PCR反应体系

摘要： 利用单因素试验结合L_(16)(4^(5))正交试验设计对国槐SSR-PCR反应体系中的5个主要影响因素(Mg^(2+)、引物、dNTPs、ExTaq酶、模板DNA用量)进行优化,确定最佳反应体系为(10μL):25 mmol/L Mg^(2+)1.0μL,2.5 mmol/L dNTPs 0.2μL,10μmol/L上下游引物共0.5μL,5 U/μL ExTaq酶0.05μL,30 ng/μL模板DNA 1.0μL,10×PCR Buffer 1.0μL,ddH_(2)O 6.25μL。随机挑选4对SSR引物和8个国槐种质对试验确定的最佳反应体系进行验证,均能获得清晰、稳定的条带。该优化反应体系的建立为利用SSR标记对国槐种质资源进行深入研究和利用奠定了基础。

摘要： [目的]建立和优化银缕梅ISSR-PCR反应体系.[方法]采用正交试验和单因子试验对影响PCR扩增体系中的Mg2 +浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶用量5个因子进行分析研究.[结果]银缕梅ISSR-PCR 25 μL反应体系中5个因子最优水平:DNA模板(20 ng/μL)2.50 μL,引物(10 μmol /L)1.00 μL,Taq酶(5 U/μL)0.10 μL,Mg2 +(25 mmol/L)3.00 μL,dNTPs(2.5 mmol/L) 1.50 μL.[结论]银缕梅ISSR-PCR反应最优体系的建立为进一步利用ISSR对其进行分子标记辅助育种、分子指纹图谱构建和遗传多样性分析等后续研究奠定了基础.%[Objective]To establish and optimize ISSR-PCR reaction system.[Method]Effect for ISSR-PCR reaction of Parrotia subaequalis on 5 factors(Mg2 +,dNTPs,DNA template,Taq polymerase and primer)were analyzed by orthogonal design and single factor test.[Result]The optimal ISSR-PCR reaction system(25 μL)mixture contained DNA template(20 ng/μL)2.50 μL,primer(10 μmol/L)1.00 μL,Taq polymerase (5 U/μL)0.10 μL,Mg2 +(25 mmol/L)3.00 μL,dNTPs(2.5 mmol/L)1.50 μL.[Conclusion]The establishment of ISSR-PCR reaction system for P.subaequalis laid the foundation for the further use of ISSR to study molecular marker-assisted breeding,molecular identity and genetic diver-sity.

摘要： Tamarix chinensis Lour. is a salt-tolerance shrub or small tree,scattered in the riverbed or forming large natural populations in coastal tidal areas. For population genetics study of this species,the orthogonal design was used to determine the PCR amplification system of genomic SSR derived from Illumina sequencing in T. chinensis. The 10卜L reaction system of gSSR is as follows:0.8 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs,0.5 U Taq DNA polymerase,0.5卜mol/L primers,and 20 ng DNA.%柽柳(Tamarix chinensis Lour.)是耐盐碱的灌木或小乔木,多散生于河漫滩或在沿海滩涂形成大规模群体.对由Illumina测序开发的柽柳微卫星标记反应体系进行了正交试验设计,确定10卜L SSR-PCR反应体系的各反应物浓度为Mg2+0.8 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、引物0.5卜mol/L、模板DNA 20 ng.

摘要： 采用正交试验设计及单因素试验对影响PCR反应的各因素进行优化,建立我国特有的濒危树种银缕梅SSR-PCR反应最佳体系,为银缕梅遗传多样性的进一步研究奠定前期基础.结果表明,银缕梅SSR-PCR反应最佳体系为(25μL):Ex-Taq Mix 15.5μL,DNA 4.5μL(20ng/μL),引物-F 2.4μL(10μmol/L),引物-R 2.4μL(10μmol/L).

摘要： 旨在建立稳定可靠的油梨（PerseaAmericanaMill）叶片DNA的提取方法和SSR-PCR反应体系及筛选出稳定的油梨SSR多态性引物，为开展油梨种质SSR分子标记提供遗传研究的基础。以油梨叶片为试材，比较3种油梨叶片DNA提取方法；利用L16（45）正交实验设计对油梨SSR-PCR反应体系进行优化；利用优化的反应体系筛选引物；同时，选取5对多态性引物对45份油梨种质进行PCR扩增，

摘要： 百日草雄性不育在F1代杂交育种中应用广泛,建立百日草雄性育性EST-SSR分子标记,为百日草分子标记辅助育种奠定科学基础.本研究通过分析NCBI数据库中百日草属EST序列20667条,进行EST-SSR信息的分析.采用20μL红酶PCR反应体系,以百日草雄性不育两用系MJ16AB的DNA为模板,筛选引物.结果获得622条重复基元不少于5次且重复序列长度≥12 bp的SSR,其中二、三核苷酸出现次数最多的是AT/TA、CTA/GAT,分别占总数的9.5%、10.6%.随机合成的136对引物中,引物28、30、33、69和ZeM63在百日草可育和不育两池间扩增出清晰且稳定的差异性条带.本试验验证了基于百日草属EST数据开发SSR分子标记的可行性,筛选出的5对多态性引物可用于建立百日草雄性育性分子标记.%Male sterility of Zinnia elegans is widely used in F1 generation. In order to establish the EST-SSR molecular markers of Zinnia elegans male fertility, provide the scientific foundation for the molecular marker assisted breeding of Zinnia elegans,the EST sequences of Zinnia from NCBI were analyzed,20667 unigenes were obtained to develop new EST-derived SSR markers.Then with 20μL red enzyme PCR reaction, taking the male sterile two-type lines MJ16AB of Zinnia elegans as templates, primers were screened 622 SSRs,whose repeated motifs were not less than 5 times and repeated length greater than 12 bp,were obtained. Among them,the dominant types of the dinucleotide and trinucleotide repeats were AT/TA and CTA/GAT,accounting for 9.5% and 10.6% repectively.5 among 136 pairs of primers could produce stable and expected polymorphism PCR products between fertile pool and sterile pool of Zinnia elegans,they were primers 28,30, 33,69 and ZeM63 respectively.The results indicated that it is a feasible way to develop EST-SSR markers from Zinnia elegans EST,5 polymorphic primers could be used for the establishment of molecular markers of Zinnia elegans male fertility.

摘要： 该研究以苹果砧木SH38为材料，利用正交试验设计对影响SRAP—PCR反应的4因素（TaqDNA聚合酶、模板DNA，dNTPs，引物）4水平进行优化，并构建苹果砧木SH38的SRAP—PCR的最佳反应体系。

摘要： In this study, 286 868 expressed sequence tags (ESTs) are downloaded from the USA NCBI database. 4 310 appropriate simple sequence repeats (SSRs) are picked out with software of SSRIT. These SSRs accounted for 1.50% of the EST database and 40.09%of them is trinucleotide which is the maximum type. A total of 235 SSR types are got, 21 of them accounted for 68.63%total SSRs picked out in this study, and each of the 21 SSRs is more than 1% of the total SSRs. The optimal PCR reaction system for EST-SSR of flax is got by orthogonal design as follow:primer 0.2μmol/L;template DNA, 50 ng, dNTP, 0.10 mmol/L、Mg2+, 1.5 mmol/L、Taq DNA polymerase 0.50 U/μl、2μL 10×buffer, and at last, filling 20μL with ddH2O. The consistent result is got from single factor optimization experiment on he optimal PCR reaction system for EST-SSR of flax.%从美国NCBI数据库中下载了286868条亚麻EST，利用SSRIT软件检索出符合要求的SSR重复序列4310条，占整个EST数据库的1.50%。其中三核苷酸出现频率最高，占总SSR的40.09%； SSR重复类型总共235种，序列中占总SSR比例大于1%的重复类型共有21种，占SSR序列总数的68.63%。通过正交设计（L16）得到了胡麻EST-SSR最佳PCR反应体系：即20μL反应体系里，引物0.2μmol/L、模板DNA 50 ng、 dNTP 0.10 mmol/L、Mg2+1.5 mmol/L、 Taq DNA聚合酶0.50 U/μl、2μL 10×buffer，其余用ddH2O补齐。并通过单因素优化试验，对得到的胡麻EST-SSR最佳PCR反应体系进行了验证，结果完全一致。

摘要： 该文以海南油茶DNA为材料,对AFLP反应体系中的油茶基因组DNA用量、酶切连接反应时间、酶切连接液稀释倍数、预扩增反应产物稀释倍数、Mg2+浓度等5个因素进行优化.结果表明:EcoRI和MseI酶切连接反应14h需基因组DNA用量为400ng,预扩增反应过程酶切连接液稀释倍数10倍,选择扩增中预扩增产物稀释倍数40倍,两次扩增选用Mg2+浓度均为2.0mmol/L.采用该技术体系得到的AFLP指纹式样清晰,适宜用作海南油茶品种鉴别和遗传多样性分析.

摘要： 本试验采用正交试验设计法,对“阳丰”甜柿SSR-PCR体系中DNA模板浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度、引物、Taq酶用量等进行了优化,通过琼脂糖凝胶电泳对谱带进行分析,结果表明体系10为最佳体系:20 μL扩增反应体系中,25 mmol·L-1 MgCl2溶液1.4 μL,10 mmol·L-1 dNTPs混合液0.4μL,10 mmol·L-1引物1.1μL,5U·μL-1 Taq酶液0.4μL,10 ng·μL-1 DNA溶液4.0 μL.所有参试因素中Taq酶对“阳丰”甜柿SSR-PCR扩增结果影响最大,dNTPs对PCR结果影响最小.

摘要： 为建立犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(CPIV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV2)的多重PCR方法，本文根据GeneBank中CDV、CPIV和CAV-2的基因序列，进行blast同源性分析,找出保守序列,即CDV中F基因序列的470-1989bp、CPIV中N基因序列的0-1658bp和CAV-2中全序列的25635-26230bp.根据保守序列对每个病毒设计2～3对引物，通过实验选择最佳的引物组合对.将PCR反应体系及反应程序进行优化，建立同时扩增CDV (500bp)、CPIV (293bp)和CAV-2 (655bp)的多重PCR方法，采用已建立的方法对39例呼吸道病犬收集的病料进行检测,得到CDV阳性率为20.5％，CPIV和CAV-2阳性率均为5.13％,证明本文建立的多重PCR方法适用于临床诊断。

摘要： 为建立犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(CPIV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV2)的多重PCR方法，本文根据GeneBank中CDV、CPIV和CAV-2的基因序列，进行blast同源性分析,找出保守序列,即CDV中F基因序列的470-1989bp、CPIV中N基因序列的0-1658bp和CAV-2中全序列的25635-26230bp.根据保守序列对每个病毒设计2～3对引物，通过实验选择最佳的引物组合对.将PCR反应体系及反应程序进行优化，建立同时扩增CDV (500bp)、CPIV (293bp)和CAV-2 (655bp)的多重PCR方法，采用已建立的方法对39例呼吸道病犬收集的病料进行检测,得到CDV阳性率为20.5％，CPIV和CAV-2阳性率均为5.13％,证明本文建立的多重PCR方法适用于临床诊断。

摘要： 为建立犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(CPIV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV2)的多重PCR方法，本文根据GeneBank中CDV、CPIV和CAV-2的基因序列，进行blast同源性分析,找出保守序列,即CDV中F基因序列的470-1989bp、CPIV中N基因序列的0-1658bp和CAV-2中全序列的25635-26230bp.根据保守序列对每个病毒设计2～3对引物，通过实验选择最佳的引物组合对.将PCR反应体系及反应程序进行优化，建立同时扩增CDV (500bp)、CPIV (293bp)和CAV-2 (655bp)的多重PCR方法，采用已建立的方法对39例呼吸道病犬收集的病料进行检测,得到CDV阳性率为20.5％，CPIV和CAV-2阳性率均为5.13％,证明本文建立的多重PCR方法适用于临床诊断。

摘要： 为建立犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(CPIV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV2)的多重PCR方法，本文根据GeneBank中CDV、CPIV和CAV-2的基因序列，进行blast同源性分析,找出保守序列,即CDV中F基因序列的470-1989bp、CPIV中N基因序列的0-1658bp和CAV-2中全序列的25635-26230bp.根据保守序列对每个病毒设计2～3对引物，通过实验选择最佳的引物组合对.将PCR反应体系及反应程序进行优化，建立同时扩增CDV (500bp)、CPIV (293bp)和CAV-2 (655bp)的多重PCR方法，采用已建立的方法对39例呼吸道病犬收集的病料进行检测,得到CDV阳性率为20.5％，CPIV和CAV-2阳性率均为5.13％,证明本文建立的多重PCR方法适用于临床诊断。

摘要： 利用筛选出的标记了2种荧光标记的18对北京鸭微卫星引物，再结合ABI3100遗传分析仪电泳测序的方法，通过引物组合和优化反应条件，建立了可用于北京鸭遗传分析的多重PCR反应体系。18个微卫星标记共获得6个具有理想扩增效果的三重PCR组合。将扩增产物按照标记荧光的不同进一步合并为3组，用ABI 3100遗传分析仪进行高通量的电泳检测。实验结果表明，18个微卫星标记可以用三重PCR进行快速的扩增，为北京鸭应用微卫星标记进行分子育种奠定了基础。

摘要： 利用筛选出的标记了2种荧光标记的18对北京鸭微卫星引物，再结合ABI3100遗传分析仪电泳测序的方法，通过引物组合和优化反应条件，建立了可用于北京鸭遗传分析的多重PCR反应体系。18个微卫星标记共获得6个具有理想扩增效果的三重PCR组合。将扩增产物按照标记荧光的不同进一步合并为3组，用ABI 3100遗传分析仪进行高通量的电泳检测。实验结果表明，18个微卫星标记可以用三重PCR进行快速的扩增，为北京鸭应用微卫星标记进行分子育种奠定了基础。

摘要： 利用筛选出的标记了2种荧光标记的18对北京鸭微卫星引物，再结合ABI3100遗传分析仪电泳测序的方法，通过引物组合和优化反应条件，建立了可用于北京鸭遗传分析的多重PCR反应体系。18个微卫星标记共获得6个具有理想扩增效果的三重PCR组合。将扩增产物按照标记荧光的不同进一步合并为3组，用ABI 3100遗传分析仪进行高通量的电泳检测。实验结果表明，18个微卫星标记可以用三重PCR进行快速的扩增，为北京鸭应用微卫星标记进行分子育种奠定了基础。

摘要： 利用筛选出的标记了2种荧光标记的18对北京鸭微卫星引物，再结合ABI3100遗传分析仪电泳测序的方法，通过引物组合和优化反应条件，建立了可用于北京鸭遗传分析的多重PCR反应体系。18个微卫星标记共获得6个具有理想扩增效果的三重PCR组合。将扩增产物按照标记荧光的不同进一步合并为3组，用ABI 3100遗传分析仪进行高通量的电泳检测。实验结果表明，18个微卫星标记可以用三重PCR进行快速的扩增，为北京鸭应用微卫星标记进行分子育种奠定了基础。

摘要： 利用筛选出的标记了2种荧光标记的18对北京鸭微卫星引物，再结合ABI3100遗传分析仪电泳测序的方法，通过引物组合和优化反应条件，建立了可用于北京鸭遗传分析的多重PCR反应体系。18个微卫星标记共获得6个具有理想扩增效果的三重PCR组合。将扩增产物按照标记荧光的不同进一步合并为3组，用ABI 3100遗传分析仪进行高通量的电泳检测。实验结果表明，18个微卫星标记可以用三重PCR进行快速的扩增，为北京鸭应用微卫星标记进行分子育种奠定了基础。

摘要： 目的:建立并优化花椒的RAPD-PCR反应体系. 方法:以汉源花椒DNA为材料,采用正交实验对Mg2+、dNTP、DNA、引物,TaqE等反应条件进行优化. 结果:花椒的PCR反应体系为25μl,包括ddH20 13.5μl、25mmol/L的MgCh 2μl、2.5mmol/L的dNTPs 2μl、10×Buffer 3μl、10ng/μl的引物2μl、DNA 2μl、5U TaqE0.5μl;PCR反应程序为95°C预变性3min,94°C预变性2min,94°C变性50s,43.8°C退火1min,72°C延伸1min20s,35个循环,72°C最后延伸5min.用所建立的方法对21个产地的花椒样品进行测定,均可获得清晰、稳定的PCR扩增条带. 结论:本研究为RAPD分析应用于花椒的遗传多样性研究打下了良好的基础.

摘要： 本发明涉及一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液及其反应体系和PCR方法,该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液包括如下原料：三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、二甲基亚砜、脱氧核糖核苷三磷酸、甘油、牛血清蛋白、吐温20、三氮化钠、Rox参比染料、去离子水。该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液增加了NH4+和N3‑，提高PCR反应效率，适用于PCR技术的高效扩增型和灵敏检测，其不仅具有稳定性好，荧光效果佳、灵敏度高的优点。该实时荧光PCR方法，通过采用一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液配置成荧光RT‑PCR反应体系，其具有结果可靠和准确灵敏、操作简单、省时省力、降低检测成本，提高检查效率等优点。

摘要： 本发明提供了一种RT‑PCR反应体系、RT‑PCR方法及应用，涉及核酸扩增与检测技术领域。所述RT‑PCR反应体系包含反转录酶和Carrier RNA；其中，所述反转录酶为MMLV反转录酶，所述Carrier RNA在所述反应体系中的终浓度为0.1~0.3μg/μL。本发明解决了反转录酶在室温条件下放置时会产生非特异性反应，本发明的反应体系和方法可以解决RT‑PCR自动化过程中整板反应一致性的问题。

摘要： 本发明提供了一种PCR反应体系、试剂、试剂盒和PCR方法，涉及PCR技术领域。该PCR反应体系包含表面活性剂、还原剂、糖类物质和醇类物质，能够直接用于对未经核酸提取和纯化的样品进行扩增，且具有较高的扩增效率和灵敏度，缓解了现有技术中存在的缺乏一种适用于有效的对未经核酸提取纯化的样本进行扩增的PCR反应体系的问题。

摘要： 本发明涉及一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液及其反应体系和PCR方法,该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液包括如下原料：三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、二甲基亚砜、脱氧核糖核苷三磷酸、甘油、牛血清蛋白、吐温20、三氮化钠、Rox参比染料、去离子水。该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液增加了NH4

摘要： 本发明提供了一种RT‑PCR反应体系、RT‑PCR方法及应用，涉及核酸扩增与检测技术领域。所述RT‑PCR反应体系包含反转录酶和Carrier RNA；其中，所述反转录酶为MMLV反转录酶，所述Carrier RNA在所述反应体系中的终浓度为0.1~0.3μg/μL。本发明解决了反转录酶在室温条件下放置时会产生非特异性反应，本发明的反应体系和方法可以解决RT‑PCR自动化过程中整板反应一致性的问题。

摘要： 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种PCR反应体系、试剂盒和PCR方法。所述PCR试剂包括KOH、SDS、精氨酸、Brij‑35、TritonX‑100、尿素和DTT。还公开了一种包括该PCR试剂的PCR反应体系。利用本发明的方法扩增DNA，在前处理阶段无需对样本进行加热或离心等处理，操作非常简便。

摘要： 本发明提供了一种湖北贝母ISSR‑PCR扩增反应体系，每20μL反应体系中含有2×Taq Master Mix 10.5μL，模板DNA 0.8μL，引物2.2μL；将上述反应混合液按如下程序进行扩增：94°C预变性5min，然后94°C变性0.75min，50～60.0°C退火0.75min，延伸1.5min，共40个循环，最后72°C延伸10min，4°C保存。另外，本发明还提供了湖北贝母ISSR‑PCR分子标记方法。该发明所建立的湖北贝母ISSR‑PCR扩增反应体系扩增出的条带清晰度和稳定性高，具有很高的多态性的特点，弥补了现有对湖北贝母遗传多样性研究的不足；而且该湖北贝母ISSR‑PCR分子标记方法操作简单，节约时间和成本，结果稳定可靠，发明的成果对湖北贝母遗传多样性分析、种质资源鉴定及分子育种等方面有较好的应用价值。

摘要： 本发明提供了一种PCR反应体系、试剂、试剂盒和PCR方法，涉及PCR技术领域。该PCR反应体系包含表面活性剂、还原剂、糖类物质和醇类物质，能够直接用于对未经核酸提取和纯化的样品进行扩增，且具有较高的扩增效率和灵敏度，缓解了现有技术中存在的缺乏一种适用于有效的对未经核酸提取纯化的样本进行扩增的PCR反应体系的问题。

摘要： 本发明涉及一种连续进样的PCR反应体系配制及进样装置包括反应组分提供部、混合室、进样管和洗液提供器，所述混合室的顶部设置有允许菌落挑取器穿过的开口，所述反应组分提供部的出口与所述混合室连通，所述洗液提供器的出口与所述混合室的入口连通，所述混合室的出口与进样管连接，所述混合室的反应体系出口处设置有反应体系出口阀，所述混合室还设置有废液出口，所述废液出口与废液排出管连接，并且，所述废液出口处设置有废液排出阀。洗液可为水或聚合酶的缓冲液。通过该装置，可实现在同一个管式控温装置中同时进行多个PCR反应。

摘要： 本发明提供了一种连续进样的PCR反应体系配制及进样装置，其包括固定组分提供部、可变组分提供器、混合室、进样管和洗液提供器，所述固定组分提供部的出口与所述混合室均连通，所述可变组分提供器的出口与所述混合室的入口连通，所述洗液提供器的出口与所述混合室的入口连通，所述混合室的出口与进样管连接，所述混合室的反应体系出口处设置有反应体系出口阀，所述混合室还设置有废液出口，所述废液出口与废液排出管连接，并且，所述废液出口处设置有废液排出阀。通过该装置，可实现在同一个管式控温装置中同时进行多个PCR反应。