胃上皮细胞

摘要： 目的:探讨不同pH环境对胃上皮细胞系GES-1蛋白质组的影响。方法:购置胃上皮细胞GSE-1系,分别放置在不同试管中,完成分组、标记。实验组试管细胞使用由浓盐酸(HCl)、氢氧化钠(NaOH)将培养基pH调节至6.8(酸性)、9.4(碱性),未经调配的RPMI.1640(pH7.4)作为对照组,将GES-1置于酸性、对照组、碱性3种pH下培养。完成三组细胞总蛋白的提取,用TMT(Tandem Mass Tags)技术对GSE-1细胞蛋白质组进行分析。借助搜库软件Proteome Discoverer 2.4(PD2.4,Thermo)检索不同run的图谱,根据检索结果实现蛋白质的鉴定与定量。结果:相同初始细胞量的GES-1在pH6.8、pH7.4(CK)、pH9.4条件下培养7.d后,细胞状态呈现出明显差异。而在pH9.4中培养的细胞,细胞形态略微变圆,细胞密集度与对照组比有所下降,但总体来说生长状况良好。与对照组比,在碱性环境中鉴定出的差异表达蛋白仅19个,其中只有1个为下调蛋白;GES-1在弱酸性环境下培养7.d后蛋白质表达发生了较大变化,与对照组比共鉴定到136个差异表达蛋白,包含96个上调蛋白和40个下调蛋白。结论:胃上皮细胞GES-1最适合在pH7.4的环境中生存,但是对碱性的耐受能力非常强,能在pH9.4的强碱性条件下保持较好的状态;而细胞对酸的耐受力相形见绌,仅仅在pH6.8的影响下便难以维持正常的生命活动,多与不同环境下细胞的功能等有关。

摘要： 随着社会的发展和睡眠的不规律,快节奏生活导致胃黏膜病变成为一种很普遍的现状。目前用于临床的各种抑酸剂和黏膜保护剂对胃黏膜病变的治疗取得一定的效果,但在治疗过程中经常出现各种不良反应。研究结果表明,在我国蒲公英资源很丰富,含有多种活性成分,具有广泛药理作用,其中蒲公英赛醇在保护胃上皮细胞和抗炎方面具有显著疗效,尤其在根除幽门螺杆菌方面,治疗更简便,且副作用小,用它作为保护胃上皮细胞及抗炎作用的药物具有重要的临床意义。它的作用及机制主要通过干预细胞信号转导、诱导炎症相关酶类、调节细胞因子、抑制胃酸、杀灭胃幽门螺杆菌等共同完成。本文从不同环节对其保护胃上皮细胞的作用及抗炎作用进行系统综述,旨在为该药治疗作用提供一定的理论基础。

摘要： 幽门螺杆菌可谓臭名昭著。它可以寄居于胃上皮细胞表面,导致消化性溃疡的发生。它还与胃癌的发病密切相关,被认为是影响胃癌发生的可控因素之一。幽门螺杆菌还是一个“顽固分子”,感染后身体无法自行清除,需要借助药物来根除,稍不注意还很容易复发。目前可以根除幽门螺杆菌的药物主要有抗菌药物、质子泵抑制剂(即拉唑类)和铋剂(如胶体果胶铋)等。

摘要： 目的 探讨爱泼斯坦—巴尔病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码的BARF1基因对人胃上皮细胞(GES-1)增殖、迁移及细胞周期分布的影响.方法 将pIRES-EGFP/BARF1重组质粒、pIRES-EGFP空载体转染GES-1细胞,通过G418筛选,获得稳定表达pIRES-EGFP/BARF1及pIRES-EGFP的GES-1细胞.在荧光显微镜下观察转染与未转染组细胞生长状况;通过逆转录PCR(Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)检测转染细胞中BARF1基因表达情况;通过细胞计数及CCK8法评估转染与未转染三组细胞的增殖能力;通过免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色法评价不同组别细胞周期蛋白Cyclin D1的表达情况;应用划痕实验分别对稳定转染BARF1组和空载体组GES-1细胞的迁移效率进行分析评价;应用流式细胞仪检测与分析细胞周期的分布情况.结果 获得稳定表达pIRES-EGFP/BARF1、pIRES-EGFP的GES-1细胞模型;稳定转染BARF1组的细胞增殖能力高于未转染组及转染空载体组,并且稳定转染BARF1组S期显著延长;稳定转染BARF1组GES-1细胞的迁移能力比转染pIRES-EGFP空载体组得到明显提升;细胞周期蛋白Cyclin D1集中表达在稳定转染BARF1组的GES-1细胞核内.结论 作为EBV编码的癌基因BARF1能够促进人胃上皮细胞GES-1增殖、迁移及分裂,抑制细胞凋亡,促进胃上皮细胞的恶性转化.

摘要： 目的 探究胃癌高发区分离的幽门螺杆菌(H.pylori-400)对正常胃上皮细胞系GES1细胞蛋白质组的影响.方法 C-13呼气实验阳性患者胃镜下取下胃黏膜,分离、培养并鉴定H.pylori-400.将H.pylori-400与GES1细胞按50:1的比例共培养,提取细胞RNA,RT-qPCR法检测炎性因子IL-8、IL-1β和TNF-α的mRNA表达.收集共培养细胞蛋白,用高效液相色谱-质谱联用检测蛋白质组的改变,lable-free进行定量分析.选择差异表达蛋白进行GO和KEGG富集分析,并筛选出其中的关键基因(Hub).结果 在胃癌高发区(河北井陉地区)分离培养并鉴定出H.pylori-400,其能够促进胃上皮细胞GES1的IL-8,IL-1β和TNF-α炎性因子的mRNA表达.GES1感染H.pylori-400后,373个蛋白发生显著变化(|Fold change|≥2),其中143个蛋白降低,230个蛋白升高.这些差异表达蛋白经富集分析后表明,H.pylori-400可能通过调节细胞周期、T细胞免疫活性以及P53通路调节炎性因子分泌,进而导致肿瘤发生.结论 胃癌高发区分离的H.pylori-400能够促进炎性因子表达,通过影响胃上皮细胞GES1蛋白质组而促进肿瘤发生.

摘要： 1983年,澳大利亚两个学者在胃幽门部分离出了一种呈螺旋状的杆菌,并将其命名为幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,简称Hp)。幽门螺旋杆菌中含有尿素酶,经过尿素酶的作用,尿素被分解产生氨和二氧化碳,呈碱性的氨和呈酸性的胃酸发生中和反应,会使得幽门螺旋杆菌周围一部分呈现中性。因此,幽门螺旋杆菌不受胃酸的影响,能长期在胃窦部生存。幽门螺旋杆菌属于一种革兰阴性微需氧杆菌,定居于胃上皮细胞。现代医学研究表明,慢性胃炎、消化性溃疡等疾病的重要患病原因就是幽门螺旋杆菌的感染。为更好地预防幽门螺旋杆菌感染,我们应对其特征、治疗知识有所了解。

摘要： 目的 探究miR-204抑制感染幽门螺杆菌(H.pylori)的胃上皮细胞迁移和侵袭的机制.方法 将人胃上皮细胞GES1分为3组:对照组、H.pylori组和H.pylori+mimic组.H.pylori组和H.pylori+mimic组细胞按照100:1的感染比例与H.pylori进行共培养.H.pylori+mimic组细胞在与H.pylori共培养之前转染miR-204 mimic以过表达miR-204.显微镜观察共培养情况.qPCR检测miR-204水平.细胞划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭能力.Western blotting检测EMT相关蛋白.结果 感染H.pylori后,GES1细胞中的miR-204表达水平比正常GES1细胞显著降低(t=27.962,P=0.000).H.pylori组的miR-204水平显著低于对照组(P<0.05),H.pylori+mimic组的miR-204水平显著高于对照组和H.pylori组(P<0.05).H.pylori组的细胞迁移和侵袭能力显著高于对照组(P<0.05),H.pylori+mimic组的迁移和侵袭能力显著低于H.pylori组(P<0.05).H.pylori组的E-cadherin蛋白显著高于对照组,而N-cadherin和Vimentin蛋白显著低于对照组(P<0.05).H.pylori+mimic组的E-cadherin显著低于H.pylori组而N-cad-herin和Vimentin显著高于H.pylori组(P<0.05).结论 将胃上皮细胞与H.pylori共培养会使细胞中miR-204的水平降低,且过表达miR-204会通过调节上皮-间充质转化抑制由H.pylori引起的胃上皮细胞迁移和侵袭.

摘要： Objective To investigate the miR-155 expression in gastric mucosa of Helicobacter pylori (H.pylori) infected and its influence on the biological behavior of gastric epithelial cells.Methods Twenty-four gastric mucosal tissues of patients with chronic gastritis and H.pylori infected gastric epithelium cells (GES-1) in vitro were collected,the expression of miR-155 was detected by Real-time PCR in gastric mucosa and gastric epithelial cell line.The influence of miR-155 overexpression in gastric epithelial cells on cell proliferation and migration and autophagy was detected by CCK-8,scratch test and Western blotting.Results The level expression of miR-155 was higher in gastric mucosa of H.pylori infected than that in the negative group,the expression of miR-155 in GES-1 cells was stimulated by H.pylori.The results of CCK-8,scratch test established that miR-155 could promote the ability of proliferation and migration of gastric epithelial cells.Western blotting result showed that miR-155 also promoted the expression of autophagy protein LC3-Ⅱ.Conclusion H.pylori infection can promote the expression of miR-155 in gastric epithelial cells and affect its biological function and regulate the mucosal barrier function.%目的 探讨miR-155在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染性胃炎患儿胃黏膜组织的表达意义及对胃上皮细胞生物学功能的影响.方法 收集24例慢性胃炎患儿的胃黏膜组织及体外H.pylori感染胃上皮细胞株(GES-1),采用Real-time PCR方法检测胃黏膜组织和胃上皮细胞株miR-155的表达.通过转染的方法使胃上皮细胞miR-155高表达,采用CCK-8法、划痕实验、Western blotting检测miR-155对胃上皮细胞增殖、迁移功能及自噬蛋白表达的影响.结果 Real-time PCR结果显示,H.pylori感染阳性的胃黏膜组织miR-155表达水平高于非感染组,体外H.pylori感染诱导胃上皮细胞miR-155高表达;CCK-8、划痕实验结果显示,miR-155过表达可促进胃上皮细胞增殖和迁移能力;Western blotting结果显示,miR-155促进自噬蛋白LC3-Ⅱ的表达.结论 体内外实验证实,H.pylori感染促进胃黏膜表达miR-155,并影响胃上皮细胞的生物学作用,调控黏膜屏障功能.

摘要： 目的 观察胃上皮细胞GES-1经亚硝基化合物N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)短时间刺激后细胞所发生形态和功能特性的变化.方法 将MNNG刺激GES-1细胞0、4、8、12 h后,应用显微镜观察细胞形态学变化,平板克隆形成实验观察细胞增殖能力,Transwell迁移实验观察细胞迁移能力(穿膜细胞数),Western blotting法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和N-cadherin.结果 GES-1细胞随着MNNG刺激时间延长,细胞边缘变得不清晰,细胞变细长、变大.GES-1细胞经MNNG刺激0、4、8、12 h时,其细胞克隆数分别为(82.00±1.16)、(89.67±3.28)、(81.33±1.76)、(85.67±1.45)个,各时点GES-1细胞克隆数比较差异无统计学意义;穿膜细胞数分别为(83.00±2.89)、(149.00±5.20)、(265.70±6.06)、(491.00±8.74)个,刺激时间越长穿膜细胞数越多(P均＜0.05);随着MNNG刺激时间延长,GES-1细胞E-cadherin表达逐渐降低而N-cadherin表达逐渐升高(P均＜0.05).结论 以亚硝基化合物MNNG短时刺激能使胃上皮细胞的形态和迁移能力发生一定变化,并且促使胃上皮细胞发生EMT.

摘要： 胃癌是一种严重威胁国民健康的常见恶性肿瘤.Smad4作为抑癌基因在胃癌中常出现缺失,突变或者表达下降.以前的研究发现微环境如T细胞Smad4对于维持胃肠道上皮稳态至关重要.但上皮细胞Smad4在胃癌发生发展中的功能未见报道.在本研究中利用Cre-loxp系统介导的组织特异性基因敲除技术在小鼠腺胃上皮细胞特异性敲除Smad4基因,并研究Smad4基因敲除对胃癌发生及发展的影响.首先研制了一种新的胃上皮细胞特异性Cre重组酶转基因小鼠,该小鼠利用肿瘤蛋白52(Tumor protein D52,TPD52)的启动子指导Cre重组酶在胃上皮细胞特异性表达.利用TPD52-Cre小鼠与Smad4条件基因敲除小鼠杂交获得了胃上皮细胞特异性Smad4基因敲除小鼠.Smad4敲除小鼠出生时表现正常，但3月龄后逐渐出现衰弱、体重下降，并在出生后1年内全部死亡。组织形态学研究表明Smad4敲除小鼠出生后逐渐出现胃上皮过度增生、息肉和浸润性腺癌。Brd U标记实验表明Smad4敲除导致胃上皮细胞增殖旺盛。在分子水平上，发现Smad4敲除导致其下游靶分子cyclin D1,c-myc和Spp1表达上升以及其他信号通路如Akt和ERK的激活。综上所述，研制出了一种新的胃上皮细胞特异性的Cre重组酶转基因小鼠，并利用此转基因小鼠阐明了胃上皮细胞Smad4在维持胃上皮细胞稳态、抑制胃癌发生中的重要作用，同时该胃癌小鼠模型也为进一步确切研究胃癌的发生机制和药物筛选提供了理想工具。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种用于体外细胞分化的混合胶，所述混合胶由基质胶和I型鼠尾胶原按照45%：55%的体积百分比混合得到，所述I型鼠尾胶原的浓度为1.1mg/mL。将制得的混合胶与胚胎肝内胆管上皮细胞混合，可用于定向分化为成熟的肝内胆管上皮细胞和胆管结构，该方法操作简单，耗时短，成本低，且构建获得的细胞模型稳定，可用于慢性、炎性及自身免疫性等胆管疾病的治疗及机制研究。

摘要： 本发明涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用，该方法为向人羊膜上皮细胞中添加含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的诱导组合物，诱导产生的细胞高表达MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等视网膜色素上皮细胞的典型基因。将利用该方法诱导产生的细胞注射到RCS大鼠视网膜下腔，通过ERG以及眼底检测发现大鼠眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，眼球切片HE染色显示其视网膜厚度明显增加，经过上述方案诱导分化后的细胞经注射后对大鼠的视力有一定程度的恢复。本发明中的诱导复合物能够用于人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞的分化以及治疗视网膜损伤相关的眼部疾病。

摘要： 本公开提供了促进多能干细胞分化成胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞的方法，以及从所述方法获得的细胞，以及包含此类细胞的溶液、组合物和药物组合物。本公开还提供了将胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞用于治疗和预防疾病、产生器官以及用于其他用途的方法，以及试剂盒。

摘要： 本发明的问题在于提供一种针对干眼症等与复层扁平上皮细胞相关的疾病有效的新的治疗剂。本发明是一种包含间充质干细胞的分泌物的复层扁平上皮细胞的正常分化‑成熟促进剂。优选地，上述分泌物不含动物血清，上述间充质干细胞为来源于脂肪的间充质干细胞、来源于脐带的间充质干细胞或来源于骨髓的间充质干细胞，上述复层扁平上皮细胞为选自由角膜上皮细胞、结膜上皮细胞、表皮角化细胞、口腔上皮细胞、会厌上皮细胞、食道上皮细胞、阴道上皮细胞、声带皱襞上皮细胞、鼻腔上皮细胞以及鼻前庭上皮细胞组成的群组中的至少一种。

摘要： 本发明公开了一种纯化子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞的制备方法及其应用，该制备方法通过两种不同的细胞消化液对样品依次进行消化处理得到高纯度的子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质细胞。本发明中的制备方法克服了现有的技术问题，能高效制备高纯度的完全分离的子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞以及基质细胞，而且所需的试剂仅包括消化酶，而且制备得到的细胞均为活细胞，可进一步应用于下游多种分子生物学和细胞生物学的研究。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种用于体外细胞分化的混合胶，所述混合胶由基质胶和I型鼠尾胶原按照45%：55%的体积百分比混合得到，所述I型鼠尾胶原的浓度为1.1mg/mL。将制得的混合胶与胚胎肝内胆管上皮细胞混合，可用于定向分化为成熟的肝内胆管上皮细胞和胆管结构，该方法操作简单，耗时短，成本低，且构建获得的细胞模型稳定，可用于慢性、炎性及自身免疫性等胆管疾病的治疗及机制研究。

摘要： 本发明的目的在于提供一种尿路上皮细胞的制备方法，其能够应用于治疗泌尿系统疾病，尤其是尿路上皮细胞损伤引起的疾病或尿路上皮细胞缺失或功能障碍引起的疾病，以及提供通过方法所制备的尿路上皮细胞和用于诱导(制备)尿路上皮细胞的培养基。由诱导尿路上皮细胞的方法制备的尿路上皮细胞能够应用于治疗泌尿系统疾病，该方法包括通过向哺乳动物的体细胞导入以下外源因子中至少一种的步骤，FOXA1(叉头盒蛋白A1，Forkhead box A1)基因或其表达产物、TP63(肿瘤蛋白P63，tumor protein P63)基因或其表达产物、MYCL(L‑Myc)基因或其表达产物、以及KLF4(Kruppel样因子4，Kruppel‑like factor 4)基因或其表达产物。

摘要： 本发明提供了一种胆囊上皮细胞的建系方法，包括以下步骤：获得胆囊上皮细胞；对所述胆囊上皮细胞进行贴壁培养以得到原代细胞；使用永生化慢病毒和病毒感染试剂对所述原代细胞进行感染；对感染后的原代细胞继续培养直至至少部分细胞出现扩增成克隆后，使用细胞消化液进行贴壁细胞的消化以得到传代细胞；使用有限稀释法对所述传代细胞继续进行单克隆培养以得到上皮属性的阳性克隆产物；将所述上皮属性的阳性克隆产物继续扩增培养以得到永生化的胆囊上皮细胞系。本发明解决了现有技术中尚未有关于制备非胆囊癌永生化的胆囊上皮细胞系的问题。同时本发明提供了一种胆囊上皮细胞系及其应用。

摘要： 本发明的课题在于，提供一种抑制从多能干细胞向肝细胞的分化的同时，维持屏障功能的肠上皮细胞的制造方法、以及抑制向肝细胞分化的同时，维持屏障功能的肠上皮细胞。根据本发明，提供一种肠上皮细胞的制造方法，其包括：工序1，使多能干细胞分化为肠道干细胞；及工序2，在选自包含MEK1抑制剂、DNA甲基化抑制剂及TGFβ受体抑制剂的组中的1种以上和EGF的存在下，使在工序1中所获得的肠道干细胞分化为肠上皮细胞，上述方法中，在工序2中途，在本说明书中所定义的规定的时点重新接种1次以上分化中的细胞。

摘要： 本发明涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用，该方法为向人羊膜上皮细胞中添加含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的诱导组合物，诱导产生的细胞高表达MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等视网膜色素上皮细胞的典型基因。将利用该方法诱导产生的细胞注射到RCS大鼠视网膜下腔，通过ERG以及眼底检测发现大鼠眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，眼球切片HE染色显示其视网膜厚度明显增加，经过上述方案诱导分化后的细胞经注射后对大鼠的视力有一定程度的恢复。本发明中的诱导复合物能够用于人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞的分化以及治疗视网膜损伤相关的眼部疾病。