马铃薯X病毒

摘要： 为实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X病毒(PVX)、Y病毒(PVY)和S病毒(PVS),采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,利用抗体与胶体金相结合的特性制备金原子与PVX、PVY和PVS抗体结合物(简称金标抗体),通过三维划膜喷金仪将金标抗体喷射于玻璃纤维上作为金标垫,将PVX抗体、PVY抗体和PVS抗体分别划线于硝酸纤维素膜作为检测线,将羊抗兔抗体划线于硝酸纤维素膜作为质控线,进行三重胶体金试纸条的制备。结果表明,研制的三重试纸条能够在5 min内同时检出PVX、PVY和PVS 3种病毒。PVX病汁液检测稀释限度可达10^(4)倍(W/V),PVY病汁液检测稀释限度可达2×10^(3)倍(W/V),PVS病汁液检测稀释限度可达10^(3)倍(W/V),即对PVX检测更灵敏。利用研制的三重检测试纸条检测危害马铃薯的其他3种常见病毒,未出现交叉反应。对田间采集的马铃薯叶片进行检测,发现利用试纸条与酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测的结果完全一致。三重检测试纸条具有操作简便,反应快捷的特点,特别适用于田间及口岸一线的检测。

摘要： 曰前,国际著名期刊《Traffic》在线发表了东北农业大学分子植物病毒学研究团队程晓非教授团队的综述论文。复制和细胞间运动是植物病毒完成侵染的两个关键步骤.但是两者之间如何衔接一直是植物病毒学研究的热点和难点。程晓非课题组一直以马铃薯Y病毒属的芜菁花叶病毒(TuMV)和马铃薯X病毒属的马铃薯X病毒(PVX)为模式病毒对植物病毒的复制和运动耦合机制开展研究。

摘要： 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)和槟榔坏死环斑病毒(Areca plam necrotic ringspot virus,ANRSV)是马铃薯Y病毒科(Potyviridae)中分别可诱导十字花科作物和槟榔产生坏死病症的2种不同属病毒.VPg(Viral protein genome linked)作为与马铃薯Y病毒科病毒基因组5′端的结合蛋白,在病毒复制、翻译和运动等侵染过程中发挥重要作用.本研究利用In-Fusion克隆策略分别构建了可表达3′端融合Strep蛋白标签序列的ANRSV和TuMV VPg全长编码基因的马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)载体pPVX-VPg-AR和pPVX-VPg-Tu.通过农杆菌渗透注射接种本生烟(Nicotiana benthamiana),利用RT-PCR、Strep蛋白标签亲和层析和Western blot等方法证明了PVX病毒载体能够介导VPg-AR和VPg-Tu蛋白在本生烟中系统表达,且发现这2种VPg蛋白的过量表达诱导本生烟叶片产生了不同程度的系统性坏死病症.进一步采用DAB和NBT染色,在产生坏死症状叶片中检测到大量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的积累.因此,推测VPg可能是TuMV和ANRSV诱发植物病症产生的一个决定因子,为后续研究这2种病毒诱导症状形成机制奠定了基础.

摘要： 病毒病是影响菊花生产的重要因素,为了解河南开封地区与湖北荆门地区菊花生产中的病毒发生情况,比较不同地区菊花感染病毒病的区别,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测技术,对常在菊花中出现的5种病毒:菊花B病毒(Chrysanthemum virus B,CVB)、番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)、菊花矮化类病毒(Chrysanthemum stunt viroid,CSVd)、马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)进行检测.结果表明,菊花B病毒、番茄不孕病毒是使菊花感病的优势病毒,在河南开封地区较为常见,而马铃薯X病毒仅在较少的开封菊花品种中检测到,菊花矮化类病毒、马铃薯Y病毒在开封菊花中均未检测到.而湖北荆门地区菊花病毒种类较少,除少数品种检测到菊花B病毒外,番茄不孕病毒、菊花矮化类病毒、马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒均未被检测到.以上结果说明,菊花B病毒、番茄不孕病毒可以作为病毒病的首要防治目标,可以减少对其他病毒的施药防治,从而减少施药对菊花生长的影响,以及减少菊花的种植成本和工作量.

摘要： 对注射PVX后烟苗的发病症状;总RNA快速检测PVX侵染烟草叶片的方法;注射抗病毒抗性诱导物质处理后周围病斑扩散情况;摩擦法接种抗性诱导物质效果等方面进行了研究。结果表明:注射1周后观察云烟叶片,PVX在云烟中可产生严重的花叶症状,PVX在云烟中表达成功;提取RNA,利用病毒的引物检测PVX病毒的纯度,经检测RNA OD260/280 = 1.955,C = 755.89 ng/μL,说明发病叶片是由纯的PVX引起;注射1 d后用抗性诱导物质比施壮处理叶片,2 d后利用UV光照射并拍照,发现经比施壮处理后,病毒扩散斑明显小于非施用处理;在抗性诱导物质胁迫下,病毒复制效率运动扩散能力都有所降低,抗性诱导物质处理后的叶片荧光斑虽有所扩大,但病毒尚未发生明显转移。由此可见:提取侵染烟草叶片总RNA进行PVX纯度检测,可灵敏地检测出马铃薯X病毒,可作为快速评价感染马铃薯X病毒的指标。抗性诱导物质(比施壮)可抑制马铃薯X病毒的扩散。

摘要： In 2015, an infected potato plant was found in Zhejiang Ningbo, which had the typical symptom of dwarf and mosaic leaf was thought to be a potato viral disease.Two kinds of linear virus particles with the typical length of 600-900 and 400 nm were observed under transmission electron microscopy by the negative staining of infected potato leaves.Ultra-thin section revealed that viral products were accumulated in the mesophyll cells.Except for observing the virus like particles in cytoplasm, two other kinds of inclusion bodies could also be observed in one cell including the cylindrical inclusion ( CI) body and the laminated inclusion component ( LIC) , which was induced by two kinds of different viruses, CI induced by Potyvirus and LIC induced by Potexvirus, implying a doubly infected in this plant. To verify the pathogen, a molecular assay was performed by RT-PCR and sequencing, by using of the universal prim-ers of Potyvirus and the specific primers of Potexvirus.At last, with the positive results of pathogenic diagnosis, we confirmed that this sick potato was induced by a synergistic infection with two viruses of potato virus X( PVX) and po-tato virus Y ( PVY) .%2015年在浙江宁波发现感病马铃薯植株具有马铃薯花叶病的典型症状,即植株矮化,叶片花叶、皱缩.透射电镜负染色发现,其叶片中含有长度约600～900和400 nm的线状病毒粒子.超薄切片发现,病毒主要集中在叶肉细胞,产生的内含体包括病毒样粒子聚集体、串珠-片层内含体和柱状内含体.串珠-片层内含体代表马铃薯X属特征,柱状内含体代表马铃薯Y属特征,表明可能存在复合侵染,并且2种不同病毒引起的内含体被发现于同一细胞.使用马铃薯Y属病毒通用引物以及针对马铃薯X病毒设计的特异性引物进行RT-PCR扩增及测序,明确其为马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)复合侵染.

摘要： 利用PVX介导的基因沉默,对番茄果实成熟过程中转录因子LeMADS-RIN的生物学功能进行了探讨.结果表明,LeMADS-RIN沉默能够延缓番茄果实的成熟,未成熟果肉保持着较低的p H值、糖含量以及花青素含量.同时LeMADS-RIN沉默能够抑制成熟相关转录因子、乙烯合成主要基因、部分色素合成相关基因的表达.

摘要： 采用RT-PCR技术从感染马铃薯X病毒贵州分离物PVX-GZ的普通烟叶片中扩增出该病毒的外壳蛋白基因C P.测序结果表明,该CP基因全长714 bp,编码237个氨基酸残基.构建原核表达载体pET 32a(+)-CP,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在25°C条件下以0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thivgalactopyranoside,简称IPTG)诱导表达重组蛋白基因;SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为45 ku;以该重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备的抗体效价达1:12800;间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunsorbent assay,简称ELISA)检测显示,该多抗能与PVX病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他5种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应.结果为病毒血清学检测试剂盒的研发奠定了基础.

摘要： 马铃薯 X 病毒（Potato virus X ，PVX）是危害茄科作物的一种重要病毒，为了建立特异性检测 PVX 的实时荧光定量 PCR 体系，本研究以 PVX-1985分离物中外壳蛋白（coat protein，CP）基因序列为模板，设计引物构建重组质粒并选择扩增效率高、特异性强的引物成功构建出标准曲线。利用建立的体系，成功检测到以含 pCaPVX440侵染性克隆载体的农杆菌 C58C1接种后的本氏烟（Nicotiana benthamiana ）中 PVX 病毒 RNA 的拷贝数。%Potato virus X (PVX)is an important virus infecting many solanaceous crops.In order to develop a re-al-time quantitative PCR system for specific detection of PVX,the standard curve was established successfully based on the recombinant plasmid and high efficient and specific primers derived from coat protein gene sequence of PVX-1985 isolate.We successfully detected the copy quantity of RNA from PVX in the Nicotiana benthamiana which injected by the Agrobacterium C58C1 containing pCaPVX440 plasmid.

摘要： 从PVX的发生与分布、基因组结构与功能、检测方法、防治技术和应用研究方面进行了综述,同时对PVX的应用前景进行了展望,旨在为PVX的深入研究提供参考.

摘要： 为了筛选抗花叶病毒的新型栽培种资源,本试验应用摩擦接种PVX普通株系和PVYO株系.根据抗病性表现和ELISA检测结果,共从251份新型栽培种或含新型栽培种血缘的材料中,筛选出抗PVX的无性系20个,抗PVY的22个,其中二者兼抗的7个,又根据其它综合性状的表现选出7个无性系,作为轮回选择基础群体的一部分加以利用.

摘要： 为了筛选抗花叶病毒的新型栽培种资源,本试验应用摩擦接种PVX普通株系和PVYO株系.根据抗病性表现和ELISA检测结果,共从251份新型栽培种或含新型栽培种血缘的材料中,筛选出抗PVX的无性系20个,抗PVY的22个,其中二者兼抗的7个,又根据其它综合性状的表现选出7个无性系,作为轮回选择基础群体的一部分加以利用.

摘要： 为了筛选抗花叶病毒的新型栽培种资源,本试验应用摩擦接种PVX普通株系和PVYO株系.根据抗病性表现和ELISA检测结果,共从251份新型栽培种或含新型栽培种血缘的材料中,筛选出抗PVX的无性系20个,抗PVY的22个,其中二者兼抗的7个,又根据其它综合性状的表现选出7个无性系,作为轮回选择基础群体的一部分加以利用.

摘要： 为了筛选抗花叶病毒的新型栽培种资源,本试验应用摩擦接种PVX普通株系和PVYO株系.根据抗病性表现和ELISA检测结果,共从251份新型栽培种或含新型栽培种血缘的材料中,筛选出抗PVX的无性系20个,抗PVY的22个,其中二者兼抗的7个,又根据其它综合性状的表现选出7个无性系,作为轮回选择基础群体的一部分加以利用.

摘要： 为了筛选抗花叶病毒的新型栽培种资源,本试验应用摩擦接种PVX普通株系和PVYO株系.根据抗病性表现和ELISA检测结果,共从251份新型栽培种或含新型栽培种血缘的材料中,筛选出抗PVX的无性系20个,抗PVY的22个,其中二者兼抗的7个,又根据其它综合性状的表现选出7个无性系,作为轮回选择基础群体的一部分加以利用.

摘要： 本文采用指示植物分离马铃薯主要病毒的毒源材料,并扩繁病毒,繁毒材料经差速离心PEG沉淀和蔗糖密度梯度离心,得到纯病毒,病毒免疫家兔,从家兔身上提病毒抗血清,抗血清经IgG纯化和酶标记IgG后测出适宜工作浓度,按照DAS-ELISA检测中所用试剂进行各缓冲液的混配、分装,与稀释好的IgG和酶标记IgG组装成完整的马铃薯主要病毒检测试剂.

摘要： 本文采用指示植物分离马铃薯主要病毒的毒源材料,并扩繁病毒,繁毒材料经差速离心PEG沉淀和蔗糖密度梯度离心,得到纯病毒,病毒免疫家兔,从家兔身上提病毒抗血清,抗血清经IgG纯化和酶标记IgG后测出适宜工作浓度,按照DAS-ELISA检测中所用试剂进行各缓冲液的混配、分装,与稀释好的IgG和酶标记IgG组装成完整的马铃薯主要病毒检测试剂.

摘要： 本文采用指示植物分离马铃薯主要病毒的毒源材料,并扩繁病毒,繁毒材料经差速离心PEG沉淀和蔗糖密度梯度离心,得到纯病毒,病毒免疫家兔,从家兔身上提病毒抗血清,抗血清经IgG纯化和酶标记IgG后测出适宜工作浓度,按照DAS-ELISA检测中所用试剂进行各缓冲液的混配、分装,与稀释好的IgG和酶标记IgG组装成完整的马铃薯主要病毒检测试剂.

摘要： 本文采用指示植物分离马铃薯主要病毒的毒源材料,并扩繁病毒,繁毒材料经差速离心PEG沉淀和蔗糖密度梯度离心,得到纯病毒,病毒免疫家兔,从家兔身上提病毒抗血清,抗血清经IgG纯化和酶标记IgG后测出适宜工作浓度,按照DAS-ELISA检测中所用试剂进行各缓冲液的混配、分装,与稀释好的IgG和酶标记IgG组装成完整的马铃薯主要病毒检测试剂.

摘要： 本文采用指示植物分离马铃薯主要病毒的毒源材料,并扩繁病毒,繁毒材料经差速离心PEG沉淀和蔗糖密度梯度离心,得到纯病毒,病毒免疫家兔,从家兔身上提病毒抗血清,抗血清经IgG纯化和酶标记IgG后测出适宜工作浓度,按照DAS-ELISA检测中所用试剂进行各缓冲液的混配、分装,与稀释好的IgG和酶标记IgG组装成完整的马铃薯主要病毒检测试剂.

摘要： 本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆；优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片段，将其导入大豆获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆。按照该方法能够获得具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆，为抗病大豆育种工作具有深远意义。

摘要： 本发明涉及一种选育广谱抗马铃薯Y病毒属病毒(Potyviruses)的烟草植物的方法，在烟草植物中聚合eIFiso4E‑S基因突变体、eIFiso4E‑T基因突变体和eIF14E1基因突变体，可获得烟草对至少4种Potyviruses的抗性，包括马铃薯Y病毒(PVY)、辣椒脉斑驳病毒(ChiVMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)。本发明所述方法对于培育抗Potyviruses烟草具有重大应用前景。

摘要： 本发明公开了检测马铃薯S病毒的成套试剂及其在利用数字PCR检测马铃薯S病毒中的应用。本发明公开的检测马铃薯S病毒的成套试剂，由名称为X1的引物对和名称为PVS‑p的探针组成；X1由PVS‑f和PVS‑r组成；PVS‑f是序列表中序列1所示的单链DNA；PVS‑r是序列表中序列2所示的单链DNA；PVS‑p的序列为序列表中序列3，PVS‑p的5'端由FAM标记，3'端由TAMRA标记。实验证明，本发明的检测马铃薯S病毒的成套试剂可用于特异性数字PCR，并且特异性好、灵敏度高(灵敏度可达15拷贝/μL)，适用于潜隐病症和病毒含量低的样品中PVS的检测。

摘要： 检测马铃薯类病毒的试剂盒及检测马铃薯类病毒的DNA探针和探针序列①的制备方法，它涉及了检测类病毒的试剂盒及检测用DNA探针和探针序列的制备方法。本发明解决了现有马铃薯类病毒检测技术存在检出灵敏度较低，操作比较复杂需要专业人员进行实验室检测的缺陷，以及现有检测马铃薯类病毒所用的DNA探针造成了检测灵敏度低的缺陷。本发明检测马铃薯类病毒的试剂盒由溶液I、溶液VI、溶液VII、溶液VIII、溶液IX、溶液X I、溶液X II、溶液XIII和溶液X IV组成。本发明检测马铃薯类病毒的DNA探针为双体探针。本发明检测马铃薯类病毒的试剂盒灵敏度高，操作简单，本发明检测马铃薯类病毒的DNA探针灵敏度为现有单体探针的500倍。

摘要： 本发明公开了一种马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2018年11月26日，保藏编号：CGMCC No.16893。马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒（Potato virus S，PVS）毒株建立包括样品采集；病原鉴定；丽薯6号品种中单一马铃薯卷叶病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存；包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PVS丽薯6号品种组培苗；应用为所述的马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株在检测中的应用。

摘要： 本发明公开了一种马铃薯品种中甸红中马铃薯X病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种中甸红中马铃薯X病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2018年11月26日，保藏编号：CGMCC No.16891。马铃薯品种中甸红中马铃薯X病毒（Potato virus X，PVX）毒株建立包括样品采集；病原鉴定；中甸红品种中单一马铃薯卷叶病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存；包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PVX中甸红品种组培苗；应用为所述的马铃薯品种中甸红中马铃薯X病毒毒株在检测中的应用。

摘要： 本发明公开了一种马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2018年12月14日，保藏编号：CGMCC No.16990。马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒（Potato virus A，PVA）毒株建立包括样品采集；病原鉴定；合作88品种中单一马铃薯A病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存；所述的建立包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PVA合作88品种组培苗；应用为所述的马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒毒株在检测中的应用。

摘要： 本发明公开了一种马铃薯品种会‑2中马铃薯卷叶病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种会‑2中马铃薯卷叶病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2018年11月26日，保藏编号：CGMCC No.16892。马铃薯品种会‑2中马铃薯卷叶病毒（Potato virus A，PVA）毒株建立包括样品采集；病原鉴定；会‑2品种中单一马铃薯卷叶病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存；包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PRLV会‑2品种组培苗；应用为所述的马铃薯品种会‑2中马铃薯卷叶病毒毒株在检测中的应用。

摘要： 本发明涉及来自野生植物(例如野生马铃薯和胡椒植物)的新颖基因，所述基因将马铃薯Y病毒组抗性赋予植物，例如在经转化的栽培植物中。还涵盖利用所述新颖基因转化的栽培植物、从所述经转化的栽培植物制得的食品和制造所述植物和食品的方法。

摘要： 本发明公开了一种马铃薯病毒及类病毒宿主内超低温长期保存的方法，本发明以感染马铃薯S病毒（PVS）和马铃薯纺锤体类病毒（PSTVd）的“紫花白”马铃薯试管苗为试材，使用小滴玻璃化超低温保存方法对带毒茎尖进行长期保存，其步骤包括切取茎尖、培养、炼苗、取茎尖、预培养、加载、玻璃化处理、制作小液滴、液氮冻存、解冻和卸载。本发明超低温保存后的茎尖再生率为52‑60%，对PVS和PSTVd的保存率均为100%。