牛肝脏组织酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

摘要

为构建应用于酵母双杂交系统的牛肝脏组织cDNA文库,试验提取牛肝脏组织的总RNA,运用SMA-RT和LD-PCR技术合成cDNA,并与文库线性载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187中,构建酵母双杂交c-DNA文库.文库滴度高达5×108cfu/mL,插入片段集中在1-2 kb之间,具有较好的多态性,随机挑取的20个克隆测定重组率为90％.较高的库容量、较长的插入片段以及较高的重组率保证了文库的完整性和覆盖度.本试验为进一步研究新孢子虫早期感染状况下的重要蛋白与宿主蛋白发生的相互作用奠定了基础.