人肝微粒体

摘要： 吡虫啉作为新烟碱类农药是目前我国使用量最大的杀虫剂之一,不合理的施用使其残留在果蔬等食物和环境中,并导致其在人体中富集,危害人体健康。然而目前吡虫啉在人体内的代谢产物和代谢路径仍不明确,导致质量安全监管和毒性评价仍然只是针对吡虫啉本身,因此亟需开展吡虫啉的生物体内代谢研究,以明确吡虫啉的代谢产物和代谢途径。本文通过人肝微粒体体外孵育模型模拟吡虫啉在人体内的代谢过程,在男性人肝微粒体孵育体系中加入1μL浓度为10 mg/m L的吡虫啉标准溶液,37°C下孵育4 h,使用Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱(2.1mm×100 mm,2.7μm)进行分离,用5mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水(A相)和5 mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸乙腈(B相)进行梯度洗脱,利用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对代谢产物进行分离鉴定。实验结果表明,吡虫啉经代谢共产生5种代谢产物,包含的主要代谢途径有加羟基、脱硝基、还原、烯烃化、氧化。本研究初步阐明了吡虫啉的I相代谢途径,为吡虫啉及其代谢物的毒性研究提供了数据基础。

摘要： 化合物P109是缬苯那嗪结构类似物,其在9位进行了环丙烷甲基取代,具有与缬苯那嗪相似的药物活性与药理作用机制。为研究P109在人肝微粒体孵育体系中的代谢产物,采用Waters Eclipse Plus-C18色谱柱(150 mm×2.1 mm×3.5μm)分离,以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,利用超高效液相色谱-高性能台式四极杆-轨道阱质谱(UHPLC-Q Exactive^(TM) Orbitrap MS)技术,在正离子模式下分析样品,筛选出9个化合物(包括P109及其8个代谢产物),并进行结构鉴定。结果表明,P109经人肝微粒体主要发生氧化、水解、脱环丙烷甲基的Ⅰ相代谢反应。代谢产物酶表型研究表明,P109的主要代谢酶亚型为CYP3A4和CYP2C8,次要代谢酶亚型为CYP2D6。本研究初步阐明了P109在人肝微粒体中的代谢规律及代谢产物酶表型,可为新药筛选、毒理学研究提供支持。

摘要： 研究4种近来滥用的酰胺类合成大麻素ADB-4en-PINACA、4CN-CUMYL-BUTINACA、5F-EMB-PICA和4F-MDMBBUTICA的体外人肝微粒体代谢规律。取人肝微粒体,加合成大麻素使成1 mg/mL,模拟人体代谢过程孵育10 min、60 min或3 h,用液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(LC-QTOF-MS)分析技术检测并鉴定代谢产物的结构,探索代谢途径。结果显示,5F-EMB-PICA、4F-MDMB-BUTICA、ADB-4en-PINACA和4CN-CUMYL-BUTINACA存在羟基化、羧基化、N-脱烷基和酯水解等27种Ⅰ相代谢途径,其中主要的Ⅰ相代谢途径为酯水解、双键氧化成邻二醇、氧化脱氟羧基化、单羟基化(烷基侧链或吲哚/吲唑环)和N-脱烷基。本研究可为司法鉴定4种酰胺类合成大麻素的滥用和污水毒情评估提供潜在的检测标志物。

摘要： 运用Orbitrap高分辨质谱仪,评估了人体肝微粒体(HLM)代谢V6的转化规律.除5种已被报道过的O-脱烷基、氧化性去磷酸化和氧化脱氯产物外,首次发现了6种新型产物.基于其MS/MS质谱图,该6种代谢产物被鉴定为醛基和羧基产物.其中,5种代谢物生成量随孵育时间呈线性增加趋势,具有累积性.此外,推导的代谢途径表明,脱烷基化和羟基化代谢物进一步转化为次级代谢物,即醛和羧基代谢物.

摘要： 目的:研究牛樟芝醇提物对人肝CYP450酶的影响.方法:建立HPLC方法,通过Cocktail探针检测樟芝醇提物对人CYP450酶的影响.结果:牛樟芝各剂量组对CYP3A4/5有抑制作用;低剂量组对CYP2E1有促进作用,中、高剂量对CYP2D6、1A2、2E1、2C9亚型作用具有促进作用.结论:牛樟芝醇提物能促进人CYP1A2、2C9、2D6、2E1的活性;可以抑制CYP3A4/5代谢.

摘要： 目的:研究树豆酮酸A对人肝微粒体中的5种细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制作用.方法:采用Cocktail探针药物法,在人肝微粒体中加入50.0、15.0、5.0、1.5、0.5、0.15、0.05μmol/L的树豆酮酸A,与混合探针药物[包含非那西丁、右美沙芬、奥美拉唑、睾酮、甲苯磺丁脲(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的探针药物)]共同孵育60 min.在另设空白组和阳性对照组[α-萘黄铜、奎尼丁、(+)-N-3-苄基香酚、酮康唑、磺胺苯吡唑(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的特异性抑制剂)]的基础上,以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)分析相应代谢产物(对乙酰氨基酚、右啡烷、5-羟基奥美拉唑、6β-羟基睾酮、羟基甲苯磺丁脲)的含量.以ACQUITY UPLC?BEH C18为色谱柱,以0.01％甲酸水溶液-0.01％甲酸乙腈为流动相(梯度洗脱),柱温为40°C,流速为0.4 mL/min,进样量为2μL;采用电喷雾电离源,以多反应监测模式进行正负离子扫描,数据采集范围为m/z 100～1200,碰撞气为氩气,雾化气为氮气,锥孔气流量为50 L/h,脱溶剂气流量为800 L/h,正、负离子模式下毛细管电压分别为2.0、1.5 kV,离子源温度分别为120、110°C,脱溶剂的温度分别为400、450°C.使用Graph-pad Prism 5.0软件进行非线性回归分析并计算半数抑制浓度(IC50).结果:上述各代谢产物检测浓度的线性范围分别为0.26～8.35、0.36～34.56、0.10～3.09、3.67～117.37、0.15～4.88μmol/L(R2>0.99),定量下限分别为0.26、0.36、0.10、3.67、0.15μmol/L.阳性对照组特异性抑制剂对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9酶的IC50均在文献报道的可接受范围内.树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶的IC50值均大于50μmol/L,对CYP2C9、CYP2C19酶的IC50值分别为4.94、18.00μmol/L.结论:树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶没有抑制作用,对CYP2C9、CYP2C19酶有一定的抑制作用.

摘要： 目的:考察比阿培南在人肝微粒体、人肾S9和体外人空白血浆中的代谢稳定性,并推测代谢产物的结构及可能的代谢途径.方法:采用高效液相色谱-串联质谱联用仪(HPLC-MS/MS)检测比阿培南分别与人肝微粒体、人肾S9和人空白血浆孵育后孵育液中剩余的比阿培南含量,比较代谢稳定性.此外,利用快速液相色谱-离子阱-飞行时间质谱联用仪(UFLC/MS-IT-TOF)分析比阿培南与人肝微粒体和人肾S9孵育后的提取离子流图,比较差异峰并通过质谱图推测代谢产物和代谢途径.结果:比阿培南与人肝微粒体、人肾S9和人空白血浆孵育120 min后的剩余百分比分别为(89.2±2.66)％、(52.0±7.6)％和(96.3±5.4)％,计算得到其在人肝微粒体和人肾S9中代谢的体外消除半衰期(t1/2)分别为1 046.2和120.9 min,在人肝微粒体中固有清除率(CLint,h)和人肾S9中固有清除率(CLint,R)分别为0.57和2.05 mL·min-1·kg-1,肝清除率(CLh)和肾代谢清除率(CLR)分别为0.53和1.72 mL·min-1·kg-1.此外,比阿培南在人肝微粒体和人肾S9孵育体系中都只鉴定出1个体外代谢产物,推测比阿培南的主要代谢途径为β-内酰胺环水解.结论:比阿培南主要在人肾S9中代谢,少量在人肝微粒体中代谢,产生的代谢物为β-内酰胺环水解产物.

摘要： 本文应用人肝微粒体体外温孵法模拟了奥芬太尼在人体内的代谢过程,并采用高分辨的超高效液相色谱串联三重四极杆飞行时间质谱对奥芬太尼及其在人肝微粒体中的主要代谢产物进行了分析,结果表明奥芬太尼的主要体外代谢产物由奥芬太尼的醚键去甲基生成。此结果为实际工作中筛查奥芬太尼滥用者提供了潜在的代谢标志物,但仍需在以后的工作中收集真实人体尿液样本或血液样本,比对其中的主要代谢产物,才能最终确认奥芬太尼的代谢标志物,为正确认定奥芬太尼滥用行为提供参考。

摘要： 目的:采用羧酸酯酶1(hCE1)特异性化学发光探针D-荧光素甲基醚(DME),在人肝微粒体(HLM)体系中测定18种调血脂类中药及12种中药单体对hCE1活性的抑制作用.方法:在HLM体系中,取不同中药饮片70％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取层(简称酯层)与残留水层及中药单体化合物,分别与hCE1特异性探针DME在37°C条件下共同孵育,通过测定探针底物代谢产物的相对光单位(RLU)值计算酶活力(Eres),判断提取物及中药单体对hCE1的抑制程度.结果:绿茶酯层、女贞子水层、干姜酯层、甘草次酸、胡椒水层、决明子水层、红花酯层、决明子酯层、柴胡水层、制何首乌水层、胡椒酯层、蒲黄酯层对hCE1有较强的抑制作用(Eres<20％),质量浓度为20μg·mL–1时hCE1酶活力分别为0.35％、0.89％、3.69％、5.26％、5.64％、6.34％、7.79％、12.04％、13.70％、15.35％、16.66％、18.89％.结论:绿茶、女贞子、干姜、甘草、胡椒、决明子、红花、柴胡、制何首乌、蒲黄中的化学成分对hCE1有较强的抑制作用.服用这些药物或食物,如饮茶时,需要注意其羧酸酯酶抑制作用会影响hCE1参与代谢的药物的血药浓度及药效.

摘要： 目的 探讨鸦胆子和水飞蓟主要活性成分对人肝微粒体催化苯妥英代谢的抑制作用.方法 采用超高效液相色谱—串联质谱(UPLC-MS/MS)法,选择ESI正离子模式测定苯妥英的代谢产物5-(4羟基苯基)-5-苯基乙内酰脲(p-HPPH)生成速率.利用产物p-HPPH生成速率的改变评价鸦胆子苦醇、鸦胆子素D、水飞蓟宾A和水飞蓟宾B对人肝微粒体催化的苯妥英代谢的抑制作用.结果 水飞蓟宾A对人肝微粒体催化的苯妥英代谢具有强抑制作用,半抑制浓度(IC50)为7.670 μmol/L.水飞蓟宾B具有中等抑制作用,IC50为15.490 μmol/L.而鸦胆子苦醇和鸦胆子素D无明显抑制作用.结论 临床用药中应避免水飞蓟制品与抗癫痫药苯妥英联合应用,以免药物相互作用引发临床不良发应.

摘要： 目的:研究异丙酚在人肝微粒体中的代谢.方法:采用高效液相方法测定孵育液中异丙酚的浓度.研究异丙酚的酶促动力学,推导出药物米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax);并计算体外酶对药物的清除率(CLint).同时观察不同种类的CYP酶特异性抑制剂对异丙酚代谢的影响.结果:异丙酚在人肝微粒体中Km 和Vmax 分别为777.43μmol·L-1 和172.413 μmol·L-1·h-1·mg-1,CLint 为0.22 h-1·mg-1.CYP2B6抑制剂能够减少异丙酚的代谢.结论:CYP2B6主要参与异丙酚的代谢,CYP2B6酶抑制剂可能异丙酚的代谢受到抑制,造成药物药效或毒性的增加.

摘要： 目的：建立测定人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷活性及其非活性代谢产物药物浓度的超高效液相色谱-串联质谱检测方法.rn 方法：采用液液萃取法处理人肝微粒体孵育体系样本测定氯吡格雷活性及其非活性代谢产物药物浓度.色谱柱为Thermo C18柱(100 mm×2.1mm,5μm).流动相为乙腈(含0.1％甲酸):水(含0.1％甲酸)(9:1,V/V),流速为200μL·min-1.正离子模式多反应监测(MRM)扫描分析,离子通道分别为氯吡格雷活性代谢产物m/z503.6→353.8;非活性代谢产物m/z 307.7→197.8;内标氯雷他定m/z382.8→336.9.rn 结果：人肝微粒体孵育体系中氯吡格雷活性及其非活性代谢产物线性范围分别为1～200ng·mL-1和10～2000ng·mL-1,定量下限分别为1ng·mL-1和10ng·mL-1,回收率分别在59.36％～73.42％、54.79％～72.77％之间,氯吡格雷活性代谢产物的批内、批间精密度RSD均小于11.36％,非活性代谢产物的批内、批间变异均小于9.69％.氯吡格雷非活性代谢产物酶促反应动力学参数Km值为15.86±1.83μM,Vmax值为620.2±19.74pmol·min-1·mg-1protein,Clint值为39.15±2.06μL·min-1mg protein-1;活性代谢产物生成开始随着底物浓度的增加而增加,在底物浓度为20μM时其生成量达到最大,随后随着底物浓度的增加其生成量并没有进一步增加.rn 结论：该方法操作简便快速,重复性好,特异性强,灵敏度高,可用于肝微粒体孵育体系中氯吡格雷活性及非活性代谢产物药物浓度的测定.

摘要： 目前，合成色素苋菜红常被违规用于作食品着色剂。本研究采用LC- MS2对苋菜红在人肝微粒体中的代谢产物进行分析鉴定，共检测到5种代谢产物，分别为3-羟基-2,7-萘二磺酸、1-萘磺酸、1-羟基亚氨基-2-羟基-3,6-萘二磺酸、1-氨基-4-萘磺酸和1-二氮烯-2,3-二羟基-6-萘磺酸。实验结果为探讨苋菜红对人体的健康影响提供了重要的科学依据。

摘要： 目的:建立快速、高灵敏的方法测定肝微粒体中及人尿中大豆苷元(DDZ)及单羟基化代谢物(M1和M2).方法:采用WatersmicromassZQ液相色谱-质谱联用仪.色谱柱:液相:WatersXterrMSC183.9mm×150mm,5μm;流动相:乙腈-1/1000的甲酸水,采用程序洗脱:首先乙腈与水的比例为10％,持续6分钟,然后在20分钟之内升至30％,维持5分钟,再重新平衡至初条件(5分钟);流速1ml·min-1;质谱:Micromass电喷雾质谱仪,离子源:ESI;极性(检出模式):正离子;毛细管电压:3.0kV;脱溶剂温度:350°C;源温度150°C;取样锥孔电压:47V;萃取锥孔电压1.6V;离子能量:0.5V;六极杆射频透镜电压:0.5V;倍增器电压650V;氮气流量:294L·h-1.结论:该方法简单、灵敏、可靠,适合体外和体内大豆苷及其代谢物的药代动力学研究.

摘要： 本发明涉及一种人抗肝肾微粒体抗体的快速定量检测试剂盒，属于医药生物领域。其为荧光免疫层析检测试纸卡；所述试纸卡是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记LKM‑1抗原的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成试纸卡。

摘要： 本发明公开一种肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，包括以下步骤：(1)将氯化石蜡溶于有机溶剂，得到氯化石蜡溶液，并向其中加入血清，静置平衡后得到底物体系；(2)向底物体系先后加入磷酸钾缓冲溶液、肝微粒体和NADPH酶再生体系，摇匀后得到最终反应体系，然后置于37°C水浴中振荡反应；(3)向步骤(2)的反应体系加入冰冷的有机溶剂终止反应，然后进行离心，取上层清液，测定氯化石蜡含量。本发明采用血清作为氯化石蜡的载体，促进氯化石蜡与肝微粒体反应，显著提高氯化石蜡的代谢清除率，实现肝微粒体离体代谢氯化石蜡的代谢清除率的测定。

摘要： 本发明公开血清作为在体外肝微粒体代谢体系中溶解卤代有机污染物试剂的用途，还提供了一种体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的方法。本发明解决现有技术中有机溶剂抑制代谢酶活性的问题，使体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的反应能更加真实地模拟出肝微粒体在体内的代谢转化情况，更能真实地反映出卤代有机污染物在动物体内的代谢特征。

摘要： 本发明涉及一种人抗肝肾微粒体抗体的快速定量检测试剂盒，属于医药生物领域。其为荧光免疫层析检测试纸卡；所述试纸卡是在PVC板上顺次相互搭接经过处理的样品垫、吸附有稀土荧光微球标记LKM‑1抗原的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，组装后形成试纸卡。

摘要： 本发明公开一种肝微粒体离体代谢氯化石蜡的方法，包括以下步骤：(1)将氯化石蜡溶于有机溶剂，得到氯化石蜡溶液，并向其中加入血清，静置平衡后得到底物体系；(2)向底物体系先后加入磷酸钾缓冲溶液、肝微粒体和NADPH酶再生体系，摇匀后得到最终反应体系，然后置于37°C水浴中振荡反应；(3)向步骤(2)的反应体系加入冰冷的有机溶剂终止反应，然后进行离心，取上层清液，测定氯化石蜡含量。本发明采用血清作为氯化石蜡的载体，促进氯化石蜡与肝微粒体反应，显著提高氯化石蜡的代谢清除率，实现肝微粒体离体代谢氯化石蜡的代谢清除率的测定。

摘要： 本发明公开血清作为在体外肝微粒体代谢体系中溶解卤代有机污染物试剂的用途，还提供了一种体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的方法。本发明解决现有技术中有机溶剂抑制代谢酶活性的问题，使体外肝微粒体代谢卤代有机污染物的反应能更加真实地模拟出肝微粒体在体内的代谢转化情况，更能真实地反映出卤代有机污染物在动物体内的代谢特征。

摘要： 本发明公开了一种肝微粒体孵育体系中睾酮及6β‑羟基睾酮检测平台的建立方法，包括如下步骤：采用甲醇稀释混合储备液，得到标准曲线工作液，任意一个浓度的标准曲线工作液中睾酮和6β‑羟基睾酮的浓度相同。采用肝微粒体孵育体系稀释标准曲线工作液，得到标准曲线样品。取100ng/mL的标准曲线样品，加入含卡马西平的甲醇沉淀剂，振荡、离心后，取上清加入超纯水，采用LC‑MS/MS进样分析。得出睾酮最优质谱条件和6β‑羟基睾酮最优质谱条件。设置睾酮最优质谱条件以及6β‑羟基睾酮最优质谱条件，将标准曲线样品采用LC‑MS/MS进样分析，得到睾酮线性回归方程和6β‑羟基睾酮线性回归方程。本发明方法缩短了分析时间，提高了检测效率，确保试验结果的准确性，并且符合方法学验证要求。

摘要： 本发明涉及一种人肝微粒体与细胞共培养体系及其构建方法和应用。人的肝源很难保证无菌，在制备人源肝微粒体时，几乎无法获得无菌的肝微粒。为了将人源肝微粒体与细胞共培养进行体外代谢试验研究，本发明提供了一种能够将有菌的人肝微粒体与无菌细胞直接接触的共培养方法，成功构建了人肝微粒体与细胞共培养体系。试验证明，本发明的构建方法能够保证人肝微粒体中的污染源无法对细胞的无菌环境造成影响，维持细胞正常生长的无菌状态。并且，该方法适用于外源物质(如烟碱、烟气)体外代谢研究，为人源肝微粒体与细胞共同作用的体外代谢研究奠定了基础。

摘要： 本发明涉及一种多细胞和人肝微粒体共培养方法、共培养培养基及其应用。本发明提供了多细胞和人肝微粒体共培养方法，包括收集细胞、接种细胞、装载人肝微粒体以及共培养步骤，首次实现了Beas‑2b、HUVEC、人肺巨噬细胞和人肝微粒体的体外共培养，为表征肺、血液循环、肝脏共同参与的暴露和代谢后再次损伤的研究奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种新化学实体在不同种属肝微粒体中代谢性能的检测方法，包括如下步骤：在包含缓冲液、肝微粒体、底物、MgCl2和NADPH的反应体系中，以底物的代谢率为参照，筛选出最适反应条件以得到人肝微粒体孵育体系。按照所述人肝微粒体孵育体系的建立方法，依次建立大鼠、小鼠、犬和猴肝微粒体孵育体系。将新化学实体在不同种属肝微粒体孵育体系中进行体外代谢测试，同时以底物进行阳性组反应，并设置不加NADPH的阴性组以及不加肝微粒体的空白组。测试后对代谢结果进行鉴定。本发明新化学实体在不同种属肝微粒体中代谢性能的检测方法，能够避免假阳性和假阴性结果的出现，提高鉴定结果的可靠性，为促进新药研发提供可靠的依据。