摘要：根据犬瘟热病毒(CDV)血凝素基因(H)的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,提取CDV弱毒疫苗株的总RNA后,进行RT-PCR,PCR产物经纯化后与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒,用HindⅢ酶切,经Klenow补平,再用BamH l将H片段切下并回收后克隆到BamH l/EcoR V双酶切的真核表达载体pIRES中,得到重组质粒pIRCDV-H并进行了序列测定。免疫质粒经纯化后对5只犬进行免疫,以空质粒为阴性对照,8周接种一次,每次接种前采血,测定血清的抗体效价,在第三次接种4周后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7天及14天时采血,测定血清的抗体效价。接种pIRCDV-H疫苗的犬,两次免疫后即可产生较高的抗体水平,攻毒后大部分能抵抗CDV强毒的攻击,虽有发病,但症状较轻,而接种空质粒的对照犬发病严重,证明所构建的核酸疫苗在一定程度上可抵抗CDV强毒的攻击。
