三种犬呼吸道病毒多重PCR方法的建立

摘要

为建立犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(CPIV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV2)的多重PCR方法，本文根据GeneBank中CDV、CPIV和CAV-2的基因序列，进行blast同源性分析,找出保守序列,即CDV中F基因序列的470-1989bp、CPIV中N基因序列的0-1658bp和CAV-2中全序列的25635-26230bp.根据保守序列对每个病毒设计2～3对引物，通过实验选择最佳的引物组合对.将PCR反应体系及反应程序进行优化，建立同时扩增CDV (500bp)、CPIV (293bp)和CAV-2 (655bp)的多重PCR方法，采用已建立的方法对39例呼吸道病犬收集的病料进行检测,得到CDV阳性率为20.5％，CPIV和CAV-2阳性率均为5.13％,证明本文建立的多重PCR方法适用于临床诊断。