新孢子虫

摘要： 弓形虫和新孢子虫是两种亲缘关系接近的顶复亚门原虫,二者之间存在一定程度的交叉免疫保护作用,这种作用可能是基于交叉反应抗原产生的。本研究旨在表达并鉴定弓形虫和新孢子虫的交叉反应抗原TgMIC17A,通过将其应用于小鼠的免疫保护试验,评估该抗原对弓形虫和新孢子虫感染产生的交叉免疫保护作用。对TgMIC17A进行基因克隆和原核表达,通过免疫印迹试验鉴定其反应原性和交叉反应性。重组蛋白免疫小鼠后测定血清特异性IgG抗体水平,评价其免疫原性。二免后,分别用1×10^(3)个弓形虫Pru速殖子、1.5×10^(7)个新孢子虫Nc1速殖子攻虫,对小鼠的体重变化、存活率进行监测,并在攻虫30 d后检测各组存活小鼠的脑荷虫量,评价TgMIC17A重组蛋白免疫小鼠后对弓形虫和新孢子虫的交叉免疫保护效果。结果显示,rTgMIC17A可以被弓形虫和新孢子虫的阳性血清识别,相较于未免疫组小鼠,免疫组小鼠体内可产生高水平特异性IgG抗体(P<0.01),且感染弓形虫或新孢子虫的脑荷虫量均显著降低(P<0.01)。本研究克隆并表达了TgMIC17A,鉴定其为新孢子虫和弓形虫的交叉反应抗原。该抗原可以刺激小鼠产生较好的体液免疫反应,并对弓形虫和新孢子虫的感染产生一定的交叉免疫保护作用,可以为弓形虫和新孢子虫共感染的防治,以及筛选具有交叉免疫保护力的重组疫苗提供可借鉴的研究资料。

摘要： 为估计新疆和静县巴音布鲁克羊新孢子虫流行率,了解其在羊群中的感染情况,通过横断面研究方法,采用两阶段抽样策略,在和静县下辖的12个乡镇中抽取67个养殖场点,采集1340份血清样品,使用间接ELISA方法检测新孢子虫抗体;通过问卷调查,分析群间传播相关风险因素。抗体检测结果显示,和静县巴音布鲁克羊新孢子虫感染的群表观流行率为32.84%(95%CI:21.85%~45.40%),真实流行率为36.05%(95%CI:24.93%~49.93%);12个乡镇中,有8个检出阳性场群。对问卷调查结果,进行卡方检验和Logistic回归分析发现,“饲养方式为舍饲”“建厂时间在6年以上”和“圈舍没有消毒”等因素具有统计学意义(P<0.05),为养殖场感染新孢子虫的主要风险因素。结果表明:新孢子虫在和静县巴音布鲁克羊群中流行普遍,流行范围较广;长时间舍内饲养、建厂时间久、卫生消毒管理差是导致新孢子虫流行的主要风险因素。因此,提高养殖场户饲养管理水平,定期对圈舍进行消毒并保证一定的空圈时间,可降低新孢子虫的感染风险。

摘要： 犬新孢子虫(Neospora caninum,简称新孢子虫)由Dubey等于1988年鉴定并命名[1],是多种动物共患原虫,终末宿主是犬科动物,中间宿主是包括犬在内的多种温血动物,主要寄生于中枢神经系统、肌肉组织和视网膜等器官组织的有核细胞中。新孢子虫病已是公认的致牛流产的主要原因之一。新孢子虫隶属于顶复合器亚门、真球虫目、肉孢子虫科、新孢子虫属,如图1所示,其具有该类原虫的三大重要的分泌细胞器,即微线体、棒状体和致密颗粒,是虫体分泌蛋白的主要来源,虫体的表面蛋白和其他分泌排泄产物也是重要的分泌蛋白。

摘要： 新孢子虫病是一种危害世界养牛业的重要动物原虫病,其病原为顶复门寄生原虫新孢子虫,主要造成牛、羊等反刍动物的流产。目前缺少可以用来预防或治疗新孢子虫病的疫苗和药物,究其原因,主要是由于对新孢子虫致病机制的认识有限。研究表明,新孢子虫感染导致流产的机制与母胎界面的炎症以及感染刺激宿主细胞介导的免疫反应有关。先天免疫反应中的模式识别受体在识别新孢子虫感染中起着关键作用,并进一步激活下游的多种级联信号通路;适应性免疫中的Th1型细胞免疫在抗新孢子虫入侵以及清除新孢子虫中也发挥着至关重要的作用。论文主要综述模式识别受体、先天免疫途径以及细胞免疫等在宿主抵抗新孢子虫感染中的研究进展,以期为后续新孢子虫致病机制的深入研究及防控措施的开发提供参考。

摘要： 为确定双氢青蒿素体外抑制新孢子虫和弓形虫的作用效果,该试验在开展双氢青蒿素细胞毒性试验的基础上,对新孢子虫和弓形虫进行了体外抑制试验,同时与青蒿素、桦褐孔菌多糖、黄芩苷、乙胺嘧啶等药物进行了比较.结果表明:双氢青蒿素与青蒿素、桦褐孔菌多糖、黄芩苷、乙胺嘧啶均对新孢子虫和弓形虫有抑制作用,尤其双氢青蒿素在质量浓度为20 mg/L时,抑制新孢子虫和弓形虫作用效果明显,其对新孢子虫抑制率为97.69％,对弓形虫抑制率为86.56％.而青蒿素、桦褐孔菌多糖、黄芩苷、乙胺嘧啶在高浓度时抑虫效果相当.该研究结果表明,双氢青蒿素具有较好抑制新孢子虫和弓形虫作用,可作为抑制2种虫体的候选药物.

摘要： 犬新孢子虫是牛流产的重要原因之一.为查清尼勒克县规模化养殖的牛群出现流产的原因,本文应用PCR检测方法,以新孢子虫NC5为诊断靶基因,对采自流产多发地—某乡8个养殖户的共计260份牛全血DNA进行诊断,并测序.结果显示,成功获得了231bp目的片段,新孢子虫病总感染率为5.0％;构建的系统发育树中,本株与Genbank上传的瑞士株(登录号:X84238)、英国株(登录号:DQ07766)亲缘关系较近,置信度达97％,说明新孢子虫病是导致牛群发生流产的主要原因之一.本次调查结果不仅为该地区的养牛业新孢子虫病的防控提供了基础数据,而且有利于当地兽医工作者建立一套符合当地实际情况的综合防制体系.

摘要： 为探究TLR3是否参与了新孢子虫致小鼠胎盘的炎性损伤,本试验将2×106新孢子虫Nc-1株速殖子通过腹腔注射给怀孕7.5 d的C57BL/6小鼠,利用病理组织切片、免疫组化和荧光定量PCR等方法检测小鼠胎盘组织中TLR3及其相关细胞因子表达水平。结果显示,在小鼠感染新孢子虫后第2、5、8 d小鼠胎盘组织分别出现了不同程度的坏死、炎性细胞浸润和细胞核变形崩解等病理损伤;免疫组化结果显示,新孢子虫感染组的小鼠胎盘内巨细胞层、海绵滋养层和迷路滋养层细胞TLR3的表达量均明显增多;荧光定量PCR结果显示,感染组小鼠胎盘中TLR3 m RNA的表达量显著高于对照组(P<0.05),是对照组的2.5~4倍,与免疫组化检测结果基本一致;感染组小鼠胎盘中TNF-α、IFN-γ和IL-2 m RNA的相对表达水平分别是对照组的1.5~3倍、4~5倍和2~3倍,差异均显著(P<0.05)。结论,新孢子虫感染可显著上调小鼠胎盘内TLR3的表达量,进而使TLR3介导的炎性细胞因子的表达量升高,参与新孢子虫致怀孕小鼠胎盘的炎性损伤,该研究为进一步揭示新孢子虫的致病机理提供了重要数据。

摘要： 牛新孢子虫病是一种在全球范围内广泛存在的牛寄生虫疾病,其病原为全新孢子虫。患病牛主要表现为运动障碍,有神经系统症状,怀孕母牛流产或娩出死胎,对养牛业的危害较大。该文介绍了牛新孢子虫病的病原学、临床症状、诊断及检测方法及综合防治措施,意在帮助广大饲养管理人员正确认识这一疾病并加以预防,从根本上降低牛新孢子虫病的发病率。

摘要： 根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因.将该基因克隆至pET-30a(+)质粒中构建重组蛋白质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool原核表达载体,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化及SDS-PAGE和Western blot验证.以0.75 mg/mL的SPA做金标抗原,用纯化后浓度为1 mg/mL的重组蛋白和牛IgG分别做检测线和质控线,建立了检测新孢子虫抗体的胶体金免疫层析检测方法(CGIA).重组质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool双酶切验证结果显示,在636 bp的位置有条带,说明重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小为39.32 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可与新孢子虫阳性血清特异性识别,表明重组蛋白有较强的反应原性;特异性试验结果显示,新孢子虫CGIA与弓形虫、肝片吸虫、包虫阳性血清不发生交叉反应;敏感性分析显示,GICA可检测出的Nc阳性血清最大稀释倍数为1:512;对92份牛血清样品进行检测,与商品化的新孢子虫ELISA检测试剂盒检测结果一致,表明建立的GICA准确性较高.综上所述,研究建立的基于新孢子虫Nc-livepoor基因胶体金免疫层析检测试纸条具有较高的灵敏性和特异性,可为新孢子虫病的诊断提供技术支撑.

摘要： 为了解绵羊住肉孢子虫、新孢子虫和弓形虫流行情况,从河南省焦作市某绵羊饲养村,采集了114个心脏、61个食道肌和131份血清样品.应用镜检法对心脏和食道样本进行住肉孢子虫包囊检测,PCR扩增18S rRNA进行住肉孢子虫虫种鉴定;应用间接ELISA法检测新孢子虫和弓形虫血清抗体.结果 显示,分离的住肉孢子虫均为柔嫩住肉孢子虫;住肉孢子虫阻性率为39.47％(45/114),新孢子虫血清阳性率为57.25％(76/131),弓形虫血清阳性率为21.37％(28/131),三者混合感染率为7.89％ (9/114).表明3种原虫感染在该绵羊群体中普遍流行,提示在绵羊饲养时要制定有效的防控措施.

摘要： 本研究通过对新孢子虫基因组数据库的分析、筛选,发现并调取了NCLIV_069640基因,进一步分析发现,NCLIV_069640基因大小为2565bp,有一个开放性阅读框,无内含子,包含1个信号肽及4个跨膜区.大部分氨基酸暴露在蛋白表面,推测具有良好的抗原性.对该基因进行原核表达和纯化,得到与GST融合表达的NCLIV_069640重组蛋白.免疫BALB/c小鼠,制备高滴度抗血清,经Western-blot鉴定,在虫体裂解上清中发现有91KD反应条带,与预测大小相符；应用IFA确定NCLIV_069640定位于新孢子虫表面,为一种新的跨膜蛋白.真核细胞的跨膜蛋白一般在其生命活动中发挥着重要作用,推测该蛋白在新孢子虫的侵入、发育和繁殖中具有重要功能,对其功能的相关研究尚在进行之中.

摘要： 本研究拟通过表达TgROP18的转染质粒,转入新孢子虫,建立TgROP18转基因新孢子虫,观察、检测转基因新孢子虫的生物学特性,明确表达TgROP18的新孢子虫活性、毒力等生物学功能是否发生变化,为进一步阐明弓形虫与新孢子虫之间毒力差异的分子机制奠定基础.首先在GenBank上调取弓形虫RH株的TgROP18基因序列,利用该序列登陆Sanger网进行Blast,获得新孢子虫中与TgROP18基因序列同源性最高的核苷酸序列,并对TgROP18及NcROP18序列进行比较分析.随后通过Overlap PCR扩增TgROP18,对序列中的EcoRV酶切位点进行同义突变.本研究成功构建了表达TgROP18的转基因新孢子虫,为下一步研究转基因新孢子虫表型特征和弓形虫与新孢子虫毒力差异的分子机制奠定基础.

摘要： 本研究通过ToxoDB数据库和生物信息学方法获得一个与弓形虫致密颗粒基因(TgGRA14)较高同源的新孢子虫基因,对该新基因进行克隆、测序,并命名为新孢子虫GRA 14(NcGRA 14).为研究新孢子虫GRA 14在入侵宿主细胞时的分泌表达和定位情况,通过原核表达NcGRA14并制备鼠源多抗,以Western blot对该蛋白进行虫体内源性鉴定,以间接免疫荧光技术对该蛋白在虫体入侵不同时间段分泌情况进行定位,以小鼠为实验动物模型评价NcGRA 14核酸疫苗抵抗新孢子虫感染免疫保护性.研究结果发现新孢子虫虫体存在内源性NcGRA14.胞外定位结果显示在虫体两端及胞浆中都存在NcGRA 14,胞内定位结果发现该蛋白可分泌到纳虫空泡腔.RT-PCR检测脑组织荷虫量发现其核酸疫苗能起到一定免疫保护作用.

摘要： 通过与弓形虫等其他顶复亚门原虫进行比较分析,锚定新孢子虫的MIC6、MIC7、MIC 11展开研究.根据ToxoDB数据库中已登录的NCLIV_061760、NCLIV_025710、NCLIV_020720三个基因序列,设计特异性引物.提取Nc-l株的DNA或RNA,扩增新孢子虫MIC6、MIC7、MICll基因,序列分析发现:MIC6基因全长984bp,编码327个氨基酸,分子量约为34kDa,无明显信号肽,含有一个跨膜区和两个表皮生长因子样结构域；MIC7基因全长4512bp,开放阅读框为1023bp,编码340个氨基酸,分子量约为36kDa,无信号肽,有一个跨膜区和四个表皮生长因子样结构域；MIC11基因全长963bp,开放阅读框为612bp,编码203个氨基酸,分子量约为22kDa,有一个明显的信号肽,无跨膜区.将MIC6基因插入pET28a,MIC7、MIC11基因插入pGEX4T-1,构建原核表达载体,诱导表达,分析、纯化蛋白,所获得的MIC6、MIC7、MIC 11重组蛋白分子量分别约为45kDa、60kDa和40kDa.分别以重组蛋白免疫Balb/c小鼠和新西兰大白兔,制备鼠源和兔源多抗血清,Western Blot检测发现多抗血清均能与新孢子虫全虫抗原发生反应.间接免疫荧光检测发现细胞内虫体的MIC6、MIC7和MIC11均定位在虫体前端,呈弥散性分布；而游离新孢子虫的MIC6、MIC7和MIC11都均匀分布于虫体表面.三种MIC蛋白在细胞内外均与MIC3共定位.本研究首次报道新孢子虫MIC6、MIC7、MIC11的基因序列,并对三种蛋白在细胞内、外的虫体的表达和定位进行了初步研究,为进一步研究其功能奠定基础.

摘要： 新孢子虫病是由犬新孢子虫(Neospora caninum)引起的一种世界范围内流行的多种动物共患的原虫病。该病能给畜牧业造成严重的经济损失，给人类健康带来潜在威胁。本研究证实了新孢子虫感染在某牛场爆发的未知原因流产中的决定性作用。通过3次连续采样研究，分析了封闭牛场中新孢子虫血清抗体变化规律。通过母-犊血清学关系比较，计算出在该牛场中表观垂直传播率和表观水平传播率分别为73.2％和37.6％。在对该牛场奶牛进行家族谱系研究的基础上，分析推论若干年前该牛场奶牛曾经历过外源性的新孢子虫感染且持续存在。确认了水平传播在该牛场中的存在。对封闭牛场中新孢子虫病的传播途径及其扩散情况进行了分析评估，了解了国内牛场中新孢子虫病传播模式，为该病的防控提供了必要的信息。

摘要： 为了解新孢子虫病在奶牛流产中所起作用,了解流产胎儿体内新孢子虫的分布情况,对北京等地区奶牛的流产胎儿脏器进行巢式PCR检测.将流产胎牛的检测结果与对母牛的血清ELISA检测结果进行对比.结果:流产胎儿体内新孢子虫DNA检出率高达58％,脑组织的检出率最高,高达85．7％,其次是肾脏和肌肉.对流产母牛追踪调查的ELISA结果显示阳性率为36．8％,与PCR检测符合率仪70％.提示因新孢子虫感染引起的奶牛流产,仅通过血清抗体检测未必能够作出准确诊断,利用巢式PCR对组织中新孢子虫DNA的检测可能比母牛血清抗体的检测更准确,是检测奶牛新孢子虫病的有效工具.

摘要： 犬新孢子虫病是一类新发现的、严重危害养殖业的原虫性人畜共患寄生虫病,能引起妊娠母畜的流产和死胎,使新生儿患有严重的精神性疾病。本文主要从病原、生活史、病理变化等方面对犬新孢子虫病进行论述。

摘要： 本研究扩增获得GRA 11和GRA6,测序与结构分析发现,GRA 11基因全长2322bp,无内含子,分子量约为82.817kDa,共有碱性氨基酸121个,酸性氨基酸99个,存在信号肽和跨膜区；GRA6全长为582-bp,无内含子,分子量约为19kDa,存在信号肽和跨膜区.分别将GRA 11和GRA6插入原核表达载体pE-T28a和pGEX-6p-1,表达、纯化蛋白,经鉴定后,分别免疫BABL/c小鼠,获得两种蛋白的高滴度多抗血清.应用间接免疫荧光方法进行虫体内蛋白定位发现,GRA 11蛋白定位在纳虫空泡膜上,GRA6蛋白在整个虫体内均有分布.构建真核表达载体pcDNA3.1-GRA11和pcDNA3.1-GRA6,转染HEK293T细胞鉴定.分别用重组蛋白和真核表达质粒免疫小鼠,检测抗体水平；免疫后2周攻虫(106/只),应用Realtime PCR检测攻虫1个月后小鼠脑内荷虫量.与对照组相比,免疫小鼠产生高水平的特异性抗体,免疫后攻虫小鼠脑内荷虫量明显降低.说明该两种蛋白具有较好的免疫原性.

摘要： 为构建应用于酵母双杂交系统的牛肝脏组织cDNA文库,试验提取牛肝脏组织的总RNA,运用SMA-RT和LD-PCR技术合成cDNA,并与文库线性载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187中,构建酵母双杂交c-DNA文库.文库滴度高达5×108cfu/mL,插入片段集中在1-2 kb之间,具有较好的多态性,随机挑取的20个克隆测定重组率为90％.较高的库容量、较长的插入片段以及较高的重组率保证了文库的完整性和覆盖度.本试验为进一步研究新孢子虫早期感染状况下的重要蛋白与宿主蛋白发生的相互作用奠定了基础.

摘要： 公开了对于易感染或者已患有能用三嗪酮化合物治疗的诸如肉孢子虫病或弓形虫病等神经性或致流产性疾病的动物进行治疗性或病后预防性治疗的方法，该方法是向动物施用药学有效量的Ponazuril，包括单次高剂量治疗。

摘要： 公开了对于易感染或者已患有能用三嗪酮化合物治疗的诸如肉孢子虫病或弓形虫病等神经性或致流产性疾病的动物进行治疗性或病后预防性治疗的方法,该方法是向动物施用药学有效量的Ponazuril,包括单次高剂量治疗。

摘要： 这里公开的是易患或已患寄生虫性神经病学疾病或致流产疾病例如肉孢子虫病(Sarcocystidiae)或弓形体病(Toxoplasmosis)的受感染动物的治疗性或准预防性处理方法,该疾病可用三嗪酮化合物类处理,即向其给药某一医药上有效量的该化合物,包括单一高剂量治疗性处理。

摘要： 治疗或补救性预防易受感染哺乳动物或被感染哺乳动物患有寄生虫引起的神经性或流产性疾病，例如肉孢子虫病、新孢子虫病或弓形虫病、等孢子虫病的组合物和方法，所述疾病可用一种吡喹酮化合物进行治疗，通过服用含药物有效量的吡喹酮或其衍生物的组合物，包括补救性预防和一次性大剂量治疗方案。

摘要： 本发明公开了治疗性或预防性治疗敏感感染动物或感染动物中由肉孢子虫、新孢子虫或弓形虫引起的寄生虫性神经病学或流产遗传学疾病的方法，这些疾病可以用三嗪酮类化合物通过施用药学有效量的化合物来治疗，包括单一高剂量治疗。

摘要： 本发明提供同时预防新孢子虫和弓形虫感染的疫苗、编码该疫苗抗原的核苷酸序列以及该疫苗的制备方法和应用。该疫苗抗原的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2及SEQ.ID.NO.4所示。该疫苗的制备方法具体为根据新孢子虫AMA1基因序列和弓形虫AMA1基因序列的开放阅读框，设计新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因的通用引物，构建pMD18‑T‑Nc/TgAMA1重组克隆质粒、重组腺病毒穿梭质粒pCR259‑Nc/TgAMA1及表达质粒H294‑Nc/TgAMA1，脂质体介导转染QBI‑HEK293细胞包装Ad5‑Nc/TgAMA1重组腺病毒，扩增、纯化制备Ad5‑Nc/TgAMA1重组腺病毒载体疫苗。

摘要： 本发明公开一种牛新孢子虫病与弓形虫病的内标多重PCR检测试剂盒，在双重PCR反应体系中引入指示假阴性的内标，通过引物设计和PCR扩增，经反应条件优化，反应条件为：dNTP 浓度为2.0 mmol/L，Mg

摘要： 治疗或补救性预防易受感染哺乳动物或被感染哺乳动物患有寄生虫引起的神经性或流产性疾病，例如肉孢子虫病、新孢子虫病或弓形虫病、等孢子虫病的组合物和方法，所述疾病可用一种吡喹酮化合物进行治疗，通过服用含药物有效量的吡喹酮或其衍生物的组合物，包括补救性预防和一次性大剂量治疗方案。

摘要： 本发明公开了治疗性或预防性治疗敏感感染动物或感染动物中由肉孢子虫、新孢子虫或弓形虫引起的寄生虫性神经病学或流产遗传学疾病的方法,这些疾病可以用三嗪酮类化合物通过施用药学有效量的化合物来治疗,包括单一高剂量治疗。

摘要： 本发明公开了检测弓形虫和新孢子虫抗体的二联胶体金试纸条。本发明提供了一种检测弓形虫和/或新孢子虫的二联胶体金试纸条。本发明提供的二联胶体金试纸条，包括底板和放置在其上的样品垫、包被有金标蛋白的金标垫、含有检测线T1、检测线T2和质控线C的硝酸纤维素膜和吸水垫；本发明的实验证明，本发明制备一种二联胶体金试纸条，可同时检测出动物体内弓形虫和新孢子虫的血清抗体，便于对动物的两种原虫感染进行鉴别诊断，节约成本，操作简便，适用于检测猪、犬、猫等动物。