学上可接受的盐：

摘要： 本发明公开一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐类、酯类、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物或它们的组合：

摘要： 本发明涉及一种具有式I结构的稠环化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其溶剂化物或者其前药分子。本发明提供的该类新的稠环类化合物能够有效的与ASK1结合并作为ASK1抑制剂，从而可以阻滞ASK1控制的下游通路，缓解或治愈ASK1介导的相关疾病。

摘要： 本发明涉及一种如通式(I)所示的化合物；该化合物具有细胞凋亡信号调节激酶(“ASK1”)抑制活性，因此可用于对肾病、糖尿病性肾病和肾脏纤维化等疾病的治疗。