模拟表位

摘要： 真菌毒素是真菌在生长繁殖过程中产生的次级有毒代谢产物,具有致癌、致畸、致突变的毒性作用,严重危害人体健康,因此对其检测与控制非常重要.现有检测方法普遍存在样品预处理复杂、成本高、操作繁琐等缺点,且会对操作人员和环境造成潜在二次危害.新型纳米材料可以提高真菌毒素的检测灵敏度,噬菌体展示技术可以筛选真菌毒素的模拟表位和抗真菌毒素的重组抗体,降低检测成本,达到无毒检测真菌毒素的目的.文章综述了近年来不同种类的纳米材料与噬菌体展示技术以及两者相互结合在真菌毒素检测方面的应用,并对其未来的发展进行了展望.

摘要： Objective To prepare peptide minotope-based recombinant diagnostic antigen of Epstein-Barr virus (EBV) infection and evaluate its antigenicity preliminarily.Methods With Trx at the N-terminal and His tag at the C-terminal,the peptide minotope of EBV (GP125,F1,A2,A3C2) was expressed in Escherichia coli and purified by affinity and anion exchange chromatography (designated ‘ H58');based on antigenicity of H58 identified by Western blotting (WB),we constructed and evaluated a novel early diagnostic ELISA for EBV infection.Results The soluble H58 protein with high concentration (2.8 mg/ml) and purity (99.01) was obtained;WB analysis found that there was an obvious band (28 × 103) on the NC membrane,using H58 anti-Trx monoclonal antibody or acute-phase sera of EBV infection as the first antibody.With the novel ELISA,50 positive sera of EBV infection and 50 negative sera were detected,displaying that the grouping of OD value of positive serum (95％ CI:1.233-1.489) and negative serum (95％ CI:0.113-0.159) was different (P ＜ 0.05) with the sensitivity 98.0％,specificity 96.0％ and kappa value 0.940.Conclusions By E.coli expression and affinity and ion exchange chromatography purification,the peptide minotope-based recombinant diagnostic antigen of EBV infection was obtained with excellent antigenicity,which could be applied for serological detection of EBV infection.%目的 利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein-Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性.方法 将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3 C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中,在大肠埃希菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立EBV-IgM抗体检测捕获法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2.8 mg/ml,纯度为99.01％;Western blot实验发现,以anti-Trx单克隆抗体或EBV-IgM阳性血清作为第一抗体,在NC膜约26×103处都可以发现特异条带(与预期一致);对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出,阳性血清样本OD值1.352 (95％ CI:1.233 ～1.489)与阴性血清样本OD值0.135(95％ CI:0.113 ～0.159)分布区组明显(P＜0.05),其中灵敏度为98.0％,特异性为96.0％,一致性检验kappa值为0.940,一致性优异.结论 原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中.

摘要： 利用噬菌体随机环七肽库筛选脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)模拟表位.以DON单抗为靶分子,四轮固相淘选噬菌体随机环七肽库,筛选出阳性噬菌体,并通过ELISA实验检测其特异性.对阳性克隆的DNA进行测序,取序列不同的阳性克隆,分别建立阳性噬菌体与DON标准品的竞争抑制曲线.对30个噬菌体单克隆进行活性测定,结果显示能与DON单抗结合的噬菌体克隆有28株,其中的22株能被DON标准品阻断与DON单抗结合.DNA测序结果显示,21株阳性噬菌体的序列是PFPNHPY,另一株的序列是TPWTQHL.其相应噬菌体与DON毒素标准品的竞争曲线结果显示,8号噬菌体建立的竞争抑制曲线线性范围是0.0292～0.636μg/mL,IC50为0.169 μg/mL;4号噬菌体建立的竞争抑制曲线线性范围是0.0124～0.271 μg/mL,IC50为0.058 μg/mL.在随机环七肽库中筛选到TPWTQHL和PFPNHPY两个DON模拟表位,可替代DON毒素标准品,建立DON的免疫学无毒检测技术.%Screening of mimetic epitopes of deoxynivalenol by using random Ph.D-7 library.DON monoclonal antibody as the target molecule,and Ph.D-7 library had been panned for 4 times.The positive phage was screened out and tested by ELISAspecificity.The activity of 30 phage monoclones was determined by indirect ELISA and indirect competitive ELISA.It showed that 28 phages could combined with DON monoclonal antibody and 22 of them were able to compete with DON standards for binding to DON mAbs.The results of DNA sequencing showed sequence of 21 was PFPNHPY,and the another one was TPWTQHL.The competition curve of corresponding phage and DON toxin standard product showed inhibition curve for the linear range of NO.8 phage was 0.0292～0.636 μg/mL and IC50 was 0.169 μg/mL,and NO.4 phage was 0.0124～0.271 μg/mL,IC50 was 0.058 μg/mL.TPWTQHL and PFPNHPY were obtained from Ph.D-7 phage display peptide library.The competitive inhibition curves of phage and DON were established respectively.Preliminary validation shows that the DON toxin standard can be replaced by two DON mimotopes and can be established DON immunological non-toxic detection techniques.

摘要： 旨在获得一株特异靶向致病性Aβ42寡聚体的模拟表位疫苗.在前期工作中,应用亲和层析的方法从人静脉用免疫球蛋白(Intravenous immune globulin,IVIG)中纯化获得特异性识别Aβ42寡聚体的抗体组分IVIG-AOB.以IVIG-AOB为靶蛋白,应用噬菌体展示技术淘选出一系列Aβ42寡聚体的特异性环状模拟表位多肽,随后将表位多肽融合表达至乙肝病毒核心蛋白(HBc-VLP)构建成表位载体疫苗,进而将免疫小鼠,从中筛选出能有效免疫产生抗Aβ42寡聚体抗体的模拟表位疫苗.从噬菌体环形七肽库中筛选出5条特异性结合IVIG-AOB的模拟表位多肽,将其克隆至HBc载体,并在大肠杆菌中成功表达和组装成嵌合表位的HBc-VLP,通过免疫小鼠优选出一株效果最好的Aβ42寡聚体构象表位疫苗HBc-C4.Aβ 寡聚体是AD发生发展的主要致病因素.基于Aβ42寡聚体独特的构象表位研制的表位HBc-VLP疫苗诱导机体产生的抗体将能够特异靶向并中和毒性Aβ42寡聚体,而不影响Aβ42的正常生理功能,从而起到从根本上治疗AD的作用.%The objective of this study is to obtain a mimotope vaccine specifically targeting to pathogenic Aβ42 oligomer. In previous studies,we purified an antibody IVIG-AOB,which specifically recognizes Aβ42 oligomers,from intravenous immunoglobulin(IVIG)by affinity chromatography. Using phage display technique,a series of ring-shape mimotope polypeptides were screened for specific binding to IVIG-AOB. These oligomer epitope peptide genes were then cloned to HBc-VLP vector and the recombinant proteins were expressed in Escherichia coli. After that,the recombinant Aβ42 oligomer conformational epitope HBc-VLP vaccine were applied to Balb/c mice. The antibody responses induced by the Aβ42 oligomer-targeted VLP vaccine were determined. Five mimotope polypeptides specifically-bound with IVIG-AOB were successfully screened from phage cyclic peptide library and cloned into HBc-VLP vector. The recombinant proteins were successfully expressed in E. coli. HBc-C4 elicited the highest antibody titer after vaccination to Balb/c mice. Conclusively,Aβ oligomer is the major factor in the pathological processes of Alzheimer's disease(AD). The mimotope HPc-VLP vaccine based on the unique structure of Aβ42 oligomer induced body to generate the antibody targeting and neutralizing the toxic Aβ42 oligomers,while not affecting its normal physiological function, thus it plays a fundamental role in the treatment of AD.

摘要： 猪轮状病毒（PoRV）是引起仔猪腹泻的重要病原之一，其主要结构蛋白衣壳蛋白VP7可诱导机体产生中和抗体。文章以制备的抗PoRV VP7单克隆抗体（MAb）3B6作为靶分子，利用噬菌体十二肽库展示技术对其模拟表位进行筛选。四轮筛选后随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定，同时提取其基因组DNA测序，10个阳性噬菌体亲和肽拥有共同的外源肽序列“VPLGTDNGDIWV”，而且与靶分子有很高亲和力。阳性噬菌体亲和肽与VP7蛋白进行序列比对，结果表明，十二肽中有4个氨基酸（第167位P、第178位T、第179位D和第184位W）与VP7蛋白167~184位氨基酸有一定的相似性。竞争抑制ELISA证明亲和多肽降低PoRV与抗VP7单克隆抗体之间的作用，病毒竞争抑制试验表明亲和多肽可以竞争性地抑制PoRV感染细胞。因此由这4个氨基酸构成的基序很有可能作为猪轮状病毒VP7蛋白的一个模拟表位。%Porcine rotavirus (PoRV) causes diarrhea, vomit, dehydration, acid-base imbalance and death in piglets. PoRV VP7 is the outer capsid glycoprotein that is highly immunogenic and induce the production of neutralizing antibody. A prepared monoclonal antibody (MAb) 3B6 against PoRV VP7 protein was used as immobilized target in a subtract biopanning process using a 12-mer phage display random peptide library. After four rounds of pannings, 10 phages bearing the consensus peptide VPLGTDNGDIWV and having a specific binding activity to the target were identified. Sequence alignment between positive phage-displayed 12-mer peptide and VP7 protein suggested that a potential motif that is identical with 167(P), 178(T), 179(D) or 184(W) aa in the VP7 protein. Competition ELISA showed that the high affinity peptide reduced the combination of PoRV with anti-VP7 MAb. Moreover, this peptide could significantly inhibit PoRV propagation in cell culture. In conclusion, the 4 amino acid motif (P-TD-W) functions as a spatial conformation epitope of PoRV VP7 protein.

摘要： [目的]研究赭曲霉毒素A毒素的替代ELISA检测.[方法]采用噬菌体展示技术筛选赭曲霉毒素A模拟表位,得到赭曲霉毒素A(OTA)模拟表位序列为IR(V)PMV(L)XX(X为任意氨基酸),化学合成法体外合成OTA模拟表位肽,通过化学交联法将OTA模拟表位肽与BSA连接,做成无毒抗原,建立无毒OTA间接竞争ELISA检测方法,同样通过化学交联法将OTA多肽-BSA与HRP相联,建立OTA无毒直接竞争ELISA检测方法.[结果]OTA多肽-BSA间接竞争ELISA检测50％抑制浓度(IC50)为5 ng/ml,OTA多肽-BSA-HRP一步直接竞争ELISA检测法IC50为2.5 ng/ml,二步直接竞争ELISA检测法IC50为2ng/ml.[结论]OTA模拟表位多肽能用于代替OTA毒素作为检测抗原使用,并建立无毒ELISA检测方法.

摘要： 以驴抗鼠二抗包被微孔板,以捕获方式包被抗赭曲霉毒素A(OTA)单克隆抗体,利用噬菌体随机七肽库筛选OTA模拟抗原表位,并以其替代检测抗原,建立了基于噬菌体展示技术的酶联免疫吸附分析(Phage ELISA)检测OTA的方法.结果表明,筛选获得的模拟OTA抗原表位七肽氨基酸序列为GMSWMMA.基于模拟表位噬菌体建立的Phage ELISA方法半数抑制浓度(IC50值)为(0.15±0.02) ng/mL,检测OTA的线性范围为0.03～ 0.50 ng/mL,OTA的检出限为0.03 ng/mL,且Phage ELISA与其它4种常见真菌毒素(黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇及玉米赤霉烯酮)无交叉反应.大米样品OTA加标实验表明,批内加标回收率为97.0％ ～ 115.2％,批间加标回收率为107.2％ ～ 123.1％,与ELISA试剂盒检测结果比较,无显著性差异.

摘要： 目的:从噬菌体12肽库中筛选出入表皮生长因子受体2(Her2)的抗原模拟表位.方法:以曲妥珠单抗为靶分子,在噬菌体12肽库中进行3轮淘选,以ELISA方法及竞争抑制实验鉴定阳性克隆,并对阳性克隆株进行测序.结果:经过3轮淘选,与曲妥珠单抗结合的噬菌体得到了有效富集,回收率从(2.00×10-8)％增加到(2.87 ×10-5)％,ELISA显示20个克隆中筛选获得了18个与曲妥珠单抗具有较高亲和性的阳性噬菌体,对阳性克隆测序获得两种氨基酸序列:HTSSLWHLFRST、VHWDFRQWWQPS.结论:噬菌体展示技术可成功筛选到表皮生长因子2模拟表位,为探索乳腺癌的防治研究创造了条件.

摘要： 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)的模拟表位(CDON),是从噬菌体展示随机肽库中淘选出来的七肽,可模拟DON与抗DON抗体结合.为了在酶联免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)中用重组蛋白替代DON偶联物,以期开发出能代替偶联DON人工抗原的无毒检测DON的ELISA方法,通过构建重组表达载体pGEX-CDON和pC89S4-CDON,并在大肠杆菌表达系统中分别表达和纯化GST-CDON和pⅧ-CDON融合蛋白,比较测定2种融合蛋白与抗DON抗体的结合效果.ELISA方阵滴定结果显示:纯化的融合蛋白具有良好的反应原性.在间接竞争性ELISA中,当以融合蛋白GST-CDON为包被抗原时,检测限为31 ng/mL,线性范围为31～500 ng/mL,IC50为194 ng/mL,加标回收率为54.1％～65.4％,变异系数为6.28％～13.37％;当以融合蛋白pⅧ-CDON为包被抗原时,检测限为15 ng/mL,线性范围为15～500 ng/mL,IC50为94 ng/mL,加标回收率为81.7％～89.0％,变异系数为3.15％～7.55％.

摘要： 目的 利用噬菌体12肽库进行生物淘洗,筛选表皮生长因子受体(EGFR)抗原模拟表位. 方法 以抗EGFR的单克隆抗体药物西妥昔单抗及尼妥珠单抗为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选表皮生长因子受体抗原模拟表位,经过3轮淘选后,选择可与西妥昔单抗及尼妥珠单抗有不同程度结合的噬菌体,对阳性产物进行克隆及测序. 结果 发现17个和21个阳性噬菌体分别与西妥昔单抗及尼妥珠单抗不同程度地结合;阳性克隆测序结果分别获得了3种不同的氨基酸序列. 结论 初步利用西妥昔单抗及尼妥珠单抗可从噬菌体展示的随机肽库中筛选到表皮生长因子受体相关抗原表位.

摘要： 目的:从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位.方法:以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,通过Phage-ELISA和间接竞争ELISA方法鉴定阳性噬菌体克隆.结果:经过四轮亲和筛选,共得到22株与OTA mAb特异结合的阳性噬菌体克隆,且该结合都能够被OTA标品阻断,DNA测序及多肽核心序列分析后,得到赭曲霉毒素A的模拟表位的主要序列为:MPLWXDL(X为任意氨基酸).结论:间接竞争ELISA线性范围为250～8000pg/mL,表明含有赭曲霉毒素A模拟表位的噬菌体可以替代OTA标品建立无毒快速检测方法.

摘要： 为了建立无毒素的赭曲霉毒素A酶联免疫吸附检测(competitiveenzyme-linked immunosorbem assay，ELISA)方法，本文通过噬菌体随机展示肽库技术，筛选到11株赭曲霉毒素A的模拟表位，从中挑选1个模拟表位(IRPMVDP)，通过pC89噬菌体展示系统，将其与噬菌体主要衣壳蛋白VIII融合，获得可大量表达模拟表位的基因重组噬菌体，通过单克隆抗体鉴别阳性克隆，DNA序列分析进行鉴定确证。并以重组噬菌体为包被抗原，建立了ELISA检测方法。rn 通过与传统ELISA方法相比较，二者的线性范围和检测限基本一致，样品的检测结果也相符合，结果表明：该重组噬菌体可替代赭曲霉毒素A偶联抗原用于ELISA检测。

摘要： 本发明涉及用于生成供预防和/或治疗突触核蛋白病用的药物的肽或多肽。

摘要： 本发明通过噬菌体展示技术分离了一种HER-2模拟抗原表位小肽(通式I)。本发明还对该表位小肽进行了突变修饰，鉴定了几种仍然保持免疫原性的这种抗原表位的衍生物。含有这种表位或其衍生物的肽或肽与其它蛋白的融合可以用作疫苗用于诱导产生针对HER-2的体液和细胞免疫反应，进而发挥对肿瘤的预防及治疗作用。本发明还合成了编码这些肽的寡核苷酸、构建了含有该寡核苷酸或该寡核苷酸与编码其它蛋白基因重组的表达载体并转化细胞。本发明提供了一种寡核苷酸、载体或细胞可以治疗肿瘤的方法和药物组合物。

摘要： 本发明涉及用于生成供预防和/或治疗突触核蛋白病用的药物的肽或多肽。

摘要： 本发明公开了一种人B细胞特异性表达膜分子CD20的12个氨基酸的模拟表位及其用该模拟表位构建的多肽表位疫苗，利用已由美国FDA批准上市的用于B淋巴细胞型白血病及淋巴瘤治疗的人鼠嵌合单克隆抗体Rituximab作为配体在噬菌体12随机呈现肽库中筛选出CD20分子的模拟表位，Gln-Asp-Lys-Leu-Th-Gln-Trp-Pro-Lys-Try-Leu-Glu，该表位能够特异性的被美罗华单抗所识别，化学合成该12氨基酸的模拟表位并与匙孔嗜血蓝蛋白(KLH)进行化学偶连，得到构建成功的疫苗。由它构建的蛋白疫苗能够在小鼠体内诱导出针对天然CD20分子的抗血清，该抗血清具有相似与美罗华杀伤CD20+细胞的作用。进一步制备能够应用于人体的CD20分子的自体疫苗，从而以主动免疫方式来替代或补充单抗被动免疫治疗，克服单抗治疗缺陷打下基础。

摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的金黄色葡萄球菌FnBPA‑A蛋白的模拟表位肽、模拟表位肽组合物及其应用。本发明提供的2个免疫保护性模拟表位肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，而模拟表位肽组合物则由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的2种多肽组成，且SEQ ID NO:1所示多肽与SEQ ID NO:2所示多肽的质量配比为2:1。实验动物免疫保护性试验表明，本发明的2个模拟表位肽能够刺激机体产生高水平的特异性抗体，具有一定程度的免疫保护性，并且模拟表位肽组合物对黄色葡萄球菌感染的免疫保护效果好于FnBPA‑A全蛋白。因此，本发明的模拟表位肽及其组合物可作为有效成分，用于金黄色葡萄球菌多表位疫苗的开发，预防金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎。

摘要： 本发明公开了以胃癌MG7-Ag模拟表位为基础构建的多表位DNA疫苗及其方法。本发明利用HSP70为载体，GGGS为间隔序列，构建含有4个串联不同的MG7-Ag模拟表位与HSP70的融合基因疫苗。经Western blotting鉴定表明融合基因在小鼠骨髓瘤SP2/0细胞中成功表达，并保持了亲本蛋白各自的活性。质粒免疫接种后，融合基因疫苗可诱导小鼠产生抗MG7-Ag特异性抗体以及一定数量的特异性CTL分泌IFNγ，多表位疫苗免疫组优于单表位疫苗组和其他对照组。肿瘤攻击后，疫苗免疫组小鼠成瘤体积明显小于对照组。这一基因疫苗在胃癌的免疫治疗研究，胃癌特异性疫苗的研制方面将具有巨大的潜在价值。

摘要： 本发明公开了一种人B细胞特异性表达膜分子CD20的12个氨基酸的模拟表位及其用该模拟表位构建的多肽表位疫苗，利用已由美国FDA批准上市的用于B淋巴细胞型白血病及淋巴瘤治疗的人鼠嵌合单克隆抗体Rituximab作为配体在噬菌体12随机呈现肽库中筛选出CD20分子的模拟表位，Gln－Asp－Lys－Leu－Th－Gln－Try－Pro－Lys－Try－Leu－Glu，该表位能够特异性的被美罗华单抗所识别，化学合成该12氨基酸的模拟表位并与匙孔嗜血蓝蛋白(KLH)进行化学偶连，得到构建成功的疫苗。由它构建的蛋白疫苗能够在小鼠体内诱导出针对天然CD20分子的抗血清，该抗血清具有相似与美罗华杀伤CD20+细胞的作用。进一步制备能够应用于人体的CD20分子的自体疫苗，从而以主动免疫方式来替代或补充单抗被动免疫治疗，克服单抗治疗缺陷打下基础。

摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的金黄色葡萄球菌FnBPA‑A蛋白的模拟表位肽、模拟表位肽组合物及其应用。本发明提供的2个免疫保护性模拟表位肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，而模拟表位肽组合物则由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的2种多肽组成，且SEQ ID NO:1所示多肽与SEQ ID NO:2所示多肽的质量配比为2:1。实验动物免疫保护性试验表明，本发明的2个模拟表位肽能够刺激机体产生高水平的特异性抗体，具有一定程度的免疫保护性，并且模拟表位肽组合物对黄色葡萄球菌感染的免疫保护效果好于FnBPA‑A全蛋白。因此，本发明的模拟表位肽及其组合物可作为有效成分，用于金黄色葡萄球菌多表位疫苗的开发，预防金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎。

摘要： 本发明属于分子生物学、免疫学和细胞生物学领域，涉及人VASN蛋白抗原表位及其制备方法和用途。通过噬菌体筛选技术，获得两条抗原表位肽VP1和VP2，其与VASN蛋白430‑441位氨基酸序列具有高度同源性。进而，通过ELISA、竞争ELISA、Transwell、CCK‑8等试验，确定了表位肽VP1和VP2能够拮抗VASN抗体抑制肝癌细胞迁移和增殖的功能。因此，VASN(430‑441位)抗原表位及其抗原模拟表位在肿瘤抗体药物和肿瘤疫苗的研发中具有良好的应用前景。

摘要： 具体来说，公开了用于患者分层和选择个性化定制的基于肽的治疗和疫苗的方法，所述方法包括通过使用组合的T细胞表位和模拟表位文库来探询患者的T淋巴细胞总库以鉴定参与哺乳动物针对病原体、癌症和其他疾病的免疫应答的抗原性和免疫原性肽的测定法。