老年大鼠

摘要： 目的观察加味芍甘附子汤通过早期生长反应蛋白2(early growth responseprotein 2,Egr2)调控胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)老年大鼠炎症反应的作用。方法选用清洁Wistar大鼠96只,其中青年鼠与老年鼠各48只。随机将老年鼠与青年鼠分为正常组、模型组、对照组、中药组,每组各12只。正常组常规饲养,其余3组复制CIA大鼠模型后分别给予生理盐水、雷公藤多苷片及加味芍甘附子汤灌胃4周,每周评价各组大鼠关节炎症指数(arthritis index,AI);4周后苏木精—伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)检测踝关节组织的病理变化;RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达;Elisa法测定外周血白细胞介素-17A(interleukin 17A,IL-17A)、γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)表达。结果(1)各组大鼠AI评价:给药期间,青年鼠和老年鼠的AI评分均降低,且在四周后中药组的评分最低(P<0.05),而老年鼠和青年鼠的组间比较差异无统计学意义。(2)HE检测大鼠踝关节组织的病理变化:四周后取材,踝关节病理学提示除正常组外,各组均有滑膜组织增生及炎性细胞浸润,老年鼠模型组的炎性细胞浸润明显重于青年鼠模型组,且中药组均明显轻于模型组。(3)RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达:对照组和中药组的大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达高于模型组(P<0.05),老年鼠模型组的大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达明显低于青年鼠模型组(P<0.05),而老年鼠中药组的表达明显高于青年中药组(P<0.05)。(4)Elisa法测定大鼠外周血IFN-γ、IL-17A、IL-6的表达:老年鼠中药组IL-17A的表达低于模型组与对照组(P<0.05);青年鼠中药组IL-17A的表达低于模型组(P<0.05),但高于对照组(P<0.05)。老年鼠模型组及对照组外周血IL-17A的表达均高于青年鼠相应组别(P<0.05),而老年鼠中药组的表达低于青年鼠中药组(P<0.05)。结论(1)老年CIA大鼠Egr2的低表达为参与炎症过程可能因素之一;(2)加味芍甘附子汤可能通过对Egr2的调控改善CIA老年鼠关节滑膜炎症,还需进一步开展机制研究。

摘要： 目的:建立分离纯化老年大鼠小胶质细胞的改良方法,并初步观察老年大鼠脊髓小胶质细胞的生物学特性。方法:以年轻SD大鼠(2月龄)为对照组,采用胰酶、胰酶替代物和机械网搓法等不同的制备方法,制备大鼠小胶质细胞的单细胞悬液,通过检测细胞纯度、存活率,观察细胞形态特征,分析细胞的炎性功能特征等,确定老年大鼠(20月龄)小胶质细胞的分离纯化方法,观察老年大鼠脊髓小胶质细胞功能特征。结果:胰酶消化所得细胞的存活率低(年轻大鼠83%,老年大鼠60%);机械网搓法虽得到的存活率较高(95%),但是细胞获取率最低(年轻大鼠((0.207±0.020)×10^(6),老年大鼠(0.243±0.023)×10^(6));采用胰酶替代物解离、密度梯度离心方法分选出的老年大鼠脊髓小胶质细胞数量多、活性好、存活率高,细胞纯度可达85%以上,我们采用此方法分选纯化不同年龄大鼠脊髓小胶质细胞,与年轻大鼠相比,老年鼠脊髓组织量大,所需消化液多,但消化时间缩短;与年轻大鼠小胶质细胞相比,老年大鼠脊髓小胶质细胞其胞体较大较圆,突起少且粗短,形态上偏向于激活状态,老年大鼠小胶质细胞促炎因子IL-1β表达降低(P<0.05),而抗炎因子IL-10(P<0.01)表达升高。结论:成功建立胰酶替代物解离结合密度梯度离心法从大鼠脊髓组织中分离纯化小胶质细胞,老年大鼠脊髓内小胶质细胞整体表现出抗炎表型。

摘要： 目的观察褪黑素对大鼠挤压综合征模型骨骼肌缺血再灌注损伤的影响。方法将健康老年SD雄性大鼠用随机数字表法分4组,分为空白组(blank group,B组)、对照组(control group,C组)、氯化钠组(NaCl group,NS组)和褪黑素组(melatonin,MT组),予以5%戊巴比妥钠溶液,以50mg/kg剂量腹腔麻醉大鼠,利用卡式止血带挤压大鼠后肢根部,止血带拉力等同于3kg重物的压力,5h后撤除止血夹恢复挤压肢体血流灌注,其间大鼠能自由获取食物与水。空白组(B组)除腹腔给予5%戊巴比妥钠麻醉外无任何处理、对照组(C组)挤压肢体前无药物干预、氯化钠组(NS组)挤压肢体前30min予10ml/kg生理盐水和褪黑素组(MT组)挤压肢体前30min予10ml/kg褪黑素溶液,给药方式均通过大鼠尾静脉5min内推注。测定术后1~5d大鼠的游泳平均速度;于术前1d、术后1~5d进行Morris水迷宫实验测得逃避潜伏期、准确跨越平台次以及目标象限停留时间百分比,并于术后第6天测试其记忆能力;于术前1d、术后1、3、5d采集各组大鼠尾静脉血1ml,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平。结果4组大鼠术后的游泳速度比较,差异无统计学意义(P>0.05);与B组比较,其他3组潜伏期显著延长(P<0.05);与对照组和氯化钠组比较,褪黑素组的潜伏期显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05),目标象限停留时间百分比显著增加(P<0.01),术后1、3、5d TNF-α、IL-10水平明显降低(P<0.05)。结论褪黑素对挤压综合征骨骼肌缺血再灌注损伤具有保护作用,并能提高挤压综合征模型大鼠的生存率。

摘要： 为研究幼年大鼠和老年大鼠肠道菌群的结构及多样性,对7只幼年大鼠(1.5月龄)和5只老年大鼠(24月龄)肠道菌群的构成进行了比较,收集相同环境下饲养的幼年组和老年组大鼠的粪便,对其进行16S核糖体RNA基因V3+V4区的测序以分析肠道菌群的构成.结果表明:幼年组大鼠个体间肠道菌群结构差异较大,而老年组大鼠相对较集中,两组大鼠肠道菌群在门级水平上相对丰度相似;幼年组大鼠乳杆菌科下的微生物所占丰度高于老年组大鼠(p＜0.05),而梭菌目瘤胃菌科下微生物丰度低于老年组大鼠(p＜0.05);老年组大鼠的肠道生物多样性高于幼年组大鼠,老年组大鼠的肠道菌群多样性较高,菌群种类丰富,但其中有害菌比例显著升高.该结果填补了不同年龄大鼠肠道菌群结构研究的空白,为改善实验用大鼠的健康状况以延长其寿命提供一定的理论基础.

摘要： 目的:探讨与分析内脂素对老年大鼠脑组织损伤和炎症反应的影响.方法:10个月龄老年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只随机平分为两组-对照组与内脂素组,内脂素组给予腹腔注射重组人内脂素200μg/次,对照组均给予等量蒸馏水灌胃,2次/w,连续给药4w.对比两组给药前、给药第2w、给药第4w的逃避潜伏期、血清白介素(Interleukin,IL)-6与C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)含量,及给药第4w的线粒体超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、海马与皮层区神经元凋亡率.结果:所有大鼠在实验期间均出现典型的绕池壁现象.两组给药前逃避潜伏期、血清IL-6与CRP含量对比差异无统计学意义(P＞0.05),给药后两组第2w、给药第4w的逃避潜伏期、血清IL-6与CRP含量均降低(P＜0.05),且内脂素组给药第2w、给药第4w的上述指标低于对照组,对比均有统计学意义(P＜0.05);内脂素组给药第4w的线粒体SOD、GSH-Px活性高于对照组,海马与皮层区神经元凋亡率低于对照组,经对比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:内脂素在老年大鼠的应用能缓解脑组织损伤,抑制炎症反应,有利于清除过量的自由基,降低神经元的凋亡率.

摘要： 目的 探讨常用吸入麻醉药物七氟醚对老年大鼠相关认知功能影响及其对海马区Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达影响.方法 30只20月龄的老年雄性wister大鼠,随机分为3组:对照组(C组n=10),七氟醚1组(S1组n=10),和七氟醚2组(S2组n=10),老年雄性wister大鼠放置一密闭麻醉箱中,该麻醉箱放置于预设温度为35°C度的水浴箱中.麻醉箱进气口与装有七氟醚气体挥发罐的麻醉机连接,出气口接延长管置于通风厨,S1组大鼠用1.5％七氟醚麻醉2h,S2组大鼠用3.0％七氟醚麻醉2h,C组大鼠暴露于纯氧中2h.麻醉气体由纯氧通过麻醉机输送通过该麻醉箱,实验中使用麻醉气体监测仪监测麻醉箱出气口的麻醉气体浓度.在麻醉过程中每隔30 min监测大鼠肤色,并记录呼吸频率.对照组在手术后第一天处死,七氟醚组分别于处理后第2天各断头处死10只,冰盘上快速取海马,Western Blot法测定海马区BDNF、CREB及Erk1/2相关表达,并分别在处死前2小时进行水迷宫实验,并判断其记忆认知相关行为是否产生了改变.结果 试验组吸入低浓度1.5％七氟醚老年雄性wister大鼠试验后认知记忆功能不如对照组,试验组Western Blot法测定海马BDNF、CREB及Erk1/2相关表达均低于对照组,实验组组间比较浓度越高该信号通路表达活性越低.七氟醚预处理后吸入低浓度1.5％七氟醚后老年雄性wister大鼠认知功能减退,其机制可能与Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达有关,高浓度组(吸入低浓度3％七氟醚)影响情况较低浓度组显著.S1组、S2组麻醉后潜伏期均较麻醉前及C组麻醉后明显延长(P<0.05),S2组麻醉后潜伏期较S1组延长更为显著(P<0.05);S1及S2组大鼠120S内穿越原平台区域进入次数麻醉后显著低于麻醉前及C组,组间比较S2组老年大鼠认知功能障碍.

摘要： 目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)β分泌酶1反义转录物(BACE1?AS)在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用.方法 SPF级健康雄性SD老年大鼠64只,18月龄,体重480～580 g.采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+阴性对照质粒组(SN组)和七氟醚+BACE1?AS抑制剂(siRNA?BACE1?AS)组(ST组),每组16只.SN组和ST组分别侧脑室注射阴性对照质粒和siRNA?BACE1?AS,C组和S组注射等体积PBS溶液,注射后1 d C组吸入30％氧气6 h,S组、SN组和ST组吸入3.6％七氟醚与30％氧气的混合气体6 h.气体吸入后1 d,采用水迷宫实验测实验第1～5天逃避潜伏期和实验第6天穿越平台次数.水迷宫实验结束后1h内处死大鼠,取海马组织,采用ELISA法检测海马组织TNF?α、IL?1β、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)浓度,可见分光光度计法检测海马组织caspase?3活性,Western blot法检测海马组织Bax、Bcl?2和BACE1蛋白含量,RT?qPCR法检测海马组织lncRNA BACE1?AS、miR?124和BACE1 mRNA表达量,TUNEL法测定海马组织神经细胞凋亡百分比,苏木素伊红染色法观察海马组织病理结构.结果 与C组比较,S组、SN组和ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显延长(P<0.05),实验第6天穿越平台次数明显减少(P<0.05),海马组织TNF?α、IL?1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1?AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显升高(P<0.05),SOD浓度、Bcl?2蛋白含量、miR?124 mRNA表达量明显降低(P<0.05),caspase?3活性明显增强(P<0.05).与S组比较,ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),实验第6天穿越平台次数明显增多(P<0.05),海马组织TNF?α、IL?1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1?AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显降低(P<0.05),SOD浓度、Bcl?2蛋白含量、miR?124 mRNA表达量明显升高(P<0.05),caspase?3活性明显减弱(P<0.05).S组和SN组上述指标差异均无统计学意义.结论 长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物参与七氟醚诱导老年大鼠认知功能下降,其机制与神经细胞炎症、氧化应激损伤、调控miR?124和BACE1表达和促进细胞凋亡有关.

摘要： 目的 观察七氟烷对老年大鼠认知功能和海马突触可塑性的影响.方法 30只老年SD大鼠随机分为对照组(C组)和七氟烷组(S组),每组15只,S组暴露于3％七氟烷、30％O2、5％CO2环境,C组暴露于30％O2和5％CO2环境,每天干预2 h,连续3 d.于干预结束前1 h(T0)、干预停止(T1)、干预停止后1 h(T2)、干预停止后2 h(T3)测试大鼠大脑中动脉收缩期最大流速(peak systolic velocity,PSV)、舒张末期血流速度(end diastolic velocity,EDV)和阻力指数(resistance index,RI)的变化,观察大脑中动脉血流动力学情况;于干预停止后24 h(T4)、48 h(T5)、72 h(T6)应用水迷宫和旷场实验测试大鼠的认知功能和情绪状态;并用透视电子显微镜观察大鼠的突触面积和囊泡面积.结果 大脑中动脉血流动力学显示,与C组比较,S组T0大脑中动脉血管RI、PSV、EDV降低,T1以后大脑中动脉血流阻力逐渐恢复;七氟烷暴露后3 d,与C组比较,S组T4、T5潜伏期增加,寻找平台时间延长,穿梭次数减少(P<0.05);旷场实验显示,七氟烷干预后,与C组比较,S组T4、T5周围格活动增加,中央格活动时间减少,直立次数增加(P<0.05);透射电子显微镜显示,与C组比较,S组大鼠的突触面积、囊泡面积减少(P<0.05).结论 七氟烷暴露可扩张大脑中动脉,扩张血管的作用很快就消失;重复暴露于七氟烷的SD老年大鼠可出现认知功能损害,并容易发生焦虑;七氟烷通过改变神经元突触的可塑性而损伤SD老年大鼠海马的认知功能.

摘要： 目的 研究μ、κ阿片受体激动剂对老年大鼠术后认知功能及海马Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 64只健康清洁级老年雄性大鼠,按照排除标准剔除4只,纳入60只大鼠随机分为3组,每组各20只.予以各组大鼠异氟醚麻醉下剖腹探查术,随后μ阿片受体激动剂组大鼠尾静脉输注DAMGO 0.2 mg/h,κ阿片受体激动剂组大鼠尾静脉输注U50,488H 0.05 mg/h,对照组大鼠尾静脉输注等量生理盐水.应用Y迷宫实验测试大鼠的认知功能,观察记录大鼠的游泳速度、逃避潜伏期、穿越平台次数、停留时长、游泳距离.分别在输注前、输注后6h、12 h、1d、3d进行神经功能缺损评分(NSS).行为学检测结束后处死大鼠,取海马组织,用酶联免疫吸附法检测大鼠海马组织的TLR4表达水平及白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、中枢神经特异性蛋白(S100β蛋白)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的含量.结果 3组大鼠海马组织的IL-1、TNF-α、TLR4、S100β蛋白、NSE水平间存在显著差异(P ＜0.05 ～0.001),其中μ阿片受体激动剂组的各项指标均明显低于其他两组(均P＜0.05).3组大鼠Y迷宫实验中的游泳速度、逃避潜伏期、穿越平台次数、停留时间、游泳距离间存在显著差异(P ＜0.05 ～0.001),其中μ阿片受体激动剂组的各项指标均优于其他两组(均P ＜0.05).3组大鼠输注前的NSS评分比较,差异无统计学意义(P＞0.05).3组大鼠输注后6h、12 h、1d、3d的NSS评分均显著低于输注前(均P＜0.001),其中μ阿片受体激动剂组输注后各时间点的NSS评分均显著低于其他两组(均P＜0.05).结论 μ、κ阿片受体激动剂能有效地改善老年大鼠的术后认知功能,尤其是μ阿片受体激动剂,同时能显著抑制海马组织的TLR4表达,促进海马区域炎症反应消退.

摘要： 目的 探讨雄激素对睾丸切除(GDX)老年大鼠胃粘膜线粒体功能的影响及机制.方法 36只SD雄性大鼠随机分为3组:假手术组(Sham,n=12)、模型组(GDX,n=12)和补充雄激素的模型大鼠(n=12).造模大鼠行GDX,造模后雄激素组灌胃睾丸酮(13.6 mg/(kg·d),溶于芝麻油中).假手术组和模型组大鼠使用芝麻油进行相同的治疗.治疗结束后收集胃组织标本,分别采用试剂盒检测胃粘膜线粒体中Mn-SOD、GSH-Px、GSH、GSSG、GSH/GSSG和ROS水平,罗丹明123荧光法检测线粒体膜电位,流式细胞仪检测细胞凋亡.体外试验以人永生胃粘膜细胞GES-1为研究对象,应用H2 O2诱导细胞损伤,考察雄激素和ALDH2抑制剂Disulfiram对细胞活力和凋亡影响.结果 与Sham组相比,GDX组ROS、GSSG水平、胃粘膜细胞凋亡和裂解的Caspase-3、细胞质Cyt c蛋白表达显著增加(P<0.05),而Mn-SOD、GSH-Px、GSH、GSH/GSSG水平、线粒体膜电位、ATP水平和线粒体Cyt c蛋白、ALDH2蛋白表达显著降低(P<0.05).在雄激素治疗后,GDX老年大鼠上述变化显著逆转(P<0.05).体外实验中,雄激素处理显著逆转了H2 O2对GES-1细胞的损伤作用(P<0.05);然而,当联合加入Disulfiram时,雄激素的治疗活性明显降低(P<0.05).结论 雄激素缺乏导致老年大鼠胃粘膜细胞线粒体功能障碍和线粒体ROS积累增加,诱导胃黏膜细胞凋亡,这种损害作用至少部分与ALDH2的抗氧化功能抑制有关.

摘要： 目的：观察补肾方药对老年大鼠空间学习记忆能力，氨基酸神经递质以及NMDA受体、Ca2+/CaMKⅣ信号通路相关分子的mRNA表达变化的影响，以探讨老年大鼠学习记忆减退的分子机制以及补肾方药的延缓作用。方法：以SD雄性大鼠为实验动物，随机分设4组：青年对照组(5月龄)、老年对照组(23月龄)、老年左归组(23月龄)和老年右归组(23月龄)；Motris水迷宫法比较观察各组大鼠空间学习记忆能力；HPLC一荧光法检测大脑杏仁核、海马分区氨基酸类神经递质含量；RT—PcR法检测海马分区NRl、CaMKⅣ、CREB、c—fos mRNA的表达变化；及补。肾方药一左归丸、右归丸对老年大鼠上述各项指标的影响。结果：与青年对照组比较，老年大鼠上述指标都有不同程度的异常变化，而左归丸、右归丸可改善老年大鼠退化的空间学习记忆能力；降低老年大鼠杏仁核、海马Glu的含量；上调老年大鼠NRl、CaMKⅣmRNA的表达，对CREB及c—fos mRNA的表达也有升高趋势。结论：补肾方药一一左归丸、右归丸可以通过不同程度地降低老年大鼠杏仁核、海马Glu含量、纠正NMDA受体介导的CaMKⅣ信号通路的异常变化，改善老年大鼠空间学习记忆能力，延缓衰老。经药物反证，大鼠学习记忆退化符合中医肾虚脑衰理论，并以肾阴肾阳失调为其特点，本实验结果进一步丰富了补肾健脑治疗法则的科学内涵．

摘要： 本发明属于中药深加工以及应用技术领域，为扩展黄芪多糖的适用范围，本发明提供一种黄芪多糖提取粉在对老年便秘大鼠抗衰老及通便中的应用，所述黄芪多糖提取粉在提高老年便秘大鼠的抗衰老能力和排便能力中的应用。黄芪多糖提取粉在提高老年便秘大鼠的抗衰老能力的同时，增加胃肠推动力，提高排便能力中的应用。在治疗老年人便秘上，不仅能够抗衰老，而且可以显著减轻便秘症状，优于现有的中西药物，无任何副作用。本发明表明黄芪多糖在抗衰老的基础上，可以产生通便效果，扩展了黄芪的适用性，为临床用药提供了新的选择。

摘要： 本发明提供一种在大鼠离乳期给与3‑MA处理制备神经发育缺陷大鼠模型的方法，包括给予正常离乳期大鼠连续7天腹腔注射自噬抑制剂3‑MA制备抑制自噬发生的大鼠模型，并通过免疫印迹检测自噬发生，而后通过三箱社交实验验证社交障碍、开放旷场实验、高架十字迷宫实验以及黑白箱实验验证大鼠模型焦虑水平是否增加，通过Y迷宫实验和被动规避实验验证大鼠模型是否出现记忆损伤，大鼠模型与对照组进行高尔基体染色，观察海马和额叶神经元及突触形态。通过多次实验发现，离乳期3‑MA处理制备神经发育缺陷的大鼠模型，具有成本低廉，造模周期短，模型行为异常更明显，稳定性更好的优势，可用于精神分裂症、孤独症等疾病研究及新药研发。

摘要： 本实用新型涉及一种老年肥胖大鼠的固定装置，包括鼠笼和用于固定大鼠的筒体，所述筒体为向上弯曲的拱形圆筒，水平设置在鼠笼的顶部，所述筒体的一端封闭并设有给药口，筒体的另一端开口并通过一端盖与此开口可盖合连接，所述鼠笼的顶部还设有一开孔，筒体的底端通过与鼠笼铰接，竖直转动到竖直的时候，筒体的底端开口与鼠笼的顶部开孔对接连通，所述筒体的中部设有用于魔术贴穿过并压紧大鼠的缺口，靠近筒体的顶端设有一个缝隙，还包括穿过所述缝隙用于固定大鼠头部的头部固定装置。本装置可以让大鼠更为舒服地进行固定，方便实验的进行。

摘要： 本实用新型提供一种经玻璃体腔注射大鼠诱导视网膜蜕变用针对大鼠的注射器，涉及针筒技术领域，本实用新型包括本体和固定装置，所述本体为注射器，所述本体的一端连通有连接口，所述连接口远离本体的一端设有针头，所述本体的表面设有固定装置，所述固定装置包括连接板，所述连接板的内部与本体贯穿滑动连接，所述连接板的一侧固定连接有滑柱，所述滑柱远离连接板的一端滑动连接有套环，所述套环的表面固定连接有两个固定板，所述固定板呈“L”形，且固定板的长臂端贯穿插设有圆柱。本实用新型解决了在注射的过程中老鼠可能会乱动，可能会导致人无法一次性的将注射液通过注射器注射进老鼠体内的问题。

摘要： 本发明涉及一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分：血浆来源的血清，青霉素-链霉素溶液，L-谷氨酰胺，硫骏庆大霉素，肝素，碱性纤维生子因子，内皮细胞生长补充因子，维生素C，血管内皮生长因子，胰岛素样生长因子-1，内皮生子因子。本发明所述内皮细胞培养液采用PDS代替了传统培养液中的FBS、小牛血清或马血清，使培养的脑血管内皮细胞纯度增加30％；并且加入了维生素C和嘌呤霉素，这使脑血管内皮细胞生长更快更纯。

摘要： 本发明涉及老年大鼠脑血管内皮细胞原代培养方法，步骤如下：（1）取出老年大鼠脑组织的灰质部分，制得样品组织；（2）置于胎牛血清的分离液的培养皿中经吹打分散和生物酶消化后，制得分散细胞；（3）离心，制得毛细血管；（4）将毛细血管重悬于分离液中，经消化后，制得毛细血管悬液；（5）离心后，沉淀重悬于分离液中，经Percoll浓度梯度离心，制得脑血管内皮细胞；（6）置于培养液中，经培养后，经消化传代或冻存即可。本发明采用低浓度胰酶或含1mM EDTA的PBS消化细胞，使细胞可传代3次而仍保持脑血管内皮细胞的特性；并且经冻存复苏后仍可保持脑血管内皮细胞的纯度和特性；因此，可节省大量的时间和金钱。

摘要： 本发明提供一种提高老年大鼠骨髓间充质干细胞移植后生存能力的基因工程方法，该方法为将从老年大鼠骨髓所取得的传代稳定的间充质干细胞置于加入了FAIM过表达慢病毒颗粒(MOI为100)的常规培养基中，感染24小时后更换为常规培养基，3日加入5ug/ml的puromycin筛选7天，筛选后的骨髓间充质干细胞用于细胞移植治疗。本发明的有益效果体现在：FIAM过表达能明显增强老年大鼠骨髓间充质干细胞在体外过氧化氢应激条件下的生存能力，减少其凋亡，从而可进一步增强细胞移植的疗效。

摘要： 本发明提供了一种改善老年大鼠骨髓间充质干细胞年龄相关衰老的基因工程方法，该方法为将从老年大鼠骨髓所取得的传代稳定的间充质干细胞置于加入了TPP1过表达慢病毒颗粒(MOI为100)的常规培养基中，感染24小时后更换为常规培养基，3日加入5ug/ml的puromycin筛选7天，筛选后的骨髓间充质干细胞用于细胞移植治疗。本发明的有益效果体现在：将老年大鼠骨髓间充质干细胞过表达TPP1后，可明显改善其年龄相关衰老，从而达到提高治疗缺血性心肌病的效果的目的。

摘要： 本发明涉及一种老年大鼠脑血管内皮细胞培养液，在每百毫升DMEM培养基的基础上，加入如下组分：血浆来源的血清，青霉素-链霉素溶液，L-谷氨酰胺，硫骏庆大霉素，肝素，碱性纤维生子因子，内皮细胞生长补充因子，维生素C，血管内皮生长因子，胰岛素样生长因子-1，内皮生子因子。本发明所述内皮细胞培养液采用PDS代替了传统培养液中的FBS、小牛血清或马血清，使培养的脑血管内皮细胞纯度增加30％；并且加入了维生素C和嘌呤霉素，这使脑血管内皮细胞生长更快更纯。

摘要： 本发明涉及老年大鼠脑血管内皮细胞原代培养方法，步骤如下：（1）取出老年大鼠脑组织的灰质部分，制得样品组织；（2）置于胎牛血清的分离液的培养皿中经吹打分散和生物酶消化后，制得分散细胞；（3）离心，制得毛细血管；（4）将毛细血管重悬于分离液中，经消化后，制得毛细血管悬液；（5）离心后，沉淀重悬于分离液中，经Percoll浓度梯度离心，制得脑血管内皮细胞；（6）置于培养液中，经培养后，经消化传代或冻存即可。本发明采用低浓度胰酶或含1mM EDTA的PBS消化细胞，使细胞可传代3次而仍保持脑血管内皮细胞的特性；并且经冻存复苏后仍可保持脑血管内皮细胞的纯度和特性；因此，可节省大量的时间和金钱。