巢式聚合酶链反应

摘要： 目的 总分析巢式聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA对治疗乙肝的临床意义.方法 选取2017年10月-2018年10月本院收治的50例HBV(乙型肝炎病毒)患者,采用ELISA(酶联免疫吸附实验)方法对HBVM进行检测,同时采用nPCR(套式聚合酶链反应)以及FQ-PCR(荧光定量聚合酶链反应)检测所有HBV患者HBV-DNA,分析HBV的复制、活动,同时选定50例本院体检中心的50例体检者.结果 nPCR检测HBV-DNA的阳性率相对较ELISA、FQ-PCR检测高(P<0.05).结论 V病毒采用nPCR检测法进行检测,具有较强的特异性,检出率相对较高,在临床中具有较高的诊断价值.

摘要： Objective To investigate the feasibility and prospects of nested real-time PCR(NR-PCR)technique for Treponema palladium(Tp)detection in various samples of different stages of syphilis from patients preliminarily diagnosed as syphilis. Methods Targeting the Tp polA gene, NR-PCR was performed to detect Tp DNA in various samples from the patients with various stages of syphilis at the first clinic visit, including skin tissue fluid swabs, serum, whole blood, cerebrospinal fluid(CSF)and earlobe blood. Data were analyzed with SPSS software version 13. Results A total of 368 clinical samples were collected from 200 patients with syphilis. With a detection limit of 2 Tp/ml, NR-PCR showed that the total positive rate for Tp DNA was 71.7%(264/368). The Tp DNA positive rate was highest in earlobe blood samples (92.0%, 23/25), followed by CSF samples(90.2%, 46/51), skin tissue fluid swabs(74.3%, 26/35), serum samples(66.9%, 99/148)and whole blood samples(64.2%, 70/109). There was good agreement between NR-PCR results and serologic test results, with a consistency rate of 76.0%(152/200). Furthermore, the Tp DNA positive rate did not differ between patients with primary(12/19)and secondary syphilis(14/16)in skin tissue fluid swabs(χ2 = 2.62, P > 0.05), and was slightly but insignificantly higher in patients with secondary syphilis than those with primary syphilis in the serum samples(χ2=3.6, P=0.06). The Tp DNA positive rate of whole blood samples was also higher in patients with secondary syphilis than those with any other types of syphilis. Among patients with neurosyphilis, no significant difference was observed in the Tp DNA positive rate between earlobe blood samples and CSF samples(P=0.06). Among patients with latent syphilis, the Tp DNA positive rate was significantly higher in serum samples with an RPR titer of ≥ 1:8 than those with an RPR titer of≤1:4. Conclusion NR-PCR is feasible for detecting Tp DNA in various kinds of samples, and the Tp DNA positive rate is influenced by stages of syphilis and types of samples, as well as RPR titers.%目的 探讨巢式-实时PCR(NR-PCR)检测初诊梅毒患者不同样本中梅毒螺旋体(Tp)靶DNA的可行性及应用前景.方法 以Tp polA为靶基因,用NR-PCR检测梅毒患者初诊时皮损拭子、血清、全血、脑脊液、末梢耳垂血等样本中的靶DNA,用统计软件SPSS.13分析结果.结果 NR-PCR检测Tp polA靶DNA的极限为2个Tp/ml,总体阳性率为71.7%,检测不同类样本的阳性率从高到低依次为:耳垂血92.0%>脑脊液90.2%>拭子74.3%>血清66.9%>全血64.2%.NR-PCR结果与血清学检查结果的一致性为76.0%(152/200).进一步分析显示:一期、二期梅毒拭子DNA阳性率(63.2%比87.5%)差异无统计学意义(χ2=2.62,P>0.05);血清样本中,二期梅毒DNA阳性率高于一期梅毒(χ2=3.6,P=0.06);全血样本中,二期梅毒DNA阳性率高于其他各类型梅毒;神经梅毒耳垂末梢血阳性率与脑脊液比较,P=0.06.隐性梅毒血清(RPR)滴度≥1:8组的Tp DNA阳性率高于RPR≤1:4组.结论 NR-PCR方法检测梅毒患者不同样本中Tp DNA是可行的,不同类型梅毒、不同类型样本以及其血清RPR滴度水平都影响Tp DNA阳性率.

摘要： 目的 研究使用巢式聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA对治疗乙肝的临床意义.方法 筛选146例乙型肝炎病毒(HBV)感染者,先采用ELISA检测HBVM作为参照,再分别采用FQ-PCR和nPCR检测参与研究的HBV病人HBV-DNA,并判断HBV的复制和活动情况.另外选择49名健康者作为对照组.结果 PCR模板1和PCR模板4中的HBV-DNA阳性率都很高,PCR模板1中ELISA检测的阳性率与套式聚合酶链反应(nPCR)和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA的阳性率差异显著(P＜0.05).PCR模板2中ELISA检测阳性率与nPCR和FQ-PCR检测HBV基因的阳性率,无明显差异(P＞0.05).nPCR法和FQ-PCR法的结果对比可见,nPCR的阳性率显著高于FQ-PCR,具有明显差异(P＜0.05).nPCR的阳性率要比ELISA的阳性率高很多,具有明显差异(P＜0.05).ELISA阳性率比对照组高很多,具有明显差异(P＜0.05).结论 采用nPCR检测技术诊断HBV疾病的检出率高、特异性强,对HBV疾病的诊断具有很高的实用价值,可在临床推广应用.

摘要： 目的 探讨三种实验室检测方法对疟疾检测的应用价值.方法 分别采用传统镜检法、巢式聚合酶链反应(PCR)法及实时荧光(Real-Time)PCR法,对江西省2012年-2014年的61份疟疾疑似病例血样进行检测.结果 巢式PCR法和Real-Time PCR法的结果一致,与镜检结果有17份样本不一致.结论 巢式PCR法和Real-Time PCR法检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值.

摘要： Objective To use the nested PCR technology to diagnose and identify a case of imported Plasmodium ovale wallikeri subspecies .Methods Blood sample was collected from 1 case of initially diagnosed imported tertian malaria and performed the ex‐amination of microscopy ,rapid diagnostic tests (RDTs) and nested‐PCR .Moreover the sequencing was conduced .Results RDTs showed the negative result ;the ring form and trophozoite of Plasmodium could be observed in the blood smear by microscopy ;the Plasmodium ovale wallikeri subspecies specific primer rOVA 1v/rOVA2v was adopted for conducting nested PCR ,the specicific am‐plification band appeared at 760 bp ,after sequencing and Blast aligning ,its coincidence with the partial sequence of Plasmodium ovale wallikeri subspecies in the Genbank database was 99% .Conclusion This patient is the first case of Plasmodium ovale wallik‐eri subspecies infection in Hubei province by nested PCR and sequencing analysis .%目的：应用巢式PCR技术对1例罕见卵形疟原虫wallikeri亚种进行诊断和鉴定。方法采集初诊为输入性间日疟患者血样，进行疟疾快速诊断试剂盒、显微镜镜检和巢式PCR检测，并进行测序分析。结果该患者疟疾快速诊断试剂盒检测阴性；镜检查见寄生于红细胞内的疟原虫环状体和滋养体；采用卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物（rOVA1v／rOVA2v）进行巢式PCR ，在760 bp处有特异性扩增条带，测序后经Blast比对，与GenBank数据库中卵形疟原虫wallikeri亚种部分序列的一致性为99％。结论该患者经巢式PCR和序列分析确诊为湖北省首例卵形疟原虫wallikeri亚种感染。

摘要： 目的：探讨巢式聚合酶链反应（nPCR）检测血清中乙型肝炎病毒（HBV）-DNA对治疗乙型肝炎的临床意义。方法：146名HBV感染者用ELISA检测HBVM作为参照，再分别用FQ-PCR和nPCR检测参与研究的所有HBV患者HBV-DNA，并判断HBV的复制和活动情况。对照组另外选择49名健康者作为对照。结果：模式1和模式4中的HBV基因的阳性率都很高，模式1的阳性率与nPCR和FQ-PCR检测HBV基因的阳性率差距显著（P＜0.05）。模式2阳性率与nPCR和FQ-PCR检测HBV基因的阳性率差距不显著（P＞0.05）。nPCR法和FQ-PCR法的结果对比可见，nPCR的阳性率显著高于FQ-PCR（P＜0.05）。nPCR的阳性率要比ELISA的阳性率高很多（P＜0.05）。ELISA阳性率比对照组高很多（P＜0.05）。结论：采用nPCR检测技术诊断HBV疾病的检出率高、特异性强，对HBV疾病的诊断具有很高的实用价值。%[ABSTRACT]Objective:To investigate the clinical significance of nested polymerase chain reaction (nPCR) was detected in the sera of hepatitis B virus (HBV) DNA on the treatment of chronic hepatitis B. Methods: 146 patients with HBV were detected by ELISA as a reference, and then FQ-PCR and nPCR were used to detect the HBV-DNA of all HBV patients involved in the study, and to determine the replication and activity of HBV. In control group, the other 49 healthy persons were selected as control group. Results:The positive rate of HBV gene in model 1 and model 4 was very high, the positive rate of model 1 was significant (P0.05), and the positive rate of HBV and FQ-PCR was not significant (nPCR). Compared with the results of nPCR method and FQ-PCR method, the positive rate of nPCR was significantly higher than that of FQ-PCR (P<0.05). The positive rate of nPCR was much higher than that of ELISA (P<0.05). The positive rate of ELISA was much higher than that of control group (P<0.05). Conclusion: The detection rate of HBV is high, the specificity is strong, and it has a high practical value for the diagnosis of HBV disease by using nPCR detection technology.

摘要： 桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段.本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序列极强的靶基因区域序列进行特异性引物BT-S-1/BT-A-1的设计和通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A的合成,分别利用常规PCR和巢式PCR技术对引物特异性和灵敏度进行检测和比较,同时本研究也对所建立的巢式PCR用于桉树焦枯病原菌快速检测的田间时效性进行验证.试验结果表明:利用beta-tubulin基因序列通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A对全部供试菌株进行扩增,所有参试菌株均可扩增出1条约500 bp的条带;而单独使用特异性引物BT-S-1/BT-A-1进行常规PCR扩增时仅病原菌能够扩增出1条148 bp的明亮条带;当利用通用引物作为第1轮引物,以稀释10倍后的第1轮PCR产物作为第2轮PCR模板,利用特异性引物进行巢式PCR扩增时,也可扩增出上述148 bp大小的明亮条带,且巢式PCR的扩增效果较常规PCR具有明显的视觉优越性;灵敏度检测试验表明,巢式PCR的灵敏度可检测到5 fg/μL,较常规PCR可以扩增出的极限(DNA质量浓度为5 pg/μL)至少提高了103倍;田间时效检测试验也说明巢式PCR较常规PCR具有更高的准确度和灵敏性,可达到田间检测的要求.本研究建立的巢式PCR检测技术可有效应用于桉树焦枯病的早期诊断.

摘要： Objective To explore the value of free fetal DNA in maternal plasma on non‐invasive prenatal .Methods A total of 46 pregnancy women were recruited in this study from January 2011 to December 2013 .Column separation method was used to got plasma DNA ,SRY gene was detected by polymerase chain reaction (PCR)technology and ATL1 specific sequence were used to judge the genders of fetuses .Results In 46 cases of pregnant women ,there was 28 cases with male fetuses ,18 cases with female fe‐tuses ,26 male fetuses was amplified with SRY gene by PCR method ,while there was 17 female fetuses was amplified with ATL1 gene .The specificity and sensitivity were 94 .4% (17/18) and 92 .9% (26/28) respectively ,the overall accuracy was 93 .5% (43/46) .Conclusion The sensitivity and specificity of free fetal DNA detection are higher in antenatal examination ,and there is no wound for pregnant women ,could reduce occurrence of adverse events .%目的：探讨孕妇血浆游离胎儿 DNA 检测在无创产前诊断中的价值。方法2011年1月至2013年12月该院46例孕妇作为研究对象，通过柱分离法获得孕妇的血浆 DNA ，并通过聚合酶链反应（PCR）技术对孕妇外周血浆中游离胎儿 DNA 的性别决定基因（SRY）进行检测，并通过 ATL1基因鉴别胎儿的性别。结果46例孕妇中28例产男性婴儿，18例产女性婴儿，其中男性胎儿中的26例能通过 PCR 技术扩增出 SRY 基因，而女性胎儿中有17例经过 PCR 技术扩增出 ATL1基因，其特异度为94．4％（17／18），而灵敏度为92．9％（26／28），检测的总符合率为93．5％（43／46）。结论将孕妇血浆游离胎儿 DNA 检测应用到产前检查检测中，其灵敏度和特异度都较高，且检查过程中无创伤，能减少不良事件的发生概率，值得临床推广和应用。

摘要： 目的：调查人群中人疱疹病毒(HHV),包括人巨细胞病毒(HCMV)、EB病毒(EBV)、HHV-6和 HHV-7的感染情况。方法收集55例南京市无偿献血者的外周血标本,提取全血DNA,巢氏PCR扩增 HCMV、EBV、HHV-6和 HHV-7特异性序列,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果55例献血者中 EBV、HCMV、HHV-6和 HHV-7的阳性感染率分别为50.9%、5.5%、49.1%和21.8%,并且存在多种病毒混合感染。结论 HHV筛查对临床相关疾病的诊治具有十分重要的意义,应引起医务工作者的重视。%Objective To investigate the prevalence of four kinds of human herpes viruses (HHV)in the blood of blood donors, including human cytomegalovirus (HCMV),epstein-barr virus (EBV),HHV-6,HHV-7.Methods DNA was prepared in whole blood samples collected from 55 blood donors.The presence of DNA of EBV,HCMV,HHV-6,HHV-7 were examined by specific nested-polymerase chain reaction.Results Prevalence of EBV,HCMV,HHV-6 and HHV-7 in whole blood were 50.9%,5.5%, 49.1% and 21.8% respectively.Multi-infections were observed in some objects.Conclusion The examination of HHV infection is useful in diagnosis and treatment of HHV related disease.

摘要： Objective:To develop a multiplex nested PCR method for detecting of P.falciparum, P.vivax, P. ovale,P.malarie and mixed Plasmodium malariae.And to evaluate the application value of multiplex nested PCR in the diagnosis and typing of malaria.In order to supply an effective supplement of microscopic examination for the detection and epidemiology of malaria.Methods: 5 pairs of primers ( 1 pair of universal primers and 4 pairs of specific primers) of the 4 kinds of malarie were designed and synthesized based on the 18 SSU rRNA to develop the multiplex nested PCR.28 blood samles were detected by nested PCR and compare the results with microscopic examination.Results: Nested PCR results showed that 6 samples were mixed Plasmodium malariae infection,consistant with sequencing.Conclusion: We have successfully developed a multiplex nested PCR method for dececting and typing of P.Falciparum, P.Vivax, P.Ovale, P.Malarie and mixed Plasmodium malariae.It shows higher sensitivity and specificity than microscopic examination on detecting and typing of malaria.%目的：应用能够同时检测恶性疟（ P.falciparum）、间日疟（ P.vivax）、卵形疟（ P.ovale）、三日疟（ P.malarie）及其混合感染的多重巢式PCR方法，对疑似疟疾混合感染样本进行检测，评价其在疟原虫混合感染及分型中的应用价值，旨在为疟疾流行病学调查、疟疾混合感染的确诊提供一种快速高效、特异性强、灵敏度高的实验室诊断方法，为传统的镜检法提供有效的补充。方法：根据恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的18 SSU rRNA基因序列设计5对引物（1对通用引物、4对特异性引物），以等比例混合的4种疟原虫核酸为模板，建立疟疾多重巢式PCR检测方法，并应用该法对28份疑似疟疾混合感染样本进行检测及测序验证，将其结果与镜检法比较。结果：28份疑似混合感染样本中混合感染样品数为6例，其中恶性疟和间日疟混合感染样品5例，恶性疟和卵形疟混合感染样品1例。结论：本研究建立的多重巢式PCR检测方法能够同时用于恶性疟、间日疟、卵形疟、三日疟及其混合感染样本的检测，在疟疾混合感染的确诊与分型上较镜检法有明显的优势和更高的应用价值。

摘要： 弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B celllymphoma,DLBCL)是最常见的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)，约占成人NHL的30%-40%。本文对42例DLBCL病例的临床资料进行了介绍，阐述了巢式聚合酶链反应技术检测DLBCL中bc12/IgH基因重排的过程。

摘要： 目的：用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增全血中梅毒螺旋体(TP)的47KDa、15KDa的膜免疫原基因，以排除梅毒血清学试验假阳性。方法：用巢式PCR和常规PCR扩增90例疑似梅毒患者全血中的TpN15、TpN47，并与血清学方法比较。结果：与血清学方法比较，巢式PCR检测TP的敏感性和特异性分别为93。3％和96.7％，两者符合率为96.7％;两种PCR方法检测结果差异有显著性(P<0.01)，巢式PCR敏感性高于常规PCR。结论：巢式PCR检测全血中TP较常规PCR灵敏，通过检测47KDa、15KDa的膜免疫原基因，有助于排除梅毒血清学试验假阳性，提高梅毒的诊断准确率。

摘要： 目的:了解SEN病毒D亚型在西安地区的分布序列特征. 方法:采用巢式聚合酶链反应对454例无偿献血人群SENVD亚型-DNA进行检测,对西安株进行克隆和序列分析. 结果:SENV-D总检出率为12.3﹪,乙肝表面抗原阳性、抗丙肝抗体、梅毒阳性和ALT升高患者人群中SENV-D亚型的阳性率分别为5.7﹪、25.0﹪、6.7﹪和27.8﹪,正常献血者SENV-D感染率为9.9﹪. 结论:西安地区SENV-D亚型及西安株序列分析有其地区特点。

摘要： 本发明涉及一种利用单管巢式实时聚合酶链反应（PCR）的改良结核菌诊断方法，尤其是一种利用两组结核菌特殊引物（Primer）的单管巢式PCR方法，本发明的方法诊断迅速，有利于特异且具有高敏感性的结核菌诊断。

摘要： 本发明公开了一种双向旋转热风交换式实时荧光定量聚合酶链反应分析仪，包括箱体，箱体内设有电机及主轴，箱体上端设有热风交换循环装置，所述热风交换循环装置包括设置在箱体上部的上风室，上风室内设有顶端开孔的进风管，进风管内设有强力风机和加热器组，强力风机位于加热器组的上端，加热器组中设有过热保护装置，进风管的出风口设有扩增室，扩增室位于箱体内并通过多孔环形密封回风口与上风室连通，扩增室内设有温度传感器，上风室内设有可控风机组和安全防护装置。本发明具有自动监测、快速、准确、不易污染、操作方便、价格低廉、便于普及等特点，适于广大基层医疗卫生、防疫、动植物检测等单位的需求。

摘要： 本发明涉及一种利用单管巢式实时聚合酶链反应（PCR）的改良结核菌诊断方法，尤其是一种利用两组结核菌特殊引物（Primer）的单管巢式PCR方法，本发明的方法诊断迅速，有利于特异且具有高敏感性的结核菌诊断。

摘要： 本发明涉及在PCR产物的末端上互补结合探针的情况下，利用抑制DNA聚合酶的5'‑瓣状内切核酸酶(FEN)活性的特性来检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。更具体地涉及将实时聚合酶链反应(real‑time PCR)中使用的探针与PCR产物末端进行互补结合的情况下，确认抑制针对探针的耐热性DNA聚合酶的5'‑瓣状内切核酸酶活性的特性，并利用其特性来使待检测的单核苷酸多态性(SNP)部位位于探针的5'‑末端部位时，根据等位基因(allele)来诱导5'‑瓣状的形成，从而可有效地检测单核苷酸多态性(SNP)的方法。

摘要： 本发明公开了一种微滴式数字聚合酶链反应芯片，属于数字PCR芯片领域，包括相连的芯片本体和收集管，芯片本体内设置有流向收集管的浊相通道以及汇聚于浊相通道入口的油相通道和水相通道，浊相通道按乳液流经次序分为曲流道和直流道，芯片本体顶面设置有油相通道入口、水相通道入口、经直流道直通收集管的吸出口和与曲流道相贯的热熔柱入口，该芯片既能生成乳液，也能加热加压扩增，油相和水相分别经油相通道和水相通道进入浊相通道中混合，流入收集管中，扩增时能利用热熔柱隔断浊相通道，隔离生成乳液的部分，便于扩增时加热、加压，不会导致溶液向外蒸发，减少热量向外散失，在扩增完成后能直接从吸出口将溶液吸出，有利于后续检测准确。

摘要： 本发明涉及一种闭环式聚合酶链反应系统及其制造方法，该系统包括具有液体流道的基材，开关阀件，丝状或面状电加热元件，控制系统；液体流道具有三段不同温度的区间具有至少一个进口、至少一个出口和/或气体逸出口，流道的三段温度区由三个开关阀件隔开，每段温度区分别由各自的加热元件供热。

摘要： 本发明公开了一种双向旋转热风交换式实时荧光定量聚合酶链反应分析仪，包括箱体，箱体内设有电机及主轴，箱体上端设有热风交换循环装置，所述热风交换循环装置包括设置在箱体上部的上风室，上风室内设有顶端开孔的进风管，进风管内设有强力风机和加热器组，强力风机位于加热器组的上端，加热器组中设有过热保护装置，进风管的出风口设有扩增室，扩增室位于箱体内并通过多孔环形密封回风口与上风室连通，扩增室内设有温度传感器，上风室内设有可控风机组和安全防护装置。本发明具有自动监测、快速、准确、不易污染、操作方便、价格低廉、便于普及等特点，适于广大基层医疗卫生、防疫、动植物检测等单位的需求。

摘要： 提供了用于核酸聚合酶链反应(PCR)的热循环装置。第一浴槽(50)和第二浴槽(51)中的浴槽介质(75)被保持在两种不同的温度。转移装置(85)让反应器(15)在多个热循环中处于两个浴槽(50、51)之中以交替地达到预定的高目标温度THT和预定的低目标温度TLT。荧光成像装置在热循环期间为反应材料(21)进行成像。当至少一个浴槽(50、51)中所使用的浴槽介质(75)是粉末(76)时，粉末清洁装置(20)就以机械方式去除附着在反应器(15)上的粉末(76)颗粒。

摘要： 本实用新型公开的基于抽屉式模块的聚合酶链反应分析仪包括支架，由散热器翅片、散热器基板、硅胶垫、模块线路板、模块压板和插置试管的模块组成的整体模块部件和热盖，在支架和整体模块部件分别装置水平滑竿和与之配合的第一滑块，形成水平滑动，在支架上固定倒置的“U”型热盖支架，热盖支架的顶面装置带动热盖动作的电机和丝杆，在热盖的侧壁固定第二滑块，“U”型热盖支架的两边分别固定垂直滑竿，第二滑块和垂直滑竿形成垂直滑动。该聚合酶链反应分析仪通过水平滑竿和第一滑块的水平滑动以及第二滑块和垂直滑竿的垂直滑动，取放试管操作简便。

摘要： 本发明公开了一种半巢式聚合酶链反应酶切分型快速检测军团菌及其应用。检测方法是：首先，增加一对引物Leg 226F和Leg 226R；接着，以386bp扩增片段为模板，进行第二次PCR扩增，得226bp片段产物；最后，对226bp的PCR扩增产物作琼脂糖凝胶电泳分析，选阳性者用FastDigestTaa I核酸内切酶作酶切分型，观察酶切分型结果。该检测方法可用于临床痰液标本的军团菌快速检测与分型，也可用于环境水样本的军团菌快速检测与分型，还可用于临床标本如支气管灌洗液的军团菌快速检测与分型。本发明半巢式PCR-酶切分型检测军团菌的方法具有简便、快速，敏感性和特异性高，可直接用于临床标本检测。