GFP

摘要： 以本氏烟草(Nicotiana benthamiana)为植物材料,分析了不同农杆菌菌株(LBA4404菌株、EHA105菌株、GV3101菌株)、菌液浓度以及侵染时间在瞬时转化过程中对报告基因GFP荧光表达量的影响。结果显示,不同的农杆菌菌株瞬时表达外源基因的最适浓度和时间均有所不同:LBA4404菌株在菌悬液OD_(600)值为0.8时所介导的瞬时表达效率最高;而EHA105和GV3101菌株在菌悬液OD_(600)值为0.6时可达到最高瞬时表达效率。LBA4404菌株所介导的瞬时表达在农杆菌注射后第2天时表达量最高,而EHA105和GV3101菌株所介导的瞬时表达在农杆菌注射后第4天时表达量最高。不同菌株间比较分析表明,LBA4404菌株所介导的瞬时表达效率最高。上述结果表明,农杆菌菌株以及浓度和侵染时间等转化条件均是影响瞬时表达效率的重要因素。

摘要： 利用0D RNA支架系统可共聚集酶的优势提高大肠杆菌甲羟戊酸的产量。通过RNA-EMSA证明RNA适配体与RBDs(RNA binding domains)存在相互作用;将RBDs与荧光蛋白融合表达以评估RNA支架系统效率。相比对照菌株BLCCG,表达0D RNA支架的菌株BLPCG及表达RBDs的菌株BLCPG荧光强度分别提高126%和129%。表达0D PP7 RNA支架系统的菌株BLPPG提高375%;应用0D RNA支架系统生产甲羟戊酸。相比对照菌株BLCCES,表达0D PP7 RNA支架系统菌株BLPPES的甲羟戊酸产量提高84%,达3.13 g/L。因此,RNA支架系统是提高多酶代谢途径效率的有效工具。

摘要： 青枯病是危害马铃薯产业的重要病害,选育与推广抗青枯病品种是防控青枯病最高效的手段。目前已有的人工接种和田间抗性鉴定的方法不能有效区分处于潜伏侵染与完全抵抗侵染的材料,而利用GFP标记的Ralstonia solanacearum能够有效解决上述问题。笔者通过电击转化法将广宿主载体pBBR1MCS2-Tac-EGFP导入青枯菌P2中,成功获得了能够稳定遗传且不影响其致病力并带有绿色荧光报告的青枯菌菌株P2-Tac-EGFP。通过对感抗材料进行接种,结果表明,P2-Tac-EGFP能够有效区分感抗材料,并且P2-Tac-EGFP在感病材料的根部和茎部大量分布,而在抗病材料的根部仅有少量分布。综上所述,利用GFP标记的R.solanacearum能够快速准确地鉴定马铃薯青枯病抗性。

摘要： [目的]利用CRISPR/Cas9技术建立绵羊示踪脐带间充质干细胞系,为间充质干细胞的临床治疗与分化机制研究奠定基础.[方法]根据绵羊ROSA26的基因组序列,利用在线工具ZiFiT Targeter Version 4.2设计合成3对引物,利用点突变法,以px330质粒为模板分别进行PCR,DpnI去除质粒DNA后,PCR产物自身环化,酶切测序鉴定,构建以绵羊Rosa26为靶标基因的sgRNA/Cas9载体,构建的质粒含Cas9和向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)表达盒,由U6启动子驱动表达.将上述载体分别利用脂质体转染绵羊脐带间充质干细胞(sUMSCs),提取其基因组PCR后进行T7E1酶切,琼脂糖电泳分析条带灰度以检测载体编辑活性.根据sgRNA序列在绵羊ROSA26靶位点的上下游设计并合成左、右同源臂扩增引物,提取绵羊全基因组为模板分别进行PCR扩增得到左右同源臂,回收纯化后分别与pMD19-Simple连接,酶切测序鉴定获得左、右同源臂重组质粒.根据PCR引入的酶切位点,将左同源臂质粒和Donor表达载体DC-DON-SH02 ROSA26进行酶切连接,鉴定获得左臂重组打靶载体,使用相同方法将右同源臂质粒连接到左臂打靶载体上,鉴定获得Donor打靶载体,载体携带嘌呤霉素抗性基因和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因.在生长良好的sUMSCs中加入不同浓度的嘌呤霉素,观察细胞存活时间,确定最佳抗性筛选浓度和时间.利用脂质体共转sgRNA/Cas9载体和Donor载体到绵羊间充质干细胞,在其ROSA26位点切割DNA双链,在DNA断裂处通过同源重组方式引入报告基因,转染48 h后进行嘌呤霉素抗性筛选,筛选结束后更换正常培养基继续培养,观察绿色荧光的表达并提取阳性细胞基因组,针对ROSA26位点设计上下游两对引物对其进行PCR检测其整合情况.[结果](1)针对绵羊Rosa26位点设计3对PCR引物,利用点突变法将sgRNA克隆至px330的BbsI酶切位点上,成功构建sgRNA/Cas9载体px330-sgRNA1/2/3,将其分别转染sUMSCs,T7E1酶切结果表明px330-sgRNA2/3出现脱靶现象,未在靶位点发生编辑,px330-sgRNA1的编辑效率最高,约为20％;(2)基于sgRNA1,PCR法获得打靶载体的左、右同源臂,经一系列分子生物学方法先后连接到载体DC-DON-SH02 ROSA26上,经酶切和PCR鉴定,成功获得绵羊ROSA26位点的重组载体sROSA26-HA;(3)筛选得到sUMSCs最佳抗性浓度时间,利用Lipofectamine2000共转染sgRNA/Cas9载体和Donor重组载体到sUMSCs,1.5μg·mL-1嘌呤霉素筛选15d至对照组细胞全部死亡,获得的阳性克隆并扩大培养.显微镜下可观察到明显的绿色荧光,且与对照组相比,阳性细胞克隆的基因组PCR均检测到特异条带,表明sUMSCs的ROSA26位点发生同源重组,GFP基因被成功敲入到基因组中并能正常表达,该细胞可以用于动物疾病模型中追踪sUMSCs的去向和分化方向的研究.[结论]成功利用CRISPR/Cas9系统在sUMSCs内实现外源GFP基因的定点敲入,获得绵羊示踪脐带间充质干细胞系,为间充质干细胞进一步的临床转化奠定了基础.

摘要： 为研究锚定蛋白基因(Ankyrin,ANK)对山羊痘病毒的影响,试验采用融合PCR和Overlap PCR技术扩增山羊痘病毒SS株5个ANK基因(ANK010、ANK138、ANK 140、ANK141.2和ANK145)两端侧翼序列和绿色荧光蛋白(GFP)基因,并将其产物连接Trans1-T 1载体构建ANK缺失的转移载体,经过菌液PCR以及质粒双酶切鉴定,阳性重组质粒用Lip 2000转染至已经感染羊痘病毒SS株的羊睾丸原代细胞,依报告基因GFP的表达情况在荧光显微镜下筛选目的基因缺失的重组病毒,同时设立不感染病毒的对照.结果 表明:通过融合PCR方法成功扩增山羊痘病毒SS株ANK基因010和138的两端侧翼序列及GFP基因片段,大小约1 200 bp;通过Overlap PCR方法成功得到ANK基因140、141.2和145基因的侧翼及GFP基因片段,大小约900 bp,与理论相符.研究成功构建了基因缺失转移载体,将其转染感染SS病毒的细胞中,5个ANK基因缺失的表达载体均可见绿色荧光斑点,说明得到各自基因缺失的重组羊痘病毒.

摘要： 青枯病是危害马铃薯产业的重要病害,选育与推广抗青枯病品种是防控青枯病最高效的手段.目前已有的人工接种和田间抗性鉴定的方法不能有效区分处于潜伏侵染与完全抵抗侵染的材料,而利用GFP标记的Ralstonia solanacearum能够有效解决上述问题.笔者通过电击转化法将广宿主载体pBBR1MCS2-Tac-EGFP导入青枯菌P2中,成功获得了能够稳定遗传且不影响其致病力并带有绿色荧光报告的青枯菌菌株P2-Tac-EGFP.通过对感抗材料进行接种,结果表明,P2-Tac-EGFP能够有效区分感抗材料,并且P2-Tac-EGFP在感病材料的根部和茎部大量分布,而在抗病材料的根部仅有少量分布.综上所述,利用GFP标记的R.solanacearum能够快速准确地鉴定马铃薯青枯病抗性.

摘要： 近年来,电力线通信(Power Line Communications,PLC)因基础设施完备、分布广、成本低等特性应用于广泛的区域.然而PLC自身不提供广域端到端连接,需要依靠现有电信网,故增加了运营成本,同时现有以太网系统还存在传输效率低下以及只针对话音优化等不足.如何低成本并高效率传输成为人们的迫切需求.虚级联技术使得同步光纤网络/数字体系(SONET/SDH)在数据流量传输中提供更精细的粒度;基于SDH/SONET的以太网(Ethernet over SDH/SONET,EoS)技术因其结构简单,能利用现有SONET/SDH脱颖而出.文中提出在同一系统中将EoS和虚级联技术结合,结果显示这样能够更高效利用带宽,并控制成本在合理的范围.

摘要： 目的 本文拟建立基于IL-1 A基因启动子驱动增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)表达的细胞衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)监测模型,以便通过荧光判断SASP是否产生及其强度.方法 构建含IL-1 A-eGFP序列的慢病毒表达载体,经NcoⅠ及SalⅠ酶切及测序验证后,制备慢病毒颗粒,并感染人黑色素瘤M14细胞,经嘌呤霉素筛选、单克隆培养等获得整合IL-1 A-eGFP序列的细胞株.用顺铂(以溶剂为阴性对照)诱导该细胞株衰老,连续观察荧光变化,并用qRT-PCR检测SASP因子IL-1 A、IL-1 B、IL-8的表达.结果 经酶切和测序证实,IL-1 A-eGFP慢病毒表达载体构建正确.用该慢病毒感染人黑色素瘤M14细胞并经过筛选后,得到形态均一、增殖迅速的M14-IL-1 A-eGFP细胞株.该细胞常规状态下仅有微弱的绿色荧光背景,加入顺铂后,细胞增殖减慢,形态变大,同时绿色荧光明显增强,qRT-PCR检测发现SASP因子IL-1 A,IL-1 B和IL-8表达明显增强(P分别为0.002,0.028,0.056).结论 成功构建了SASP细胞监测模型,可通过绿色荧光的强度反映SASP状态,该模型有望为相关研究提供便利.

摘要： 农杆菌介导的瞬时基因表达因其操作简单、可重复性高和实验成本低而成为研究基因功能、生产活性蛋白的有效方法.该研究以非病毒型(载体Ⅰ)和病毒型二元载体(载体Ⅱ)及两种农杆菌(EHA105、LBA4404)为介导,通过叶片渗透法在5种中草药(甘草、黄芩、黄芪、大黄、板蓝根)叶片中进行报告基因GFP的瞬时表达,并对影响表达的因素进行分析,以明确中药材中适宜瞬时表达技术应用的物种材料.结果 显示:(1)农杆菌在5种中草药叶片中的瞬时转化效率受到载体、菌株和植物物种类型的影响.(2)在所选的5种中草药植物中,与无转化载体的菌株相比,当农杆菌重悬液OD600为0.8、叶片侵染5～7 d时,含非病毒型二元载体的EHA105菌株在甘草叶片中荧光强度最高,大黄次之;含病毒型二元载体的LBA4404菌株在黄芩叶片中GFP荧光表达量最高;含不同载体的不同菌液侵染的甘草、黄芪叶片仅有注射孔处检测出荧光或几乎无荧光蛋白表达,即未向四周扩散表达;在板蓝根叶片中检测出弱荧光或无荧光强度.研究表明,甘草和黄芩植物叶片可作为农杆菌介导基因瞬时表达的材料.

摘要： 随着各类宽带应用的蓬勃发展,光通信网络凭借高容量、低传输损耗、保密性佳等优点,成为铺设骨干网络的重要技术。为了应对日益复杂的通信业务内并提高网络的使用效益,各个城市积极规划布建下一代同步数字体系(SDH)。文章针对下一代 SDH 的关键技术虚拟连接 (VCAT)、链路容量调整方案 (LCAS)、通用成帧协议 (GFP) 等三个问题进行研究,以光网络实验室构建下一代 SDH 架构,从而测量并验证 SDH 的性能。

摘要： 本研究选择了9株分离自菜豆(Phaselous vulgaris)和杭子梢(Campylotropis sp.)与悬钩子土壤杆菌同种的根瘤菌,对它们进行了gfp(绿色荧光蛋白基因)标记的植物回接试验、nodA和nifH PCR,试图确定它们的结瘤固氮特性;同时,用这9株菌接种向日葵进行植物致病性试验,从表型上确定这群菌株的土壤杆菌特性.结果表明,这些菌株不能在原宿主上结瘤,虽然宿主为菜豆的3株供试菌CCBAU 71197、CCBAU 71181以及CCBAU 73083与分离自菜豆的根瘤菌CCBAU 01012混合接种,能使菜豆结瘤,但在根瘤中并没有发现gfp标记的供试菌.两种引物的nodA PCR没有扩增出供试菌中预期大小的nodA基因,但其中一种引物扩增出大约900bp的片段,经测序与比对,发现其与已知根瘤菌的序列有很大的差异,而与土壤杆菌的基因组序列有同源性.nifH PCR的结果表明部分供试菌可能具有固氮基因.所有的供试菌都不能使向日葵产生冠瘿瘤.

摘要： 【目的】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。【方法】构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthemBlot、Western Blot等检测分析。【结果】检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。【结论】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： 【目的】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。【方法】构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthemBlot、Western Blot等检测分析。【结果】检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。【结论】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： 【目的】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。【方法】构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthemBlot、Western Blot等检测分析。【结果】检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。【结论】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： 【目的】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。【方法】构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthemBlot、Western Blot等检测分析。【结果】检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。【结论】利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： [目的]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。rn [方法]rn 构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthernBlot、Western Blot等检测分析。rn [结果]rn 检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。rn [结论]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： [目的]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。rn [方法]rn 构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthernBlot、Western Blot等检测分析。rn [结果]rn 检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。rn [结论]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： [目的]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。rn [方法]rn 构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthernBlot、Western Blot等检测分析。rn [结果]rn 检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。rn [结论]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： [目的]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白，研究提高抗原蛋白表达量的方法。rn [方法]rn 构建含高效表达元件MAR序列的植物高效表达载体和含引导肽KDEL的融合表达载体，以百脉根的子叶作为外植体，通过农杆菌介导法，将禽流感血凝素基因导入到了豆科牧草推广品种百脉根“里奥”中，经过抗性筛选，获得了抗性植株，对抗性植株进行RT-PCR、SouthernBlot、Western Blot等检测分析。rn [结果]rn 检测结果表明禽流感血凝素基因已成功在百脉根中表达。而通过荧光共聚焦显微镜观察MHA-GFP的表达结果发现KDEL并未和预想的一样起到将目的蛋白定位到内质网的作用，而是定位到了细胞膜和细胞间隙。rn [结论]rn 利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白是切实可行的。同时发现禽流感血凝素基因(HA)本身可能存在着引导蛋白到细胞膜和细胞间隙的序列。HA有很强的定位作用目前还没有报道，尚属首次发现。禽流感血凝素基因在细胞膜及细胞间隙的表达，将为抗原蛋白的纯化提供了可能。

摘要： 传输效率是光通信中的重要指标，而影响效率的重要因素就是业务的封装形式．本文从OTN的分层和帧结构出发，分析了OTN的特点，并重点讨论了IP数据业务在OTN上传榆的实现方法。

摘要： 本发明公开了一种GFP数据性能监控方法，包括以下步骤：A、源节点对GFP净负荷计算纠错码，将该GFP净负荷纠错码与GFP净负荷组成GFP数据包内的GFP净负荷区，随GFP数据包发送至下游中间节点或宿节点；B、中间节点对接收到的GFP数据包的所述GFP净负荷区的内容不作任何变更；C、宿节点接收到GFP数据包后，解离出GFP净负荷区并利用GFP净负荷纠错码对GFP净负荷进行检错和纠错；在此基础上，还公开了一种GFP设备。本发明利用增加的GFP净负荷纠错码实现端到端的GFP数据性能监控；利用保留的负荷区纠错码实现逐段的GFP数据性能监控；本发明对两种纠错码的结合使用，简便、有效地实现了对GFP数据性能进行监控，保证了GFP数据能够安全、有效地传送。

摘要： 本发明是通过基因工程的技术手段获得了GFP标记的白僵菌，并通过四种方法将所述的GFP标记的白僵菌接种于玉米中，然后利用激光扫描共聚焦显微镜在蓝光下进行荧光观察并拍照，本发明的方法能够准确观测不同接种浓度下，白僵菌孢子在植物组织内的宿存情况，操作简便，省时省力，同时，本发明为研究虫生真菌在植物中的定殖机理奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一株可表达绿色荧光蛋白(GFP)的生防菌玫烟色拟青霉在靶标害虫流行病学中的应用。该生防菌通过原生质体转化技术，将带有绿色荧光蛋白标记的表达质粒载体pCT74-GFP转入玫烟色拟青霉菌株FZ01基因组中，获得了一株可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP。该菌株用于靶标害虫流行病学的研究：释放所述FZ01-GFP生防菌株，定时定点采集、记录靶标害虫数量，收集罹病害虫样本，通过质粒载体pCT74-GFP的一对特异引物对罹病样本进行PCR分子检测鉴别，分析数据，确定生防菌FZ01-GFP对靶标害虫侵染的发生规律和流行趋势。解决了目前生防菌流行病学研究中靶标害虫病因鉴定困难的问题。具有步骤简单，操作方便，能有效监测和客观反映生防菌玫烟色拟青霉对靶标害虫发生发展规律等优点。

摘要： 本发明公开了一种GFP数据性能监控方法，包括以下步骤：A、源节点对GFP净负荷计算纠错码，将该GFP净负荷纠错码与GFP净负荷组成GFP数据包内的GFP净负荷区，随GFP数据包发送至下游中间节点或宿节点；B、中间节点对接收到的GFP数据包的所述GFP净负荷区的内容不作任何变更；C、宿节点接收到GFP数据包后，解离出GFP净负荷区并利用GFP净负荷纠错码对GFP净负荷进行检错和纠错；在此基础上，还公开了一种GFP设备。本发明利用增加的GFP净负荷纠错码实现端到端的GFP数据性能监控；利用保留的负荷区纠错码实现逐段的GFP数据性能监控；本发明对两种纠错码的结合使用，简便、有效地实现了对GFP数据性能进行监控，保证了GFP数据能够安全、有效地传送。

摘要： 本发明提供了一种核酸分子和相应的载体、稳定共表达GFP‑Flag‑FXR的细胞及制备方法，所述核酸分子包含表达FXR蛋白的FXR序列和/或相应的互补序列、表达Flag标签的Flag序列和/或相应的互补序列、表达GFP标签的GFP序列和/或相应的互补序列；所述FXR蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO：1，所述Flag标签的氨基酸序列示于SEQ ID NO：2，所述GFP标签的氨基酸序列示于SEQ ID NO：3。该核酸分子能够同时表达GFP标签、Flag标签和FXR蛋白。以GFP为标签，可以在转染过程中实时观察FXR的转染效率，提高了操作效率；小分子的Flag标签，在不改变FXR基本结构的前提下，使其能够用于IP、ChIP等对于蛋白分子构象要求较高的基础研究，能够拓展研究范围。

摘要： 本发明属于胶质瘤技术，具体涉及一种应用CRISPR/Cas9和split GFP双分子荧光互补技术标记胶质瘤干细胞标志物LGR5的方法及试剂盒，克服因缺乏高特异性的抗体，使得现有方法无法准确检测LGR5在GSCs中的内源蛋白表达水平的难题。本发明巧妙的应用CRISPR/Cas9技术用较小的亚基GFP11标记LGR5蛋白，同时构建稳定表达较大亚基GFP1‑10蛋白的GSCs。当两个片段在同一细胞内，这两个部分能够稳定地相互作用，产生具有发光功能的GFP，从而可检测胶质瘤干细胞中的LGR5内源表达水平。其检测方法稳定性好，便于推广。

摘要： 本发明公开了NCre/CCre系统及Cre‑GFP融合蛋白的构建方法与应用。本发明公开的NCre/CCre系统为由序列15所示的Spy‑GNCreaa59与序列17所示的Spy‑GCCreaa60组成的Split‑Spy‑GCre系统，以及由序列3所示的GFP‑NCreaa59与序列5所示的GFP‑CCreaa60组成的Split‑GFP‑Cre系统，Cre‑GFP融合蛋白为序列21所示的蛋白质。本发明的NCre/CCre系统及Cre‑GFP融合蛋白具有高Cre重组酶活性，其中的GFP可用于检测蛋白表达情况，具有很好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一套可以将猪内源OCT4基因替换为GFP的载体系统。通过研究猪内源OCT4翻译起始位点的基因组序列特征，设计了可以将猪内源OCT4替换为GFP的新型载体系统。利用该载体系统，成功实现了原代猪成纤维细胞的基因替换，并通过体细胞核移植在猪的早期胚胎中实现了该报告系统的功能。进而，本发明提供了可以实时监测内源OCT4基因激活程度的新方法，避免了OCT4基因激活带来的基因表达网络的改变。本发明具有创新性强、报告精确、安全性好、操作简便等特点。为后续猪内源OCT4激活的机制研究提供了可靠的技术平台。

摘要： 本发明公开了基于GFP标记的梨火疫病菌监测其在果树组织中的侵染定殖和迁移特征中的应用，涉及植物病理学技术领域。本发明利用梨火疫病菌的GFP标记菌株，针对梨树的枝条、叶片和根组织分别采用针刺、喷雾和灌根法接种，采用对接种的植物组织材料测量病斑，选择培养基分离培养并结合荧光菌落的鉴别，定量检测梨火疫病菌在寄主不同组织中侵染定殖的活菌数量、迁移时间及速率。通过显微影像直观监测病原菌在寄主不同组织内的扩展分布和侵染过程。本发明具有取材方便，可操作性强，简便易行，直观可视，结果准确，检测周期短，重复性好的优点。

摘要： 本发明公开了一种质体转化GFP的转基因烟草在诱集鳞翅目害虫中的应用；所述质体转化GFP的转基因烟草是将GFP基因序列连接到pLD载体上，再利用基因枪法得到。将质体转化GFP的转基因烟草植株在常规烟草田的四周条状种植，以集中引诱鳞翅目害虫成虫产卵和幼虫为害并集中诱杀。本发明将质体转化GFP的转基因烟草运用在田间引诱斜纹夜蛾和甜菜夜蛾等害虫，从而加强对害虫的引诱作用，附以灭杀策略可控制靶标保护田害虫虫口密度，达到绿色防控的目的。