KISS-1基因

摘要： 目的:研究kiss-1基因在宫颈癌SiHa细胞增殖活力和侵袭迁徙能力中发挥的作用机制,以便为宫颈癌的治疗提供新的靶点。方法:选取kiss-1基因过表达后稳定转染SiHa宫颈癌细胞。本实验分为3组。1) 空白组为常规宫颈癌SiHa细胞;2) 空载体组为转染空载体的宫颈癌SiHa细胞;3) 过表达组为转染稳定kiss-1基因的宫颈癌SiHa细胞。Western blot法分析3组kiss-1基因蛋白的表达量差异,CCK-8测出3组细胞增殖活力,Transwell模型测3组细胞侵袭能力和转移能力。结果:过表达组kiss-1基因蛋白表达量最高,过表达组中Ecadherin的表达是明显上调(P 0.05),相反Vimentin的表达明显下调(P 0.05)。转染kiss-1基因的过表达组细胞增殖活力明显低于其他两组(P 0.05),尤其在12小时的穿膜细胞个数计数方面,转染kiss-1基因过表达组的个数显著高于其他两组(P 0.05)。转染kiss-1基因的过表达组可明显的抑制宫颈癌SiHa细胞的侵袭能力和转移能力。结论:kiss-1基因过表达能显著抑制宫颈癌疾病侵袭转移。

摘要： 本研究检测了肿瘤转移抑制基因(KISS1)在夷陵绵羊群体中的遗传多样性,并与产羔数进行关联分析,旨在研究KISS1基因的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)对绵羊繁殖性状的影响。结果表明,KISS1基因在夷陵绵羊群体中存在14个SNP位点,其中11个SNP位点为非同义突变,这些SNPs共形成3个连锁区块;g.5765C>T对产羔数有显著影响,CC基因型母羊的产羔数比CT基因型的多0.45只。综上所述,KISS1基因与绵羊的繁殖性状密切相关,该基因g.5765C>T位点显著影响绵羊产羔数。

摘要： [目的]明确转移抑制素基因(KISS1)多态性与努比亚山羊繁殖性状(产羔数、初生重和断奶重)的关联,为进一步展开山羊分子标记辅助选择育种提供参考依据.[方法]利用DNA混合池结合Sanger测序筛选出努比亚山羊KISS1基因SNP位点,再通过MTA-Seq测序对355只努比亚山羊群体进行SNP位点的基因分型,并采用SAS 9.2的一般线性模型(GLM)对KISS1基因SNP位点与努比亚山羊的产羔表型性状进行关联分析.[结果]在努比亚山羊KISS1基因内含子1发现2个SNP位点(g.1341600A>G和g.1341674C>G).其中,g.1341600A>G位点处于中度多态(0.250.05);而g.1341674C>G位点处于低度多态(PICG位点GG和AG基因型个体的第一胎、第二胎及三胎联合产羔数均高于AA基因型个体,且在第一胎达显著水平(PG位点CC基因型个体则表现为第一胎、第三胎及三胎联合产羔数均高于GG基因型个体,同样在第一胎达显著水平.g.1341674C>G位点GG基因型个体的第一胎、第三胎及三胎联合羔羊初生重均高于CC基因型个体,且在第三胎达显著水平;g.1341600A>G位点不同基因型与努比亚山羊各胎次羔羊初生重无显著关联(P>0.05,下同).在羔羊断奶重方面,2个SNP位点不同基因型与努比亚山羊各胎次断奶重也无显著关联.g.1341600A>G位点和g.1341674C>G位点可形成连锁不平衡单倍型模块,其中GC、AC、AG单倍型的频率分别为0.645、0.265和0.090;单倍型模块与第一胎产羔数显著关联,AACC组合型产羔数显著低于其他组合型.[结论]努比亚山羊KISS1基因内含子1存在2个SNP位点(g.1341600A>G和g.1341674C>G)与其繁殖性状相关,其中g.1341600A>G位点的A等位基因和g.1341674C>G位点的C等位基因可作为努比亚山羊选育的潜在分子标记,且在今后的育种过程中应淘汰KISS1基因AACC组合型母羊.

摘要： 为探究kiss-1基因rs5780218和rs4889多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)的相关性,该研究采集2018年1月-2019年6月就诊于陆军军医大学附属新桥医院妇产科门诊的PCOS患者61例及同期内分泌功能正常的对照患者64例的血液样本,检测患者kiss-1基因rs5780218和rs4889多态性,检测空腹血糖、FSH、LH、T及血清kisspeptin的表达并分析其相关性.结果显示PCOS患者血清kisspeptin表达水平与LH显著正相关(R=0.544,P<0.001).与对照组相比,rs5780218多态性在PCOS中并无显著改变,而rs4889基因型及等位基因频率在PCOS组中呈现显著差异.与rs4889 G/G基因型相比,rs4889 C/C基因型是PCOS发生的危险因素,且C/C患者表达更高的kisspeptin、LH及T.可推断kiss-1基因rs4889多态性是PCOS发生发展的危险因素,其与PCOS患者kisspeptin表达及内分泌功能异常有关.

摘要： 目的 探讨Kiss-1基因表达与过表达对直肠癌细胞SW620增殖的影响.方法 培养人直肠癌SW620细胞,随机将其分为3组:空白对照组(未转染)、实验组(转染pIRES2-Kiss-1)、阴性对照组(转染pIRES2空载体).采用免疫荧光染色和免疫细胞化学染色观察直肠癌SW620细胞中Kiss-1的表达情况;Western blot检测转染pIRES2-Kiss-1基因后直肠癌SW620细胞中Kiss-1的表达;采用CCK-8法、MTT法检测转染对SW620细胞增殖的影响.结果 免疫重组质粒pIRES2-Kiss-1成功转染至直肠癌SW620细胞,与空白对照组和阴性对照组相比较,实验组中Kiss-1蛋白高表达,差异有显著性(P<0.05);3组细胞培养48、72h后,与空白对照组和阴性对照组SW620细胞数相比较,实验组明显降低(P<0.05).结论 Kiss-1基因在直肠癌SW620细胞中能高效、稳定地表达;Kiss-1基因可有效降低直肠癌SW620细胞的增殖.

摘要： [目的]预测母猪Kiss1(GenBank Gene ID:100145896)上游区域潜在的转录因子结合位点,并验证部分转录因子在猪卵巢颗粒细胞中对Kiss1基因的调控作用,为研究Kiss1基因在母猪卵巢颗粒细胞中的分子调控机制提供理论基础.[方法]参考NCBI数据库中Kiss1基因上游区域的序列,通过生物信息学网站预测的Kiss1基因上游区域潜在转录因子结合的位点,结合文献阅读与资料查询,在转录因子CEBPα和p53与Kiss1基因上游区域潜在结合位点附近设计引物,利用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术,验证转录因子CEBPα和p53与Kiss1基因上游区域的结合情况;参照NCBI数据库相关转录因子CEBPα和p53的mRNA序列,使用软件Primer Premier5设计引物,PCR分别扩增转录因子CEBPα(带有KpnⅠ和Xho Ⅰ限制性内切酶的酶切位点)和p53(带有KpnⅠ和HindⅢ限制性内切酶的酶切位点)的CDS区序列,并进行测序鉴定,连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建含有潜在转录因子CEBPα和p53 CDS区序列的真核表达载体,并获得无内毒素质粒,分别命名为pcDNA3.1-CEBPα和pcDNA3.1-p53;化学合成目标转录因子CEBPα和p53的干扰siRNA片段.屠宰场采集猪的卵巢,快速分离并培养原代猪的卵巢颗粒细胞,阳离子脂质体转染法分别将转录因子CEBPα和p53真核表达载体(pcDNA3.1-CEBPα和pcDNA3.1-p53)或siRNA片段(CEBPα-siRNA和p53-s iRNA)转染进母猪卵巢颗粒细胞,使用实时荧光定量PCR和Western Blot技术分别验证预测的转录因子CEBP α和p53对Kiss1基因mRNA水平和蛋白水平的影响. [结果]生物信息学预测结果表明,Kiss1基因上游区域(-850-+221)存在p53(肿瘤抑制蛋白,tumor protein p53,p53)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein,CEBP)、信号传导及转录活化家族Stat4(signa1 transducer and activator of transcription 4,Stat4)等转录因子的潜在结合位点,其中转录因子p53(GenBank Gene ID:397276,NM_213824.3)可能结合在Kiss1基因上游区域-533--523 bp处,转录因子CEBPα(GenBank Gene ID:397307,XM_003127015.4)可能结合在Kiss1基因上游区域-744--733bp处;ChIP结果表明,转录因子p53和CEBPα可以特异性的结合在Kiss1基因上游区域-533--523 bp和-744--733 bp处;在母猪卵巢颗粒细胞中超表达转录因子p53或CEBPα后,Kiss1基因的mRNA的表达水平显著下降(P＜0.05),蛋白水平显著下降(P＜0.05);在母猪卵巢颗粒细胞中,干扰转录因子p53或CEBPα后,Kiss1基因的mRNA的表达水平显著升高(P＜ 0.05),蛋白水平显著升高(P＜0.05).[结论]在猪卵巢颗粒细胞里,转录因子p53和CEBPα能结合到Kiss1基因的上游区域降低其启动子转录活性,进而降低其mRNA和蛋白表达水平.

摘要： Kiss基因编码的kisspeptin多肽是脊椎动物重要的神经激素,在调控机体生长发育、能量代谢和生殖活动中发挥重要作用.为了明确卵形鲳鯵Kiss1 (ToKiss1)基因序列及饵料类型对其表达的影响,实验利用RACE方法克隆分析了ToKiss1基因结构特征,荧光定量PCR (qRT-PCR)方法研究了饵料类型对ToKiss1 mRNA表达调控的影响.结果 显示,ToKiss1基因全长2 768 bp,由3个外显子和2个内含子组成.ToKiss1基因cDNA全长505 bp,开放阅读框312 bp,编码104个氨基酸,包括信号肽序列和典型的kisspeptin-10结构域“YNLNSFGLRY”.卵形鲳鯵ToKiss1蛋白三级结构由2个α螺旋和无规则卷曲构成.qRT-PCR表达分析结果显示,ToKiss1 mRNA在卵形鲳鯵脑、肠道、胃、脾脏、肌肉和心脏中均有表达,在脑中的表达量最高.饵料类型显著影响ToKiss1 mRNA在卵形鲳鯵肠道组织中的表达,颗粒饲料组表达量最高,其次为冰杂鱼组,冰鱿鱼组表达量最低,但饵料类型对肝脏组织中ToKiss1 mRNA的表达无显著影响,表明ToKiss1在卵形鲳鲹消化吸收过程中发挥了重要调控作用.该研究首次探讨了饵料类型对硬骨鱼肝脏和肠道组织中Kiss1 mRNA表达的影响,为深入研究硬骨鱼类Kiss1基因摄食调控生理机制奠定了基础.

摘要： 为研究KISS1基因在常年发情的小尾寒羊和季节性发情的草地型藏羊中的表达模式,以及KISS1基因多态性与绵羊繁殖之间的关系,实验采用qPCR技术对比分析KISSJ基因在2个品种绵羊的10种繁殖相关组织中的表达差异,同时利用Sequenom MassARRAY(R)SNP技术对常年发情绵羊(小尾寒羊、策勒黑羊和湖羊)和季节性发情绵羊(滩羊、苏尼特羊和草地型藏羊)KISSJ基因2个SNPs位点多态性进行检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析.qPCR结果显示:KISS1基因在小尾寒羊下丘脑、大脑、垂体和甲状腺中的表达量高于草原型藏羊(P＜0.05);分型结果表明,g.1317523C＞T位点基因型频率和等住基因频率在常年发情和季节性发情绵羊品种间差异均达到极显著水平(P＜0.01);群体遗传学分析表明,g.1317523C＞T位点在6个绵羊群体中均表现为中度多态(0.25＜PIC＜0.5);卡方适合性检验表明,g.1317523C＞T位点在小尾寒羊、滩羊、苏尼特羊和湖羊中均处于哈代温伯格平衡状态(P＞0.05),g.1311578G＞T位点在苏尼特羊和湖羊中处于哈代温伯格平衡状态(P＞0.05);关联分析表明,这2个SNPs位点与小尾寒羊前3胎产羔数均无显著关联(P＞0.05),但g.1311578G＞T位点TT型各胎产羔数均大于GT和GG型.综上,KISSJ基因与绵羊的季节性繁殖密切相关,并且g.1311578G＞T位点对绵羊产羔性状有潜在调控作用.

摘要： 中枢性性早熟是一种儿童性发育异常性疾病,突出的病理生理改变是下丘脑-垂体-性腺轴提前激活导致促性腺激素释放激素提前大量释放.基因、营养、环境等因素均在调控青春期发育中起着重要作用,其中基因突变是中枢性性早熟发病的关键因素.最近的临床研究发现,kisspeptin及其受体基因的功能获得性突变以及ma-korin环指蛋白3基因的功能丧失性突变是中枢性性早熟的重要致病因素.

摘要： 性成熟启动是一个复杂的生理过程,决定性成熟启动的关键性事件是下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)脉冲式释放增加.KISS-1基因编码产物kisspeptin通过其受体GPR54能够直接刺激GnRH释放,进而启动性成熟进程,因此KISS-1/GPR54系统被认为是性成熟启动的关键看门基因.禽类的KISS-1基因在GenBank中尚未被清晰注释.本文以文昌鸡为素材,通过比较不同物种KISS-1及其上下游基因在染色体上的分布,确定了鸡chr26:1522493-1532710区域为候选片段,通过PCR扩增和克隆测序获得了该候选片段完整序列(称为类KISS-1序列).采用BLAST程序搜索出9个同源性在50%~85%的EST序列,通过拼接得到3个延伸EST序列.表达验证分析表明,3个延伸EST序列在文昌鸡下丘脑组织中均有表达.研究结果提示,KISS-1基因在禽类性成熟启动中可能也发挥重要作用.

摘要： 性成熟启动是一个复杂的生理过程,决定性成熟启动的关键性事件是下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)脉冲式释放增加.KISS-1基因编码产物kisspeptin通过其受体GPR54能够直接刺激GnRH释放,进而启动性成熟进程,因此KISS-1/GPR54系统被认为是性成熟启动的关键看门基因.禽类的KISS-1基因在GenBank中尚未被清晰注释.本文以文昌鸡为素材,通过比较不同物种KISS-1及其上下游基因在染色体上的分布,确定了鸡chr26:1522493-1532710区域为候选片段,通过PCR扩增和克隆测序获得了该候选片段完整序列(称为类KISS-1序列).采用BLAST程序搜索出9个同源性在50%~85%的EST序列,通过拼接得到3个延伸EST序列.表达验证分析表明,3个延伸EST序列在文昌鸡下丘脑组织中均有表达.研究结果提示,KISS-1基因在禽类性成熟启动中可能也发挥重要作用.

摘要： 性成熟启动是一个复杂的生理过程,决定性成熟启动的关键性事件是下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)脉冲式释放增加.KISS-1基因编码产物kisspeptin通过其受体GPR54能够直接刺激GnRH释放,进而启动性成熟进程,因此KISS-1/GPR54系统被认为是性成熟启动的关键看门基因.禽类的KISS-1基因在GenBank中尚未被清晰注释.本文以文昌鸡为素材,通过比较不同物种KISS-1及其上下游基因在染色体上的分布,确定了鸡chr26:1522493-1532710区域为候选片段,通过PCR扩增和克隆测序获得了该候选片段完整序列(称为类KISS-1序列).采用BLAST程序搜索出9个同源性在50%~85%的EST序列,通过拼接得到3个延伸EST序列.表达验证分析表明,3个延伸EST序列在文昌鸡下丘脑组织中均有表达.研究结果提示,KISS-1基因在禽类性成熟启动中可能也发挥重要作用.

摘要： 性成熟启动是一个复杂的生理过程,决定性成熟启动的关键性事件是下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)脉冲式释放增加.KISS-1基因编码产物kisspeptin通过其受体GPR54能够直接刺激GnRH释放,进而启动性成熟进程,因此KISS-1/GPR54系统被认为是性成熟启动的关键看门基因.禽类的KISS-1基因在GenBank中尚未被清晰注释.本文以文昌鸡为素材,通过比较不同物种KISS-1及其上下游基因在染色体上的分布,确定了鸡chr26:1522493-1532710区域为候选片段,通过PCR扩增和克隆测序获得了该候选片段完整序列(称为类KISS-1序列).采用BLAST程序搜索出9个同源性在50%~85%的EST序列,通过拼接得到3个延伸EST序列.表达验证分析表明,3个延伸EST序列在文昌鸡下丘脑组织中均有表达.研究结果提示,KISS-1基因在禽类性成熟启动中可能也发挥重要作用.

摘要： 本文综述了KiSS-1基因与生殖相关的表达及性腺类固醇激素、代谢激素和光周期对其在下丘脑表达的调节作用最新研究进展，为今后KiSS-1基因的研究取向提供参考。

摘要： 本文综述了KiSS-1基因与生殖相关的表达及性腺类固醇激素、代谢激素和光周期对其在下丘脑表达的调节作用最新研究进展，为今后KiSS-1基因的研究取向提供参考。

摘要： 本文综述了KiSS-1基因与生殖相关的表达及性腺类固醇激素、代谢激素和光周期对其在下丘脑表达的调节作用最新研究进展，为今后KiSS-1基因的研究取向提供参考。

摘要： 本文综述了KiSS-1基因与生殖相关的表达及性腺类固醇激素、代谢激素和光周期对其在下丘脑表达的调节作用最新研究进展，为今后KiSS-1基因的研究取向提供参考。

摘要： 本试验首次采用实时荧光定量PCR技术研究母羊发情周期不同阶段下丘脑上KiSS-1和GPR54基因的表达规律，为阐明KiSS-1／GPR54系统在母羊排卵中的作用奠定基础。

摘要： 本试验首次采用实时荧光定量PCR技术研究母羊发情周期不同阶段下丘脑上KiSS-1和GPR54基因的表达规律，为阐明KiSS-1／GPR54系统在母羊排卵中的作用奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种黔北麻羊KISS1基因单核苷酸多态性的检测方法。本发明采用PCR产物直接测序法对KISS1基因多态性位点进行检测，以探寻KISS1基因多态性和表达量与产羔数之间的相关性，为进一步研究黔北麻羊繁殖性状的遗传机制提供依据。首次在黔北麻羊KISS1基因第1内含子处检测到3个SNP，分别为G277C，G436T，T486A，其中G277C，T486A位点的三个基因型个体之间的产羔数达到差异显著。由此可知，KISS1基因内含子1位点的变异影响黔北麻羊的产羔数。

摘要： 本发明公开一种Kiss1基因在促进卵巢颗粒细胞中E2生成的应用，属于基因工程和细胞工程技术领域。本发明以Kiss1基因为研究对象，采用了分子与细胞生物学方法研究其在猪卵巢颗粒细胞中表达调控。并通过基因工程技术找出其核心启动子区；再预测该基因核心启动子区潜在结合的转录因子，研究转录因子在卵巢颗粒细胞中对该基因核心启动子区活性的影响，来达到该基因在卵巢颗粒细胞中的表达调控研究。本发明首次证实长大二元杂母猪初情期调控基因Kiss1基因在猪卵巢颗粒细胞中的表达调控，还通过在猪卵巢颗粒细胞中转录因子Stat4对Kiss1基因的表达调控和在卵巢颗粒细胞中的功能进行研究。本研究实验内容较多，结果齐全、准确。

摘要： 本发明涉及一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法，所述系统为红色荧光蛋白稳定表达，绿色荧光受Kiss1表达调控元件调控的双荧光Kiss1基因表达调控报告系统。构建方法包括：构建红色荧光蛋白打靶载体Ai9‑dtomato；构建绿色荧光蛋白打靶系统；EGFP受Kiss1表达调控元件控制的Cas9‑GT1‑7‑Kiss1‑2A‑EGFP细胞的构建；插入稳定表达的红色荧光背景，即得。本发明实现对研究对象对Kiss1作用效应的量化评估。

摘要： 本发明公开了检测KISS1基因C242G、417delA、437insT和C487G碱基突变的方法、引物和试剂盒，采用Touch‑down PCR扩增技术和Sanger测序技术，可用于快速检测患者体内KISS1基因C242G、417delA、437insT和C487G位点突变情况。利用本发明的试剂盒进行检测的结果准确，对IHH有辅助诊断价值且对恶性肿瘤的转移可能有预测作用。

摘要： 本发明提供了一种黔北麻羊KISS1基因单核苷酸多态性的检测方法。本发明采用PCR产物直接测序法对KISS1基因多态性位点进行检测，以探寻KISS1基因多态性和表达量与产羔数之间的相关性，为进一步研究黔北麻羊繁殖性状的遗传机制提供依据。首次在黔北麻羊KISS1基因第1内含子处检测到3个SNP，分别为G277C，G436T，T486A，其中G277C，T486A位点的三个基因型个体之间的产羔数达到差异显著。由此可知，KISS1基因内含子1位点的变异影响黔北麻羊的产羔数。

摘要： 本发明公开一种Kiss1基因在促进卵巢颗粒细胞中E2生成的应用，属于基因工程和细胞工程技术领域。本发明以Kiss1基因为研究对象，采用了分子与细胞生物学方法研究其在猪卵巢颗粒细胞中表达调控。并通过基因工程技术找出其核心启动子区；再预测该基因核心启动子区潜在结合的转录因子，研究转录因子在卵巢颗粒细胞中对该基因核心启动子区活性的影响，来达到该基因在卵巢颗粒细胞中的表达调控研究。本发明首次证实长大二元杂母猪初情期调控基因Kiss1基因在猪卵巢颗粒细胞中的表达调控，还通过在猪卵巢颗粒细胞中转录因子Stat4对Kiss1基因的表达调控和在卵巢颗粒细胞中的功能进行研究。本研究实验内容较多，结果齐全、准确。

摘要： 本发明涉及一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法，所述系统为红色荧光蛋白稳定表达，绿色荧光受Kiss1表达调控元件调控的双荧光Kiss1基因表达调控报告系统。构建方法包括：构建红色荧光蛋白打靶载体Ai9‑dtomato；构建绿色荧光蛋白打靶系统；EGFP受Kiss1表达调控元件控制的Cas9‑GT1‑7‑Kiss1‑2A‑EGFP细胞的构建；插入稳定表达的红色荧光背景，即得。本发明实现对研究对象对Kiss1作用效应的量化评估。

摘要： 本发明公开了一种基于KISS?1基因的猪繁殖性状相关的分子标记及其检测方法和应用。所述的分子标记为猪KISS?1基因片段，所述的猪KISS?1基因片段含有多态性位点，所述的多态性位点位于猪KISS?1基因的核苷酸序列中第41位，所述的多态性位点具有G/T碱基的变异。本发明猪KISS?1基因第1外显子存在一个突变位点，该位点位于猪KISS?1基因的核苷酸序列中第41位，该突变位点与猪的繁殖性状尤其是总产仔数或产活仔数相关，且容易检测，从而本发明根据该突变位点提供了一种分子标记，并提供了该分子标记的检测方法及在猪繁殖性状选择中的应用，为猪分子育种、研究猪繁殖生理机制提供基础。

摘要： 本发明涉及一种KiSS1基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了一种KiSS1基因原位杂交检测方法。另外，本发明还提供了试剂盒在制备检测癌症早期转移、复发疾病药物中的应用。本发明优点在于：本发明提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。

摘要： 本发明属于双辊铸轧技术领域，具体涉及一种测量双辊铸轧Kiss角的方法。双辊铸轧工艺稳定顺行的关键是Kiss角始终处于合理范围。为研究适宜的Kiss角取值范围和对应的工艺参量匹配关系，申请人发明了一种测量双辊铸轧Kiss角的方法。