顶体反应

摘要： 目的 评估精子功能参数对精子常规体外受精能力的预测价值,探寻有效选择受精方式的新指标.方法 回顾性分析2017年1月至2019年12月于我院首次行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)短时受精的429个周期的临床资料,根据受精结局不同分为2组:受精失败或受精率＜30％的患者为早补救卵胞浆内单精子注射(R-ICSI)组(n=98);受精率≥30％的为短时IVF组(n=331).比较两组患者精子前向运动(PR)、精子浓度、精子正常形态率、顶体酶活性、顶体反应(AR)、酪氨酸磷酸化(TP)及透明质酸结合试验(HBA)等指标;采用Logistic回归分析影响受精的独立危险因素,并绘制受试者工作曲线(ROC曲线)评估各项危险因素对IVF受精率的预测价值.结果 两组患者精子的正常形态率、顶体酶活性、自发AR和TP比较均无显著性差异(P＞0.05);R-ICSI组患者的精子浓度、PR、诱发顶体反应(IAR)和HBA均显著低于短时IVF组(P＜0.05).Logistic回归分析显示,精子PR、IAR和HBA为IVF受精率的独立危险因素;ROC曲线显示精子PR、IAR、HBA和联合预测新变量(Pre-l)的曲线下面积(AUC)分别为0.66、0.62、0.64和0.70.结论 精子功能指标中IAR和HBA是影响IVF受精率的独立危险因素,其对辅助生殖助孕方式的选择有一定指导意义.

摘要： 蚯蚓在评价土壤生态环境污染方面起着重要作用,但目前与生殖毒性相关的蚯蚓生物标志物中缺乏可以灵敏和快速对污染物生殖毒性进行诊断的生物标志物.本研究采用考马斯亮蓝法对蚯蚓精子顶体反应进行检测;采用响应面分析法优化苯甲酰精氨酸乙酯/乙醇脱氢酶(BAEE/ADH)联合测定法,以建立蚯蚓精子顶体酶活性测定法.结果表明,蚯蚓精子顶体率为(47.67±3.87)% ,最优测定条件为洗涤2次,抽提时间24 h,ADH浓度1.8 mg·mL-1 ,氧化型辅酶Ⅰ(NAD)浓度12 mg·mL-1 .为考察方法的可靠性,采用醋酸棉酚污染土壤暴露实验进行方法学考察.数据表明,醋酸棉酚污染土壤暴露3d后,检测出顶体酶活性变化,且与精子密度具有一定的相关性(r=0.9908).建立的蚯蚓顶体酶活性测定方法可以快速和有效的检测醋酸棉酚的生殖毒性变化,蚯蚓顶体酶活性有望作为生物标志物应用于土壤污染的生态毒理学快速诊断中.

摘要： 蚯蚓在评价土壤生态环境污染方面起着重要作用,但目前与生殖毒性相关的蚯蚓生物标志物中缺乏可以灵敏和快速对污染物生殖毒性进行诊断的生物标志物。本研究采用考马斯亮蓝法对蚯蚓精子顶体反应进行检测;采用响应面分析法优化苯甲酰精氨酸乙酯/乙醇脱氢酶(BAEE/ADH)联合测定法,以建立蚯蚓精子顶体酶活性测定法。结果表明,蚯蚓精子顶体率为(47.67±3.87)%,最优测定条件为洗涤2次,抽提时间24 h,ADH浓度1.8 mg·mL^(-1),氧化型辅酶Ⅰ(NAD)浓度12 mg·mL^(-1)。为考察方法的可靠性,采用醋酸棉酚污染土壤暴露实验进行方法学考察。数据表明,醋酸棉酚污染土壤暴露3 d后,检测出顶体酶活性变化,且与精子密度具有一定的相关性(r=0.9908)。建立的蚯蚓顶体酶活性测定方法可以快速和有效的检测醋酸棉酚的生殖毒性变化,蚯蚓顶体酶活性有望作为生物标志物应用于土壤污染的生态毒理学快速诊断中。

摘要： 常用的冷冻保护剂对于弱精症精子冻融效果欠佳,本实验通过在人精子冷冻保护液中添加淫羊藿多糖(EPS),研究其对冻融过程中精子活力及精子功能的影响.选择弱精症精液15例,液化后的精液样本分别与甘油-卵黄-柠檬酸盐(GEYC)冷冻保护液或含有EPS冷冻保护液混匀冷冻.检测其精子的活力、存活率以及精子形态、丙二醛(MDA)以及活性氧(ROS)的含量,精子核碎裂指数(DFI),精子顶体反应率(AR),并通过透射电镜观察精子微观结构的变化.添加EPS后精子MDA和ROS水平明显降低,含有3 mg/mL EPS的冷冻组抗氧化性明显优于其他组(P＜0.05);含有EPS的冷冻组复苏后的存活率以及精子头部正常形态率都明显高于未添加组,但是两组间的精子前向运动PR无显著差异;此外,添加EPS的冷冻组精子DFI下降显著,AR明显升高;电镜观察精子头部显微结构显示,添加EPS组的精子在质膜以及顶体膜完整性上明显优于未添加组.结果提示,在精液冷冻保护液中添加EPS可降低精子活性氧的水平,保护精子顶体结构和功能,从而改善解冻后精子顶体功能和精子核的完整性.

摘要： 启动及激活精子功能是一个复杂的过程,涉及多种信号分子及信号通路.精子在睾丸中生成、附睾中获得运动能力后,进入雌性生殖道后发生超活化,为精子获能提供前提条件,随后精子在环磷酸腺苷-蛋白激酶A(cAMP-PKA)、细胞外信号调节激酶-丝裂原活化蛋白激酶(ERK-MAPK)、内源性大麻素等通路的介导下完成获能,并快速移动至卵子处.此时顶体反应启动,复杂的级联信号通路介导精子完成膜融合,释放顶体酶,帮助精子穿越卵丘细胞团间隙和透明带.成功进入卵周膜间隙的精子,识别并结合卵子细胞膜表面的蛋白,在热休克蛋白、精子赤道片段蛋白、半胱氨酸分泌蛋白以及整联蛋白金属蛋白酶-整合素(ADAM-Integrin)、Izumo1-Juno蛋白对的协助下,完成精卵膜融合.本文就精子获能、顶体反应、受精的生理机制进行综述.

摘要： 目的:分析精子-固相透明质酸分离法选择精子的整体质量.方法:选取2016年9月?2018年12月生殖医学研究所实施单精子卵胞浆显微注射辅助生殖技术的44例男性患者为研究对象,采用随机数字表法分为研究组22例和常规组22例,研究组采用精子-固相透明质酸分离法选择精子,常规组采用密度梯度法选择精子.观察两组精子质量参数指标、精子成熟障碍指标、精子运动参数.结果:研究组精子正常形态率、获能2h酪氨酸磷酸化、△TP、诱发顶体反应和△AR高于对照组(P＜0.01);研究组自发顶体反应、核蛋白不成熟度和DNA碎片率显著低于对照组(P＜0.01);研究组线速度高于常规组(P＜0.05);两组精子活动率、精子向前运动率、轨迹速度、向前运动速度、精子运动路径速度、精子头摆幅度及摆动频率比较无显著性差异(P＞0.05).结论:与传统的密度梯度法相比,采用精子-固相透明质酸分离法选择精子,分离后的精子具有更优的受精潜能和成熟度,可显著提高分离精子的整体质量.

摘要： 目的 本研究采用网络毒理学方法研究莠去津作用于人体的毒性作用机制.方法 查询CTD毒理学数据库,选择的物种为人类,剔除重复靶点信息,得到莠去津作用于人类的靶点;查询GeneCards数据库,得到与精子顶体反应相关的靶点信息,并与CTD数据库收集到的靶点信息取交集,得到所要研究的靶点信息;通过Cytospace3.2.1的插件ClueGo分析所要研究靶点的GO生物学过程和KEGG代谢通路;将小鼠随机分为空白对照组、低剂量莠去津组、中剂量莠去津组和高剂量莠去津组,运用精子活力试剂盒检测精子顶体反应率,运用实时定量PCR法检测莠去津作用靶点的mRNA表达情况.结果 通过CTD数据库得到莠去津作用于人类的靶点共有3010个,GeneCards数据库得到与人类精子顶体反应相关的靶点共34个,两者取交集共得到4个(DLD、PLCD4、SYT8、TRIM36),其中莠去津作用于DLD、PLCD4和TRIM36可抑制表达,SYT8可促进表达,并且这4个靶点的主要生物学过程为顶体反应,实验验证表明莠去津能抑制精子顶体反应,并使DLD、PLCD4和TRIM36的mRNA表达量降低,SYT8的mRNA表达量升高,且中剂量莠去津组表现最明显.结论 莠去津主要作用于DLD、PLCD4、SYP8和TRIM36这些靶点发挥其对精子顶体反应的毒理作用,并具有倒"U"形毒性效应.

摘要： 目的：观察黄芪多糖对雄性肥胖小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)表达和顶体反应的影响. 方法：将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组(10只)和高脂饲料组(30只),分别给予普通饲料和高脂饲料喂养.8周后选取造模成功的肥胖小鼠20只,随机分为模型对照组和黄芪多糖(APS)组,每组10只.正常对照组、模型对照组给予生理盐水灌胃,黄芪多糖组给予APS200mg/(kg·d)灌胃.4周后检测精子PTP1B表达,测定精子顶体反应率. 结果：高脂饲料组小鼠体重明显高于正常饲料组(P＜0.01).与正常对照组相比,模型对照组小鼠精子顶体反应率显著降低(P＜0.01),PTP1B的表达量明显升高(P＜0.01);与模型对照组相比,APS干预后精子顶体反应率升高,而PTP1B表达量显著降低(P＜0.01). 结论：黄芪多糖改善肥胖小鼠精子顶体反应,其机制可能与其降低精子PTP1B有关.

摘要： 目的：探讨男性不育患者中钙离子载体A23187诱发精子顶体反应率与精液量、精子浓度及活力的关系,以及与体外受精率的关系.方法：选取135例就诊于北京大学第三医院的男性不育患者,其中精液常规检查正常组30例,少精子症组30例,弱精子症组30例,IVF组45例,采取荧光染色技术测定各组的钙离子载体A23187诱发精子顶体反应率,应用SPSS 13.0软件对精子诱发顶体反应率与精子浓度、活力及体外受精率进行相关性分析.结果：精液正常组、弱精子症组及少精子症组钙离子载体A23187诱发顶体反应率分别为22.80±11.13％、19.02±8.34％、21.36±7.19％,组间比较没有显著性差异;整合三组数据总诱发反应率为21.06±9.08％,其中诱导顶体反应率＜10％、10-15％、15-30％、.＞30％分别占10.0％、14.1％、58.9％和16.7％.精子诱导顶体反应率与患者年龄、精液量、精子浓度及活力的相关系数分别为-0.059(P=0.581)、-0.092(P=0.39)、0.067(P=0.533)、0.208 (P=0.049),均无统计学意义.在IVF组中，体外受精率与诱发顶体反应率的相关系数为0.593 (P=0.001)，具有统计学意义，而体外受精率与精子浓度、活力没有统计学相关性。结论：钙离子载体诱发顶体反应率在男性不育人群中存在差异，与患者年龄、精液量、精子浓度以及活力没有统计学相关性，可能是引起男性不育的独立危险因素;诱发顶体反应率与体外受精率存在统计学正相关性，可以预测IVF患者体外受精情况。

摘要： 以马鹿为试验动物,采用上浮法诱导马鹿精子体外获能,以钙离子载体A23187诱导顶体反应,摸索出了A23187诱发马鹿精子顶体反应的适宜体系.结果表明:0.01μmol/L～100μmol/L的A23187可提高获能马鹿精子的顶体反应率;其中适宜的A23187浓度为0.1μmol/L,顶体反应率为74.00±2.62％;而且0.1μmol/L A23187诱导马鹿精子顶体反应的时间以5min为宜;A23187能促进获能马鹿精子的顶体反应,但不能显著(P＞0.05)促进未获能马鹿精子的顶体反应.

摘要： 目的:观察氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应的影响并探讨其作用机理.方法:采用顶体反应诱导试验结合细胞染毒,以考马斯亮蓝染色法判定精子顶体反应.结果:孕酮或A23187诱导的小鼠精子顶体反应,可被2 mmol·L-1EDTA和1.8 mmol·L-1 Mn2+相应地完全抑制;50 μmol·L1氰戊菊酯则有明显抑制作用.实验还发现氰戊菊酯在精子获能前或后加入,对孕酮诱发顶体反应的抑制率不同,获能前抑制率低,二者存在显著性差异(P＜0.01).结论:氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应有抑制作用,结合Ca2+在顶体反应中的关键作用,提示氰戊菊酯可能通过抑制钙调神经磷酸酶的活性,阻止蛋白酪氨酸去磷酸化,进而抑制精子顶体反应的发生.同时实验结果也提示氰戊菊酯对小鼠精子获能可能有一定的促进作用.

摘要： 目的:研究精液中B7-H3的含量与精液参数是否存在相关性,以及B7-H3是否影响人类精子的功能.rn 方法:选择83例正常有生育能力的健康男性(年龄22-37岁)和176例不育症患者(21-38岁),用酶联免疫吸附试验检测精液中B7-H3的含量,用计算机辅助精液分析(CASA)检测精液参数,并分析它们的相关性.以及在体外用不同浓度的B7-H3与精子孵育0-4小时不同时间后,分别用CASA和PSA-FITC荧光染色法检测精子活力、精子获能及精子顶体反应.rn 结果:健康男性的精液B7-H3的含量比不育症患者的精液B7-H3的含量显著增高(P0.05 )。在体外B7-H3与精子孵育，发现B7-H3浓度与前向运动精子百分率存在剂量和时间依赖性关系，但B7-H3浓度对精子的获能及顶体反应无显著影响。rn 结论:B7-H3能够提高人类精子的活力，但对精子获能及顶体反应无影响。

摘要： 本试验探讨了目前鹿类精子体外获能培养体系中常用的修正BO、DTALP、DSOF和mBO-DM等培养液对马鹿精子体外获能效果的影响，旨在为鹿类动物体外受精技术体系的建立提供科学参考。实验结果表明，马鹿精子随着在4种获能基础液中获能时间的延长，发生顶体反应的精子数量均逐渐增加，且mBO-DM液和修正BO液中顶体反应率显著高于DTALP液和DSOF液。

摘要： 本实验将分离优化的蓝狐精子置于38.5°C条件下的BO液5％CO2培养箱中进行获能培养后，分别在6个DMSO浓度(0％、0.1％、0.2％、0.5％、1.0％、2％)和4个时间段(15分钟、30分钟、60分钟、120分钟)内进行考马斯亮蓝染片、伊红一苯胺黑染片，检测并统计精子顶体反应率、活精子比率，利用SPSS15.0软件分析实验数据。结果显示：DMSO浓度为0.2％时蓝狐精子体外获能效果最好，是最佳体外获能浓度。

摘要： 综述了哺乳动物精子细胞骨架变化的主要研究进展，包括精子在获能，顶体反应和冷休克过程中细胞骨架的变化.通过比较研究精子不同时期细胞骨架的变化，将有助于在分子水平上进一步研究精子细胞骨架的变化。

摘要： 目的：评估甘油在5°C保存公猪精液时防止冷刺激的功效。方法：糖添加剂加上2个浓度的甘油作为精液保护液(EH)，无甘油保护剂作对照(E)。对6头试验用公猪，采集后，分离精子，用不同保存液在37°C稀释，然后样品放置于5°C。用精子综合分析系统分析精子保存5天和8天后的运动性。结果：保存5天后，所有分析数据都没有差异；8天后，有甘油组相比与对照组NAR的比例更高，并在较高浓度组具有显著差异，其他参数没有显著差异。结论：甘油在保护低温保存精子的顶体完整性具有重要作用，且不影响活力。

摘要： 目的：评估甘油在5°C保存公猪精液时防止冷刺激的功效。方法：糖添加剂加上2个浓度的甘油作为精液保护液(EH)，无甘油保护剂作对照(E)。对6头试验用公猪，采集后，分离精子，用不同保存液在37°C稀释，然后样品放置于5°C。用精子综合分析系统分析精子保存5天和8天后的运动性。结果：保存5天后，所有分析数据都没有差异；8天后，有甘油组相比与对照组NAR的比例更高，并在较高浓度组具有显著差异，其他参数没有显著差异。结论：甘油在保护低温保存精子的顶体完整性具有重要作用，且不影响活力。

摘要： 本发明属于精子顶体酶测量技术领域，公开了一种人体精子顶体酶药盒，将明胶混合液制成溶胶状基质液，涂制固定成均匀底膜，显示顶体酶(Acroin)的活性；将精子在超薄明胶底膜上孵育，离心及磷酸盐缓冲液清洗去除膜抑制因子精子顶体解聚，释放并溶解‑明胶基质膜，形成围绕在精子前部周围的孔区；通过光镜观察，光线穿透孔区，在精子头周围看到明亮的晕环，在染色后深紫蓝色背景的衬托下，观察到酶反应，测量每个亮环直径的大小来估计单个精子顶体酶活性的强弱。本发明方法简单且成本低，准确计算顶体酶的阳性反应率，为试管婴儿技术筛选出活性更强的精子，提高成功率。

摘要： 本发明提供一种精子顶体空泡太赫兹成像方法，属于太赫兹近场生物成像领域，主要解决精子样本顶体空泡的无染色快速成像问题。在太赫兹近场成像系统中，太赫兹波激发原子力显微镜的探针，经探针照射到精子样本顶体位置，精子样本顶体反射的太赫兹近场波被探针接收并转化为远场波传播出去，结合原子力的信号处理和显示系统，可以清晰的对精子样本顶体内部的空泡进行成像。采取太赫兹波进行近场成像，太赫兹对非极性材料的穿透性，可以对精子样本顶体进行内部成像，可以清晰的对精子样本顶体的空泡进行成像。基于太赫兹近场系统的原子力显微镜系统，精度可以达到纳米级。

摘要： 本实用新型公开了一种椭圆采光顶体系，包含圆心十字撑、连接于圆心十字撑外侧的圆心第一内束、外圈下梁、外圈上梁、连接于外圈下梁和外圈上梁之间的外圈竖柱、连接于圆心第一内束与外圈上梁之间间隔设置的圈梁以及设置于圆心第一内束与外圈上梁之间呈放射状的弧形斜连梁。本实用新型通过圆心十字撑、圆心第一内束和圆心第二内束的设置利于支撑架体的核心安装，且通过弧形斜连梁的分级安装利于椭圆采光顶整体的便捷安装和一体性；通过椭圆采光顶的中心区和外周翻边的设立，利于长弧形的弧形斜连梁支撑连接，且通过挂笼进行辅助施工，可更加利于焊接固定；通过翻边处柱体的设立，利于为整个采光顶提供下部支撑力，保证采光顶的整体稳定性。

摘要： 本实用新型公开了一种应用于地铁模块化装修吊顶体系装置，其结构包括：底杆、支撑杆、贯穿杆、主龙骨、固定装置,底杆焊接连接于支撑杆的下端，贯穿杆与支撑杆的上端为一体，主龙骨与贯穿杆形成间隙配合，固定装置螺栓连接于主龙骨的下端，本实用新型通过主龙骨与固定装置内部的次龙骨先进行组装成模型最后通过提升装置将模型提升到相应的高度能够有效的提升施工效率，并且在组装的同时通过孔洞内部的活动器与定位块的效果下能够在贯穿杆进行贯穿连接的同时提升贯穿杆的平衡效果，并且在实际施工完毕后能够大大提升各部件的固定稳定性，从而增强设施的定位与稳定效果。

摘要： 一种精子顶体反应试剂盒，包括组织片保存液、荧光结合物、荧光封固液。所述组织片保存液每100ml含有戊二醛0.5ml、甲醇5ml、乙醇2ml、聚乙烯吡咯酮PVP0.2g、福尔马林1ml，余量为纯净水。该试剂盒可进行精子诱发顶体反应检测，如不进行钙离子诱发，则可用于精子顶体反应状况评估、精子顶体完整性测定。组织片保存液可让整个精子诱发顶体反应检测试验过程分成两部分进行，保存第一部分实验得到的样品和试验结果，在随后72小时内的任意时间里进行第二部分的操作都不会影响最终的试验结果，缓解工作强度。荧光染色系统的荧光强、可稳定15天不衰减，检测结果更加稳定、易判读，也保证了结果的可重复性。该试剂盒及测定方法可以临床应用推广。

摘要： 本发明公开了一种精子顶体反应检测试剂，其特征在于：包括精子获能处理液，顶体反应诱导液以及染色液；其中，所述精子获能处理液含有干酪乳杆菌LC‑N235发酵上清液。本发明还提供了用所述精子顶体反应试剂做成的试剂盒。本发明还提供了用所述精子顶体反应试剂做成的试剂盒进行顶体检测的方法。本发明的优点：(1)突破性缩短了精子获能所需要的时间，提高了效率。(2)保护精子，提高精子的活力从而使得样本保存不当引起的偏差减少。

摘要： 一种精子顶体反应试剂盒，包括组织片保存液、荧光结合物、荧光封固液。所述组织片保存液每100ml含有戊二醛0.5ml、甲醇5ml、乙醇2ml、聚乙烯吡咯酮PVP0.2g、福尔马林1ml，余量为纯净水。该试剂盒可进行精子诱发顶体反应检测，如不进行钙离子诱发，则可用于精子顶体反应状况评估、精子顶体完整性测定。组织片保存液可让整个精子诱发顶体反应检测试验过程分成两部分进行，保存第一部分实验得到的样品和试验结果，在随后72小时内的任意时间里进行第二部分的操作都不会影响最终的试验结果，缓解工作强度。荧光染色系统的荧光强、可稳定15天不衰减，检测结果更加稳定、易判读，也保证了结果的可重复性。该试剂盒及测定方法可以临床应用推广。

摘要： 本发明公开了一种精子顶体反应检测试剂，其特征在于：包括精子获能处理液，顶体反应诱导液以及染色液；其中，所述精子获能处理液含有干酪乳杆菌LC‑N235发酵上清液。本发明还提供了用所述精子顶体反应试剂做成的试剂盒。本发明还提供了用所述精子顶体反应试剂做成的试剂盒进行顶体检测的方法。本发明的优点：(1)突破性缩短了精子获能所需要的时间，提高了效率。(2)保护精子，提高精子的活力从而使得样本保存不当引起的偏差减少。

摘要： 本发明公开了一种人类精子顶体反应能力检测的方法，特点是步骤为：①取适量液化的精液，缓缓加入到37°C上游液底部，优选精子；②将优选出来的精子悬液分成两份于流式上样管中，检测管加顶体反应诱导剂，对照管加入顶体反应诱导剂溶剂；③诱导顶体反应结束后，离心去上清，加入预冷乙醇固定，固定结束后，离心去上清；④加入缓冲液重悬精子，再加入FITC‑PSA染色液；⑤设定流式细胞仪的校准，对照管检测管按顺序上机，每管样本至少连续测定两次；⑦测定后，分别用漂白剂、进样管清洁剂和除菌的双蒸水彻底清除残留于流式细胞仪进样线中的细胞碎片和荧光染料，优点是操作简单且方便快速、结果易于判定、检测结果准确、稳定可靠、重复性好。

摘要： 本发明公开了一种基于流式细胞术的精子顶体反应检测试剂，包括顶体反应诱导液和染色液，还包括精子获能液，精子获能液的pH值7.0～7.8，含有氯化钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸二钠盐、碳酸氢钠、丙酮酸钠、牛血清白蛋白、乳酸钠溶液，这样用精子获能液代替目前的精子培养液，获能效果好，便于诱导，可以用流式细胞术检测精子顶体反应，使精子顶体反应检测结果准确、稳定可靠、重复性好、临床易于推广。