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PCR反应体系

PCR反应体系的相关文献在2000年到2020年内共计71篇,主要集中在林业、植物学、园艺 等领域,其中期刊论文47篇、会议论文3篇、专利文献21篇;相关期刊38种,包括检验医学教育、三明学院学报、通化师范学院学报等; 相关会议3种,包括第十五次全国养犬学术研讨会暨第七次全国小动物医学学术研讨会、第四届(2011)中国水禽发展大会、第三届中医药现代化国际科技大会等;PCR反应体系的相关文献由239位作者贡献,包括任如意、刘艳玲、杨美等。

PCR反应体系—发文量

期刊论文>

论文:47 占比:66.20%

会议论文>

论文:3 占比:4.23%

专利文献>

论文:21 占比:29.58%

总计:71篇

PCR反应体系—发文趋势图

PCR反应体系

-研究学者

  • 任如意
  • 刘艳玲
  • 杨美
  • 刘献勇
  • 卢新坤
  • 叶新福
  • 姜业先
  • 姜翠翠
  • 张婷
  • 徐立铭
  • 期刊论文
  • 会议论文
  • 专利文献

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排序:

年份

    • 陈云霞; 路志远; 肖卓恒
    • 《安徽农业科学》  | 2018年
    • 摘要: [目的]建立和优化银缕梅ISSR-PCR反应体系.[方法]采用正交试验和单因子试验对影响PCR扩增体系中的Mg2 +浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶用量5个因子进行分析研究.[结果]银缕梅ISSR-PCR 25 μL反应体系中5个因子最优水平:DNA模板(20 ng/μL)2.50 μL,引物(10 μmol /L)1.00 μL,Taq酶(5 U/μL)0.10 μL,Mg2 +(25 mmol/L)3.00 μL,dNTPs(2.5 mmol/L) 1.50 μL.[结论]银缕梅ISSR-PCR反应最优体系的建立为进一步利用ISSR对其进行分子标记辅助育种、分子指纹图谱构建和遗传多样性分析等后续研究奠定了基础.%[Objective]To establish and optimize ISSR-PCR reaction system.[Method]Effect for ISSR-PCR reaction of Parrotia subaequalis on 5 factors(Mg2 +,dNTPs,DNA template,Taq polymerase and primer)were analyzed by orthogonal design and single factor test.[Result]The optimal ISSR-PCR reaction system(25 μL)mixture contained DNA template(20 ng/μL)2.50 μL,primer(10 μmol/L)1.00 μL,Taq polymerase (5 U/μL)0.10 μL,Mg2 +(25 mmol/L)3.00 μL,dNTPs(2.5 mmol/L)1.50 μL.[Conclusion]The establishment of ISSR-PCR reaction system for P.subaequalis laid the foundation for the further use of ISSR to study molecular marker-assisted breeding,molecular identity and genetic diver-sity.
    • 曹建波; 张如华
    • 《湖北农业科学》  | 2018年
    • 摘要: Tamarix chinensis Lour. is a salt-tolerance shrub or small tree,scattered in the riverbed or forming large natural populations in coastal tidal areas. For population genetics study of this species,the orthogonal design was used to determine the PCR amplification system of genomic SSR derived from Illumina sequencing in T. chinensis. The 10卜L reaction system of gSSR is as follows:0.8 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs,0.5 U Taq DNA polymerase,0.5卜mol/L primers,and 20 ng DNA.%柽柳(Tamarix chinensis Lour.)是耐盐碱的灌木或小乔木,多散生于河漫滩或在沿海滩涂形成大规模群体.对由Illumina测序开发的柽柳微卫星标记反应体系进行了正交试验设计,确定10卜L SSR-PCR反应体系的各反应物浓度为Mg2+0.8 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、引物0.5卜mol/L、模板DNA 20 ng.
    • 陈云霞; 马鑫; 杨明睿
    • 《通化师范学院学报》  | 2018年
    • 摘要: 采用正交试验设计及单因素试验对影响PCR反应的各因素进行优化,建立我国特有的濒危树种银缕梅SSR-PCR反应最佳体系,为银缕梅遗传多样性的进一步研究奠定前期基础.结果表明,银缕梅SSR-PCR反应最佳体系为(25μL):Ex-Taq Mix 15.5μL,DNA 4.5μL(20ng/μL),引物-F 2.4μL(10μmol/L),引物-R 2.4μL(10μmol/L).
    • 胡妙; 秦美姣; 李娟; 叶要妹
    • 《江西农业大学学报》  | 2017年
    • 摘要: 百日草雄性不育在F1代杂交育种中应用广泛,建立百日草雄性育性EST-SSR分子标记,为百日草分子标记辅助育种奠定科学基础.本研究通过分析NCBI数据库中百日草属EST序列20667条,进行EST-SSR信息的分析.采用20μL红酶PCR反应体系,以百日草雄性不育两用系MJ16AB的DNA为模板,筛选引物.结果获得622条重复基元不少于5次且重复序列长度≥12 bp的SSR,其中二、三核苷酸出现次数最多的是AT/TA、CTA/GAT,分别占总数的9.5%、10.6%.随机合成的136对引物中,引物28、30、33、69和ZeM63在百日草可育和不育两池间扩增出清晰且稳定的差异性条带.本试验验证了基于百日草属EST数据开发SSR分子标记的可行性,筛选出的5对多态性引物可用于建立百日草雄性育性分子标记.%Male sterility of Zinnia elegans is widely used in F1 generation. In order to establish the EST-SSR molecular markers of Zinnia elegans male fertility, provide the scientific foundation for the molecular marker assisted breeding of Zinnia elegans,the EST sequences of Zinnia from NCBI were analyzed,20667 unigenes were obtained to develop new EST-derived SSR markers.Then with 20μL red enzyme PCR reaction, taking the male sterile two-type lines MJ16AB of Zinnia elegans as templates, primers were screened 622 SSRs,whose repeated motifs were not less than 5 times and repeated length greater than 12 bp,were obtained. Among them,the dominant types of the dinucleotide and trinucleotide repeats were AT/TA and CTA/GAT,accounting for 9.5% and 10.6% repectively.5 among 136 pairs of primers could produce stable and expected polymorphism PCR products between fertile pool and sterile pool of Zinnia elegans,they were primers 28,30, 33,69 and ZeM63 respectively.The results indicated that it is a feasible way to develop EST-SSR markers from Zinnia elegans EST,5 polymorphic primers could be used for the establishment of molecular markers of Zinnia elegans male fertility.
    • 赵玮; 党占海; 张建平; 王利民; 党照; 李闻娟; 赵利
    • 《甘肃农业科技》  | 2016年
    • 摘要: In this study, 286 868 expressed sequence tags (ESTs) are downloaded from the USA NCBI database. 4 310 appropriate simple sequence repeats (SSRs) are picked out with software of SSRIT. These SSRs accounted for 1.50% of the EST database and 40.09%of them is trinucleotide which is the maximum type. A total of 235 SSR types are got, 21 of them accounted for 68.63%total SSRs picked out in this study, and each of the 21 SSRs is more than 1% of the total SSRs. The optimal PCR reaction system for EST-SSR of flax is got by orthogonal design as follow:primer 0.2μmol/L;template DNA, 50 ng, dNTP, 0.10 mmol/L、Mg2+, 1.5 mmol/L、Taq DNA polymerase 0.50 U/μl、2μL 10×buffer, and at last, filling 20μL with ddH2O. The consistent result is got from single factor optimization experiment on he optimal PCR reaction system for EST-SSR of flax.%从美国NCBI数据库中下载了286868条亚麻EST,利用SSRIT软件检索出符合要求的SSR重复序列4310条,占整个EST数据库的1.50%。其中三核苷酸出现频率最高,占总SSR的40.09%; SSR重复类型总共235种,序列中占总SSR比例大于1%的重复类型共有21种,占SSR序列总数的68.63%。通过正交设计(L16)得到了胡麻EST-SSR最佳PCR反应体系:即20μL反应体系里,引物0.2μmol/L、模板DNA 50 ng、 dNTP 0.10 mmol/L、Mg2+1.5 mmol/L、 Taq DNA聚合酶0.50 U/μl、2μL 10×buffer,其余用ddH2O补齐。并通过单因素优化试验,对得到的胡麻EST-SSR最佳PCR反应体系进行了验证,结果完全一致。
    • 王惠君; 王文泉; 李文彬; 卢诚; 黎明; 陈友
    • 《河北林业科技》  | 2016年
    • 摘要: 该文以海南油茶DNA为材料,对AFLP反应体系中的油茶基因组DNA用量、酶切连接反应时间、酶切连接液稀释倍数、预扩增反应产物稀释倍数、Mg2+浓度等5个因素进行优化.结果表明:EcoRI和MseI酶切连接反应14h需基因组DNA用量为400ng,预扩增反应过程酶切连接液稀释倍数10倍,选择扩增中预扩增产物稀释倍数40倍,两次扩增选用Mg2+浓度均为2.0mmol/L.采用该技术体系得到的AFLP指纹式样清晰,适宜用作海南油茶品种鉴别和遗传多样性分析.
    • 段国锋; 李丽娟; 王争争; 刘群龙
    • 《山西农业大学学报(自然科学版)》  | 2015年
    • 摘要: 本试验采用正交试验设计法,对“阳丰”甜柿SSR-PCR体系中DNA模板浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度、引物、Taq酶用量等进行了优化,通过琼脂糖凝胶电泳对谱带进行分析,结果表明体系10为最佳体系:20 μL扩增反应体系中,25 mmol·L-1 MgCl2溶液1.4 μL,10 mmol·L-1 dNTPs混合液0.4μL,10 mmol·L-1引物1.1μL,5U·μL-1 Taq酶液0.4μL,10 ng·μL-1 DNA溶液4.0 μL.所有参试因素中Taq酶对“阳丰”甜柿SSR-PCR扩增结果影响最大,dNTPs对PCR结果影响最小.
    • 刁松锋; 邵文豪; 姜景民; 栾启福
    • 《广西植物》  | 2015年
    • 摘要: 无患子(Sapindus mukorossi )是我国长江以南地区传统的重要绿化树种,其果皮富含皂苷,种仁富含油脂,为新型木本油料树种之一。为了获得基于 KOD FX 高保真 DNA 聚合酶试剂盒的无患子 ISSR-PCR 的最佳反应体系,该文采用正交优化设计相结合的方法,研究了引物浓度、dNTPs 浓度、KOD FX 酶、模板 DNA浓度和 Mg2+浓度对无患子 ISSR-PCR 反应体系的影响,并在此基础上对退火温度进一步优化,最终确立了适合无患子的 ISSR-PCR 反应的最佳体系和程序,即20μL PCR 反应体系中,引物0.5μmol.L-1、dNTPs 0.05 mmol.L-1、KOD FX 酶0.06 U.μL-1、模板 DNA 浓度1.0 ng.μL-1和 Mg2+1.0 mmol.L-1。当以 UBC841为引物时,PCR 扩增程序为94℃预变性2 min,98℃变性10 s,48.6℃退火30 s,68℃延伸90 s,35个循环,68℃延伸7 min,4℃保存。这一优化的 ISSR-PCR 反应体系的建立,为无患子种质资源的遗传多样性、亲缘关系及遗传结构研究、种质创新与分子辅助育种等奠定了良好的基础。%Sapindus mukorossi is a traditional and important virescencetree species in the south part of China with rich saponins in peel and rich oil in seed.This tree species is one of the newly-developed woody oil species that were approved by the State Forestry Administration of China.For optimizing ISSR-PCR reaction system of S .mukorossi , based on KOD FX High-fidelity DNA Polymerase Kit,orthogonal design experiments were conducted.The main fac-tors affecting ISSR-PCR amplification,such as suitable concentration of primer,dNTPs,KOD FX DNA polymer-ase,DNA template and 2×PCR buffer for KOD FX were studied.Furthermore,the annealing temperature was op-timized on the base of the above tests.An ideally ISSR-PCR reaction system was established,namely 25 μL reaction system containing primer 0.5 μmol.L-1 ,dNTPs 0.05 mmol.L-1 ,KOD FX DNA polymerase 0.06 U.μL-1 、DNA tem-plate 1.0 ng.μL-1 and Mg2+ 1.0 mmol.L-1 .The optimal PCR amplification program was:The profile of ISSR-PCR was an initial denaturation step for 2 min 94 ℃,followed by 35 cycles of 30 s at 98 ℃ for denaturation,30 s at 48.6 ℃ for annealing,90 s at 68 ℃ for extension,finally extension at 68 ℃ for 7 min and holding the samples at 4℃.This optimized ISSR-PCR reaction system would provide the basis for the analysis of genetic diversity,genetic structure,germplasm innovation and molecular assisted selection in S .mukorossi .
    • 杨振华
    • 《黑龙江农业科学》  | 2015年
    • 摘要: 为建立及优化啤酒大麦SSR分子标记PCR反应体系,以35个啤酒大麦品种(系)为试验材料,利用L16(44)正交试验设计研究DNA、Taq酶、dNTPs及引物浓度对啤酒大麦SSR扩增效果的影响.结果表明:模板DNA 2.0 ng、10×PCR buffer 1.0μL、dNTPs 0.6μL、引物(0.25 mmol·L-1)1.5 μL、Taq酶(2.5U·μL-1)0.45 μL的扩增效果最优,扩增结果重复性好且稳定.
    • 任绪瑞; 刘艳玲; 杨美; 陈媛媛; 王冬良; 陈友根
    • 《热带作物学报》  | 2014年
    • 摘要: 利用单因素分析法对影响菰SRAP-PCR扩增效果的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、DNA模板和引物浓度5种因素进行了优化.结果表明:建立了适合菰基因组的SRAP-PCR的体系:1μL 10×Buffer、0.5U TaqDNA聚合酶、2mmol/L MgC12、50 ng模板DNA、0.20 mmol/L dNTPs、正反向引物的浓度各为0.7 μmol/L,共10μL.选取5对引物,利用该体系对72份菰样本进行PCR扩增,共获得132条清晰的谱带,其中91条具有多态性,比率为68.9%.菰SRAP-PCR反应体系的优化和建立将为利用该标记进行种质遗传多样性分析和连锁图谱构建等研究提供转术支持.
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