花椒RAPD-PCR反应体系的建立与优化

摘要

目的:建立并优化花椒的RAPD-PCR反应体系. 方法:以汉源花椒DNA为材料,采用正交实验对Mg2+、dNTP、DNA、引物,TaqE等反应条件进行优化. 结果:花椒的PCR反应体系为25μl,包括ddH20 13.5μl、25mmol/L的MgCh 2μl、2.5mmol/L的dNTPs 2μl、10×Buffer 3μl、10ng/μl的引物2μl、DNA 2μl、5U TaqE0.5μl;PCR反应程序为95°C预变性3min,94°C预变性2min,94°C变性50s,43.8°C退火1min,72°C延伸1min20s,35个循环,72°C最后延伸5min.用所建立的方法对21个产地的花椒样品进行测定,均可获得清晰、稳定的PCR扩增条带. 结论:本研究为RAPD分析应用于花椒的遗传多样性研究打下了良好的基础.