噬菌体随机肽库

摘要： [目的]以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选出具有抗流感病毒活性的亲和多肽.[方法]运用噬菌体展示技术,以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选HA1蛋白亲和多肽,并对获得的多肽进行鸡胚水平和细胞水平抗H3N2亚型流感病毒活性验证.[结果和结论]经过4轮体外亲和筛选获得了6条HA1蛋白亲和多肽,6条多肽对H3N2亚型流感病毒有不同程度的抗病毒活性,其中以HA-4的抗病毒活性最强.试验结果表明噬菌体随机肽库技术能够应用于抗病毒研究.

摘要： Objective: To screen out short peptide antigen epitopes capable of binding with anti human inter⁃lukin 15(hIL-15) monoclonal antibody from 7TMphage display peptide library. Methods: Using anti-hIL-15 anti⁃body as the target protein, peptides which could bind with anti-hIL-15 antibody were selected from 7TMphage dis⁃play peptide library by biopaning and identified by sandwich ELISA and competitive ELISA. The selected peptide was conjugated to keyhole limpet hemocyanin and the immunogenicity of the peptide vaccines was examined in BALB/c mice. Results: 15 of 50 phage clones were identified as positive clones which can bind to anti-hIL-15 antibody after screening and ELISA. The amino acid sequences of the positive clones are MTPFWQK, MSPFNQK, MIPYWQK, and MIPFHQK. Sera from the vaccinated mice demonstrated high-titer specific antibodies to the pep⁃tide conjugates. Conclusion: The selected peptide epitopes could bind specifically to the anti-hIL-15 antibody and induced anti-IL-15 specific immune response. The work provided the potential for developing short peptide IL-15 vaccines.%目的：用噬菌体呈现随机七肽库筛选能与抗人白细胞介素15（hIL-15）中和抗体特异性结合的模拟抗原表位肽，并初步鉴定其免疫原性。方法：以抗hIL-15中和抗体为靶分子，用生物淘洗法从噬菌体呈现线性七肽库中筛选与之结合的噬菌体克隆，用噬菌体ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆；化学合成筛选得到的多肽，并与匙孔血蓝蛋白（KLH）偶联免疫BALB/c小鼠，检测其免疫原性。结果：经过3轮体外筛选后随机挑取50个阳性噬菌体克隆，ELISA检测结果显示其中15个克隆与抗hIL-15抗体有较强的结合能力，DNA测序结果得到的结构相似群为MTPFWQK、MSPFNQK、MIPYWQK和MIPFHQK；竞争性ELISA结果显示4个序列均能与IL-15竞争性地结合抗IL-15单抗；小鼠免疫实验结果显示4组多肽均能诱导IL-15特异性免疫反应。结论：筛选得到能与抗hIL-15中和抗体特异性结合，且具有免疫原性的模拟抗原7肽序列，为进一步开发hIL-15相关的多肽疫苗提供了依据。

摘要： Objective: To obtain the neutralizing epitope of Yersinia pestis F1 antigen and construct recombinant epitope vaccine based on flagellin adjuvants. Methods: A phage display random 12 peptide library was bio-panned by the neutralizing antibody of F1 antigen-F2H5. The positive clones were identified by ELISA and com⁃petitive inhibition ELISA. The recombinant fusion proteins containing the selected 12 peptide and truncated flagel⁃lin C protein were expressed and purified, detected by Western blot and ELISA using neutralizing antibody F2H5. Results: Two positive phage monoclones 12-1 and 12-14 can compete to bind F2H5 with F1 antigen, the compe⁃tition ability of 12-14 was stronger. The inserted peptide sequences of the two positive phage monoclones were no consistent with F1 antigen sequence by sequence alignment, but the recombinant fusion proteins containing insert⁃ed peptide and FliCdel can be detected by monoclonal antibody against F1 using Western blot and ELISA analy⁃sis. Conclusion: The peptide sequence screening by F1 neutralizing antibody can be identified by F2H5 specifical⁃ly, which laid the foundation for the further immune response evaluation of the recombinant epitope antigen.%目的：筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原的中和性表位，构建基于鞭毛蛋白佐剂的重组表位疫苗。方法：利用鼠疫菌F1抗原的中和抗体F2H5筛选噬菌体随机12肽库，对得到的阳性克隆采用ELISA进行特异性鉴定，采用竞争抑制ELISA确定具有竞争性的噬菌体单克隆并对其DNA测序，重组表达并纯化获得肽序列与截短型鞭毛蛋白FliCdel的融合蛋白，并通过Western印迹和ELISA鉴定重组蛋白与F2H5的结合。结果：获得了2株能够与F1抗原竞争结合F2H5的噬菌体单克隆12-1和12-14，其中12-14的竞争能力较强；通过序列比对，并没有发现这2株噬菌体克隆的插入肽序列与F1抗原序列存在一致性，但这2个插入肽序列与FliCdel的重组蛋白在Western印迹和ELISA结果中均显示出能够被抗F1的单克隆抗体识别。结论：F1中和性抗体筛选出的肽序列与截短的鞭毛蛋白融合表达后能够被F2H5特异性识别，为进一步对重组表位抗原进行免疫保护评价奠定了基础。

摘要： 为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体阳性克隆.测序结果显示,其编码的12肽序列分别为:PINMQTLNCMAA(P2-12)、GCTLNPMSDLLG(P6-12)和MSSTLNGMLNSL(P7-12),其核心基序为TLNXM.通过人工合成P2-12、P6-12、P7-12多肽,并采用MTT法检测其对BP5抗肿瘤细胞增殖能力的影响,结果显示,P2-12和P7-12肽在0.2 μg/mL～20 μg/mL浓度下,P6-12肽在2μg/mL～20 μg/mL浓度下均能够抑制BP5抗小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞增殖作用,其中P2-12在20 μg/mL浓度下抑制作用最为显著(p＜0.01).此外,p53荧光素酶活性检测结果显示,这3种BP5结合肽在实验浓度下均能够下调BP5促p53基因转录的活性.以上结果表明,这3种BP5特异性结合肽具有下调BP5抗肿瘤活性.本研究为进一步研究BP5抗肿瘤细胞增殖作用的机制提供了相关的实验依据.

摘要： 猪繁殖与呼吸道综合征病毒（PRRSV）已给世界养猪业带来巨大的经济损失。该病毒感染宿主后可诱发靶细胞凋亡，使宿主出现持续带毒和抗体依赖性增强的现象，病毒自身氮基酸可构成“诱骗表位”，其GP5结构蛋白的糖基化位点可产生“多糖屏蔽现象”；PRRSV容易突变，并存在多种基因型和表现型，以上各种特征为该疾病的防治带来巨大的困难。目前，多采用驯化病毒、制备灭活疫苗、研制载体疫苗和多价疫苗、开发新型佐剂、构建重组病毒及建立清除性免疫等方法用于该病毒防控与净化，但各种方法均存在潜在风险。为避免活病毒自身的突变性和致病性、外源载体的免疫干扰性、灭活病毒低细胞免疫诱导性以及重组病毒的生物安全风险性，研究者逐渐有意借助噬菌体随机肽库对PRRS病毒进行重要抗原表位的筛选，以获得可用于免疫防治以及检测方法研究，并具有较好生物活性的小分子短肽，为新型疫苗的研发、快速诊断方法的研究以及致病机理的探寻提供新的线索。

摘要： Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) has caused great economic losses to the swine industry in the worldwide. The virus infection of the host target cells can be induced to apoptosis, host virus and antibody dependent enhancement phenomenon continues, the virus itself amino acids can form"decoy epitope", glycosylation sites in the GP5 protein can produce "polysaccharide shielding phenomenon"; PRRSV mutation, and the existence of a variety of genotype and phenotype type bring huge dififculty above all sorts of characteristics for prevention and treatment of the disease. At present, the domestication of virus, preparation of inactivated vaccine, vaccine and multivalent vaccine development, development of new adjuvants, construction of recombinant virus and the establishment of clear immunity method for the virus prevention and cleaning, but the potential risk of various methods exist. In order to avoid catastrophe live virus itself and pathogenicity, avoid exogenous vector immune interference, avoid the risk of biological safety of inactivated virus and low cellular immunity induced by recombinant virus, more researchers will use phage display random peptide library is an important antigen epitope of PRRS virus, in order to gain method which can be used immune prevention and detection and provide new clues to explore the small molecular peptides with good biological activity for the research and development of new vaccines, rapid diagnosis method research and pathogenic mechanism.%猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)已给世界养猪业带来巨大的经济损失。该病毒感染宿主后可诱发靶细胞凋亡，使宿主出现持续带毒和抗体依赖性增强的现象，病毒自身氨基酸可构成“诱骗表位”，其G P5结构蛋白的糖基化位点可产生“多糖屏蔽现象”；PRRSV容易突变，并存在多种基因型和表现型，以上各种特征为该疾病的防治带来巨大的困难。目前，多采用驯化病毒、制备灭活疫苗、研制载体疫苗和多价疫苗、开发新型佐剂、构建重组病毒及建立清除性免疫等方法用于该病毒防控与净化，但各种方法均存在潜在风险。为避免活病毒自身的突变性和致病性、外源载体的免疫干扰性、灭活病毒低细胞免疫诱导性以及重组病毒的生物安全风险性，研究者逐渐有意借助噬菌体随机肽库对PRRS病毒进行重要抗原表位的筛选，以获得可用于免疫防治以及检测方法研究，并具有较好生物活性的小分子短肽，为新型疫苗的研发、快速诊断方法的研究以及致病机理的探寻提供新的线索。

摘要： Cd2+ binding peptides were effective enriched from the commercially phage 12 random peptide library ,and six different Cd2+ binding peptides were obtained ,two which had strong affi-nity were selected and connected together in series and displayed on yeast surface by gene recom-bination .The recombinant yeasts showed significant higher adsorption rate for Cd2+ and Ni2+ as compared with the control .The recombinant yeasts adsorption rate for Cd2+ increased with the in-crease of the induction time ,when the induction time was 24 h ,the adsorption rate for Cd2+reached the maximum (30 .4% ) ,and the adsorption rate for Ni2+ reached 32 .9% .%利用C d2＋螯合树脂，对噬菌体随机十二肽库进行C d2＋结合肽筛选，并将亲和力较强的结合肽展示在酵母EB Y 100表面，以期得到耐受和吸附能力具佳的工程菌，为重金属的生物修复提供新的思路。通过筛选共得到6条不同的C d2＋结合肽，其中有2条对C d2＋亲和力较强，将其串联展示于酵母细胞表面。与对照菌相比，酵母工程菌对C d2＋、N i2＋的吸附率显著提高。酵母工程菌对C d2＋的吸附率随诱导时间的增加而增加，诱导24 h时最高，达30.4％，此时酵母工程菌对N i2＋的吸附率达到32．9％。

摘要： 目的 从纯化的人抗Rh (D)抗体阳性血清中筛选Rh (D)血型抗原模拟表位.方法 用纯化的多克隆抗Rh (D)抗体血清对噬菌体随机十二肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"过程筛选,随机挑取噬菌体克隆;用ELISA法检测其特异性及其与抗体的结合能力.提取阳性克隆DNA并进行测序,推导外源多肽的氨基酸序列.凝集抑制试验检测噬菌体展示的多肽对Rh (D)血型抗原结合的模拟作用.结果 经过3轮筛选和相应鉴定后得到6个抗Rh (D)抗体的特异性噬菌体克隆,其中4个克隆展示相同的氨基酸序列为PSQGYVILLDEK,命名为C2,另外2个克隆展示相同的氨基酸序列为TMLNRAHDFSEC,命名为C21.凝集抑制试验结果 表明这两个多肽的噬菌体可以抑制Rh (D)抗原阳性红细胞的凝集作用.结论 多肽PSQGYVILLDEK和TMLNRAHDFSEC可以模拟Rh (D)血型抗原表位.%Objective To screen the mimic epitope of Rh ( D ) blood group antigen from purified positive anti-Rh ( D ) antibody serum. Methods A twelve mer phage peptide library was biopanned with purified anti-Rh ( D ) polyclonal antibody serum. Clones were randomly selected and were identified by ELISA for specificity and the ability of the bond between clones and antibodies. DNA sequencing of positive clones were performed to deduce the a-mino acid sequence of exogenous polypeptide. The hemagglutination inhibition ( HI ) test detected the simulation effect of the combination between phage-displayed peptide and Rh ( D ) blood group antigen. Results After panning three times and corresponding identification, 6 specific clones of anti-Rh ( D ) antibody were obtained. Four of them displayed the same amino acid sequence as PSQGYVILLDEK, and were named C2. Other two clones were named C21 which displayed the same amino acid sequence as TMLNRAHDFSEC. The results of HI test showed that phages that displayed these two polypeptides could inhibit the agglutination of Rh ( D ) antigen positive red blood cells. Conclusion The polypeptides PSQGYVILLDEK and polypeptides TMLNRAHDFSEC could mimic the antigen epitope of Rh ( D ) blood type.

摘要： 从噬菌体随机肽库中淘选模拟NFLX(Norfloxacin)表位的噬菌体粒子并进行性质鉴定.以抗NFLX单克隆抗体为靶分子,对噬菌体环七肽库和十二肽库进行生物亲和淘选,以ELISA鉴定阳性克隆,进行DNA测序,采用生物信息学方法对淘选得到的模拟表位进行分析.分别得到了9个(环七肽)和8个(十二肽)能与靶分子特异性结合且能被NFLX标准品阻断的阳性克隆,其特有序列为(环七肽):X-X-X-X-X-脯氨酸-苯丙氨酸(X为任意氨基酸),以阻断效果最好的抗原模拟表位H3建立了竞争ELISA标准曲线,IC 50为:(48.07±6)ng·mL-1,检测线性范围为10～200 ng·mL-1.噬菌体展示技术可淘选得到NFLX模拟表位,淘选到的噬菌体粒子可作为NFLX的替代品建立免疫学检测方法.

摘要： 采用猪瘟单抗对猪瘟病毒石门株E2基因噬菌体随机肽库(SM—E2库)进行淘洗以研究猪瘟病毒E2抗原表位。运用猪瘟单克隆抗体WH303、WH211和M56对SM—E2库进行4轮生物淘洗，对阳性克隆再经噬菌体原位杂交、特异PCR测序分析，然后人工合成阳性多肽进行EUSA反应。经鉴定分析发现单抗WH303从SM-E2库中筛选得到一段CSFV特异的抗原多肽IECTAVSPTTLRTEVVKT,RTEVVKT，并且该段多肽与已知CSFV表位TAVSPTTLR极为相似；单抗WH211和56未能筛选到包含CSFV序列的克隆。结果表明，利用靶基因噬菌体随机多肽库筛选抗原表位能够得到更接近于真实表位的抗原表位。

摘要： 本发明涉及用于治疗和控制细菌感染的噬菌体治疗的领域。具体地，本发明涉及新的噬菌体F1245/05,F168/08,F170/08,F770/05,F197/08,F86/06,F87s/06和F91a/06，它们的分离的多肽，包含一种或多种所述新的噬菌体和/或分离的多肽的组合物，以及用于治疗和预防细菌感染的方法，所述方法是单独的或与其它抗菌治疗(例如抗生素或其它噬菌体治疗)相组合。

摘要： 本发明涉及用于治疗和控制细菌感染的噬菌体疗法领域。特别地，本发明涉及新型细菌噬菌体F387/08、F391/08、F394/08、F488/08、F510/08、F44/10和F125/10，其分离的多肽，包含一种或多种新型细菌噬菌体和/或分离的多肽的组合物，以及使用其单独或与其他抗菌疗法例如抗生素和/或其他噬菌体疗法组合用于治疗和预防细菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及用于治疗和控制细菌感染的噬菌体治疗的领域。具体地，本发明涉及新的噬菌体F1245/05，F168/08，F170/08，F770/05，F197/08，F86/06，F87s/06和F91a/06，它们的分离的多肽，包含一种或多种所述新的噬菌体和/或分离的多肽的组合物，以及用于治疗和预防细菌感染的方法，所述方法是单独的或与其它抗菌治疗(例如抗生素或其它噬菌体治疗)相组合。

摘要： 一种噬菌体展示随机肽库的构建方法，所述方法采用NNK编码方式，将编码随机肽库的两条链经退火、延伸补平、双酶切后，与经同样双酶切的5’去磷酸化载体连接，电转TG1感受态细胞。扩增菌液后进行库容和多样性检验。利用该肽库筛选获得的肽段序列，通过测序分析即可得到与药物特异性结合的外源蛋白或多肽。该技术广泛应用于抗原表位的模拟和蛋白、核酸结合特性的研究，同时在药物筛选和疫苗研制方面也有广泛的应用。

摘要： 本发明涉及使用源自M13噬菌体的pIX的工程化杂交噬菌体载体来生成pIX噬菌体展示文库并使用该文库来产生一种或多种非抗体肽或蛋白质的组合物和方法。

摘要： 本发明涉及用于治疗和控制细菌感染的噬菌体治疗的领域。具体地，本发明涉及新的噬菌体F1245/05,F168/08,F170/08,F770/05,F197/08,F86/06,F87s/06和F91a/06，它们的分离的多肽，包含一种或多种所述新的噬菌体和/或分离的多肽的组合物，以及用于治疗和预防细菌感染的方法，所述方法是单独的或与其它抗菌治疗(例如抗生素或其它噬菌体治疗)相组合。

摘要： 本发明涉及用于治疗和控制细菌感染的噬菌体疗法领域。特别地，本发明涉及新型细菌噬菌体F387/08、F391/08、F394/08、F488/08、F510/08、F44/10和F125/10，其分离的多肽，包含一种或多种新型细菌噬菌体和/或分离的多肽的组合物，以及使用其单独或与其他抗菌疗法例如抗生素和/或其他噬菌体疗法组合用于治疗和预防细菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及用于治疗和控制细菌感染的噬菌体治疗的领域。具体地，本发明涉及新的噬菌体F1245/05，F168/08，F170/08，F770/05，F197/08，F86/06，F87s/06和F91a/06，它们的分离的多肽，包含一种或多种所述新的噬菌体和/或分离的多肽的组合物，以及用于治疗和预防细菌感染的方法，所述方法是单独的或与其它抗菌治疗(例如抗生素或其它噬菌体治疗)相组合。

摘要： 本发明公开了对噬菌体肽库的筛选方法，将目的Sm单抗用碳酸氢钠包被缓冲液，以1:5的比例进行稀释，3-5摄氏度湿盒过夜；然后用百分之二十以上的脱脂牛奶对其进行封闭，时间不少于2小时；振荡洗涤；过滤；轻咬振荡，直至噬菌体全部结合；筛选未结合的噬菌体，将其吸出，并弃去；滴入酸碱中和液，对洗脱液进行滴度测定；上述步骤反复三次；计算每一轮免疫筛选后噬菌体的回收率即可；过滤的时候，需要轻取轻放，用三层纱布进行；所述酸碱中和液在使用前需要在零下四度的冰柜中进行预冷。本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，可以准确进行筛选，重复操作性强，筛选精确。

摘要： 本发明公开了结核分枝杆菌噬菌体随机肽库，它是在严格条件下，用DNase I消化结核分枝杆菌H37Rv基因组，得到50－80bp基因片段，连接于噬菌体M13KE上，用鹿结核IgG，进行三轮淘选获得的结核分枝杆菌噬菌体随机肽库。通过小鼠的皮肤变态反应、免疫小鼠血清中特异性抗体的检测试验、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖试验、牛结核分枝杆菌BCG的攻毒试验小鼠肺荷菌量与对照组比较差异显著；证明其抗原性优于牛结核分枝杆菌BCG，毒性低于牛结核分枝杆菌BCG，也为进一步的结核杆菌抗原模拟表位的淘选和结核病新型诊断试剂及新型疫苗的研发奠定了一定的基础。