STAT

摘要： 背景:干细胞以旁分泌或远距分泌的方式对炎症反应产生调节作用,是干细胞移植治疗疾病的主要机制之一.移植的干细胞分泌大量生物活性分子,如转化生长因子β、前列腺素E2、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α-刺激基因-6蛋白(tumor necrosis factorαstimulating gene-6 protein,TSG-6)等,影响单核/巨噬细胞从促炎M1表型转化为抑炎M2表型,协调促炎和抗炎因子的平衡,是其调节炎症反应的重要机制,而目前干细胞分泌因子促进单核/巨噬细胞亚型转化的作用机制尚不明确.目的:探讨人脐血间充质干细胞分泌的生物活性分子之一TSG-6对小鼠骨髓来源巨噬细胞表型变化及炎症因子水平的影响,并探究TSG-6蛋白介导的巨噬细胞M2极化的机制.方法:①无菌提取6-8周龄Balb/c小鼠骨髓单核细胞,脂多糖及干扰素γ诱导为M1巨噬细胞,分M1(M1)、MT(M1+rhTSG-6)、MM(M1+MSCs)、MMsi(M1+MSCs+TSG-6siRNA)4组共培养3 d,收集巨噬细胞和上清液,流式检测巨噬细胞表型比例;ELISA检测炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素12、肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1、白细胞介素10、TSG-6水平;Western blot检测巨噬细胞极化相关p/t-STAT1/3/6及TSG-6水平;RT-PCR检测精氨酸酶1、白细胞介素10、诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α的mRNA表达.②阻断M1表面CD44:分M1(M1)、MT(M1+rhTSG-6)、bMT(M1+TSG-6+blkCD44组)、MM(M1+MSCs)、bMM(M1+MSC+blkCD44组)5组共培养3 d,Western blot检测各组细胞CD44、p/t-STAT1/3/6水平;RT-PCR检测CD44、STAT1/3/6 mRNA和目的基因表达水平;流式分析阻断CD44后TSG-6黏附阳性M1巨噬细胞.结果 与结论:小鼠M1巨噬细胞加入rhTSG-6或与人脐血间充质干细胞共培养后观察到:①M1细胞减少、M2细胞增加、M1/M2下降(P<0.05);②促炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素12水平降低(P<0.05),抗炎症因子白细胞介素10、转化生长因子β1和TSG-6水平升高(P<0.05);③p/t-STAT1水平降低、p/t-STAT3/6水平升高(P<0.05);④肿瘤坏死因子α和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达降低,白细胞介素10 mRNA和精氨酸酶1 mRNA表达升高(P<0.05).阻断M1表面CD44后观察到:①TSG-6黏附阳性细胞比例降低(P<0.05);②CD44蛋白及mRNA表达下降(P<0.05);③p/t-STAT1、肿瘤坏死因子α及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达升高(P<0.05),p/t-STAT3/6 mRNA、白细胞介素10及精氨酸酶1 mRNA表达降低(P<0.01).因此,该研究阐述了人脐血间充质干细胞分泌的TSG-6以CD44依赖的方式影响STAT1/3/6信号通路介导巨噬细胞M1向M2亚型转化及炎症调节.

摘要： 背景:干细胞以旁分泌或远距分泌的方式对炎症反应产生调节作用,是干细胞移植治疗疾病的主要机制之一。移植的干细胞分泌大量生物活性分子,如转化生长因子β、前列腺素E2、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α-刺激基因-6蛋白(tumor necrosis factorαstimulating gene-6 protein,TSG-6)等,影响单核/巨噬细胞从促炎M1表型转化为抑炎M2表型,协调促炎和抗炎因子的平衡,是其调节炎症反应的重要机制,而目前干细胞分泌因子促进单核/巨噬细胞亚型转化的作用机制尚不明确。目的:探讨人脐血间充质干细胞分泌的生物活性分子之一TSG-6对小鼠骨髓来源巨噬细胞表型变化及炎症因子水平的影响,并探究TSG-6蛋白介导的巨噬细胞M2极化的机制。方法:①无菌提取6-8周龄Balb/c小鼠骨髓单核细胞,脂多糖及干扰素γ诱导为M1巨噬细胞,分M1(M1)、MT(M1+rhTSG-6)、MM(M1+MSCs)、MMsi(M1+MSCs+TSG-6siRNA)4组共培养3 d,收集巨噬细胞和上清液,流式检测巨噬细胞表型比例;ELISA检测炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素12、肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1、白细胞介素10、TSG-6水平;Western blot检测巨噬细胞极化相关p/t-STAT1/3/6及TSG-6水平;RT-PCR检测精氨酸酶1、白细胞介素10、诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α的mRNA表达。②阻断M1表面CD44:分M1(M1)、MT(M1+rhTSG-6)、bMT(M1+TSG-6+blkCD44组)、MM(M1+MSCs)、bMM(M1+MSC+blkCD44组)5组共培养3 d,Western blot检测各组细胞CD44、p/t-STAT1/3/6水平;RT-PCR检测CD44、STAT1/3/6 mRNA和目的基因表达水平;流式分析阻断CD44后TSG-6黏附阳性M1巨噬细胞。结果与结论:小鼠M1巨噬细胞加入rhTSG-6或与人脐血间充质干细胞共培养后观察到:①M1细胞减少、M2细胞增加、M1/M2下降(P<0.05);②促炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素12水平降低(P<0.05),抗炎症因子白细胞介素10、转化生长因子β1和TSG-6水平升高(P<0.05);③p/t-STAT1水平降低、p/t-STAT3/6水平升高(P<0.05);④肿瘤坏死因子α和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达降低,白细胞介素10 mRNA和精氨酸酶1 mRNA表达升高(P<0.05)。阻断M1表面CD44后观察到:①TSG-6黏附阳性细胞比例降低(P<0.05);②CD44蛋白及mRNA表达下降(P<0.05);③p/t-STAT1、肿瘤坏死因子α及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达升高(P<0.05),p/t-STAT3/6 mRNA、白细胞介素10及精氨酸酶1 mRNA表达降低(P<0.01)。因此,该研究阐述了人脐血间充质干细胞分泌的TSG-6以CD44依赖的方式影响STAT1/3/6信号通路介导巨噬细胞M1向M2亚型转化及炎症调节。

摘要： 葡萄膜炎是一种眼内炎症性疾病,其病因为传染性或自身免疫性,是世界可预防盲的主要原因之一。其病理改变为眼睛中持续产生炎症细胞、具有细胞毒性的细胞因子和其他免疫调节蛋白。该病最主要的治疗目标是下调免疫反应,减轻炎症反应,保持眼部结构的完整性,避免眼部永久性损伤。目前的治疗方法主要是在局部或全身皮质类固醇使用的基础上联合或不联合免疫调节药物。这些药物有严重的不良反应,所以需要我们进一步研究开发毒性较低的更具有针对性的葡萄膜炎治疗方式。本综述描述了葡萄膜炎的病理生理学,调节葡萄膜炎发生和发展的分子机制,并总结了治疗这类潜在致盲性疾病的新策略中的新兴生物制剂。

摘要： 目的探索联合激活AKT/mTOR和JAK/STAT信号通路对小鼠C;脊髓钳夹损伤后皮质脊髓束轴突再生和运动功能的影响。方法成年C;7/BL小鼠40只,随机分为磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)/细胞因子信号抑制物3(SOCS3)组(注射PTEN抑制病毒和SOCS3抑制病毒)、PTEN组(注射PTEN抑制病毒)、SOCS3组(注射SOCS3抑制病毒)与对照组(注射空载对照病毒),每组10只,所有小鼠均于感觉运动皮质区进行病毒注射。采用免疫荧光染色检测锥体神经元p-S6和p-STAT3的表达以明确通路激活情况。注射病毒2周后,对各组小鼠进行C;钳夹损伤,使用生物素化葡聚糖胺(BDA)顺行示踪皮质脊髓束。在损伤前及损伤后1、2、4、6周行水平楼梯和圆筒攀爬探索实验检测小鼠运动功能恢复情况。结果免疫荧光染色结果显示,腺相关病毒(AAV)成功转染感觉运动皮质锥体神经元。PTEN/SOCS3组和PTEN组皮质神经元p-S6表达明显增加,其荧光强度[分别为(25.429±2.991) AU、(26.171±2.140) AU]明显高于SOCS3组和对照组[分别为(9.544±2.474) AU、(9.558±1.650) AU],差异有统计学意义(P0.05)。结论联合激活AKT/mTOR和JAK/STAT信号通路可提高神经元轴突内源性再生能力,促进脊髓损伤小鼠轴突再生,但对其早期运动功能恢复的作用不明显。

摘要： 试验通过生物信息学技术对信号转导和转录激活子(signal transducer and activators of transcription,STATs)基因家族进行了motif、基因结构分析、共线性分析、不同物种系统进化分析和表达量分析,旨在挖掘水牛STAT基因家族的功能。结果表明,水牛STAT基因家族共有7个家族成员并分别命名为bbu.STAT1~6,其中bbu.STAT5分为bbu.STAT5A和bbu.STAT5B。bbu.STAT1和bbu.STAT4位于2号染色体,bbu.STAT2和bbu.STAT6位于4号染色体,bbu.STAT3、bbu.STAT5A和bbu.STAT5B位于3号染色体。这7个STAT蛋白长度在748~865 aa之间,等电点PI均小于7,说明水牛STAT蛋白均属于酸性蛋白质。基因结构分析发现不同的组具有不同的内含子数模式。Motif分析发现,除bbu.STAT2外,均含有预测出的motif 1~10且排序相同,说明水牛STAT基因家族成员蛋白功能相似。共线性分析结果显示,水牛和奶牛中均存在3对相同成员的STAT基因表现出串联重复且没有发现片段重复,推测串联复制在水牛和奶牛STAT家族的扩增中起着主导作用。发现2个水牛STAT基因对的Ka/Ks值小于0.5,且STAT5A-STAT5B小于0.1,说明该基因对具有更强的纯化选择压力。不同物种STAT系统发育分析显示,STAT基因家族具有较高的保守性,其中水牛与奶牛和牦牛的聚类更为相近。表达量分析发现所有STAT基因在乳腺组织中均有表达,其中STAT5A的表达量最高,STAT4的表达量最低,推测水牛STAT基因家族参与调控乳房发育及泌乳过程,其中STAT5A可能起更重要的作用。

摘要： The effect of resistance training and a herbal supplement on muscular signaling pathways are limited.We investigated the expression of IL-6,Gp130,JAK and STAT after resistance training,and Spirulina platensis supplementation in animal muscle.Thirty-two male Sprague Dawley rats(weight:290±20 g,and 9 weeks of age)were divided into four groups:control(CO;n=8),Spirulina platensis supplementation(SP;n=8),resistance exercise(RE;n=8),and Spirulina platensis+resistance exercise(SP+RE;n=8).The resistance exercise group trained five sessions each week for eight weeks.Spirulina 200 mg kg^(−1)d^(−1) was used in the SP and SP+RE groups.Gene expression was measured by real-time PCR following the last training session.One-way ANOVA test with Tukey’s post-hoc test were used for analysis of data(SPSS,version,21).Data analysis revealed that the expression of IL-6(P=0.001),Gp130(P=0.001),JAK(P=0.0001)and STAT(P=0.004)increased significantly in the RE group.The expression of IL-6(P=0.018),JAK(P=0.001)and STAT(P=0.001)in SP+RE group also increased significantly(P≤0.05).SP showed a significant increase in Gp130(P=0.001)and STAT(P=0.001).Supplementation by Spirulina platensis may enhance muscle accretion during resistance training.

摘要： 目的 观察苯磺酸芍药苷(代号CP-25)对实验性干燥综合征(experimental Sj?gren's Syndrome,ESS)小鼠模型的作用,探讨其作用机制是否通过调节GRK2与JAK1的结合,抑制JAK1-STAT1/2-CXCL13信号通路而发挥作用.方法 建立颌下腺蛋白诱导的ESS小鼠模型,分为正常组、模型组、浓度分别为35、70 mg·kg-1的CP-25组、浓度为80 mg·kg-1的羟氯喹组;检测小鼠唾液流率;ESS小鼠颌下腺做病理切片以观察淋巴细胞浸润情况;小鼠颌下腺中p-JAK1、p-STAT1、p-STAT2蛋白水平用Western blot测定;小鼠颌下腺中CXCL13的表达情况采用免疫组化法检测;免疫荧光及CO-IP法检测GRK2与JAK1的结合情况.结果 ESS小鼠唾液流率较正常组降低,颌下腺病理切片中淋巴细胞明显浸润,CXCL13蛋白表达升高,活化了JAK1-STAT1/2信号;CP-25能明显增加ESS小鼠唾液流率,降低淋巴细胞浸润,改善病理的异常表现,阻断JAK1-STAT1/2及CXCL13的表达;CP-25能明显促进GRK2与JAK1的结合.结论 CP-25可能通过促进GRK2与JAK1的结合,进而抑制JAK1-STAT1/2-CXCL13信号的激活,减少颌下腺淋巴细胞浸润,提高唾液流率,对ESS小鼠产生治疗作用.

摘要： 癌细胞表面能表达多种免疫抑制蛋白,程序性死亡分子受体1配体(programmed death lig-and-1,PD-L1)是关键蛋白之一,可与免疫细胞(如T细胞、B细胞、树突状细胞和自然杀伤性T细胞)表面的程序性死亡受体-1(programmed death ligand,PD-1)结合,激活PD-1的免疫抑制作用,通过RAS/Raf/MEK/ERK、磷脂酶C-γ(phospholipase C-γ,PLC-γ)、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)等通路下调机体免疫细胞功能,协助癌细胞进行免疫逃逸.故近年来应用免疫检查点PD-1、PD-L1抑制剂成为治疗恶性肿瘤的新手段.研究表明,PD-L1的表达受多种信号通路、相关蛋白和转录因子的调控,故本文就PD-L1的表达调控进行综述,寻求PD-L1表达调控通路能否作为抗肿瘤治疗新的靶点.

摘要： 目的 探讨骨肉瘤干细胞(osteosarcoma stem cells,OSCs)来源的外泌体对T细胞增殖及分化的影响及其相关作用机制.方法 采用无血清悬浮培养获得OSCs,并利用干细胞标志物流式分选技术进行鉴定.试剂盒提取骨肉瘤干细胞分泌的外泌体(OSCs-exo),利用透射电镜、粒径分析及Western blot实验进行鉴定.将OSCs-exo与PBMC进行共培养,CFSE染色及细胞流式实验检测其对T细胞增殖的影响.Western blot实验检测ERK信号通路中ERK蛋白的磷酸化改变.免疫磁珠分选CD4+T细胞,并将其与OSCs-exo在不同CD4+T细胞亚群诱导分化液中进行共培养,细胞流式实验检测OSCs-exo对后者分化的影响.Western blot实验检测STAT信号通路中磷酸化STAT1、STAT3、STAT5蛋白的表达.结果 成功分离获得了OSCs CD133+MG-63,透视电镜、粒径分析及Western blot实验结果表明OSCs-exo为直径在30～100 nm的圆形或椭圆形囊泡结构,其高表达外泌体标志性蛋白CD63、HSP70.CFSE染色及细胞流式实验及Western blot实验结果显示OSCs-exo可能通过抑制ERK蛋白磷酸化抑制CD3+、CD4+、CD8+T细胞的增殖,通过抑制磷酸化STAT1、STAT3蛋白的表达抑制CD4+T细胞向Th1、Th17并促进其向Th2、Treg细胞的分化.结论 骨肉瘤干细胞来源的外泌体能够通过下调ERK蛋白的磷酸化抑制T细胞的增殖,并降低磷酸化STAT1与STAT3蛋白的表达以诱导CD4+T细胞向Th2、Treg细胞分化,而抑制其向Th1、Th17的分化,从而下调细胞免疫功能,促进肿瘤的进展.

摘要： 本发明公开了一种Stat3靶向CRISPR/Cas载体、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体以及两种重复靶向靶向HBx的CRISPR/Cas载体，具体涉及一种Stat3靶向单功能质粒、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体、两种重复靶向HBx的CRISPR/Cas载体，以及上述载体的构建方法。发明人通过实验证明了该发明中构建的载体具有针对HBV相关的肝癌细胞具有特异性靶向治疗作用，本发明相应保护上述沉默基因载体、载体的构建方法、载体对Stat3和HBx双沉默策略以及载体在制备HBV慢性感染及抗肝癌相关药物中的应用。

摘要： 本发明公开了一种Stat3靶向CRISPR/Cas载体、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体以及两种重复靶向靶向HBx的CRISPR/Cas载体，具体涉及一种Stat3靶向单功能质粒、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体、两种重复靶向HBx的CRISPR/Cas载体，以及上述载体的构建方法。发明人通过实验证明了该发明中构建的载体具有针对HBV相关的肝癌细胞具有特异性靶向治疗作用，本发明相应保护上述沉默基因载体、载体的构建方法、载体对Stat3和HBx双沉默策略以及载体在制备HBV慢性感染及抗肝癌相关药物中的应用。

摘要： 本发明公开了一种STAT3抑制剂、STAT5激活剂在增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力方面的应用。本领域技术人员知道，抑制肿瘤微环境内的STAT3可以促进NK细胞等免疫细胞对肿瘤的杀伤作用；STAT5既可促进肿瘤细胞的生长发育又可促进NK细胞的发育和细胞毒性，抑制NK细胞的STAT5水平不仅损害NK细胞的正常功能，而且促进肿瘤的生长，因而促进STAT5在NK细胞中的表达有利于对肿瘤的治疗。本发明发现，Flexilarin F或Flexilarin G为STAT3抑制剂、STAT5激活剂，Flexilarin F或Flexilarin G通过抑制STAT3的表达、激活STAT5的表达提高NK细胞对肿瘤细胞杀伤力；对比二萜Lobocrassin E不具备这种作用。

摘要： 本发明公开了STAT3的抑制剂。还公开了在疾病和病症如癌症的治疗中使用所述STAT3抑制剂的方法，其中在所述疾病和病症中抑制STAT3提供益处。

摘要： 本发明公开了一种测定T细胞膜脂肪微区域STAT5a和STAT5b分布的方法。该方法的步骤为对T细胞培养，细胞破裂前用IL－2刺激T细胞；采用不连续蔗糖密度梯度超速离心法分离T细胞膜脂肪微区域；采用蛋白免疫印记法分析分离的T细胞膜脂肪微区域中的STAT5a和STAT5b。该方法能够简单、有效、准确地测定T细胞膜脂肪微区域STAT5a和STAT5b分布，可用于新型抗肿瘤药物研制和抗肿瘤效果的测定。

摘要： 本公开提供了由式I或式VIII表示的化合物：其中R1a、R1b、M、A、E、QA和QB如本说明书中所定义，以及其盐和溶剂合物。式I化合物为STAT3的降解剂或STAT3和STAT1的降解剂。式VIII化合物为STAT3的抑制剂。STAT3降解剂和抑制剂可用于治疗癌症和其他疾病。

摘要： 本发明提供了HSP90抑制剂阻碍STAT3线粒体转运和治疗哮喘的新应用。具体而言，本发明提供了HSP90抑制剂在制备用于阻碍STAT3线粒体转运的制剂中的应用。本发明还提供了HSP90抑制剂在制备用于抑制2型天然淋巴样细胞的功能的制剂中的应用。本发明还提供了HSP90抑制剂在制备用于治疗哮喘或其相关疾病的药物中的应用。本发明还提供了以STAT3的线粒体转运为靶点在筛选和/或制备用于治疗哮喘或其相关疾病的药物中的应用。

摘要： 本发明提供了一种组合的STAT信号通路相关基因在结直肠癌预后模型中的应用，组合的STAT信号通路相关基因为CAV1、EPO、IL13、LEP和NEUROD1；其中结直肠癌预后模型的建立方法包括步骤1)数据的收集整理，步骤2)筛选差异表达的STAT信号通路相关基因，步骤3)STAT信号通路相关基因的预后模型构建，步骤4)构建列线图。本发明的预后模型具有准确性高的优点，在临床上可以为结直肠癌患者提供疾病诊断及预后的新方法，同时揭示其对肿瘤微环境的预测作用，并为靶向治疗的发展提供重要信息。

摘要： 一种大片段stat1a/stat1b基因双突变缺失型斑马鱼，其获得方法包括如下步骤，CRISPR/Cas9基因敲除靶位点设计；构建表达载体以及体外合成；斑马鱼胚胎的显微注射；T7E1法和Sanger测序检测靶位点的有效性；注射两个月之后，进行剪尾鉴定；目的序列的TA克隆；质粒的Sanger测序；获得可遗传的斑马鱼突变体的F1代；获得斑马鱼突变体的F2代纯合子；依据步骤九方法进行stat1a基因缺失型斑马鱼的F3代纯系遗传，得到stat1a‑17的斑马鱼纯合品系；筛选stat1a/stat1b基因双突变缺失型斑马鱼。

摘要： 一种小片段stat1a/stat1b基因双突变缺失型斑马鱼，该斑马鱼获得方法包括如下步骤：CRISPR/Cas9基因敲除靶位点设计构建表达载体以及体外合成；斑马鱼胚胎的显微注射；T7E1法和Sanger测序检测靶位点的有效性；注射两个月之后，进行剪尾鉴定；目的序列的TA克隆；质粒的Sanger测序；获得可遗传的斑马鱼突变体的F1代；获得斑马鱼突变体的F2代纯合子；依据步骤九方法进行stat1a基因缺失型斑马鱼的F3代纯系遗传，得到stat1a‑17的斑马鱼纯合品系；筛选stat1b基因突变缺失型斑马鱼；筛选stat1a/stat1b基因双突变缺失型斑马鱼。