胰腺干细胞

摘要： 背景:胰岛细胞来源不足说明胰岛细胞移植治疗糖尿病不能满足临床需要.因此,体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛细胞成为研究的热点.目的:观察雷公藤多糖对小鼠胰岛来源的胰腺干细胞的诱导分化作用,从而探索中药诱导胰腺干细胞分化为胰岛β细胞的作用.方法:采用雷公藤多糖体外诱导经纯化的小鼠胰腺干细胞分化为胰岛细胞.胰岛样细胞团进行形态学观察,双硫腙染色和Western blot分析.结果与结论:①细胞形态学、细胞生长特性及免疫细胞化学染色显示,实验不仅得到了纯度高的小鼠胰腺干细胞,而且该细胞经雷公藤多糖诱导后能形成球形的胰岛样结构,有细长的蒂与培养瓶底部相连,双硫腙染色呈铁红色;②Western-blot检测显示,胰岛样细胞团中有β细胞素蛋白的表达;③结果表明,小鼠胰腺干细胞可以体外经雷公藤多糖诱导分化为含有β细胞的胰岛样细胞团.%BACKGROUND: Inadequate sources of islet cells mean that islet cell transplantation for diabetes cannot meet the clinical demand.Therefore,in vitro induction of pancreatic stem cells to differentiate into islets has become a focus of research. OBJECTIVE:To study the effect of Tripterygium wilfordii polysaccharides on the differentiation of pancreatic stem cells from islets in mice, so as to explore the effect of traditional Chinese medicine on the differentiation of pancreatic stem cells into pancreatic beta cells. METHODS:Tripterygium wilfordii polysaccharide was used to induce the differentiation of purified mouse pancreatic stem cells into islets in vitro.The islet-like cell clusters then underwent morphologic observation, dithizone (DTZ) staining, and western blot analysis. RESULTS AND CONCLUSION: Cell morphology, cell growth characteristics and immunocytochemical staining showed that mouse pancreatic stem cells were obtained.They were induced by Tripterygium wilfordii polysaccharide into spherical islet-like structures, which had a spindly pedicle connected with the bottom of the culture flask, and were DTZ-stained to iron red. Western blot assay detected β-cytokine proteins in the islet-like cell clusters. These findings confirm that mouse pancreatic stem cells can be induced to differentiate into islet-like cell clusters containing β cells in vitro by Tripterygium wilfordii polysaccharide.

摘要： 背景：胰岛细胞来源不足说明胰岛细胞移植治疗糖尿病不能满足临床需要。因此，体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛细胞成为研究的热点。目的：观察雷公藤多糖对小鼠胰岛来源的胰腺干细胞的诱导分化作用，从而探索中药诱导胰腺干细胞分化为胰岛β细胞的作用。方法：采用雷公藤多糖体外诱导经纯化的小鼠胰腺干细胞分化为胰岛细胞。胰岛样细胞团进行形态学观察，双硫腙染色和Western blot分析。结果与结论：①细胞形态学、细胞生长特性及免疫细胞化学染色显示，实验不仅得到了纯度高的小鼠胰腺干细胞，而且该细胞经雷公藤多糖诱导后能形成球形的胰岛样结构，有细长的蒂与培养瓶底部相连，双硫腙染色呈铁红色；②Western-blot检测显示，胰岛样细胞团中有β细胞素蛋白的表达；③结果表明，小鼠胰腺干细胞可以体外经雷公藤多糖诱导分化为含有β细胞的胰岛样细胞团。

摘要： 目的 从新生大鼠胰腺分离出一种胰腺干细胞,并对其进行初步鉴定.方法 采集大鼠胰腺,5.5 mg/mlⅣ型胶原酶消化,用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基培养,首次传代时利用差速贴壁分离上皮样细胞和成纤维样细胞.多次纯化上皮细胞,细胞密度为80％进行传代.对第4代的细胞进行免疫荧光染色,诱导向β胰岛细胞分化并利用高糖刺激胰岛素释放.结果 新生大鼠胰腺中的胰腺干细胞具有较强的增殖能力,可连续传代.第4代细胞经免疫荧光染色,显示胰十二指肠同源框因子l(PDX-1)、巢蛋白(Nestin)、神经元素3(NGN3)、波形蛋白(Vimentin)、胰岛素(Insulin)和C肽(C-peptide)阳性;经诱导分化后,经双硫腙(DTZ)染色为阳性,同时免疫组织化学显示PDX-1和C-peptide阳性;在糖刺激实验中,当无糖刺激时,细胞组胰岛素释放量为(5.3±1.5) pIU/ml,而诱导后的细胞组胰岛素释放量为(30.0±11.5) pIU/ml,两者比较差异有统计学意义(P =0.035).结论 分离的胰腺细胞是胰腺干细胞.%Objective The aim of this study is to isolate and identify the pancreatic stem cells from the pancreas of neonatal rats.Methods The pancreatic tissue was collected from neonatal rats in aseptic environment,and then digested with 5.5 mg/ml collagenase Ⅳ.The organoid cultured in RPMI 1640 medium supplemented with 10％fetal bovine serum (FBS).Differential centrifugation method was carried out to isolate the epithelial cell and fibroblast.The epithelial cells were purified for several times.The 4th-generation cells were then induced to differentiate into β islet cells,and stained with immunofluorescent signal.High concentration of glucose was applied to induce insulin secretion.Results The pancreatic stem cells in the pancreas of the neonatal rats possessed high proliferative rate and can be applied for continuous passage.Immunofluorescence staining of the4th-generation cells showed positive Pancreatic duodenal homeobox-1 (PDX-1),Nestin,neurogenin3 (NGN3),Vimentin,insulin and C-peptide which were pancreatic stem/progenitor cell specific proteins;after inducing to differentiation,the cells displayed positive with Dithizone staining,while immunohistochemistry test showed cells were PDX-1 and C-peptide positive;for glucose stimulation assay,insulin secretion of induced ICCs [(30.0 ± 11.5) pIU/ml] was significantly higher than that of non-induced ICCs [(5.3 ± 1.5) pIU/ml,P =0.035).Conclusion The isolated pancreas cells were pancreas stem cells.

摘要： 近年来糖尿病发病率逐年增加,研究如何控制和预防糖尿病成为世界性课题.传统的治疗方法不仅不能从根本上解决高血糖也不能有效地控制糖尿病并发症.胰岛移植技术的出现为临床治疗糖尿病提供了新的途径,但是胰岛数量的不足和胰岛移植出现的免疫排斥反应制约了胰岛移植技术的发展.因此,通过自体胰腺干细胞分化修复胰腺组织从而达到平稳血糖和控制糖尿病并发症成为一种新的技术手段.论文综述胰腺胚胎发育调控机制、胰腺干细胞的定位及体外诱导分化方法等方面的研究进展.%At present,the incidence of diabetes has increased year by year,how to control and prevent diabetes is becoming a worldwide subject.The traditional treatment method can not only solve the problem of hyperglycaemia,but also can not control the diabetic complications effectively.Although the technologies of islet transplantation provide a new way,the deficiency of the islets and the immune rejection in islet transplantation have restricted the development of islet transplantation.Therefore,it has become a new technique to repair the pancreatic tissue by the differentiation of pancreatic stem cells(PSCs) and achieve stable blood glucose and control the diabetic complications.In this paper,the development regulation mechanism of pancreatic embryos,the localization of pancreatic stem cells and the methods of inducing differentitation in vitro were reviewed.

摘要： 糖尿病作为全球范围内的代谢性常见疾病,极大地影响着患者的生命质量.常规的药物和胰岛素注射并不足以根治糖尿病.近年来,逐渐发展起来的干细胞的相关研究,有望从根本上治愈糖尿病及其并发症,因而成为治疗糖尿病的热点研究.而利用干细胞医治糖尿病的关键点是明确干细胞的来源及分化为胰岛细胞的诱导方法.论文针对胰腺干细胞存在部位及诱导方法的研究概况做一综述.

摘要： 目的观察粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor GCS-F)是否可以促进胰腺干细胞的增殖。方法应用L-精氨酸诱导大鼠急性胰腺炎模型,随机分为对照组及G-CSF治疗组。于治疗后第21天处死大鼠,通过免疫荧光和免疫组化检测胰腺组织表面标记物Pax-4、Nkx-6。结果治疗后3周,免疫荧光及免疫组化结果表明G-CSF治疗组大鼠的胰腺组织表面标志物Pax-4、Nkx-6表达的细胞数明显多于对照组。结论 G-CSF治疗可以促进胰腺干细胞增殖并修复损伤的胰腺组织。

摘要： 目的 体外探讨胰腺干细胞形成胰岛样结构并对其进行相关检测,探寻胰腺干细胞分化为胰岛样结构可行性及初步鉴定的技术方法.方法 从新生小鼠胰腺组织中通过原位传代扩增培养获得富足数量PSC,以尼克酰胺定向诱导PSC,观察细胞的形态变化、形成的细胞团双硫腙染色、免疫荧光组织化学染色及Mallory染色鉴定.结果 PSC集落分布,细胞为单个大核、胞质折光透亮,巢蛋白(nestin)及碱性磷酸酶(AKP)染色阳性;诱导后聚集成团,最终形成具被膜包裹的细胞团;双硫腙染色阳性,胰岛素免疫荧光染色可见胞质被激发出碌色荧光的胰岛素阳性细胞;细胞团中央β样细胞及周围α样细胞,形成类似正常胰岛细胞组成的胰岛样结构.结论 胰腺干细胞在适宜条件下可定向分化,形成胰岛样结构.

摘要： 目的 探讨分离、培养及初步鉴定新生大鼠胰腺干细胞的方法.方法 取30只无特定病原体(SPF)级新生大鼠的胰腺组织,用完整胰腺胶原酶消化法分离胰岛.以低糖改良Eagel培养液为基础培养液,于不同时期分别添加血清、碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、白血病抑制因子、神经干细胞原代培养的无血清培养液中的营养因子B27、神经元培养的无血清培养液中的营养因子N2等进行培养,倒置相差显微镜下观察其形态学特征及生长特性.应用免疫细胞化学法对培养不同时期的细胞进行巢蛋白(Nestin)及细胞角质蛋白19(CK-19)检测,并进行初步鉴定.结果 ①新生大鼠胰腺内纤维组织少,体积小,完整胰腺胶原酶消化法简化了胰岛分离步骤,减少了污染机会,有利于进一步培养.②培养24 h可见细胞贴壁,但贴壁细胞数量较少,改用无血清培养后,贴壁细胞快速生长,10～ 15 d形成单层细胞汇集,细胞形态较一致.③培养所得细胞一直较多表达胰腺干细胞的标志物Nestin,随培养时间延长,表达CK-19的细胞数量逐渐增多.结论 新生大鼠胰腺消化后,获得的细胞于不同时期表达胰腺干细胞的标志物Nestin、CK-19.

摘要： Objective To investigate the protective effect of pancreatic stem cells ( PSCs) of fetal rats in vitro on the islets of langerhans.Methods The PSCs of SD rat embryos on embryonic 16th day were isolated, purified, cultivated and passaged , then were identified by immuocytochemistry and flow cytometry .The rat's islets were isolated from the pancreas . After being identified by dithizone , the islets were divided into two groups:group A which underwent islet alone culturing and group B which underwent co-culturing of islet and PSCs for 14 days.The morphological changes , survival rate and ap-optosis rate of islets were observed under inverted microscope , fluorescence microscope and flow cytometry ( FCM) in both groups.The amount of insulin secretion was measured by ELISA;and insulin stimulation index was calculated with the in-sulin release test.After being cultured for 7 days, the islets in the two groups were transplanted to the peplos of the left kid-ney in SD rats with diabetes , respectively .The blood glucose of the SD rats was tested after transplantation .Results The immuocytochemistry showed the PSCs were nestin-positive after being cultivated and passaged for the 3rd generation.Flow cytometry showed its content accounted for 74.1%;on the 7th, 14th day, the survival rate of islets in group B was signifi-cantly higher than that in group A (all P<0.01), while on the 7th day, the apoptosis rate of islets in group B was signifi-cantly lower than that in group A (P<0.05).On the 7th , 14th day, under the high glucose stimulation , the levels of in-sulin secretion and insulin stimulation index in group B were significantly higher than those in group A (all P<0.01).Af-ter transplantation in group B , the blood glucose of rats dropped to normal on the 5th day.Conclusion Co-cultivation of islet and PSCs can significantly prolong the survival time of islets and preserve viability of islets .%目的：观察胎鼠胰腺干细胞体外对胰岛功能的保护作用。方法将孕16 d的SD大鼠胎鼠胰腺干细胞分离、纯化、培养传代，免疫细胞化学法及流式细胞术鉴定；分离纯化SD大鼠胰岛，双硫腙鉴定后分为A组和B组，分别行单纯胰岛培养及胰岛与胰腺干细胞联合培养14 d，期间观察胰岛形态变化、检测胰岛存活率及细胞凋亡率， ELISA法检测胰岛素分泌量、计算刺激指数。取两组培养7 d后悬浮生长的胰岛移植入糖尿病大鼠左肾包膜下，术后每天尾静脉采血以快速血糖测试仪检测血糖。结果胎鼠胰腺干细胞培养传代3代后免疫细胞化学可见巢蛋白（Nestin）阳性细胞，流式细胞术测定其含量占74．1％；培养第7、14天时B组胰岛存活率显著高于A组（P均＜0．01），培养第7天时B组胰岛细胞凋亡率显著低于A组（P＜0．05）；培养第7、14天时B组高糖刺激后胰岛素分泌量及刺激指数均显著高于A组（P均＜0．01）；B组移植后大鼠血糖第5天降至正常。结论胎鼠胰腺干细胞与胰岛联合培养可明显延长胰岛体外存活时间并使其保持良好的活性。

摘要： 胰腺炎、糖尿病、胰腺痛等胰腺疾病严重影响人类健康,胰腺干细胞移植治疗糖尿病取得了极大成功,使胰腺干细胞成为于细胞领域研究的热点之一.本文对胰腺干细胞的特征、分化机制及应用前景进行综述.

摘要： 本研究使用鸡为研究材料，从鸡胚胎胰腺中成功分离了nestin阳性细胞，方法上与哺乳动物分离nestin阳性细胞区别在于差速时间上的差异，禽类细胞的贴壁速度与生长速度普遍高于哺乳动物。鸡nestin阳性细胞在尼克酞胺长时间诱导下，可分化为胰岛素分泌细胞，主要区别在PDX-1基因的消失；分化后的nestin阳性细胞具有胰岛素分泌功能，可以在不同浓度葡萄糖下分泌不同量的胰岛素，钙离子动态检测也证实本研究诱导获得胰岛素分泌细胞具有生理功能，为糖尿病的细胞治疗提供新的生物材料与理论基础。

摘要： 本研究使用鸡为研究材料，从鸡胚胎胰腺中成功分离了nestin阳性细胞，方法上与哺乳动物分离nestin阳性细胞区别在于差速时间上的差异，禽类细胞的贴壁速度与生长速度普遍高于哺乳动物。鸡nestin阳性细胞在尼克酞胺长时间诱导下，可分化为胰岛素分泌细胞，主要区别在PDX-1基因的消失；分化后的nestin阳性细胞具有胰岛素分泌功能，可以在不同浓度葡萄糖下分泌不同量的胰岛素，钙离子动态检测也证实本研究诱导获得胰岛素分泌细胞具有生理功能，为糖尿病的细胞治疗提供新的生物材料与理论基础。

摘要： 本研究使用鸡为研究材料，从鸡胚胎胰腺中成功分离了nestin阳性细胞，方法上与哺乳动物分离nestin阳性细胞区别在于差速时间上的差异，禽类细胞的贴壁速度与生长速度普遍高于哺乳动物。鸡nestin阳性细胞在尼克酞胺长时间诱导下，可分化为胰岛素分泌细胞，主要区别在PDX-1基因的消失；分化后的nestin阳性细胞具有胰岛素分泌功能，可以在不同浓度葡萄糖下分泌不同量的胰岛素，钙离子动态检测也证实本研究诱导获得胰岛素分泌细胞具有生理功能，为糖尿病的细胞治疗提供新的生物材料与理论基础。

摘要： 本研究使用鸡为研究材料，从鸡胚胎胰腺中成功分离了nestin阳性细胞，方法上与哺乳动物分离nestin阳性细胞区别在于差速时间上的差异，禽类细胞的贴壁速度与生长速度普遍高于哺乳动物。鸡nestin阳性细胞在尼克酞胺长时间诱导下，可分化为胰岛素分泌细胞，主要区别在PDX-1基因的消失；分化后的nestin阳性细胞具有胰岛素分泌功能，可以在不同浓度葡萄糖下分泌不同量的胰岛素，钙离子动态检测也证实本研究诱导获得胰岛素分泌细胞具有生理功能，为糖尿病的细胞治疗提供新的生物材料与理论基础。

摘要： 本发明公开了一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞及胰岛β细胞的方法，涉及干细胞分化在医疗中的应用技术领域，包括以下步骤：将人多能干细胞制备为多功能细胞球；培养所得多功能细胞球，使其定向分化为定型内胚层细胞；培养所得定型内胚层细胞，诱导其分化为胰腺前体细胞；培养所得胰腺前体细胞诱导其分化为胰岛β细胞。本发明通过调整各步骤培养液组分，使试验过程和结果都更加稳定，培养液更简单、成本低、易保存；单次试验结果之间差异性更小、产量更高。所得细胞质量也更加均匀、细胞性能更好。从胰腺前体细胞诱导分化为胰岛β细胞基本可以看做一步培养，在保证细胞实现有效的定向分化的前提下，节约了大量的培养时间及培养基。

摘要： 本发明提供了一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞以及胰岛β细胞的方法。在由人多能干细胞来源的内胚层细胞向胰腺谱系细胞特化过程中，通过阶段性加入WNT信号通路抑制剂可以提高人多能干细胞向胰腺前体细胞分化效率。本发明在提高胰腺前体细胞分化效率后，进而提高成熟的胰岛β细胞分化效率。该方法适用于不同细胞系的胰腺分化，获得大量胰岛β细胞，为糖尿病细胞治疗、药物筛选、疾病模型等提供有力的支持，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种表皮干细胞向胰腺细胞分化的改进方法，基于表皮干细胞作为基础，通过添加活性诱导肽，使得细胞分化成为胰腺细胞，并且分化时间较短，表皮干细胞来源宽泛，成本低廉，制备简便，具有极好的市场应用前景。

摘要： 本发明提供促进胰腺内胚层细胞分化成胰腺内分泌富集聚簇并增强激素表达细胞中的胰岛素表达的方法。

摘要： 本发明提供了一种表皮干细胞向胰腺细胞分化的改进方法，基于表皮干细胞作为基础，通过添加活性诱导肽，使得细胞分化成为胰腺细胞，并且分化时间较短，表皮干细胞来源宽泛，成本低廉，制备简便，具有极好的市场应用前景。

摘要： 本发明提供了一种表皮干细胞向胰腺细胞分化的改进方法，基于表皮干细胞作为基础，通过添加活性诱导肽，使得细胞分化成为胰腺细胞，并且分化时间较短，表皮干细胞来源宽泛，成本低廉，制备简便，具有极好的市场应用前景。

摘要： 本发明涉及用于在生物相容性半渗透包封装置中包封胰腺祖细胞的方法。本发明还涉及在哺乳动物中响应葡萄糖刺激生成人胰岛素。

摘要： 本发明公开了一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞及胰岛β细胞的方法，涉及干细胞分化在医疗中的应用技术领域，包括以下步骤：将人多能干细胞制备为多功能细胞球；培养所得多功能细胞球，使其定向分化为定型内胚层细胞；培养所得定型内胚层细胞，诱导其分化为胰腺前体细胞；培养所得胰腺前体细胞诱导其分化为胰岛β细胞。本发明通过调整各步骤培养液组分，使试验过程和结果都更加稳定，培养液更简单、成本低、易保存；单次试验结果之间差异性更小、产量更高。所得细胞质量也更加均匀、细胞性能更好。从胰腺前体细胞诱导分化为胰岛β细胞基本可以看做一步培养，在保证细胞实现有效的定向分化的前提下，节约了大量的培养时间及培养基。

摘要： 本发明提供了一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞以及胰岛β细胞的方法。在由人多能干细胞来源的内胚层细胞向胰腺谱系细胞特化过程中，通过阶段性加入WNT信号通路抑制剂可以提高人多能干细胞向胰腺前体细胞分化效率。本发明在提高胰腺前体细胞分化效率后，进而提高成熟的胰岛β细胞分化效率。该方法适用于不同细胞系的胰腺分化，获得大量胰岛β细胞，为糖尿病细胞治疗、药物筛选、疾病模型等提供有力的支持，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及胰腺癌干细胞及针对胰腺癌的新的分子标记、标记检测方法及筛选方法。本发明作为从胰腺癌细胞株中发掘的标记，是一种通过胰腺癌干细胞标记的检测，对胰腺癌，尤其是对早期的胰腺癌进行检测的标记。并且，利用本发明的标记，能够对胰腺癌进行准确的诊断及预后分析。