胶原Ⅳ型

摘要： 目的报道1例COL4A5基因新发突变致ALPORT综合征患者,探讨该病的临床表现及遗传学特征。方法收集患者的临床资料,提取外周血DNA,通过全外显子组测序技术检测患儿及直系亲属COL4A5基因突变情况,并结合HGMD数据库中相关文献进行复习。结果患者长期反复血尿、蛋白尿,糖皮质激素治疗无效;肾脏穿刺活检,光镜下检查显示肾小球节段系膜轻度增生性病变;电镜检查显示肾小球基底膜厚薄不一,基底膜致密层增厚,部分呈撕裂状和蛛网状;基因检测显示患者COL4A5基因第38号外显子编码区第3393~3419位碱基缺失(c.3393_3419del),导致第1128~1136号氨基酸缺失(p.G1128_S1136del);家系验证其为新发突变,且该突变位点在HGMD等数据库中均未见报道。入院后继续给予福辛普利钠治疗,以减少尿蛋白分泌、延缓肾脏病变。随访半年余,患儿无听力及眼部异常改变,肾功能无异常。结论COL4A5基因c.3393_3419del突变可能导致ALPORT综合征。早期的肾脏病理检查及基因检测对于明确ALPORT综合征的诊断、治疗方案的制定以及预后的评估具有重要意义。

摘要： 目的 观察利拉鲁肽对老年2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏组织转化生长因子β1 (TGF-β1)/细胞内信号蛋白Smads基因通路的影响并探讨其作用机制.方法 20月龄、体重(500±100)g的健康雄性SD大鼠75只,应用随机数字表法按1∶2随机分为对照组(25只)和造模组(50只),造模组给予高糖、高脂饲料喂养8周后,一次性腹腔内推注1％链脲佐菌素30 mg/kg,成模后剩余48只再随机分为T2DM组(24只)和干预组(24只),干预组给予利拉鲁肽200 μg·kg-1·d-1腹腔注射,对照组和T2DM组大鼠给予等量生理盐水.各组分别于分组后第4、8、12周末随机取8只大鼠,留取24 h尿液检测24 h尿蛋白.随后麻醉采血测生化指标,留取肾脏组织,行苏木素伊红(HE)染色后光学显微镜下观察其病变,并用免疫组化法测Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应法测TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA的表达.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 在各时间段,与对照组大鼠比较,T2DM组大鼠出现肾小球基底膜增厚、系膜增生及间质纤维化改变,且随时间延长逐渐加重,TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ表达增加(12周:0.69±0.01比0.15±0.01、0.51±0.02比0.02±0.01、183.33±2.08比221.67±2.08,t值分别为89.22、60.87、24.52,均P＜0.05),而Smad7 mRNA减少(t=13.42,P＜0.05);与同期T2DM组比较,干预组大鼠肾脏纤维化程度减轻,TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ表达减少(t值分别为71.70、37.58、20.04,均P＜0.05),而Smad7 mRNA增多(t=9.96,P＜0.05).且随利拉鲁肽干预时间延长,病变逐渐减轻,TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ逐渐减少,Smad7 mRNA逐渐增多(均P＜0.05).结论 利拉鲁肽可能通过抑制TGF-β1/Smads通路从而减少其下游Col-Ⅳ的生成,发挥抗肾纤维化的作用,延缓老年T2DM大鼠肾脏病变的进展.

摘要： 目的 探讨血清透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、层黏连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP-P)在结缔组织病-间质性肺病(CTD-ILD)中的变化及意义.方法 选取经临床确诊的结缔组织病患者157例,其中经肺部高分辨率CT(HRCT)确诊合并ILD的患者(CTD-ILD组)87例,未合并ILD患者(CTD-非ILD组)70例,收集2组患者的临床资料,并完善肺功能、血气分析、肺部HRCT、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、HA、ColⅣ、LN、PⅢNP-P等指标,分析HA、ColⅣ、LN和PⅢNP-P在CTD-ILD病情评估中的临床意义.结果 CTD-ILD组患者血清HA、ColⅣ水平较CTD-非ILD组患者明显升高(P<0.05),2组患者ESR、CRP、PⅢNP-P和LN水平比较差异无统计学意义.CTD-ILD组血清HA水平与ESR、CRP、肺泡炎症评分和临床-影像-生理评分呈正相关(rs分别为0.230、0.254、0.497和0.267,P<0.05),与动脉血氧分压[p(O2)]呈负相关(rs=-0.318,P<0.01);CTD-ILD组血清ColⅣ与肺泡炎症评分呈正相关(rs=0.212,P<0.05),与p(O2)呈负相关(rs=-0.327,P<0.01).结论 血清HA、ColⅣ水平与CTD-ILD肺部炎症程度密切相关,对CTD-ILD有一定的预测价值,HA能作为反映CTD-ILD病情活动度的指标.

摘要： 患者女,22岁,小腿皮肤潮红4年,6个月前渐蔓延至整个下肢、前臂.皮肤科检查:下肢及双前臂可见弥漫潮红及扩张的毛细血管,压之褪色.皮损组织病理:网篮状角化过度,基底层色素增加,真皮浅层散在淋巴细胞浸润,未见明显红细胞溢出;PAS染色显示,血管周围可见增厚的均一化物质沉积;免疫组化显示,血管壁增厚,Ⅳ型胶原阳性.诊断:皮肤胶原血管病.

摘要： 目的 探讨复方甘草酸苷片联合川芎嗪对酒精性肝病病人T淋巴细胞亚群的影响和临床疗效.方法 选择2016年9月至2018年9月在石家庄市第五医院治疗的酒精性肝病病人116例,按照随机数字表法分为两组,各58例.对照组病人均采用川芎嗪治疗(120 mg川芎嗪加入至250 mL葡萄糖注射液中,静脉滴注,1次/日),观察组病人均在对照组基础上采用复方甘草酸苷片治疗(饭后口服,每次50 mg,3次/日).两组均接受28 d的连续治疗,用药剂量依据病人年龄、症状等酌情加减.比较两组T淋巴细胞亚群[成熟T淋巴细胞(CD3+)、诱导性T细胞/辅助性T细胞(CD4+)、抑制性T细胞/细胞毒性T细胞(CD8+)]、肝纤维化指标[层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CL-Ⅳ)]、细胞因子水平[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、瘦素(LP)]与肝功能指标[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)].结果 治疗28 d后,观察组CD3+(63.71±9.92)％与CD4+(38.99±8.26)％高于对照组(59.37±9.68)％、(35.75±6.12)％,CD8+(28.63±5.62)％水平低于对照组(31.35±6.17)％,LN(52.44±13.65)μg/L、HA(39.75±10.69)μg/L、CL-Ⅳ(69.88±14.55)μg/L、TNF-α(235.95±67.28)pg/L、TGF-β1(94.35±20.76)mg/L、IL-6(54.99±12.08)pg/L、LP(4.38±1.59)μg/L、AST(40.96±12.08)U/L、GGT(36.28±14.53)U/L与ALT(39.24±10.97)U/L水平均低于对照组LN(52.44±13.65)μg/L、HA(39.75±10.69)μg/L、CL-Ⅳ(69.88±14.55)μg/L、TNF-α(235.95±67.28)pg/L、TGF-β1(94.35±20.76)mg/L、IL-6(54.99±12.08)pg/L、LP(4.38±1.59)μg/L、AST(40.96±12.08)U/L、GGT(36.28±14.53)U/L与ALT(39.24±10.97)U/L水平,差异有统计学意义(P<0.05).结论 酒精性肝病病人在川芎嗪治疗基础上,采用复方甘草酸苷片治疗,可有效改善T淋巴细胞亚群水平,利于控制肝纤维化,调节细胞因子水平,改善肝功能.

摘要： 目的 探讨染料木素对尿毒症大鼠细胞外基质(ECM)沉积的影响及其机制.方法 5/6肾切除术建立尿毒症模型鼠,将模型鼠分为染料木素组(G组)和对照组(C组),假手术组(S组)作为正常对照.检测各组术前及术后第4、8周尿蛋白和生化等指标,第8周观察肾组织病理变化情况,半定量法评估肾小球硬化指数(GSI).免疫组化法检测Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的沉积情况.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western blot法分别检测肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA转录、蛋白质表达情况.结果 术后第4周与C组比较,G组尿蛋白排泄量减少[(11.63±2.07) vs.(19.93±3.19)mg/d,P＜0.01],血清尿素氮、肌酐水平降低[(9.39±0.59) vs.(12.09±0.78)mmol/L,(65.11±3.79) vs.(77.63±3.20)μmol/L,P＜0.01].至术后第8周,尿蛋白排泄量减少,血清尿素氮、肌酐水平降低更为显著.肾小球内ColⅣ和FN沉积减少[(17.30±1.96)％ vs.(24.68±3.97)％,(18.26±2.31)％vs.(29.35±4.15)％,P＜0.01],肾小球硬化明显减轻.TGF-β1mRNA、蛋白质表达减弱(P＜0.05).结论 染料木素可以减少尿毒症大鼠细胞ECM的蓄积,对肾脏具有保护作用.%Objective To investigate the effect of genistein on deposition of extracellular matrix(ECM) in uremic rats and its mechanism.Methods The uremic rat model was established by 5/6 nephrectomy.The model rats were divided into the genistein group(G) and control group (C).The sham-operation group served as the normal control(S).Urinary protein and biochemical indexes before operation,at postoperative 4,8 weeks were measured in various groups.The pathologic changes of renal tissue were observed.The glomerular sclerosis index(GSI) was evaluated by the semi-quantitative method.fibronectin(FN) and type Ⅳ collagen (ColⅣ) deposition situation were detected by using the immunohistochemical method.Western blot and RT-PCR were used to measure the protein expression and mRNA transcription of TGF-β1.Results Comparing postoperative 4 weeks with the group C,the urinary protein excretion amount was decreased[(11.63 ± 2.07) mg/d vs.(19.93 ± 3.19) mg/d,all P＜ 0.01],serum urea nitrogen and creatinine levels of the group G were decreased[(9.39±0.59)mmol/L vs.(12.09±0.78)mmol/L,(65.11±3.79)mmol/L vs.(77.63±3.20)μmol/L,all P＜0.01].Until postoperative 8 weeks,the urinary protein excretion amount was decreased and the decrease of serum urea nitrogen and creatinine levels was more obvious.The deposition of ColⅣ and FN in renal glomerulus was lower than that of the control group[(17.30±1.96)％ vs.(24.68±3.97)％;(18.26±2.31)％ vs.(29.35±4.15)％,all P＜ 0.01].Glomerular sclerosis was significantly alleviated.The TGF-β1mRNA and protein expression were attenuated (P＜0.05).Conclusion Genistein can reduce the deposition of ECM in uremic rats and has a protective effect on kidney.

摘要： Objective To observe the effect of daidzein on extracellular matrix of uremic rats and to discuss its mechanism.Methods Uremic rat model were established by 5/6 nephrectomized. Model rats were devided into daidzein group, control group. Rats with sham-operation were regarded as the normal control. At time of baseline, 4th and 8th week after operation, urinary protein and biochemical detection were measured. The pathologic changes, fibronectin (FN) and typeⅣcollagen (ColⅣ) were investigated at 8th week. The Western-Blot and RT-PCR were used to measure protein expression and mRNA transcription of TGF-β1. Results At 8th week after operation, the urinary protein (12.35 ± 2.13 mg/24 hvs. 19.93 ± 3.19 mg/24 h), serum urea (10.11 ± 0.65 mmol/Lvs.12.09 ± 0.78 mmol/L) and creatinine (68.10 ± 2.51μmol/Lvs.77.63 ± 3.20μmol/L) in the daidzein group decreased significantly than those in the control group (P<0.01). The deposition of ColⅣ (16.33% ± 2.14%vs. 24.68% ± 3.97%) and FN (19.17 ± 2.68 vs. 29.35 ± 4.15) in the daidzein group decreased significantly than those in the control group (P<0.01). Compared with control group, the pathological lesion in the daidzein group was less serious. The mRNA transcription (0.37 ± 0.06vs. 0.64 ± 0.08) and protein expression of TGF-β1 (0.28 ± 0.09vs. 1.40 ± 0.13) in the daidzein group were attenuated significantly than those in the control group (P<0.05). ConclusionsDaidzein had a beneficial effect on uremic rats. It may be associated with a decrease of extracellular matrix accumulation.%目的：观察大豆素对尿毒症大鼠肾组织细胞外基质的影响，并探讨其作用机制。方法采用随机数字表法将26只大鼠分为假手术组8只、模型组8只、大豆素组10只。除假手术组外，其余各组采用5/6肾切除术制备尿毒症大鼠模型。大豆素组于造模后次日灌胃15 mg/kg大豆素溶液，假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。1次/d，连续给药8周。检测各组造模前、造模后第4、8周尿蛋白及生化指标。第8周观察各组大鼠肾组织病理改变。采用免疫组化法检测肾组织Ⅳ型胶原蛋白、纤连蛋白表达。采用RT-PCR法、Western blot法检测肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达。结果造模后第8周，与模型组比较，大豆素组尿蛋白排泄量[(22.54±3.47)mg/24 h比(31.28±3.78)mg/24 h]减少(P＜0.01)，血清BUN[(12.09±0.59)mmol/L比(14.26±0.71)mmol/L]、SCr[(75.20±3.39)μmol/L比(90.25±2.71)μmol/L]水平降低(P＜0.01)。肾小球Ⅳ型胶原蛋白[(16.33±2.14)%比(24.68±3.97)%]、纤连蛋白[(19.17±2.68)比(29.35±4.15)]表达降低(P＜0.01)，肾小球硬化明显减轻。肾组织TGF-β1 mRNA[(0.37±0.06)比(0.64±0.08)]、TGF-β1蛋白[(0.28±0.09)比(1.40±0.13)]表达降低(P＜0.05)。结论大豆素可减少尿毒症大鼠细胞细胞外基质的蓄积，对肾脏具有保护作用，其机制可能与下调TGF-β1表达有关。

摘要： Objective To explore a new pathogenic gene mutationin in COL4A3 and COL4A4 genes of a family with thin-basement-membrane nephropathy (TBMN), and explain its mechanism.Methods Genomic DNA was extracted from blood samples.Mutation screening for all the exons in COL4A3 and COL4A4 of the proband was carried out by direct PCR sequencing.The sequences of the proband were compared with standard sequences in GenBank.After identifying the mutation in COL4A4, screening for the mutation site in 200 healthy controls and the rest of family members were conducted.RNA sequence of the proband was analyzed by reverse transcription PCR and TA cloning.The positive clones were sequenced for RNA screening.Results There was a G to A mutation in the 1459 site of COL4A4 (c.1459+G ＞ A) in the proband, her mother, and the elder sister, whereas the mutation was not found in other family members and healthy people.RNA screening showed that the COL4A4 (c.1459+G ＞ A) mutation was a heterozygous substitution in position + 1 of exon 21, in the splicing region.This mutation leaded to eliminating of exon 21 from the COL4A4 mRNA, causing the exon 21 deletion and frameshift mutation following the exon 20 in its amino acids sequence.Conclusions It is described that COL4A4 (c.1459+G ＞ A) is a new pathogenic mutation in TBMN, which further help understanding the pathogenesis and clinical diagnosis of TBMN.%目的 对显性遗传的薄基底膜肾病(thin-basement-membrane nephropathy, TBMN)家系进行COL4A3和COL4A4基因分析,寻找突变位点并阐述其致病机制.方法 提取先证者外周血基因组DNA,PCR法扩增COL4A3和COL4A4基因所有外显子,与GenBank数据库中的标准序列比对寻找突变位点,确定COL4A4基因突变后对其他6例家系成员和200例健康对照者进行该位点测序.提取先证者外周血RNA,反转录后PCR扩增含突变位点的基因片段进行TA克隆,挑选阳性单克隆菌落进行测序分析RNA.结果 DNA测序显示先证者及其母亲、大姐均发现COL4A4基因1459位点G杂合突变为A,其他4例家庭成员和200例健康对照均未见该位点突变.先证者RNA分析显示COL4A4(c.1459+G＞ A)突变基因位于第21号与22号外显子之间的剪接位点,该位点突变导致剪接错误,其mRNA序列第21号外显子缺失,相应编码的氨基酸序列也全部缺失,20号外显子后编码的氨基酸序列也随之发生移码突变.结论 本研究报道的COL4A4 (c.1459+G＞A)为TBMN患者的致病基因突变,其致病机制进一步丰富了TBMN发病机制,为将来临床诊断提供参考.

摘要： 本发明创造提供了一种融合蛋白酶及其制备方法、其在提取I型胶原蛋白中的应用以及该I型胶原蛋白的用途，所述融合蛋白酶包括蛋白酶7片段mmp7C和/或蛋白酶9片段mmp9C；所述蛋白酶7片段mmp7C的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述蛋白酶9片段mmp9C的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的融合蛋白酶在提取动物皮和肌腱组织的I型胶原蛋白的过程中，I型胶原蛋白空间结构不会被破坏，且能够去除终产品中的杂蛋白，提高了I型胶原蛋白的提取率。

摘要： 本发明公开了一种液化动物软骨的设备，包括：外腔体，其上端可拆卸密封设有上盖、下端可开启/关闭密封设有下封盖，所述上盖开有投料口和第一进汽口；第一液化腔，其同轴且可上下滑动地设置在所述外腔体内；第二液化腔，其顶面固接在所述外腔体的外侧壁上，以使所述外腔体下端伸入第二液化腔内。本发明还公开了一种液化动物软骨的设备联产硫酸软骨素、Ⅱ型胶原寡肽、Ⅱ型胶原多肽的方法。本发明的液化动物软骨的设备，能对动物软骨进行第一次液化和第二次液得到液化物，从而简化动物软骨的加工流程、提高生产效率。

摘要： 本发明属于医学生物材料领域，具体公开了一种改性I型胶原蛋白及改性方法和利用该改性I型胶原蛋白制备的胶原凝胶，该改性方法包括：在2～10°C的温度下(1)将弱酸与I型胶原蛋白混合均匀，制得酸性胶原溶液；(2)利用磷酸盐缓冲液对酸性胶原溶液进行透析，直到获得中性胶原溶液；(3)去除中性胶原溶液中的气泡；(4)在液封条件下，利用旋转流变仪对脱除了气泡的中性胶原溶液进行剪切，剪切完成后静置，即可制得改性I型胶原蛋白。本发明通过利用机械剪切的方式对胶原蛋白进行改性，该方法简便高效，可以在不需要引入其他物质的基础上，减少胶原分子的三螺旋结构，增多无规卷曲结构，使得组装得到的胶原纤维直径、孔隙和粘弹性可控。

摘要： 本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种医用级Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，包含如下步骤：动物胎盘组织预处理、脱细胞、脱脂、除杂、酶切、盐析纯化、脱盐浓缩；所述的盐析方法为：在碱性条件下对含有Ⅲ型胶原蛋白的动物源胶原蛋白混合物进行盐析，一步盐析即可得到高纯度的Ⅲ型胶原蛋白，纯度达到95％以上；制备得到的动物胎盘Ⅲ型胶原蛋白具有良好的三螺旋结构以及特征性的纤维网状结构；内毒素含量低于0.5Eu/mL，达到医用标准；可应用于活性护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、医疗器械、保健食品等领域。

摘要： 提供以新的作用机制为指标的成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选方法。通过以神经激活作为指标，能够进行成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选。

摘要： 本发明创造提供了一种融合蛋白酶及其制备方法、其在提取I型胶原蛋白中的应用以及该I型胶原蛋白的用途，所述融合蛋白酶包括蛋白酶7片段mmp7C和/或蛋白酶9片段mmp9C；所述蛋白酶7片段mmp7C的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述蛋白酶9片段mmp9C的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的融合蛋白酶在提取动物皮和肌腱组织的I型胶原蛋白的过程中，I型胶原蛋白空间结构不会被破坏，且能够去除终产品中的杂蛋白，提高了I型胶原蛋白的提取率。

摘要： 本发明涉及一种将选自I型胶原酶、II型胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白酶构成的组的至少一种酶从物质的混合物中纯化出来的方法，作为方法步骤，所述方法包括至少一个疏水作用色谱过程，其特征在于，疏水作用色谱过程中的固定相包括从聚丙二醇和丁基琼脂糖构成的组中选出的材料。本发明还涉及以这种方法纯化的酶用于制药、化妆品和/或生化目的的用途。

摘要： 本发明公开了IV型胶原、层粘连蛋白和III型前胶原氨基端肽三联检测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：S1：样品垫的制备；S2：结合垫的制备；S3：NC膜的制备；S4：装配。本发明利用荧光免疫层析技术，采用双抗体夹心法原理进行检测，在层析过程中，样本中的CIV/LN/PIIINP抗原与结合垫上的荧光微球标记的CIV/LN/PIIINP单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下沿着硝酸纤维素膜向前移行至检测区域，被硝酸纤维素膜上包被的另一株CIV/LN/PIIINP单克隆单克隆抗体捕获并形成复合物沉积在T区，在激发光源的作用下，荧光物质发射特定波长的荧光信号，荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及设定的定标曲线自动转化为定量数值。

摘要： 本发明公开了一种液化动物软骨的设备，包括：外腔体，其上端可拆卸密封设有上盖、下端可开启/关闭密封设有下封盖，所述上盖开有投料口和第一进汽口；第一液化腔，其同轴且可上下滑动地设置在所述外腔体内；第二液化腔，其顶面固接在所述外腔体的外侧壁上，以使所述外腔体下端伸入第二液化腔内。本发明还公开了一种液化动物软骨的设备联产硫酸软骨素、Ⅱ型胶原寡肽、Ⅱ型胶原多肽的方法。本发明的液化动物软骨的设备，能对动物软骨进行第一次液化和第二次液得到液化物，从而简化动物软骨的加工流程、提高生产效率。

摘要： 本申请涉及重组III型胶原蛋白技术领域，尤其涉及重组人源III型胶原蛋白注射剂及其在在皮肤胶原再生中的应用。通过构建Col IIIɑ‑1和P4HA融合表达的毕赤酵母X33，制备了能够胞外表达III胶原蛋白ɑ链，对该基因工程菌进行发酵培养，能够大量收获胞外表达的III胶原蛋白ɑ链，极大地利于该蛋白的下游纯化和提取。本申请公开的重组人源III型胶原蛋白注射剂，以独立包装的Col III‑ɑ1‑DOPA和葡萄糖亚铁摩尔比例为5:1的条件下形成具有三螺旋和铁离子配位交联结构的水凝胶，能够增强胶原的粘合性，还能够在体内具有优良的生物相容性，非常适合应用在于中创伤部位的胶原再生和组织填充。