农杆菌

摘要： 【目的】研究新疆海岛棉不同材料愈伤组织培养体系,筛选再生能力强的海岛棉材料,为新疆海岛棉基因工程育种提供参考。【方法】以105份新疆海岛棉为材料,利用改良后的MS培养基对下胚轴共培养,在2,4-D诱导培养基中诱导分化产生愈伤组织,浸染农杆菌介导的红色荧光蛋白,验证转化效果。【结果】海岛棉材料愈伤组织的增殖速率与其基因型有关,改良后的MS共培养基、2,4-D诱导培养基可有效用于新疆海岛棉共培养和胚性愈伤组织增殖;愈伤组织增殖的适宜培养时间为4个月,时间过长不利于其增殖;愈伤增殖速度与转化率呈正相关,增殖快的材料其红色荧光蛋白的转化率较高;筛选出2份增殖快且转化率好的海岛棉材料。【结论】建立了新疆海岛棉胚性愈伤组织培养体系与鉴定方法,筛选出9份愈伤增殖好、且能够有效转化的海岛棉材料。

摘要： 旨在构建一个适用于农杆菌的遗传转化载体,为研究农杆菌T-复合物招募蛋白VBP3的编码基因Atu4856的表达调控机制奠定基础。通过聚合酶链式反应(PCR)获得该编码基因5'端上游可能含有转录活性的DNA片段。用绿色荧光蛋白基因(gfp)和495 bp Atu 4856启动子构成嵌合基因,以绿色荧光蛋白基因(gfp)为报告基因,体外构建启动子探针prset-agfp1,转化大肠杆菌,通过抗生素筛选和对绿色荧光蛋白(GFP)的跟踪观察,最终确定有启动子转录活性的基因片段。结果表明,该载体适用于农杆菌T-复合物招募蛋白VBP3的编码基因Atu4856的表达调控机理的研究。

摘要： 目的:建立一个高效稳定便捷的辣椒遗传转化体系。方法:以辣椒材料BY-1的子叶作为外植体,探索影响辣椒遗传转化体系的因素,包括不同激素浓度、卡那霉素选择压、侵染时间、特美汀水溶液浸泡时间等。结果:在卡那霉素50 mg/L、农杆菌侵染时间30 min以及特美汀水溶液浸泡时间3 min下抑菌效果较好。不定芽诱导:MS+4 mg/L 6-BA+50 mg/L Kan+200μmol/L TMT+3.0%蔗糖+0.8%琼脂、不定芽伸长:MS+4 mg/L 6-BA+50 mg/L Kan+200μmol/L TMT+0.5 mg/L GA_(3)+3.0%蔗糖+0.8%琼脂,不定芽生根:1/2MS+50 mg/L Kan+200μmol/L TMT+3.0%蔗糖+0.8%琼脂。结论:得到了BY-1的遗传转化植株,并建立了该材料的遗传转化体系。

摘要： 构建了 gpd 启动子驱动的双孢蘑菇(Agaricus bisporus)双元表达载体,研究了受体材料、农杆菌浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度和共培养时间对转化效率的影响.结果表明:不同受体的转化效率有较大的差异;以直径2～4 cm 的菌丝球为受体,当农杆菌菌液D600为0.2,侵染时间30 min,共培养AS浓度为200 μmol·L-1,共培养1 d 时,获得抗性转化子的百分率最高,为56.8％.拟转化子的PCR鉴定和GUS(β-glucuronidase,GUS)染色验证外源基因已整合到双孢蘑菇基因组并得到稳定表达.

摘要： 为优化玉米农杆菌介导法的转化体系,以玉米杂交种昌7-2×HiⅡA和郑22×87-1的胚性愈伤组织为受体材料,对转化过程中抗菌素抑制效果、侵染液类型、侵染时间、共培养处理方法等条件进行了优化.结果表明:100 mg/L头孢霉素可完全抑制农杆菌生长,不同侵染液类型对转化率影响不大;侵染转化过程中加入乙酰丁香酮(As)可以明显提高转化效率,加入As的LB和YEP培养基染色率分别较不加As分别提高40.0％和33.3％;侵染时间为10 min时抗性愈伤率最高;在培养基中加1层灭菌滤纸,既能实现共同培养,又能减少农杆菌对愈伤组织的伤害,得到质量好的抗性愈伤.

摘要： 以一株分离自小球藻培养体系中的IAA高产菌-农杆菌(A grobacterium)为研究对象,从生物量积累-抗氧化系统响应-转录组学不同层次揭示了农杆菌对藻细胞生长代谢的影响机制.结果表明,农杆菌与相当浓度水平的外源IA A相比,对小球藻的生长具有更高的促进作用;农杆菌可提高小球藻可溶性糖和蛋白的含量,分别达到纯藻体系的1.34倍和1.43倍;农杆菌可显著提高小球藻SOD活性和降低MDA的含量.转录组学分析结果显示:对基因进行GO功能分类注释,细胞组分包含的unigene最多.与纯藻体系相比,添加细菌体系和添加外源IA A体系分别有246和966个基因显著下调,有1394和1115个基因显著上调,且共同的差异基因有948个.

摘要： 以一株分离自小球藻培养体系中的IAA高产菌-农杆菌(Agrobacterium)为研究对象,从生物量积累-抗氧化系统响应-转录组学不同层次揭示了农杆菌对藻细胞生长代谢的影响机制.结果表明,农杆菌与相当浓度水平的外源IAA相比,对小球藻的生长具有更高的促进作用;农杆菌可提高小球藻可溶性糖和蛋白的含量,分别达到纯藻体系的1.34倍和1.43倍;农杆菌可显著提高小球藻SOD活性和降低MDA的含量.转录组学分析结果显示:对基因进行GO功能分类注释,细胞组分包含的unigene最多.与纯藻体系相比,添加细菌体系和添加外源IAA体系分别有246和966个基因显著下调,有1394和1115个基因显著上调,且共同的差异基因有948个.

摘要： 农杆菌介导的瞬时基因表达因其操作简单、可重复性高和实验成本低而成为研究基因功能、生产活性蛋白的有效方法.该研究以非病毒型(载体Ⅰ)和病毒型二元载体(载体Ⅱ)及两种农杆菌(EHA105、LBA4404)为介导,通过叶片渗透法在5种中草药(甘草、黄芩、黄芪、大黄、板蓝根)叶片中进行报告基因GFP的瞬时表达,并对影响表达的因素进行分析,以明确中药材中适宜瞬时表达技术应用的物种材料.结果 显示:(1)农杆菌在5种中草药叶片中的瞬时转化效率受到载体、菌株和植物物种类型的影响.(2)在所选的5种中草药植物中,与无转化载体的菌株相比,当农杆菌重悬液OD600为0.8、叶片侵染5～7 d时,含非病毒型二元载体的EHA105菌株在甘草叶片中荧光强度最高,大黄次之;含病毒型二元载体的LBA4404菌株在黄芩叶片中GFP荧光表达量最高;含不同载体的不同菌液侵染的甘草、黄芪叶片仅有注射孔处检测出荧光或几乎无荧光蛋白表达,即未向四周扩散表达;在板蓝根叶片中检测出弱荧光或无荧光强度.研究表明,甘草和黄芩植物叶片可作为农杆菌介导基因瞬时表达的材料.

摘要： 转基因作物是利用基因工程技术将其它生物的遗传物质导入作物中,使之具有更好的品质.通常转基因作物可增加作物的产量、改善品质、提高抗旱、抗寒及其它特性,如抗除草剂、抗虫、抗病、抗寒、抗旱等,常见的转基因作物有大豆、玉米、棉花和油菜等.把外源基因导入作物的常用方法是农杆菌介导法(如图1和图2),农杆菌的Ti质粒可以作为载体,Ti质粒上有两个区域,一个是T-DNA区,适合目的基因的导入,能够转移并整合进植物受体的区段。

摘要： 采用含有双元质粒Plasmid4的3个农杆菌菌株(EHA105、GV3101和LBA4404)介导转化鸡纵菌(Termitomyces sp.)菌丝体,对转化体系相关的抗生素质量浓度、受体材料(菌丝球和菌丝块)、农杆菌菌株、农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间、共培养温度进行优化;并通过PCR鉴定转化子、荧光蛋白表达验证转化子的遗传稳定性.结果 表明:潮霉素(hygromycin,Hyg)最适质量浓度为50 μg·mL-1;菌丝球的转化效率优于菌丝块;EHA105菌液D600为0.7、侵染时间30 min、共培养时间48 h、共培养温度26°C时,鸡纵菌遗传转化效率最高.增强型荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的表达结果说明外源GFP基因已经成功整合到鸡纵菌基因组并获得高效稳定表达.构建的鸡纵菌高效转化体系为其后续相关功能基因研究和共生机制解析提供参考.

摘要： 甘蔗梢腐病是甘蔗生长中期的主要真菌病害.目前,研究甘蔗梢腐病病原菌和甘蔗品种的互作机制是防治梢腐病害的重点.本研究运用农杆菌介导的转化方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的双元载体PCA-MBgfp转化到甘蔗梢腐病野生菌株(YN41)中,获得41个转化子.随机挑取7个转化子进行PCR扩增,均可扩增出潮霉素基因目标条带;且转化菌株的菌落形态、生长速度和致病力与野生型菌株相比没有显著差异;单孢继代培养后仍能发出稳定的绿色荧光,并且能够稳定遗传.同时发现60μg/mL潮霉素B能够完全抑制甘蔗梢腐病菌株YN41的生长.以上结果表明GFP基因已成功转化到甘蔗梢腐病菌株YN41中,可为后续甘蔗梢腐病病原菌和甘蔗品种的互作机制研究提供技术支撑.

摘要： 农杆菌普遍存在并且发病严重农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它在自然条件下能够趋化性地感染植物受伤部位,形成巨大的肿瘤状组织.从趋化和附着、vir基因的诱导表达、T-DNA的剪切和转运、T-DNA在植物细胞内的整合与表达等方面研究了农杆菌的致病机。为防治樱桃根癌病，建议防止在起苗、运输、栽植和管理等环节对苗木根系及其茎部的伤害；在苗木定植前对根系进行化学药剂的保护，预防地下害虫、病原菌等对根系造成的损伤；对根系施用含有K84等生防菌株的生物肥料，使生防菌率先占据生态位，阻止农杆菌从伤口侵入；加强肥水管理、改善土壤p H值、土壤黏重度、避免重茬等。

摘要： 本研究以加2、M1(dmy2母本)、加23、加24等8份优良玉米早熟和极早熟自交系为试材,对农杆菌介导玉米胚性愈伤组织离体培养体系进行了优化,旨在建立高效稳定的农杆菌介导玉米遗传转化体系.结果表明该体系为：适合基因型为加2和M1,诱导培养基2,4-D浓度为2mg·L-1,浸染液与共培养培养基AS浓度为150mg·L-1,菌液浓度(OD600=0.4)浸染15min,农杆菌菌株为LBA4404,恢复培养基头孢霉素和羧苄青霉素的浓度分别为350mg·L-1.

摘要： 本研究以东方百合'索邦'组培苗的鳞片为外植体,进行不同处理时间的超声波处理,并统计鳞片共培养后GUS基因的瞬时表达情况.结果表明:在超声波处理农杆菌侵染的条件下,鳞片在40Hz、100W条件下处理1.0min,GUS基因瞬时表达率和抗性植株诱导率都达到最高,均值分别为95.5％和21％.因此,在合适的超声波处理条件下可以显著提高农杆菌侵染百合的遗传转化效率.

摘要： 农杆菌介导法因其快速、简便、成本低等优点是目前大豆遗传转化中最常用的方法。但是，此方法仍存在转化率较低等缺陷。本研究以含pCAMBIA1301质粒的EHA105农杆菌菌株为试验材料并结合前人研究结果，对大豆遗传转化的部分体系做进一步优化，以期提高大豆遗传转化效率，为后续转基因研究提供试验依据。实验结果表明，确定农杆菌菌液培养浓度OD600为0.4～0.6，菌液侵染浓度OD600为0.1～0.2，侵染时间1～4h，侵染时乙酰丁香酮浓度为80～120Lunol/L，共培养时的pH值为5.2～5.6。在此条件下进行大豆遗传转化，侵染后农杆菌污染率低、侵染成功率较高、获得的抗性芽较多，转化率可达8.7%。

摘要： 本研究主要根据转基因技术设计,以高大乔木胡杨和模式植物拟南芥为研究材料.通过花序侵染法,以农杆菌为介导将胡杨大片段基因转移到模式植物拟南芥中.研究中利用SilwetL-77作为侵染液,在不同浓度,不同时间下,将农杆菌中携带的胡杨大片段基因转入到拟南芥中,将获得的转化后的种子进行抗性培养基的筛选,通过对可能的阳性转化子进行DNA的提取,验证胡杨基因是否转入到拟南芥中,将阳性转化子进行抗性培养基筛选,分子检测、并筛选表型变化的突变体.为了更进一步研究胡杨基因组学,必须获得可以稳定遗传且携带胡杨基因的纯合子,还需要继续培养阳性转化子,进行抗性筛选和传代遗传差异筛选.rn 主要研究结果如下:rn (1)最佳农杆菌菌种活化培养条件是YEP液体培养基，活化时间24h时。最佳转化体系为300ulSilwetL-77/L侵染液侵染7min和500ulSilwet L-77/L侵染液侵染lmin。rn (2)在转化的862个克隆株系中，通过抗性培养基筛选并提取了约1500个转化子的DNA，其中大部分表现出阳性，获得了171个株系的阳性转化子。筛选过程中得到的最佳消毒法为酒精消毒法。rn (3)在多次的筛选及后代观察中获得了7个具有表型变化的突变体。rn (4)在针对拟南芥的培养中，做了一定的改动，使得它在特定的环境条件下生长，以便发育强壮利于转化。rn 本文对胡杨基因库的完善具有很大的贡献，也为研究胡杨基因组的作用提供了理论依据。

摘要： 转基因技术已经在果树上得到了广泛的应用,为提高果树的育种效率提供了新的途径.然而枣树的转基因较其他果树起步较晚,技术体系不成熟.本文综述了中国枣树的转基因研究进展，转化方法，以及从受体材料的选择及预培养，农杆菌的种类及纯度，农杆菌菌液浓度，农杆菌的侵染时间及共培养时间，Vir基因的活化对转化效率的影响因素，阐述了枣树转基因的发展方向。

摘要： 茎尖转化法是目前发展较快的农杆菌转化技术.本研究利用茎尖转化法将载体pCambia - 35S - TR1 -EPSPS转入玉米的自交系中,通过草甘膦除草剂筛选得到46株抗除草剂的玉米幼苗,通过PCR验证,这些幼苗中有9株含有外源载体片段.

摘要： 大豆的转基因研究开始于20世纪80年代，自1988年Hinche等…用农杆菌侵染大豆子叶节率先获得转基因大豆植株以来，大豆的遗传转化研究受到广泛的重视。本试验研究了不同载体骨架对大豆子叶节诱导再生率的影响.试验选用2种双价表达载体PB7RWG和pCAMBIA3300(均携带目的基因oxdc1和glu),采用农杆菌介导大豆半种子遗传转化方法,分别转化不同大豆基因型Jack、W82、HC6.结果表明:以PB7RWG为载体骨架的基因,3种基因型诱导效果都比较好,其中Jack的诱导率最高,达到84.87％;以pCAMBIA3300为载体骨架的基因,3种基因型诱导率都比较低,仅为10％左右.因此,不同载体骨架类型可能会明显影响大豆子叶节再生效率和转化效率.

摘要： 利用农杆菌介导法将β1,3-葡聚糖酶基因(BG2)转入美洲黑杨—泰山1号。本研究以叶片为外植体,建立了泰山1号的高效再生体系,并进一步以茎段、叶柄、叶片为受体材料,利用农杆菌介导转化BG2基因。通过抗生素筛选获得大量抗性植株。经对抗性植株的PCR鉴定,获得6个株系的转化植株。

摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体及其应用。所述大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体为含有酵母DNA复制子和酵母筛选标记基因的双元载体。所述应用为大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体在向真菌或植物细胞转化DNA中的应用。本发明的大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体是世界上首次报道的、可以同时在酵母、大肠杆菌和农杆菌内复制、增殖并稳定存在的质粒，该穿梭表达载体可以直接通过农杆菌介导的方式转化真菌或植物细胞，缩短了基因操作的流程和时间，使用方便、工作效率高，且制备过程简便、快速、高效。

摘要： 本发明涉及一种玉米农杆菌转化受体的制备方法及农杆菌介导的玉米转化方法，属于玉米生物技术育种技术领域。本发明提供的玉米农杆菌转化受体的制备方法，包括以下步骤：1)将玉米幼胚进行诱导培养，得到疏松的II型愈伤组织；2)将步骤1)得到的疏松的II型愈伤组织进行酶解，得到感受态II型愈伤组织细胞，即玉米农杆菌转化受体；所述酶解用酶包括纤维素酶和果胶酶。本发明提供的转化受体选用感受态玉米II型愈伤组织，克服了玉米幼胚来源的季节限制，为建立稳定的玉米农杆菌转基因体系奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种建立农杆菌介导东农冬麦1号成熟胚遗传转化的方法，包括：挑选当年籽粒饱满的东农冬麦1号成熟种子，消毒，灭菌，清洗，无菌干燥后取胚，接种在诱导培养基中培养，再置于预培养培养基中进行预培养得到预培养愈伤组织；取农杆菌在YEP培养基划线培养；接着挑取培养得到的农杆菌单菌落接种在液体YEB培养基中培养至对数期，离心得到菌液；将菌液加入侵染培养基中重悬得到混合物料；将预培养愈伤组织浸入混合物料中侵染，无菌干燥，置于含有两层无菌滤纸的培养皿中进行共培养；再置于恢复培养基上进行恢复培养；接着置于分化筛选培养基上进行抗性筛选；再置于生根培养基中进行壮苗生根培养，炼苗，然后将植株移栽到花盆中培养。

摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体及其应用。所述大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体为含有酵母DNA复制子和酵母筛选标记基因的双元载体。所述应用为大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体在向真菌或植物细胞转化DNA中的应用。本发明的大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体是世界上首次报道的、可以同时在酵母、大肠杆菌和农杆菌内复制、增殖并稳定存在的质粒，该穿梭表达载体可以直接通过农杆菌介导的方式转化真菌或植物细胞，缩短了基因操作的流程和时间，使用方便、工作效率高，且制备过程简便、快速、高效。

摘要： 本发明属于农药污染治理技术领域，涉及一株发根农杆菌菌株AT13及其应用。本发明从农田土壤中分离筛选获得一株发根农杆菌菌株AT13，该菌株于2021年9月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61943。该菌株对莠去津、特丁津等三嗪类农药的生物降解效果显著，降解效率高，降解性能稳定，在培养24h后对100mg/L的莠去津降解率达99％以上，并可耐受较高浓度三嗪类农药，可用于莠去津等三嗪类除草剂污染的水体、土壤等污染环境的生物修复，本发明为打破现有治理农药残留污染瓶颈提供了新的开发途径，丰富了农药降解菌的种质资源库，应用前景广阔。

摘要： 本发明公开了一种利用发根农杆菌诱导红豆杉空中生根繁育的技术：1)制备发根农杆菌悬浮液；2)配制基质：取田间土壤﹕珍珠岩﹕营养土﹕蛭石﹕营养液混合配制为基质；3)选取曼地亚红豆杉健硕树种中1‑3年生枝条，用环割刀去除宽度3～6mm的树皮及维管束形成层；4)环割后立即用发根农杆菌悬浮液喷施/涂抹环割伤口处；5)用容器盛装基质并用发根农杆菌悬浮液喷湿基质表面后包裹环割伤口；6)剪掉处理枝上的新枝；7)将枝条扶正；8)根冒出基质5‑8cm时即可以剪取枝条种到田间。本发明诱导曼地亚红豆杉枝干生根(空中生根)，不仅能缩短人工繁育周期，更能为后续可持续、高效利用紫杉醇含量较高的根部奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种农杆菌介导的猕猴桃转化的方法，属于猕猴桃基因工程技术领域，其技术方案要点是：猕猴桃转化的方法包括下胚轴稳定转化和果实瞬时转化；下胚轴稳定转化的步骤如下：S1、猕猴桃种子播种；S2、下胚轴去顶保湿；S3、遗传转化载体构建；S4、农杆菌转化及侵染；S5、转基因植株鉴定；S6、稳定转化下胚轴体系建立；果实瞬时转化的步骤是：A.遗传转化载体构建；B.农杆菌转化；C.农杆菌菌液转入猕猴桃果实；D.瞬时转化果实体系建立。本发明主要用于建立稳定转化下胚轴体系和瞬时转化果实体系，利用该方法成功实现了稳定转化和果实瞬时转化，有效改变猕猴桃遗传转化再生率普遍低下的现状。

摘要： 一种利用农杆菌转化大麦小孢子愈伤组织的方法，使用国产大麦品种‘花22’作为受体材料，通过：1)大麦小孢子提取、诱导培养；2)农杆菌侵染大麦小孢子愈伤组织；3)筛选转化后的愈伤组织；4)分化培养及壮苗培养步骤，选定合适的侵染条件，在分化阶段使用抗除草剂基因作为筛选标记，成功建立了农杆菌侵染大麦小孢子愈伤组织转基因体系，获得转基因阳性植株，阳性率在77％以上。

摘要： 本发明公开了一种烟草的农杆菌遗传转化方法，涉及农杆菌遗传转化方法技术领域，所述方法包括烟草无菌苗的培养、农杆菌介导的烟草叶盘转化和愈伤组织的筛选。通过将烟草遗传转化的外植体选择烟草小苗长大至三四片叶的无菌苗，由于三四片叶幼苗叶片再生能力最强，进而可实现无菌苗免除叶片消毒对叶片的伤害；通过首先将叶片侵染农杆菌前先培养两天，使叶片边缘膨化，进而可减少叶片侵染过程的伤害，提高叶片的被侵染效率；通过将农杆菌选择侵染的浓度是D600nm在1.0左右，时间为10min，可试下侵染率高，且对叶片伤害较小的效果，达到了最好的侵染效果。

摘要： 本发明公开了一种建立农杆菌介导中国水仙高效遗传转化体系的方法，包括以下步骤：植物材料预处理、外植体消毒、愈伤组织诱导、侵染液制备、农杆菌侵染、共培养和筛选培养以及GUS染色检测。本发明以中国水仙子房为转化材料，通过农杆菌类型和愈伤组织预培养时间及卡那霉素浓度的优化，建立了中国水仙的高效遗传转化体系，且转化效率高，为中国水仙种植资源创制及品种改良奠定了基础。