ApoE基因敲除小鼠

摘要： 目的研究辛伐他汀(simvastatin,Sim)对高脂饲料喂养的载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE KO)小鼠肝功能损伤的保护作用及机制。方法24只8周龄雄性ApoE KO小鼠随机分为ApoE KO组、ApoE KO+Sim组和ApoE KO+PD150606组。实验结束后测定小鼠血清和肝脏中总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量,血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性,肝脏中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,以及calpain活性。结果与C57组相比,ApoE KO组小鼠血清和肝脏TC、TG含量明显升高,血清AST和ALT活性明显升高,肝脏MDA和ROS水平增加、而SOD活性降低,肝脏TNF-α和IL-6水平明显升高、Calpain活性明显增加。与ApoE KO组相比,Sim组小鼠血清和肝脏TC和TG含量没有明显变化,但血清AST和ALT活性明显降低,肝脏MDA和ROS含量下降、而SOD活性升高,TNF-α和IL-6水平以及Calpain活性均明显降低。Calpain抑制剂PD对上述指标的作用和Sim相似。结论Sim能够减轻ApoE KO小鼠肝功能损伤,其机制可能与抑制calpain活性,进而提高机体抗氧化能力、降低炎症反应有关。

摘要： 目的观察嗜黏蛋白阿克曼(AKK)对高脂饲料喂养的肥胖ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠血脂代谢及炎症因子相关指标的影响。方法选取健康SPF级雄性C57BL/6J及ApoE^(-/-)4周龄小鼠,均给予高脂饲料喂养。喂养6周后,选取高于C57BL/6J小鼠平均体质量10%的ApoE^(-/-)小鼠20只,随机编号,奇数为模型组(n=10),偶数为AKK干预组(n=10),C57BL/6J小鼠作为对照组(n=10)。对照组与模型组小鼠灌胃不含AKK的甘油制剂,AKK干预组灌胃含1×10^(9) CFU AKK的甘油制剂。每日灌胃1次,每次0.1 ml。灌胃4周后,称量小鼠空腹体质量,采集血清及附睾脂肪组织。检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等血脂代谢指标水平,白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8、IL-10、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)等炎症因子指标水平。称量附睾脂肪组织质量,苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠附睾脂肪组织细胞形态及大小,测量脂肪组织细胞平均面积。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。多组间比较采用单因素方差分析。结果灌胃4周后,与模型组相比,AKK干预组小鼠空腹体质量、附睾脂肪组织质量及体脂百分比均有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);AKK干预组血脂代谢指标TG[(0.85±0.17)和(1.65±0.15)、(1.08±0.09)mmol/L]及LDL-C[(3.20±0.85)和(6.47±0.87)、(4.89±0.56)mmol/L]均显著低于模型组及对照组,HDL-C[(919.89±116.19)和(433.59±183.85)、(721.11±222.70)mmol/L]显著高于模型组及对照组,TC[(3.00±0.64)和(5.12±0.71)mmol/L]显著低于模型组,差异均有统计学意义(均P0.05)。HE染色观察显示,AKK干预组较模型组小鼠附睾脂肪组织细胞平均面积[(330.45±55.84)和(879.58±36.74)μm 2)]显著减小(P<0.05),形态规整,单个视野下脂肪细胞数量明显增多。结论AKK可改善高脂饲料喂养的肥胖ApoE^(-/-)小鼠的血脂异常,并降低肥胖ApoE^(-/-)小鼠血清炎症因子水平。

摘要： 目的 探讨细颗粒物PM2.5对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的影响及相关分子机制.方法 将32只8周龄的SPF级雄性ApoE-/-小鼠随机分为两组,分别给予高脂饲料喂养8周,同时对照组气管滴注生理盐水,PM2.5组气管滴注PM2.5的生理盐水混悬液(30 mg·kg-1·d-1).8周后采用电感耦合等离子体质谱法测定两组小鼠全血中的PM2.5浓度.免疫组化评估主动脉根部斑块面积、胶原、巨噬细胞和平滑肌细胞表达.实时荧光定量PCR法检测降主动脉中白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)、CD206、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及脂蛋白相关磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的表达.结果 与对照组比较,PM2.5组重金属成分含量显著升高(P＜0.05),动脉粥样硬化斑块面积增大(P＜0.05),斑块中巨噬细胞数量增加(P＜0.05),胶原含量降低(P＜0.05),平滑肌数量无明显差异(P＞0.05).与对照组比较,PM2.5组小鼠主动脉粥样硬化斑块内IL-6、iNOS、IL-12、ICAM-1、MCP-1、Lp-PLA2的表达显著上调(均P＜0.05),Arg-1,CD206的表达显著下调(均P＜0.05).结论 PM2.5暴露促进了ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的发生、发展,其原因可能与动脉粥样斑块内相关炎症因子表达变化有关.

摘要： 目的:探讨清血消脂方调节脂肪酸结合蛋白4(FABP4)和过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)表达对动脉粥样硬化小鼠的干预作用.方法:选取45只ApoE-/-小鼠经高脂喂养9周后,随机分为模型组(n=15)、立普妥(阿托伐他汀钙)组(n=15)、清血消脂方组(n=15);继续高脂喂养并药物干预9周后,测其血脂及血清同型半胱氨酸水平,主动脉斑块面积与斑块中胶原纤维含量;同时,测定FABP4、PPARα与PPARγ在肝脏及主动脉中mRNA及蛋白表达水平.结果:与模型组比较,清血消脂方可显著降低血清三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与血清同型半胱氨酸(Hcy)水平,差异有统计学意义(P<0.05),且明显缩小主动脉斑块相对面积,差异有统计学意义(P<0.05).清血消脂方显著降低主动脉中FABP4的mRNA及蛋白表达(P<0.05),并促进PPARγmRNA及蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05);同时,清血消脂方可显著降低肝脏中FABP4的蛋白表达,并促进PPARγ的蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05).结论:清血消脂方对动脉粥样硬化具有一定的防治作用,其机制可能与显著降低主动脉与肝脏中FABP4的mRNA及蛋白表达,并促进PPARγ的表达有关.

摘要： 目的 二甲双胍对高脂小鼠(ApoE基因敲除小鼠,自发动脉粥样硬化模型)颈动脉及肝脏内脂肪沉积的研究.方法 将20只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为4组:高脂对照组、二甲双胍组、PCL手术组和PCL+二甲双胍组,其中二甲双胍给药剂量均为300mg/(kg·d),给药途径为灌胃;实验小鼠每天称重,记录体重和饲料的变化情况;于饲养7周后处死,取颈动脉组织,冰冻切片后,油红O染色;取肝脏组织,4％多聚甲醛溶液固定后,HE染色观察肝脏组织的变化.结果 与高脂对照组相比,二甲双胍组体重明显下降(P＜0.01),左侧颈总动脉脂质含量降低,肝细胞脂肪变减轻;与PCL手术组相比较,PCL+二甲双胍组体重减轻较为明显,左侧颈总动脉脂质含量明显降低(P＜0.01),肝细胞脂肪变也有所缓解.结论 二甲双胍改善高脂饲料引起的肝细胞脂肪变,也能轻微减轻PCL手术所引起的肝细胞脂肪变,为颈动脉粥样硬化脂肪肝患者的治疗提供新策略.

摘要： 目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2特异性抑制剂苯肼基吡唑啉酮磺酸盐1(PHPS1)对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.方法 2019年1—12月于河北省人民医院临床研究中心进行实验.6～8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠18只,随机数字表法分为模型组(生理盐水灌胃,0.25 mg·kg-1·d-1)和PHPS1组(PHPS1灌胃,0.25 mg·kg-1·d-1),各9只.4周后处死小鼠取血清,检测总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及IL-1β、TNF-α水平;主动脉根部病理切片HE染色评估斑块大小;免疫组化评估斑块内巨噬细胞、平滑肌含量;天狼星红染色评估斑块内胶原表达情况;TUNEL染色评估斑块内细胞凋亡情况;Movat染色评估斑块内坏死核心面积;Western-blot检测内质网应激凋亡相关通路蛋白表达量.结果 与模型组比较,PHPS1组血脂水平差异无统计学意义(P>0.05),炎性因子IL-1β和TNF-α水平明显升高(t/P=2.934/0.010,2.240/0.040);斑块面积、斑块内巨噬细胞含量显著增加(t/P=4.869/0.001,4.241/0.001);斑块内平滑肌和胶原含量差异无统计学意义(P>0.05);TUNEL和Movat染色显示凋亡阳性区域和斑块内坏死核心面积显著增大(t/P=7.636/0.000,17.212/0.000);Western-blot结果显示内质网应激蛋白p-PERK、ATF4表达升高,凋亡相关蛋白CHOP、cleaved-caspase3、bax表达显著上升,bcl-2蛋白表达显著下降(P均<0.01).结论 蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2可通过抑制斑块细胞的内质网应激从而抑制凋亡进而稳定动脉粥样硬化斑块.

摘要： 目的:探讨黑参煎剂对小鼠下肢缺血模型血管新生的影响.方法:选取84只雄性ApoE基因敲除小鼠,采用右下肢肢动脉结扎缩窄术构建下肢缺血模型,随机分为模型对照组与黑参煎剂组,并选取42只C57野生小鼠作为假手术组,仅切开并分离动静脉后缝合,不结扎缩窄.采用显微镜观察各组小鼠下肢缺血症状并进行量化积分,术前及术后即刻、7、14、21、28 d行激光多普勒扫描观察小鼠下肢血流灌注情况,采用HE染色分析黑参煎剂对下肢缺血小鼠模型病理组织改变的影响,采用黑参煎剂对下肢缺血小鼠右下肢腓肠肌CD34、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平的影响.结果:与假手术组相比,模型对照组与黑参煎剂组右下肢缺血症状评分均增高(P<0.05).与模型对照组相比,黑参煎剂组下肢缺血症状评分降低(P<0.05).术后即刻、7、14、21、28 d行激光多普勒检测,黑参煎剂组术后下肢血流恢复情况优于模型对照组.右下肢HE染色病理评分比较,黑参煎剂组与模型对照组右下肢病理评分均高于假手术组(P<0.05).黑参煎剂组右下肢HE染色病理评分低于模型对照组(P<0.05).与假手术组及模型对照组比较,黑参煎剂组小鼠右下肢腓肠肌CD34、α-SMA表达均高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:黑参煎剂对小鼠下肢缺血有一定保护作用,能够促进缺血后血管生成.

摘要： 目的二甲双胍对高脂小鼠(ApoE基因敲除小鼠,自发动脉粥样硬化模型)颈动脉及肝脏内脂肪沉积的研究。方法将20只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为4组:高脂对照组、二甲双胍组、PCL手术组和PCL+二甲双胍组,其中二甲双胍给药剂量均为300mg/(kg·d),给药途径为灌胃;实验小鼠每天称重,记录体重和饲料的变化情况;于饲养7周后处死,取颈动脉组织,冰冻切片后,油红O染色;取肝脏组织,4%多聚甲醛溶液固定后,HE染色观察肝脏组织的变化。结果与高脂对照组相比,二甲双胍组体重明显下降(P<0.01),左侧颈总动脉脂质含量降低,肝细胞脂肪变减轻;与PCL手术组相比较,PCL+二甲双胍组体重减轻较为明显,左侧颈总动脉脂质含量明显降低(P<0.01),肝细胞脂肪变也有所缓解。结论二甲双胍改善高脂饲料引起的肝细胞脂肪变,也能轻微减轻PCL手术所引起的肝细胞脂肪变,为颈动脉粥样硬化脂肪肝患者的治疗提供新策略。

摘要： 目的 观察特洛细胞在动脉粥样硬化小鼠颈动脉血管损伤修复中的形态及数量变化.方法 选取Apo E基因敲除小鼠30只作为观察组,给予高脂饮食喂养10周建立动脉粥样硬化模型;选取正常SPF级小鼠30只作为对照组,正常饮食喂养10周.两组均进行颈动脉锐性损伤后缝合,分别于术前及术后8 h、48 h、21 d麻醉后分离颈动脉标本.以CD34、CD117、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)作为免疫标记,采用双标记免疫荧光染色法观察特洛细胞形态,并对10μm2血管图像中的CD34阳性染色(CD34+)特洛细胞进行计数.结果 观察组和对照组术前绿色荧光的CD34+和PDGFR+特洛细胞均集中位于血管壁的外膜层中.术后8 h,观察组CD34+特洛细胞聚集在血管壁外膜损伤处,细胞形态改变不明显.术后48 h,观察组CD117+特洛细胞数量明显减少,细胞体扁平,由圆形或椭圆形变为细长的梭形,端足细长如丝;对照组CD34+和CD117+特洛细胞形态较术后8 h无明显差别,端足形态无明显改变.术后21 d,观察组CD117+特洛细胞细胞恢复至术前和术后8 h时的形态,但数量较术后8 h明显减少;对照组CD34+、CD117+和PDGFR+特洛细胞形态较术前无明显差别,数量无明显改变.随着时间的推移,两组术后特洛细胞数量均呈现先升高后降低趋势.两组术前特洛细胞数量比较无明显差异(P>0.05).观察组术后8 h特洛细胞数量高于术前,术后48 h和术后21 d特洛细胞数量均低于术前(P均0.05).观察组术后8 h、48 h、21 d特洛细胞数量均低于对照组(P均<0.05).结论 动脉粥样硬化并不会影响小鼠颈动脉血管中的特洛细胞数量,但动脉粥样硬化小鼠在颈动脉血管损伤修复过程中存在特洛细胞数量降低及形态异常.

摘要： 目的观察脂欣康对ApoE基因敲除(ApoEKO)小鼠认知功能的影响。方法研究对象为ApoEKO小鼠，分为实验对照组与脂欣康治疗组，采用Morris水迷宫评估小鼠学习记忆功能，行为学观察结束后将小鼠断头处死进行病理学观察，评估脑内胆碱能神经功能状态。结果与正常C57BL/6J小鼠相比，ApoEKO小鼠的学习记忆能力下降，海马区神经细胞明显受损，脂欣康组的行为学成绩及病理学改变介于两者之间。结论脂欣康能够部分改善ApoEKO小鼠的认知功能障碍，减轻胆碱能神经细胞损害可能是其潜在的作用机制。

摘要： 目的观察脂欣康对ApoE基因敲除(ApoEKO)小鼠认知功能的影响。方法研究对象为ApoEKO小鼠，分为实验对照组与脂欣康治疗组，采用Morris水迷宫评估小鼠学习记忆功能，行为学观察结束后将小鼠断头处死进行病理学观察，评估脑内胆碱能神经功能状态。结果与正常C57BL/6J小鼠相比，ApoEKO小鼠的学习记忆能力下降，海马区神经细胞明显受损，脂欣康组的行为学成绩及病理学改变介于两者之间。结论脂欣康能够部分改善ApoEKO小鼠的认知功能障碍，减轻胆碱能神经细胞损害可能是其潜在的作用机制。

摘要： 目的观察脂欣康对ApoE基因敲除(ApoEKO)小鼠认知功能的影响。方法研究对象为ApoEKO小鼠，分为实验对照组与脂欣康治疗组，采用Morris水迷宫评估小鼠学习记忆功能，行为学观察结束后将小鼠断头处死进行病理学观察，评估脑内胆碱能神经功能状态。结果与正常C57BL/6J小鼠相比，ApoEKO小鼠的学习记忆能力下降，海马区神经细胞明显受损，脂欣康组的行为学成绩及病理学改变介于两者之间。结论脂欣康能够部分改善ApoEKO小鼠的认知功能障碍，减轻胆碱能神经细胞损害可能是其潜在的作用机制。

摘要： 目的：观察脂欣康胶囊对ApoE基因敲除(ApoEKO)小鼠学习记忆行为的影响．方法：采用Morris水迷宫，分别于给药前后进行定位航行实验与空间搜索实验，记录每天的潜伏期与游泳轨迹，分析小鼠在目的象限停留的时间百分比，评估ApoEKO小鼠治疗前后的行为学差异，并与正常C57BL/6J小鼠进行比较。结果：给药前2组ApoEKO小鼠的学习记忆成绩无明显差异，但比C57BL/6J小鼠差;给药1个月后，脂欣康组的成绩优于实验对照组，但仍比C57BL/6I小鼠差;实验对照组自身对比显示，10月龄ApoEKO小鼠的成绩比9月龄时差。结论：脂欣康胶囊能够部分改善ApoEKO小鼠的认知功能障碍，ApoEKO小鼠的认知功能障碍随月龄的增加呈日渐加重趋势。

摘要： 目的：观察脂欣康胶囊对ApoE基因敲除(ApoEKO)小鼠学习记忆行为的影响．方法：采用Morris水迷宫，分别于给药前后进行定位航行实验与空间搜索实验，记录每天的潜伏期与游泳轨迹，分析小鼠在目的象限停留的时间百分比，评估ApoEKO小鼠治疗前后的行为学差异，并与正常C57BL/6J小鼠进行比较。结果：给药前2组ApoEKO小鼠的学习记忆成绩无明显差异，但比C57BL/6J小鼠差;给药1个月后，脂欣康组的成绩优于实验对照组，但仍比C57BL/6I小鼠差;实验对照组自身对比显示，10月龄ApoEKO小鼠的成绩比9月龄时差。结论：脂欣康胶囊能够部分改善ApoEKO小鼠的认知功能障碍，ApoEKO小鼠的认知功能障碍随月龄的增加呈日渐加重趋势。

摘要： 目的：观察脂欣康胶囊对ApoE基因敲除(ApoEKO)小鼠学习记忆行为的影响．方法：采用Morris水迷宫，分别于给药前后进行定位航行实验与空间搜索实验，记录每天的潜伏期与游泳轨迹，分析小鼠在目的象限停留的时间百分比，评估ApoEKO小鼠治疗前后的行为学差异，并与正常C57BL/6J小鼠进行比较。结果：给药前2组ApoEKO小鼠的学习记忆成绩无明显差异，但比C57BL/6J小鼠差;给药1个月后，脂欣康组的成绩优于实验对照组，但仍比C57BL/6I小鼠差;实验对照组自身对比显示，10月龄ApoEKO小鼠的成绩比9月龄时差。结论：脂欣康胶囊能够部分改善ApoEKO小鼠的认知功能障碍，ApoEKO小鼠的认知功能障碍随月龄的增加呈日渐加重趋势。

摘要： 目的：观察脂欣康胶囊对ApoE基因敲除(ApoEKO)小鼠学习记忆行为的影响．方法：采用Morris水迷宫，分别于给药前后进行定位航行实验与空间搜索实验，记录每天的潜伏期与游泳轨迹，分析小鼠在目的象限停留的时间百分比，评估ApoEKO小鼠治疗前后的行为学差异，并与正常C57BL/6J小鼠进行比较。结果：给药前2组ApoEKO小鼠的学习记忆成绩无明显差异，但比C57BL/6J小鼠差;给药1个月后，脂欣康组的成绩优于实验对照组，但仍比C57BL/6I小鼠差;实验对照组自身对比显示，10月龄ApoEKO小鼠的成绩比9月龄时差。结论：脂欣康胶囊能够部分改善ApoEKO小鼠的认知功能障碍，ApoEKO小鼠的认知功能障碍随月龄的增加呈日渐加重趋势。

摘要： 本发明提供一对短肽、一对转录激活子样效应因子、一对DNA载体，本发明所述的短肽能够对大鼠Apoe基因进行准确、高效的打靶，快速获得Apoe基因敲除大鼠。本发明还提供了一种敲除Apoe基因的方法以及一种Apoe基因敲除的动物模型的构建方法，本发明的敲除Apoe基因的方法敲除基因结果更为可靠，并且可实现在大鼠成年初期即表现出高血脂特征。

摘要： 本发明涉及猪ApoE基因敲除载体及其构建方法与应用，本发明的载体命名为pApoEKO‑DTA‑M，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其构建方法包括如下步骤：(1)扩增猪ApoE基因侧翼序列作为基因打靶的长臂和短臂；(2)短臂与打靶载体ploxp分别酶切、连接后，再与长臂连接；去除tk，与dta基因片段连接；(3)在长短臂之间插入特异性启动子Cre，构建得到ApoE基因敲除载体。本发明的猪ApoE基因敲除载体可用于培育敲除了ApoE基因的猪，用于动脉硬化模型动物的制备。

摘要： 本发明涉及转基因构建物及其在制备附睾头部基因条件性敲除小鼠模型中的应用。具体地，发明人发现长度为1.8kb的Lcn5基因启动子序列能驱动外源基因在小鼠附睾头部（特别是中远端特定）区域表达，并由此构建了由该启动子驱动的外源Cre基因表达载体。这种转基因载体能驱动外源Cre基因在动物附睾头部特异地表达，也可以驱动其他基因如CreERT2重组酶等的表达。应用这种转基因体系制备转基因小鼠，能获得很高的基因组整合率（>25%），并可准确、高效驱动外源基因在附睾头部中远端区域表达。本发明还建立了附睾头部特定区域条件性基因敲除或过表达技术平台。

摘要： 本发明公开了一种基于PEDF/ApoE双基因敲除的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型构建方法及其应用，属于医学技术领域。该模型采用高脂饲料诱导PEDF/ApoE双基因敲除小鼠发生非酒精性脂肪性肝炎表型，该模型构建方法简便，容易推广。利用本发明提供的方法构建的小鼠模型能够较好的模拟人类非酒精性脂肪性肝炎的病变特征，尤其具备极其强烈的肝脏炎症反应和肝脏纤维化表型，并具有一定几率发展为肝脏肿瘤，因此在非酒精性脂肪性肝炎等代谢性疾病的药物研发领域，具有重要的应用前景和价值。

摘要： 本发明公开了特异性靶向ApoE基因第二外显子的SgRNA，所述SgRNA的核苷酸序列为GCTTCTGGGATTACCTGCGC。本发明还公开了含所述SgRNA的ApoE‑CRISPR/Cas9载体，ApoE‑CRISPR/Cas9载体在构建ApoE基因敲除的哺乳动物模型中的应用及在制备ApoE基因敲除试剂盒中的应用。本发明基于CRISPR/Cas9技术构建了ApoE基因敲除的哺乳动物模型，敲除ApoE基因能影响哺乳动物体内的脂质代谢，加速动脉粥样硬化等脂代谢相关疾病的发病进程，从而加速哺乳动物相应疾病模型的造模进程，为动脉粥样硬化等疾病的研究提供动物实验依据。

摘要： 本发明提供一对短肽、一对转录激活子样效应因子、一对DNA载体，本发明所述的短肽能够对大鼠Apoe基因进行准确、高效的打靶，快速获得Apoe基因敲除大鼠。本发明还提供了一种敲除Apoe基因的方法以及一种Apoe基因敲除的动物模型的构建方法，本发明的敲除Apoe基因的方法敲除基因结果更为可靠，并且可实现在大鼠成年初期即表现出高血脂特征。

摘要： 本发明提供一种猪ApoE基因敲除打靶载体及其构建方法。所述打靶载体是以载体pLoxPneo作为骨架载体，还包括正筛选元件、负筛选标记基因以及猪ApoE基因的5’同源臂和3’同源臂。本发明还提供所述打靶载体在制备猪ApoE基因敲除动物模型中的应用。利用本发明方法成功获得了健康存活的ApoE基因敲除的纯合子小型猪，为心血管疾病的新药创制奠定基础，同时为开展病理研究、药物筛选、药效评价等提供保障。

摘要： 本发明涉及猪ApoE基因敲除载体及其构建方法与应用，本发明的载体命名为pApoEKO-DTA-M，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其构建方法包括如下步骤：(1)扩增猪ApoE基因侧翼序列作为基因打靶的长臂和短臂；(2)短臂与打靶载体ploxp分别酶切、连接后，再与长臂连接；去除tk，与dta基因片段连接；(3)在长短臂之间插入特异性启动子Cre，构建得到ApoE基因敲除载体。本发明的猪ApoE基因敲除载体可用于培育敲除了ApoE基因的猪，用于动脉硬化模型动物的制备。

摘要： 本发明公开Bestrophi n3血管平滑肌特异性基因敲除小鼠和主动脉夹层小鼠模型的构建方法，涉及小鼠模型建立领域。主动脉夹层小鼠模型包括以下构建步骤：采用Bestrophi n3血管平滑肌特异性基因敲除小鼠，简称Best3

摘要： 本发明公开了一种GLCCI1基因基于Cre‑LoxP条件性基因敲除小鼠模型构建试剂盒、打靶载体及构建方法。具体地，通过利用Cre/loxP原理，在GLCCI1的一段目标序列两端各放置一个loxP序列，得到flox小鼠，将flox小鼠与全身性敲除Cre品系的小鼠交配繁殖，获得全身性敲除GLCCI1基因的小鼠品系，获得的GLCCI1基因敲除小鼠将可应用于GLCCI1基因及蛋白质功能研究。