绿色荧光蛋白(GFP)

摘要： 【目的】构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猪痘病毒(recombinant Swinepox virus,rSWPV),制备抗GFP单克隆抗体。【方法】首先合成3′-端含His标签的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列EGFP-His,用双酶切方法将其插入到基础质粒载体pSW中,构建重组转移载体pSW-EGFP-His;采用脂质体转染的方法使该载体与SWPV(SWPV-JX20G株)同源重组,经蚀斑纯化获得rSWPV-EGFP-His。重组病毒进行PCR和SDS-PAGE鉴定,扩增并纯化EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗GFP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗GFP单克隆抗体进行效价及特异性鉴定。【结果】PCR和SDS-PAGE结果显示,成功构建并纯化到rSWPV-EGFP-His,该病毒感染PK15细胞可稳定表达EGFP-His蛋白,蛋白大小约27 ku,为可溶性表达,镍柱纯化的EGFP-His蛋白溶液呈明显的绿色。EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠血清抗体效价高达1∶256000。采用杂交瘤技术制备了9株能稳定分泌抗EGFP-His单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接ELISA和Western blotting结果显示,9株单克隆抗体中的7株针对GFP的线性表位,另外2株单克隆抗体针对GFP的构象表位。【结论】本研究成功制备了EGFP-His蛋白和9株抗EGFP-His的单克隆抗体,为后续建立GFP的免疫学检测方法提供了必备材料。

摘要： Catsup是果蝇体内一个功能重要的基因,其突变会导致体内多巴胺含量过高,引起果蝇致死及生殖障碍。绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)在确定蛋白的亚细胞定位进而在研究蛋白功能方面起着重要的作用。为了探索Catsup的亚细胞定位进而能够更好地研究Catsup的功能,文章利用基因工程技术和生物学方法,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增Catsup基因全长,与GFP一起连接至pUAST质粒,构建载体pUAST-Catsup-GFP,通过显微注射技术导入果蝇,获得UAS-Catsup-GFP转基因果蝇。通过克隆验证了转基因果蝇构建成功。利用该果蝇进行Catsup的亚细胞定位,确定其定位在高尔基体上,为进一步研究该基因的功能奠定基础。

摘要： 黑腹果蝇作为经典遗传学和分子遗传学模式生物,已经成为研究基因调控器官发育以及各种疾病发生的一个强有力的模型。为了探究Mlp84B在果蝇体内的表达定位及互作蛋白质,首先将含启动子元件的果蝇Mlp84B基因组融合GFP序列克隆至pUAST表达载体中,利用胚胎显微注射技术将构建好的重组质粒注射到果蝇早期受精卵;其次通过杂交获得红眼果蝇,经单果蝇建系、平衡子定位后获得稳定遗传的转基因果蝇;最后通过在果蝇体内检测到GFP的表达,同时经qRT-PCR检测到Mlp84B的表达水平上升,证实转基因果蝇构建成功。GFP定位结果显示,内源Mlp84B在果蝇肌肉系统表达,并且Mlp84B与Act57B在果蝇体内相互作用。实验结果表明,文中构建的UAS-Mlp84B-GFP转基因果蝇可以作为肌肉的标记品系,这为探究肌肉系统形成和稳态奠定了基础。

摘要： 为了观察人SMAD4全长及剪接体在HEK-293T中的亚细胞定位,并分析它们在HEK-293T细胞中的转录活性差异,将SMAD4全长及剪接体的pEGFP-C1重组质粒转染至HEK-293T细胞中,在荧光显微镜下观察含GFP标签的SMAD4全长及其剪接体蛋白的亚细胞定位,并通过双荧光素报告酶实验在HEK-293T细胞中对SMAD4全长及其剪接体激活SBE报告基因的情况进行比较.亚细胞定位观察显示,与pEGFP-C1空载组中GFP在HEK-293T中呈现核质均匀分布不同,GFP-SMAD4和GFP-SMAD4△4、GFP-SMAD4△6、GFP-SMAD4△5-6、GFP-SMAD4△4-6、GFP-SMAD4△4-7五种剪接体均分布于 HEK-293T 的细胞质中;而GFP-SMAD4△3则主要分布于HEK-293T的细胞核中.双荧光素酶实验结果显示,与空载组相比,在6种剪接体过表达组中,只有SMAD4△3过表达组能对SBE报告基因的荧光素酶活性起到一定的上调作用;但与SMAD4△3过表达组比较,SMAD4全长过表达组能对SBE报告基因的荧光素酶活性起到更明显的上调作用.本文观察了人SMAD4全长及剪接体在HEK-293T中的亚细胞定位,并分析了其对下游信号通路的转录激活情况,可为后续SMAD4剪接体蛋白的功能研究提供一定的基础.

摘要： 假禾谷镰孢菌(Fusarium pseudograminearum)是引起山东省小麦茎基腐病的主要致病菌,严重影响小麦的产量和品质.研究假禾谷镰孢菌的侵染机制,可为小麦茎基腐病的防治提供理论依据.本研究采用PEG介导的原生质体转化法将GFP基因导入假禾谷镰孢菌中获得转化菌株,经PCR和荧光显微镜观察发现该菌株可稳定遗传;致病力测定发现,GFP转化菌株致病力未减弱.转化菌株侵染试验表明,种衣剂包衣处理可有效防止小麦幼苗被假禾谷镰孢菌侵染;相比10、15°C,20°C条件更有利于假禾谷镰孢菌侵入.本研究建立的PEG介导的假禾谷镰孢菌遗传转化体系,可用于该菌致病相关基因功能研究,标记菌株可用于病菌侵入、田间消长动态、侵染循环等病菌发生规律的研究.

摘要： 本研究通过农杆菌EHA105介导的方法,以含潮霉素抗性基因和GFP基因的双元载体pCAMBgfp为转化载体,对小孢拟盘多毛孢Pestalotiopsis microspora KFRD-2菌株进行遗传转化.基于潮霉素及GFP荧光抗性进行转化子的初步筛选,随后,进一步对转化子的菌落特征、菌丝生长速率、产孢量、荧光稳定性及致病力进行验证.结果 获得阳性转化子100余株,转化效率达200个转化子/106个孢子.大部分转化子与野生型菌株无明显形态及致病力差异.同时,获得了14株菌丝形态、产孢量或致病力与野生型存在明显差异的突变株,可用于小孢拟盘多毛孢关键致病基因的挖掘验证及致病机理等研究.

摘要： 目的 比较GFP阳性细胞在不同荧光通道下的凋亡检测效果.方法 使用流式细胞技术选用Annexin V-PE/7-AAD双标法检测GFP阳性细胞的凋亡,采用三色均用488 nm激光激发,和GFP用488 nm激光激发,PE、7-AAD用561 nm激光激发两种方案.结果 仅使用488 nm激光器,可见GFP/PE/7-AAD三色之间漏光严重,均需补偿且补偿值极大,样品管补偿前后的PE/7-AAD双参数散点图形态改变极大.而第二种方案可见GFP往PE和7-AAD漏光少,补偿值极小甚至不用补偿,PE与7-AAD之间补偿极大,样品管补偿前后的PE/7-AAD双参数散点图形态改变大,但形态改变明显小于均用488 nm激光器激发的图形.用两个方案检测的凋亡率基本一致.结论 实验室应根据所拥有流式细胞仪的激光和荧光通道滤光片的配置来选择最适合的凋亡试剂盒.如果仪器允许,尽量采用多激光激发减少光谱重叠.若有561 nm激光器,其拓展了荧光通道的选择,减少了补偿带来的麻烦,有更多的优势.若只有488 nm未配561 nm激光的小型流式细胞仪,可通过齐全的单阳管设置,合适的荧光补偿调节也可以获得满意的检测结果.

摘要： 本研究旨在构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV),以便更快速有效的检测中和抗体.参照GenBank中GFP基因序列设计特异性引物,应用PCR技术扩增获得携带Age Ⅰ和NheⅠ酶切位点的GFP基因,并对pFPV质粒进行定点突变,从而获得AgeⅠ和NheⅠ酶切位点,然后用Age Ⅰ和NheⅠ同时双酶切pFPV和GFP基因,经4°C过夜连接、转化,成功构建携带GFP基因的重组猫泛白细胞减少症病毒质粒pFPV-GFP,应用脂质体转染法将重组质粒pFPV-GFP导入猫肾细胞(F81),利用GFP独特的发光机制可在荧光显微镜下对标记的重组病毒rFPV-GFP进行细胞内活体观察,利用Western blotting鉴定重组病毒rFPV-GFP中GFP的表达情况.结果 显示,重组质粒pFPV-GFP转染F81细胞24 h时可观察到绿色荧光蛋白,且随着转染时间的延长观察到的绿色荧光蛋白数量增多,说明重组质粒pFPV-GFP成功转染到F81细胞中,Western blotting鉴定出GFP在重组病毒rFPV-GFP中稳定表达.本研究通过在pFPV上成功插入GFP并拯救出病毒,说明pFPV上可以插入外源基因,为其他外源基因在pFPV上的插入奠定基础,同时GFP的插入为FPV的研究提供了更加有利的研究工具,为FPV的基础研究以及中和抗体的快速检测奠定基础.

摘要： 为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点(基因组中70303-70304 bp之间),利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定.结果 显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中.Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达.本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料.

摘要： 为明确球孢白僵菌在玉米中的定殖分布规律以及不同施用方式和处理浓度对玉米生长发育的影响,本文利用绿色荧光蛋白(GFP)标记的球孢白僵菌,在激光扫描共聚焦显微镜下观测了球孢白僵菌在玉米根部、茎部和叶部的定殖情况,同时检测了不同接种方式在球孢白僵菌不同处理浓度下对玉米生长指标的影响。结果表明,球孢白僵菌在玉米不同组织部位上的定殖有着明显的差异,各球孢白僵菌接种处理中,均以叶部定殖的白僵菌孢子数最多,而茎部均未观测到孢子定殖;玉米根部仅在浸种和灌根处理中可见少量孢子。球孢白僵菌不同接种方式对其在玉米中定殖率的影响差异较大,灌根处理定殖率最高,为76.7%;其次为浸种处理,为73.3%;茎部注射处理及叶面喷施处理定殖率较低,分别为43.3%和36.7%。研究表明,不同施用方式及接种浓度球孢白僵菌孢悬液对玉米生长指标有一定的影响,球孢白僵菌可通过不同接种方式在玉米植株中定殖并扩散,对玉米的生长发育有一定的促进作用,其中以1×10^6~1×10^7孢子/mL球孢白僵菌孢悬液浸种或灌根,对玉米苗的促进生长作用最明显。

摘要： 近年来,随水母Aequora victoria来源的绿色荧光蛋白(green flurescent protein,GFP),由238个氨基酸组成,稳定发蓝、绿色荧光,GFP作为一种新型的报道蛋白在生物学界引起了广泛的关注,它已吸引了从生命科学(包括细胞生物学、分子生物学、发育生物学、遗传学及生物技术等)到生物医学及农学许多领域研究者的兴趣.为了探讨绿色荧光蛋白在真核细胞中的表达及其毒性问题,本文将这种真核表达载体质粒pEGFPL/CMV分别转染人脑胶质瘤细胞U251、人肝癌细胞Hep 3B、人膀胱癌细胞株T24和人小细胞肺癌株LTEP-P等几株肿瘤细胞;另外,还转染入正常细胞——原代地鼠肾细胞以全面了解GFP的表部及其对细胞生长是否有影响——即GFP对细胞是否具有毒性;并以Hep 3B细胞为例展开阐述.我们将质粒pEGFPL/CMV以质体DOTAP为介导,转染到Hep 3B细胞中,经台盼蓝染色计数、荧光显微镜观察、MTT检测、吖啶橙染色、LDH检测、琼脂糖凝胶电泳、乙肝HBsAg测定等方法来确定GFP对细胞生长和增殖的影响,从而以判断GFP是否具有毒性;结果表明GPF能在Hep 3B中表达,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光,且表达GFP的细胞生长与增殖均未受到影响;亦即GFP对Hep 3B没有毒性,有望作为理想的报道蛋白;为今后以GFP作为报道蛋白提供实验基础.

摘要： 近年来,随水母Aequora victoria来源的绿色荧光蛋白(green flurescent protein,GFP),由238个氨基酸组成,稳定发蓝、绿色荧光,GFP作为一种新型的报道蛋白在生物学界引起了广泛的关注,它已吸引了从生命科学(包括细胞生物学、分子生物学、发育生物学、遗传学及生物技术等)到生物医学及农学许多领域研究者的兴趣.为了探讨绿色荧光蛋白在真核细胞中的表达及其毒性问题,本文将这种真核表达载体质粒pEGFPL/CMV分别转染人脑胶质瘤细胞U251、人肝癌细胞Hep 3B、人膀胱癌细胞株T24和人小细胞肺癌株LTEP-P等几株肿瘤细胞;另外,还转染入正常细胞——原代地鼠肾细胞以全面了解GFP的表部及其对细胞生长是否有影响——即GFP对细胞是否具有毒性;并以Hep 3B细胞为例展开阐述.我们将质粒pEGFPL/CMV以质体DOTAP为介导,转染到Hep 3B细胞中,经台盼蓝染色计数、荧光显微镜观察、MTT检测、吖啶橙染色、LDH检测、琼脂糖凝胶电泳、乙肝HBsAg测定等方法来确定GFP对细胞生长和增殖的影响,从而以判断GFP是否具有毒性;结果表明GPF能在Hep 3B中表达,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光,且表达GFP的细胞生长与增殖均未受到影响;亦即GFP对Hep 3B没有毒性,有望作为理想的报道蛋白;为今后以GFP作为报道蛋白提供实验基础.

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摘要： 近年来,随水母Aequora victoria来源的绿色荧光蛋白(green flurescent protein,GFP),由238个氨基酸组成,稳定发蓝、绿色荧光,GFP作为一种新型的报道蛋白在生物学界引起了广泛的关注,它已吸引了从生命科学(包括细胞生物学、分子生物学、发育生物学、遗传学及生物技术等)到生物医学及农学许多领域研究者的兴趣.为了探讨绿色荧光蛋白在真核细胞中的表达及其毒性问题,本文将这种真核表达载体质粒pEGFPL/CMV分别转染人脑胶质瘤细胞U251、人肝癌细胞Hep 3B、人膀胱癌细胞株T24和人小细胞肺癌株LTEP-P等几株肿瘤细胞;另外,还转染入正常细胞——原代地鼠肾细胞以全面了解GFP的表部及其对细胞生长是否有影响——即GFP对细胞是否具有毒性;并以Hep 3B细胞为例展开阐述.我们将质粒pEGFPL/CMV以质体DOTAP为介导,转染到Hep 3B细胞中,经台盼蓝染色计数、荧光显微镜观察、MTT检测、吖啶橙染色、LDH检测、琼脂糖凝胶电泳、乙肝HBsAg测定等方法来确定GFP对细胞生长和增殖的影响,从而以判断GFP是否具有毒性;结果表明GPF能在Hep 3B中表达,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光,且表达GFP的细胞生长与增殖均未受到影响;亦即GFP对Hep 3B没有毒性,有望作为理想的报道蛋白;为今后以GFP作为报道蛋白提供实验基础.

摘要： 近年来,随水母Aequora victoria来源的绿色荧光蛋白(green flurescent protein,GFP),由238个氨基酸组成,稳定发蓝、绿色荧光,GFP作为一种新型的报道蛋白在生物学界引起了广泛的关注,它已吸引了从生命科学(包括细胞生物学、分子生物学、发育生物学、遗传学及生物技术等)到生物医学及农学许多领域研究者的兴趣.为了探讨绿色荧光蛋白在真核细胞中的表达及其毒性问题,本文将这种真核表达载体质粒pEGFPL/CMV分别转染人脑胶质瘤细胞U251、人肝癌细胞Hep 3B、人膀胱癌细胞株T24和人小细胞肺癌株LTEP-P等几株肿瘤细胞;另外,还转染入正常细胞——原代地鼠肾细胞以全面了解GFP的表部及其对细胞生长是否有影响——即GFP对细胞是否具有毒性;并以Hep 3B细胞为例展开阐述.我们将质粒pEGFPL/CMV以质体DOTAP为介导,转染到Hep 3B细胞中,经台盼蓝染色计数、荧光显微镜观察、MTT检测、吖啶橙染色、LDH检测、琼脂糖凝胶电泳、乙肝HBsAg测定等方法来确定GFP对细胞生长和增殖的影响,从而以判断GFP是否具有毒性;结果表明GPF能在Hep 3B中表达,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光,且表达GFP的细胞生长与增殖均未受到影响;亦即GFP对Hep 3B没有毒性,有望作为理想的报道蛋白;为今后以GFP作为报道蛋白提供实验基础.

摘要： 近年来,随水母Aequora victoria来源的绿色荧光蛋白(green flurescent protein,GFP),由238个氨基酸组成,稳定发蓝、绿色荧光,GFP作为一种新型的报道蛋白在生物学界引起了广泛的关注,它已吸引了从生命科学(包括细胞生物学、分子生物学、发育生物学、遗传学及生物技术等)到生物医学及农学许多领域研究者的兴趣.为了探讨绿色荧光蛋白在真核细胞中的表达及其毒性问题,本文将这种真核表达载体质粒pEGFPL/CMV分别转染人脑胶质瘤细胞U251、人肝癌细胞Hep 3B、人膀胱癌细胞株T24和人小细胞肺癌株LTEP-P等几株肿瘤细胞;另外,还转染入正常细胞——原代地鼠肾细胞以全面了解GFP的表部及其对细胞生长是否有影响——即GFP对细胞是否具有毒性;并以Hep 3B细胞为例展开阐述.我们将质粒pEGFPL/CMV以质体DOTAP为介导,转染到Hep 3B细胞中,经台盼蓝染色计数、荧光显微镜观察、MTT检测、吖啶橙染色、LDH检测、琼脂糖凝胶电泳、乙肝HBsAg测定等方法来确定GFP对细胞生长和增殖的影响,从而以判断GFP是否具有毒性;结果表明GPF能在Hep 3B中表达,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光,且表达GFP的细胞生长与增殖均未受到影响;亦即GFP对Hep 3B没有毒性,有望作为理想的报道蛋白;为今后以GFP作为报道蛋白提供实验基础.

摘要： 本发明涉及一种针对绿色荧光蛋白的纳米抗体，所述抗体具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本纳米抗体是一种可以与GFP特异性结合的单域抗体重链抗体(即纳米抗体)，可以用于GFP及GFP融合蛋白的检测及纯化，例如用于制备检测和纯化GFP的试剂和工具等。

摘要： 本发明提供了一种基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统。该组用于检测待测蛋白是否相互作用的融合蛋白，为如下1)和2)：1)由荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号组成；2)由荧光蛋白B、待测蛋白B和核定位信号组成；所述荧光蛋白A与所述荧光蛋白B为发不同颜色荧光的荧光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段与2)所示融合蛋白片段分别独立包装；所述待测蛋白A和待测蛋白B是待检测是否相互作用的两个蛋白。本发明方法检测结果可靠，操作简单，一目了然地看到共定位现象，易于判别，方便快捷。

摘要： 本发明公开了一种用于绿色荧光蛋白(GFP)的荧光定量检测方法。其主要特征在于：(1)光学检测系统采用了半透半反镜与光纤相结合的方法，确保了检测灵敏度，同时降低了系统复杂度；(2)激发光源采用了LED，荧光检测采用了光敏二极管，有效降低了系统体积与成本；(3)GFP定量采用了实时定标的方法，通过实时的定标模型来克服由标准品或检测系统带来的系统误差，确保了检测精度。所述的GFP荧光定量检测方法，在一个高通量荧光检测平台上实现，其主要特征在于，通过两维运动平台，实现96孔检测板中，单个孔位的定位与检测。本发明涉及的GFP荧光检测方法及系统具有灵敏度高、定量准确等特点，为基于GFP的标志物检测提供了一条简便、可靠的途径。

摘要： 本发明公开了一种针对绿色荧光蛋白GFP的纳米抗体，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。本发明公开了纳米抗体基因序列及宿主细胞，纳米抗体是一种可以与GFP特异性结合的单域抗体重链抗体(即纳米抗体，下同)，也能够在大肠杆菌内高效表达，可应用于GFP及GFP融合蛋白的纯化及检测。

摘要： 本发明涉及一种针对绿色荧光蛋白的纳米抗体，所述抗体具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本纳米抗体是一种可以与GFP特异性结合的单域抗体重链抗体(即纳米抗体)，可以用于GFP及GFP融合蛋白的检测及纯化，例如用于制备检测和纯化GFP的试剂和工具等。

摘要： 本发明涉及基因沉默技术领域，特别涉及一种靶向抑制绿色荧光蛋白GFP基因表达的siRNA序列。本发明设计鱼类siRNA序列，本发明所设计的针对GFP蛋白的siRNA序列在鱼类细胞系(CIK)中能够利用RNAi机制高效的抑制GFP蛋白的表达。

摘要： 本发明提供一种表达绿色荧光蛋白的尖孢镰刀菌西瓜专化型菌株FON-GFP及其制备方法和应用，提供带有绿色荧光蛋白的真菌表达载体，该载体含有潮霉素B抗性基因hph和绿色荧光蛋白基因gfp，采用农杆菌介导法将该载体转化尖孢镰刀菌西瓜专化型菌株race1，转化子能够表达绿色荧光蛋白，将转化菌株分别侵染嫁接砧木和西瓜的根，通过实时监测荧光菌株来准确分析尖孢镰刀菌西瓜专化型菌在植株根和下胚轴组织中的侵染情况。本发明具有快速简便且可以实时指示尖孢镰刀菌西瓜专化型菌侵染途径的特点，且本发明提供的方法适用于多种丝状真菌，可广泛应用于科研领域。

摘要： 本发明涉及一种瘤胃绿色荧光蛋白GFP基因工程菌及其构建方法和应用。所述瘤胃绿色荧光蛋白GFP基因工程菌，是含有原核表达载体pET15b-EGFP的瘤胃溶纤维丁酸弧菌；所述原核表达载体pET15b-EGFP是将增强型绿色荧光蛋白EGFP基因亚克隆连接入原核表达载体pET15b的BamH1位点而得到。本发明的瘤胃绿色荧光蛋白GFP基因工程菌可用于瘤胃微生态微循环消化代谢检测。利用GFP基因进行基因操作、标记目标蛋白，即可通过这种生物“摄像头”实时监控靶蛋白的时间、空间变化。

摘要： 本发明提供了一种基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统。该组用于检测待测蛋白是否相互作用的融合蛋白，为如下1)和2)：1)由荧光蛋白A、待测蛋白A和核输出信号组成；2)由荧光蛋白B、待测蛋白B和核定位信号组成；所述荧光蛋白A与所述荧光蛋白B为发不同颜色荧光的荧光蛋白；所述1)所示融合蛋白片段与2)所示融合蛋白片段分别独立包装；所述待测蛋白A和待测蛋白B是待检测是否相互作用的两个蛋白。本发明方法检测结果可靠，操作简单，一目了然地看到共定位现象，易于判别，方便快捷。

摘要： 本发明提供了一种跟踪原发肿瘤转移进展的方法,该方法包括取出脊椎动物的新鲜器官组织,所述动物经修饰已经含有表达GFP的肿瘤细胞,观察切取的组织中有否荧光。也可以原位观察荧光。含有产生GFP的肿瘤的脊椎动物主体可用作研究肿瘤转移机制的模型。此外,可以处理已经具有肿瘤的动物,将内源性肿瘤修饰成含有GFP。这可以用于临床。最后,给含有GFP－标记的肿瘤的动物注射对比染料可以直接观察肿瘤内的血管形成。