RASSF1A

摘要： BACKGROUND Studies have validated the potential of methylated cell-free DNA as a biomarker in various tumors,and methylated DNA in plasma may be a potential biomarker for cancer.AIM To evaluate the diagnostic value of RASSF1A methylation in plasma for colorectal cancer(CRC)and hepatocellular carcinoma(HCC).METHODS A total of 92 CRC patients,67 colorectal polyp(CRP)patients,63 HCC patients,and 66 liver cirrhosis(LC)patients were enrolled.The plasma DNA was subjected to DNA extraction,double-strand DNA concentration determination,bisulfite conversion,purification,single-strand DNA concentration determination,and digital polymerase chain reaction(PCR)detection.The methylation rate was calculated.The diagnostic value was evaluated by the area under the curve(AUC).RESULTS The age and sex in the CRC and CRP groups and the HCC and LC groups were also matched.The DNA methylation rate of RASSF1A in plasma in the CRC group was 2.87±1.80,and that in the CRP group was 1.50±0.64.DNA methylation of RASSF1A in plasma showed a significant difference between the CRC and CRP groups.The AUC of RASSF1A methylation for discriminating the CRC and CRP groups was 0.82(0.76-0.88).The AUCs of T1,T2,T3 and T4 CRC and CRP were 0.83(0.72-0.95),0.87(0.78-0.95),0.86(0.77-0.95),and 0.75(0.64-0.85),respectively.The DNA methylation rate of RASSF1A in plasma in the HCC group was 4.45±2.93,and that in the LC group was 2.46±2.07.DNA methylation of RASSF1A in plasma for the HCC and LC groups showed a significant difference.The AUC of RASSF1A methylation for discriminating the HCC and LC groups was 0.70(0.60-0.79).The AUCs of T1,T2,T3 and T4 HCC and LC were 0.80(0.61,1.00),0.74(0.59-0.88),0.60(0.42-0.79),and 0.68(0.53-0.82),respectively.CONCLUSION RASSF1A methylation in plasma detected by digital PCR may be a potential biomarker for CRC and HCC.

摘要： 目的:探讨SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测在早期肺癌的诊断价值。方法:选择2020年8月-2021年3月期间我院收治肺部小结节患者107例为研究对象,其中经病理活检确认早期肺癌患者72例(肺癌组),肺部良性病变患者35例(对照组)。采集患者肺泡灌洗液(BALF)样本,进行细胞学检查且荧光PCR法测定样本中SHOX2和RASSF1A基因甲基化阳性率,分析甲基化情况及其病理诊断关系。结果:肺癌组和对照组SHOX2基因甲基化阳性率分别为51.4%和2.9%,RASSF1A基因甲基化阳性率分别为61.1%和5.7%,均差异显著(P<0.05),且SHOX2和RASSF1A基因甲基化任意阳性率显著高于细胞学检查阳性率(P<0.05);并联SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测早期肺癌的灵敏度和特异性分别为76.4%(55/72)、91.4%(32/35),且在不同病理分型中存在差异,灵敏度在小细胞癌中最高(95.7%,22/23),鳞癌次之(76.5%,13/17),腺癌最低(68.8%,22/32)。结论:SHOX2和RASSF1A基因甲基化任意阳性率在患者BALF中诊断效果良好,有成为早期肺癌临床筛查指标的潜力。

摘要： 目的 探讨RASSF1A启动子甲基化在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)组织中的表达及对患者预后和生存的影响.方法 MSP方法检测60例SACC患者癌组织和正常涎腺组织中RASSF1A启动子甲基化水平;qRT-PCR,Western Blot检测SACC患者组织和正常涎腺组织中RASSF1A的mRNA和蛋白表达水平.分析RASSF1A启动子甲基化作为SACC患者预后指标的可能性.结果 正常涎腺组织中无RASSF1A启动子甲基化,60例涎腺癌组织中有48例发生RASSF1A启动子甲基化(P<0.01);与正常涎腺组织相比,SACC肿瘤患者组织中RASSF1A的mRNA和蛋白表达水平较低(P<0.01).进一步分析发现,RASSF1A的表达与SACC患者的肿瘤分期和淋巴结转移相关,并且,RASSF1A高表达的患者生存比低表达患者好.结论 SACC组织中发生RASSF1A启动子甲基化与肿瘤的进展相关.

摘要： 目的 探究Ras相关区域家族1 A(RASSF1A)基因甲基化与碘营养状态的关系.方法 将40只SD大鼠随机均分成低碘组、适碘组、5倍高碘组、10倍高碘组、20倍高碘组,每组8只.分别用ICP-MS法测定尿碘水平,化学发光免疫分析方法测定血清中甲状腺激素水平,BSP法测定RASSF1A基因的甲基化率.结果 不同碘浓度饲养SD大鼠3个月后:①各组大鼠的血清FT3值随着碘浓度升高而降低(P＜0.05),但FT4、TSH值在各组间差异无统计学意义;②各组间RASSF1A基因启动子区域CpG岛1和CpG岛2的甲基化率差异无统计学意义.结论 3个月碘诱导下,各组间RASSF1A基因甲基化率无统计学差异,碘可能对RASSF1A基因甲基化无影响或机体处于代偿期.

摘要： 目的 综合评价支气管肺泡灌洗液(BALF)中基因矮小同源盒基因(SHOX)2、基因RAS类联域家族(RASSF)1A甲基化和4种血浆肿瘤标志物对早期肺癌的诊断价值.方法 选取病理确诊的134例患者,其中67例早期肺癌纳入肺癌组,67例良性病变者纳入对照组.所有患者采用实时荧光PCR(RT-PCR)法检测BALF中基因SHOX2和RASSF1A甲基化情况,并收集癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCCAg)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)血浆肿瘤标志物结果.统计BALF基因SHOX2、RASSF1A及肿瘤标志物诊断肺癌的灵敏度和特异度.通过Logistic回归分析评价各指标对肺癌组织的影响.构建受试者工作特征(ROC)曲线,计算各指标曲线下面积(AUC)值,以评估其在早期肺癌诊断中的性能.结果 基因SHOX2及RASSF1A甲基化诊断灵敏度分别为80.6％ 、79.1％,特异度为82.1％ 、85.1％.Logistic回归分析显示,Cyfra21-1、NSE、SHOX2ΔΔCT及RASSF1AΔΔCT值是肺癌的影响因素.以基因SHOX2ΔΔCT值联合基因RASSF1AΔΔCT值为检验变量,绘制ROC曲线,诊断肺癌的AUC值为0.935,显著高于单独进行SHOX2和RASSF1A、NSE和Cyfra21-1诊断肺癌的ROC曲线(P<0.05).结论 BALF的基因SHOX2及基因RASSF1A甲基化,对早期肺癌的诊断有较高的敏感性和特异性,对肺癌的早期诊断具有高效的诊断能力,联合SHOX2、RASSF1FΔΔCT值诊断效率显著升高,在早期肺癌诊断中可以作为细胞学的辅助工具.

摘要： 目的 探讨半胱氨酸双加氧酶1 (cysteine dioxygenase type 1,CDO1)、Ras相关结构域家族基因1A(Ras association domain family member 1A,RASSF1A)和人矮小同源盒基因2(short stature homeobox 2,SHOX2)基因启动子区甲基化与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床病理学特征的关系,并分析各基因甲基化在NSCLC中的潜在诊断价值和意义.方法 采用定量甲基化特异性PCR(quantitative methylation specific PCR,QMSP)法分析55例NSCLC组织和55例肺部良性病变组织中CDO1、RASSF1A和SHOX2基因甲基化检出率,分析各基因甲基化检出率与NSCLC临床病理特征的关系.利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)、敏感性和特异性评价各基因甲基化在NSCLC中的诊断价值.结果 NSCLC组织中CDO1、RASSF1A和SHOX2基因启动子区甲基化检出率分别为85.45％ (47/55)、41.82％ (23/55)和29.09％(16/55),肺部良性病变组织中CDO1、RASSF1A和SHOX2基因甲基化检出率分别为5.45％ (3/55)、9.09％(5/55)和3.64％(2/55).与肺部良性病变组织相比,CDO1、RASSF1A和SHOX2基因甲基化在NSCLC中更易被检测到(P均＜0.001).CDO1、RASSF1A和SHOX2基因甲基化检测NSCLC的敏感性分别为85.45％、41.82％和29.09％,特异性分别为94.55％、90.91％和96.36％,区分NSCLC组织和肺部良性病变组织的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.920 0、0.672 1和0.641 5(P ＜0.001,P=0.002,P=0.011).此外,三基因甲基化检出率与NSCLC临床病理特征均无关(P＞0.05).结论 与RASSF1A和SHOX2相比,CDO1基因甲基化是筛查NSCLC更有效的潜在分子标志物.

摘要： 目的 探讨涎腺肿瘤中上皮型钙粘素(E-cadherin)、P16、Ras相关区域家族1A基因(RASSF1A)的表达及其与临床病理参数的关系.方法 选取2015年6月-2019年6月收治的涎腺肿瘤患者手术切除的石蜡标本90例和肿瘤旁正常组织(证实为无癌浸润)石蜡标本56例作为研究对象.采用免疫组化法检测涎腺肿瘤组织中E-cadherin、P16、RASSF1A的表达并分析三者与涎腺肿瘤患者临床病理参数的关系.结果 E-cadherin、P16、RASSF1A在涎腺恶性肿瘤组织中的阳性表达率均低于良性肿瘤和肿瘤旁组织,差异具有统计学意义(P0.05).涎腺肿瘤组织中E-cadherin的表达与P16、RASSF1A均呈显著正相关(P<0.05);涎腺肿瘤组织中P16的表达与RASSF1A呈显著正相关(P<0.05).结论 E-cadherin、P16的阳性率与涎腺肿瘤的TNM分期、神经侵犯和淋巴结转移有关;其中P16阳性率与肿瘤分化程度有关.

摘要： 目的:对疑诊肺癌患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中SHOX2、RASSF1A基因甲基化分析,评估两指标联合检测区分肺癌与肺良性疾病的诊断效能及联合细胞学使用对肺癌的诊断价值.方法:收集276例肺部疾病患者(肺癌组131例,肺部良性疾病组145例)的BALF样本,应用PCR法检测BALF中SHOX2和RASSF1A基因甲基化,并将检测结果和Sanger测序法结果比较.结果:PCR和Sanger测序法一致性分析显示两种方法在检测SHOX2和RASSF1A基因甲基化具有良好的一致性(Kappa=0.978,95％CI=0.954～1.000).SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测在肺癌组的诊断灵敏度为0.840,高于良性疾病组(0.193)(P<0.001);肺癌组BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化联合检测阳性率在小细胞肺癌和肺鳞癌中分别是100％和90.9％,高于肺腺癌(66.0％);SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测阳性率在晚期肺癌高达89.3％,明显高于早期肺癌阳性检出率.ROC曲线分析显示当SHOX2、RASSF1A基因甲基化、细胞学三指标联合使用时进一步将诊断灵敏度提高至0.931.结论:对BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化PCR检测在肺癌诊断中有良好的灵敏度;SHOX2、RASSF1A甲基化PCR检测与细胞学联合使用可显著提高肺癌诊断灵敏度,是肺癌病理学诊断的有效补充工具.

摘要： 目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用.方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组.建立改良实时荧光定量PCR体系.检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度.结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05).结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度.

摘要： 本发明公开了RASSF4作为糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病向肝癌演变治疗的靶点药物在治疗肝脏炎症、纤维化和脂肪变性药物中的应用。特别是在治疗抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和成瘤，促进凋亡药物中的应用。

摘要： 本发明涉及一种Rassf6作为阿尔茨海默病标志物的应用，属于疾病靶点研究技术领域。本发明公开了Rassf6作为疾病标志物在制备用于诊断和/或治疗阿尔茨海默病试剂和/或药物中的用途。如可通过检测Rassf6作为AD辅助诊断的依据，也可通过药物作用于Rassf6靶点，抑制Rassf6‑Hippo信号通路，从而改善AD的行为学及病理特征，起到治疗AD的作用。将为发掘治疗AD的潜在靶点提供重要的临床意义，并具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明属于DNA甲基化检测领域，特别涉及一种用于人RASSF1A基因甲基化检测的特异性引物、试剂盒及方法。克服现有特定CpG位点的甲基化检测方法操作繁琐，检测仪器成本高的技术问题。引物组包括甲基化特异性引物对和未甲基化特异性引物对，对RASSF1A基因启动子区域特定CpG位点进行识别与扩增；在甲基化特异性引物对和未甲基化特异性引物对中正向引物的5'端均标记地高辛，反向引物的5'端均标记生物素。通过优化引物在保证准确性、操作简便性的同时提高了速度和灵敏度，0.1％的靶点变异可在90分钟内区分，较之前DNA甲基化试纸条检测方法显著提高了速度和灵敏度。且检测过程中仅通过试纸条目视化判读结果，极大地降低了整个检测的成本。

摘要： 本发明涉及内耳干细胞领域，具体的是Rassf2调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。调控方法，包括以下步骤：一、在野生型小鼠中检测Shh或Hippo和Rassf2在耳蜗中的表达情况；二、在离体实验中研究Shh或Hippo和Rassf2对流式分选出的内耳干细胞增殖分化的作用；三、在活体毛细胞新霉素损伤模型上，研究Shh或Hippo和Rassf2的作用。本发明使用Lgr5‑EGFP‑CreERT2工具鼠可使得内耳干细胞(Lgr5阳性细胞)的分离准确且大量，可达到较好的研究前提：分选出的小鼠Lgr5阳性内耳干细胞。此外，在离体实验中研究Shh、Hippo和Rassf2对分选出的内耳干细胞进行成球和分化实验后，可以深入探究Shh、Hippo和Rassf2在调控内耳干细胞增殖分化及毛细胞再生中的具体作用机制。

摘要： 本发明公开了RASSF4作为糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病向肝癌演变治疗的靶点药物在治疗肝脏炎症、纤维化和脂肪变性药物中的应用。特别是在治疗抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和成瘤，促进凋亡药物中的应用。

摘要： 本发明涉及一种用于RASSF1A基因甲基化检测的荧光定量PCR检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括一对甲基化扩增引物和二条甲基化检测探针，所述一对甲基化扩增引物用于扩增RASSF1A基因启动子到第1‑3外显子的序列中一段CpG序列富集区域，该段CpG序列富集区域是一个PCR反应所扩增的序列，该段CpG序列富集区域中具有至少8个甲基化的CpG序列；所述二条探针分别用于检测PCR扩增产物的正链和负链，两条探针都使用相同的荧光报道基团和淬灭基团。在本发明中，充分利用针对RASSF1A基因片段扩增得到的PCR产物双链，每条链都能产生反应信号，因此可以提高检测甲基化片段的灵敏度。

摘要： 本发明涉及一种制备前列腺癌标志物，尤其涉及一种GSTP1，APC和RASSF1在制备前列腺癌标志物中的应用及其试剂盒。试剂盒除三个甲基化检测基因靶点外，还包含一个内参基因ACTB，包括检测GSTP1基因甲基化位点的特异性引物GSTP1‑F，GSTP1‑R,及荧光水解探针GSTP1‑P；检测APC基因甲基化位点的特异性引物GSTP1‑F，GSTP1‑R,及荧光水解探针GSTP1‑P；检测RASSF1基因甲基化位点的特异性引物RASSF1‑F，RASSF1‑R,及荧光水解探针RASSF1‑P；检测ACTB基因的引物ACTB‑F，ACTB‑R,及荧光水解探针ACTB‑P。取样方便、检测快速、准确率高，可以实现前列腺癌辅助诊断的甲基化检测试剂盒，以及提供GSTP1，APC和RASSF1联合使用作为前列腺癌分子标记物的应用。

摘要： 本发明公开了一种检测RASSF1A基因甲基化的引物、检测方法、试剂盒及应用，包括特异性扩增引物和测序引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:3。本发明还提供了所述的特异性引物的应用、检测RASSF1A基因甲基化的试剂盒和RASSF1A甲基化检测方法。本发明的检测方法具有高通量性和高准确性，无需在PCR后进行TA克隆，大大节约时间，减少检测成本，提高检测效率。本发明为结肠癌的早期诊断提供了有效手段，具有良好的临床应用价值。

摘要： 本发明涉及RASSF1A基因甲基化状态检测试剂盒，所述试剂盒包括茎环状引物，所述茎环状引物用于特异性扩增检测RASSF1A基因的转录起始区上游‑1至‑187bp中富含CpG岛的序列。本发明设计的茎环状引物，其能显著提高DNA中甲基化DNA的检出效率，防止非甲基化DNA模板的非特异性扩增；本发明的试剂盒能增加检测肿瘤特异性的同时，提高了检测的灵敏度。

摘要： 本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人乳腺癌细胞RASSF2基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向RASSF2基因的sgRNA，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；其次是构建RASSF2基因的sgRNA到慢病毒载体系统，该系统含有Cas9蛋白；最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人乳腺癌细胞MDA‑MB‑231，获得RASSF2蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对RASSF2基因切割效率高；此外，所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势，并能特异性敲除RASSF2基因，得到敲除RASSF2基因的人乳腺癌细胞，从而为进一步研究乳腺癌细胞中RASSF2的作用机制提供强有力的工具。