腺相关病毒载体

摘要： 腺相关病毒载体是基因治疗领域中最有前景的基因递送平台之一,它具有免疫原性较低、安全性高、制备简单、可大规模生产等优势,尤其在安全性方面远超其他病毒载体.近几年,在难治性疾病的临床治疗中,腺相关病毒基因载体发挥着越来越重要的作用,但由于仍存在一些待解决的问题,尚未在临床中大规模应用.综述了目前腺相关病毒基因载体在基因治疗领域中的应用趋势和所面对的挑战,并进行了展望.

摘要： 近年来,已有3种采用重组腺相关病毒载体(Recombinant Adeno-Associated Viral Vector,rAAV)的基因疗法获批上市,且已证明这些新型疗法对遗传性罕见病有长期治疗作用。但是,rAAV作为基因疗法载体仍面临着转导效率低、载体嗜性有待提高以及会引发宿主免疫清除反应等挑战。目前,已有多项研究表明,对rAAV的载体序列进行优化,对载体衣壳进行工程改造可以改善转导效率、载体嗜性,避免宿主免疫反应并提高大规模生产的产量。本文对近年来rAAV载体工程研究方面取得的进展进行简单梳理和总结,旨在为其大规模的运用提供参考依据。

摘要： 过去30年来,基因疗法给多种遗传性和获得性视网膜疾病患者带来了很大希望。在大量临床前研究的基础上,全球已进行了60多项视网膜疾病基因疗法的各期临床试验,且Luxturna,一种用于由RPE65突变导致的2型Leber先天性黑朦(LCA2)的基因治疗产品已批准用于临床。目前的基因传递系统虽然在临床研究中取得了一些成功,但为保证安全性和有效性,仍然需要在载体和眼内给药方式上加以改进和变通。新的腺相关病毒载体技术的发展使大基因传递和小创伤载体注射方式的研究都有所进展。规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)技术也丰富了基因疗法的手段,必将在视网膜疾病的治疗中得到广泛应用。虽然基因疗法仍面临许多挑战,但预计在未来若干年中,它将成为目前许多不可治性视网膜疾病的临床治疗选择。

摘要： 过去30年来,基因疗法给多种遗传性和获得性视网膜疾病患者带来了很大希望.在大量临床前研究的基础上,全球已进行了60多项视网膜疾病基因疗法的各期临床试验,且Luxturna,一种用于由RPE65突变导致的2型Leber先天性黑朦(LCA2)的基因治疗产品已批准用于临床.目前的基因传递系统虽然在临床研究中取得了一些成功,但为保证安全性和有效性,仍然需要在载体和眼内给药方式上加以改进和变通.新的腺相关病毒载体技术的发展使大基因传递和小创伤载体注射方式的研究都有所进展.规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)技术也丰富了基因疗法的手段,必将在视网膜疾病的治疗中得到广泛应用.虽然基因疗法仍面临许多挑战,但预计在未来若干年中,它将成为目前许多不可治性视网膜疾病的临床治疗选择.

摘要： 腺相关病毒载体是基因治疗领域中最有前景的基因递送平台之一,它具有免疫原性较低、安全性高、制备简单、可大规模生产等优势,尤其在安全性方面远超其他病毒载体。近几年,在难治性疾病的临床治疗中,腺相关病毒基因载体发挥着越来越重要的作用,但由于仍存在一些待解决的问题,尚未在临床中大规模应用。综述了目前腺相关病毒基因载体在基因治疗领域中的应用趋势和所面对的挑战,并进行了展望。

摘要： 超过60％的语前聋病例是由于遗传因素引起.遗传性耳聋患者的基因突变包括单核苷酸替换、碱基缺失、插入等,当这些突变导致耳聋基因的错义时便可临床上引起遗传性耳聋的症状.对这些突变在基因水平选择性纠正是目前遗传性耳聋生物治疗的新思路.CRISPR/Cas技术作为第三代的靶向基因组编辑技术系统,具有靶向、高效、易操作等优势,很大程度上推进了耳聋的基因治疗研究.本文对目前国内外耳聋的基因治疗研究现状进行回顾.

摘要： To study the function of myostatin (MSTN),molecular biology method was applied to construct the recombinant vector of MSTN knockout AAV-SaCas9,the transfected 293T cells were extracted for the genome and identified by T7 endonuclease.Then the mutations were further confirmed by TA cloning and sequencing.The AAV-293 cells were co-transfected with AAV-SaCas9 and helper plasmids.Virus was isolated and purified after three days,and its titer was determined by real-time fluorescence quantitative PCR.Our results showed that the recombinant vector of MSTN knockout AAV-SaCas9 was successfully constructed.MSTN could be edited by sgRNA2 identified by T7 digestion and sequencing,and AAV-SaCas9 was successfully packaged into virus.Finally the titer was 2.73 × 1012 vg/mL,which was identified by fluorescence quantitative PCR.%为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)的相关功能,应用分子生物学方法构建敲除MSTN的AAV-SaCas9载体,通过转染293T细胞提取基因组后进行T7酶切鉴定、TA克隆及测序确定该基因的敲除效果;将鉴定正确的AAV-SaCas9重组质粒与pHelper质粒共转染AAV.-293细胞3d后,分离纯化病毒并用实时荧光定量PCR法检测病毒滴度.结果显示,成功构建了敲除MSTN基因的AAV-SaCas9重组载体,T7酶切和测序鉴定出sgRNA2位点可以对MSTN进行编辑,并成功将其包装成病毒,经荧光定量PCR鉴定病毒滴度为2.73×1012vg/mL.

摘要： Objective:To Study on transfection effection and expression of recombinant adeno-associated virus in kinds of cell lines.Methods:Packaging 293FT cells with the packaging plasmids AAV-DJ, Helper, and shuttle plasmids, AAV-GFP of recombined adeno-associated virus by liposome. Collect the solution of virus and infect 2 normal cells and 15 kinds of cancer cells. 24hours after infection, the efficacy of adenoviral transfered into kinds of cells was assessed by quantification of GFP-positive cells under an inverted fluorescence microscope. Count cells in 3 random sights under microscope.Results:The efficiency of GFP recombinant adeno-associated virus is various in these kinds of cells. The highest efficiency shows in 293FT cells and Hela cells, 96.2% and 81.86%. Conversely the efficiency is approximately 0 in SCG, SEM-M, SP20 cells.Conclusion: Due to the high and relatively high transfection efficiency of the AAV-GFP in normal cells, 293FT, and cancer cells, Hela, SMC7721, BGC823, Panc-1, A549, A875, C6, MCF-7, it is available to do some genetic therapy researh using AAV as a vector.%目的：研究腺相关病毒载体(AAV)感染各类正常细胞和肿瘤细胞的效率，为相关研究提供参考。方法：利用脂质体将重组腺相关病毒的包装质粒AAV-DJ、Helper以及表达绿色荧光蛋白(GFP)的穿梭质粒AAV-GFPP转染293FT细胞进行病毒包装，收集病毒液后感染2种正常细胞和14种肿瘤细胞，24 h后倒置荧光显微镜下观察GFP的表达，并随机选取3个视野统计感染GFP的细胞数目。结果：GFP重组腺相关病毒对各种细胞的感染效率存在差别，感染效率最高的为293FT细胞(占96.2%)和Hela细胞(占81.86%)，对SCG7901、SEM-M和SP20细胞的感染效率近乎为零。结论：GFP重组腺相关病毒对正常细胞293FT感染效率最高，对肿瘤细胞Hela、SMC7721、BGC823、PANC-1、A549、A875、C6和MCF-7的感染效率较高，这类细胞适合使用AAV作为载体进行外源基因的导入及功能研究。

摘要： 目的：比较腺相关病毒(AAV)载体和慢病毒(LV)载体在间充质干细胞(MSCs)基因转染中的效率。方法密度梯度离心法分离培养MSCs， HE染色、Nestin免疫荧光染色鉴定， BrdU标记观察增殖情况。分别包装AAV与LV假病毒颗粒，并感染MSCs，通过β-gal染色和绿色荧光蛋白检测，分别计算两者的转染效率。结果 MSCs成功从骨髓分离。AAV载体介导的基因转染率为49.1%，LV载体的转染率为91.4%(P<0.01)。结论 LV载体介导的基因转染方法转染效率更高。%Objective To compare 2 kinds of commonly used viral vectors, adeno-associated viral (AAV) vector and lentiviral (LV) vec-tor in the gene transfection for bone marrow derived mesenchymal stem cells (MSCs). Methods MSCs were isolated with density gradient (lymphocytes seperation) and identified with HE staining and immunocytochemistory staining for Nestin. The proliferation of BMSCs was detected with BrdU labeling. AAV mediated gene transfection was carried out through recombinant AAV-LacZ viral particles. For LV medi-ated gene transfection, the LV particles were used directly. The transfection efficiency was estimated withβ-gal staining and green fluores-cent protein under the fluorescent microscope respectively. Results MSCs was successfully isolated from the bone marrow. HE staining showed that MSCs was with big nucleus, 1-3 nucleoli, and high nucleocytoplasmic ratio. BrdU labeling suggested that MSCs were prolifer-ating. Some MSCs expressed Nestin. The gene transfection efficiency mediated with AAV vector was 49.1%, and it was 91.4%with LV vec-tor (P<0.01). Conclusion The LV vector is more efficient on gene transfection than AAV vector.

摘要： 本发明提供经分离的嵌合病毒，其包含博卡病毒(bocavirus)衣壳蛋白质和重组型腺相关病毒(AAV)基因体；经分离的rBoV，其包含人类博卡病毒衣壳蛋白质和重组型BoV基因体，以及其用途。

摘要： 本发明涉及新型AAV衣壳蛋白、编码该衣壳蛋白的核酸分子、包含该衣壳蛋白的载体以及包含该载体的药物。本发明的AAV载体具有高实心率，可作为治疗性基因的送递载体用于治疗各种疾病。

摘要： 本发明涉及新型AAV衣壳蛋白、编码该衣壳蛋白的核酸分子、包含该衣壳蛋白的载体以及包含该载体的药物。本发明的AAV载体具有高实心率，可作为治疗性基因的送递载体用于治疗各种疾病。

摘要： 本发明提供经分离的嵌合病毒，其包含博卡病毒(bocavirus)衣壳蛋白质和重组型腺相关病毒(AAV)基因体；经分离的rBoV，其包含人类博卡病毒衣壳蛋白质和重组型BoV基因体，以及其用途。

摘要： 本发明公开了一种携带人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原S基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与其应用。是将人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原基因(HBV‑C S基因)插入已经剔除结构基因并带有启动子的腺相关病毒载体中获得的。该重组腺相关病毒载体可将其携带的HBV‑C S基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞，从而杀灭被HBV‑C病毒感染的细胞，可被用于制备抗HBV‑C病毒感染的药物。

摘要： 本发明提供了环状RNAcircTTC3过表达腺相关病毒载体、腺相关病毒及其应用，属于生物医药技术领域。本发明利用AAV9病毒载体递送环状RNA‑circTTC3能够用于制备预防和/或治疗心肌缺血再灌注损伤(IRI)的药物。本发明基于AAV病毒将能够转录出环状RNA‑circTTC3的基因序列递送至心脏组织中，并在心脏组织中稳定的高表达，上调circTTC3能产生心脏保护效应，有效减少心肌梗死面积，从而起到保护心肌梗死的作用。本发明通过在新生大鼠原代心肌细胞中过表达circTTC3，发现circTTC3可以显著性地促进新生大鼠原代心肌细胞的增殖和生长。

摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种重组腺相关病毒载体、重组腺相关病毒及其应用。该重组腺相关病毒载体为将PD‑1细胞外段核苷酸序列插入腺相关病毒载体而形成的载体；所述PD‑1细胞外段核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的重组腺相关病毒载体，将PD1的胞外段(共170个氨基酸)插入至腺相关病毒AAV8表达后分泌出可溶性PD1，这样就能够通过可溶性PD1与肿瘤细胞上的PDL1结合，有效阻断PD‑1/PD‑L1信号通路，以阻止肿瘤细胞上的PDL1与T细胞上PD1结合而避免T细胞耗竭，改善宿主的T细胞功能，提高免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，并且对正常的细胞、组织和器官几乎无损伤，具有极高的安全性和可靠性。

摘要： 本发明公开了一种携带人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原S基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与其应用。是将人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原基因(HBV‑C S基因)插入已经剔除结构基因并带有启动子的腺相关病毒载体中获得的。该重组腺相关病毒载体可将其携带的HBV‑C S基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞，从而杀灭被HBV‑C病毒感染的细胞，可被用于制备抗HBV‑C病毒感染的药物。

摘要： 本发明涉及重组Glut1腺相关病毒载体(rAAV)构建体和用于恢复Glut1缺陷型哺乳动物中的Glut1表达的相关方法。在某些实施方案中，所述rAAV还包含鸡β‑肌动蛋白启动子，其中所述rAAV能够穿过血脑屏障(BBB)。在某些实施方案中，本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本文所述的任何重组AAV。在某些实施方案中，本发明涉及一种包括容器壳体的试剂盒，所述容器壳体包含本文所述的组合物。在某些实施方案中，本发明涉及恢复受试者的BBB中的Glut1转运的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的任何重组AAV载体。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗有需要的受试者中的Glut1缺陷综合征的方法。

摘要： 本发明涉及一种小鼠维甲酸相关的孤核受体α（RORα）腺相关病毒载体及其构建方法，属于疾病的基因治疗领域。本发明所提供的载体基因组小，含4.7～6kb之间的线状单链DNA基因组，本发明采用降低腺病毒污染的三质粒共转染法以及不会破会AAV的肝素琼脂糖纯化法和利用AmiconUtra-15高效的浓缩作用包装rAAV-RORα，且应用于转染肿瘤细胞。该载体可感染分裂期及静止期细胞，整合到宿主细胞基因组的特定区域，无致病性且免疫原性弱，可用于体内试验以及体外实验，从而充分发挥AAV载体在基因治疗中的作用，以及RORα于多种重要生理过程的调节作用。