酶联免疫斑点法

摘要： 目的 探讨酶联免疫斑点法(ELISPOT)与酶联免疫吸附法(ELISA)对结核病的诊断价值,旨在为临床诊断疾病提供依据.方法 选择我院收治的疑似结核病患者共80例作为研究对象,均行结核菌培养,同时所有患者均进行γ干扰素释放试验,并分别使用ELISPOT与ELISA法检测,以结核菌培养结果为"金标准",分析两种检测方法诊断结核病的效能.结果 本研究80例患者中,结核菌培养结果显示,阳性患者74例,阴性患者6例;以结核菌培养结果为"金标准",ELISPOT诊断结核病的准确度为91.25％,灵敏度为91.89％,特异度为83.33％,阳性预测值为98.55％,阴性预测值为45.45％略高于ELISA法(86.25％、87.84％、66.67％、97.01％、30.77％),无显著差异(P>0.05).结论 ELISPOT与ELIAS法诊断该疾病均具有较高的临床价值,其中ELISPOT诊断准确度略高,但ELIAS法适合在基层推广应用.

摘要： 目的探讨酶联免疫斑点法(ELISPOT)与酶联免疫吸附法(ELISA)对结核病的诊断价值,旨在为临床诊断疾病提供依据.方法选择我院收治的疑似结核病患者共80例作为研究对象,均行结核菌培养,同时所有患者均进行γ干扰素释放试验,并分别使用ELISPOT与ELISA法检测,以结核菌培养结果为"金标准",分析两种检测方法诊断结核病的效能.结果本研究80例患者中,结核菌培养结果显示,阳性患者74例,阴性患者6例;以结核菌培养结果为"金标准",ELISPOT诊断结核病的准确度为91.25%,灵敏度为91.89%,特异度为83.33%,阳性预测值为98.55%,阴性预测值为45.45%略高于ELISA法(86.25%、87.84%、66.67%、97.01%、30.77%),无显著差异(P>0.05).结论ELISPOT与ELIAS法诊断该疾病均具有较高的临床价值,其中ELISPOT诊断准确度略高,但ELIAS法适合在基层推广应用.

摘要： 目的 探讨酶联免疫斑点法联合肺泡灌洗液结核菌Xpert检测在涂阴肺结核的诊断价值.方法选择2015年8月至2016年8月该院收治的68例涂阴肺结核患者作为研究对象,采用酶联免疫斑点法及肺泡灌洗液结核菌Xpert检测,将酶联免疫斑点法及结核菌Xpert检测结果与痰培养结果相比,分析其对涂阴肺结核的诊断价值.结果 肺结核患者临床表现以夜间盗汗、发热、咳嗽、咳痰为主;X射线、C T 检查结果以斑片影云絮影多见.联合检查对于不同类型肺结核的诊断正确率明显高于单独采用酶联免疫斑点法或结核菌Xpert检测,差异有统计学意义(P＜0.05).酶联免疫斑点法诊断的灵敏度为88.46%,特异度为69.05%,准确度为76.47%;结核菌Xpert检测诊断的灵敏度为80.77%,特异度为52.38%,准确度为63.23%;联合检测诊断的灵敏度为92.30%,特异度为78.57%,准确度为83.82%;联合检测对诊断涂阴肺结核的灵敏度、特异度及准确度均有显著提高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 酶联免疫斑点法联合肺泡灌洗液结核菌Xpert检测对诊断涂阴肺结核具有重要价值,是一种简便、快速、高效的检查方法.%Objective To investigate the diagnostic value of enzyme-linked immunosorbent assay combined with bronchoalveolar lavage fluid tuberculosis Xpert detection in smear negative pulmonary tuberculosis. Methods From August 2015 to August 2016 ,68 cases of smear negative pulmonary tuberculosis ,admitted in the hospital ,were enrolled in the study.Enzyme-linked immunosorbent assay and bronchoalveolar lavage fluid tuberculosis Xpert detection were used in the study.The results of enzyme-linked immunosorbent assay and tuberculosi sXpert detection were compared with sputum culture results ,and their diagnostic values for smear negative pulmonary tuberculosis were analyzed.Results The clinical manifestations of pulmonary tuberculosis were mainly nocturnal sweating ,fever ,cough and expectoration.The results of X-ray and CT examinations showed that the lesions were mostly patchy or in cloudy opacity.The diagnostic accuracy of the combined ex-amination for different types of pulmonary tuberculosis was significantly higher than single detection of en-zyme-linked immunosorbent assay or tuberculosis Xpert detection ,and the difference was statistically signifi-cant (P＜ 0.05).The sensitivity of enzyme-linked immunosorbent assay was 88.46%,the specificity was 69.05%,and the accuracy was 76.47%;the sensitivity of tuberculosis Xpert detection was 80.77%,the speci-ficity was 52.38%,and the accuracy was 63.23%;the sensitivity of the combined detection was 92.30%,the specificity was 78.57%,and the accuracy was 83.82%;the sensitivity ,the specificity and the accuracy of the combined detection for diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis were significantly increased ,and the difference was statistically significant (P＜0.05).Conclusion The enzyme-linked immunosorbent assay combined with bronchoalveolar lavage fluid tuberculosis Xpert detection has important value in the diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis.It is a simple ,rapid and effective method of examination.

摘要： 目的 探究宫颈鳞癌(CSCC)患者外周血中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)L1和L2多肽特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫反应水平及其与临床特征相关性,为其免疫治疗提供实验依据.方法 选择2014年3月-2016年7月新疆医科大学附属肿瘤医院由病理明确诊断的宫颈鳞癌患者118例,采用酶联免疫斑点法(ELLSPOT)检测患者外周血单个核细胞(PBMC)经合成的HPV16 L1和L2抗原重叠肽刺后,分泌干扰素γ(IFN-γ)的CTL细胞的频率及强度,并分析其与临床特征之间的相关性.结果 (1)118例宫颈鳞癌患者外周血中HPV16L1和L2特异性CTL免疫应答阳性率分别为31.4％和16.9％;平均反应强度分别为36.3及30.3 SFC/106 PBMC.(2) HPV16 L1和L2特异性抗原多肽反应频率在临床分期Ⅰ～Ⅱ期组均高于Ⅲ～Ⅳ期组(P=0.003,P=0.002);在HPV16阳性组均高于阴性组(P=0.002,P=0.015),余临床特征比较差异均无统计学意义.(3) HPV16 L1特异性抗原多肽反应强度在组织学类型中,菜花型＞空洞型＞结节型＞其他类型(P =0.019);HPV16 L2特异性抗原多肽反应强度≤56岁组高于＞56岁组(P =0.012),余临床特征比较差异均无统计学意义.结论 宫颈鳞癌患者外周血中,HPV16 L1和L2抗原肽可以诱导产生特异性CTL反应,并与HPV16感染、临床分期和组织学类型等临床特征有一定相关性,有可能成为宫颈鳞癌免疫治疗的潜在靶点.

摘要： 目的 检测食管鳞癌患者婆罗双树样基因4 (SALL4)和黑色素瘤抗原A1 (MAGE-A1)特异性细胞免疫水平,探讨其患者的特异性免疫应答及其与临床特征的相关性,为食管鳞癌的临床免疫治疗潜在靶点的选择提供实验依据.方法 收集2015年4月-2016年10月新疆医科大学附属肿瘤医院放疗中心收治的食管鳞癌初治患者51例,用合成的肿瘤睾丸抗原(CTA)中的SALL4和MAGE-A1特异性抗原表位肽刺激患者外周血单个核细胞(PBMC),采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌γ干扰素(IFN-γ)细胞的频率及强度,并分析其与食管鳞癌患者临床特征的关系.结果 食管鳞癌患者外周血中,SALL4和MAGE-A1特异性CTL反应频率分别为29.4％(15/51)和27.5％(14/51),反应强度分别为78.0、5 5.7 SFC/106 PBMCs;N0～1组MAGE-A1特异性CTL反应频率(37.5％)明显高于N2～3组(10.5％) (P =0.037);SALL4特异性CTL免疫反应频率与MAGE-A1呈现弱的正相关性(r=0.471,P=0.000).结论 食管鳞癌患者可对肿瘤特异性抗原SALL4和MAGE-A1多肽产生特异性T细胞免疫反应,并可为食管鳞癌免疫治疗的临床应用提供线索.

摘要： 目的 探讨食管鳞癌患者肿瘤特异性抗原(TSA)中纽约食管鳞状上皮癌抗原1(NY-ESO-1)、滑膜肉瘤X断裂点基因2(SSX-2)和黑色素瘤抗原A3 (MAGE-A3)的特异性CTL免疫应答差异及其临床相关性及其在食管癌免疫治疗中的应用价值.方法 收集51例新疆医科大学附属肿瘤医院2015年4月-2016年10月确诊食管鳞癌初治患者,用合成的NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3特异性CTL抗原表位肽刺激食管鳞癌患者的外周血单个核细胞(PBMCs),采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌γ-干扰素(IFN-γ)的CTL细胞频率及强度,并分析其与食管鳞癌患者临床特征的关系.结果 食管鳞癌患者外周血中NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3特异性CTL反应频率分别为19.6％(10/51)、9.8％(5/51)和15.7％(8/51),反应强度分别为36.33、36.00和45.83SFC/106 PBMCs;其三者的特异性CTL反应频率及强度在食管鳞癌临床特征中的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 食管鳞癌患者可对肿瘤特异性抗原NY-ESO-1、SSX-2和MAGE-A3多肽产生特异性T细胞免疫反应,是否可作为食管癌免疫治疗靶点的指标尚需进一步研究.

摘要： Objective:To explore the type of cytokine (IL-2 or IL-7) and its most optimal concentration regarding the improvement of the signal-to-noise ratio of glutamic acid decarboxylase 65 (GAD65) in enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay in Type 1 diabetic (T1DM) patients.Methods:Twenty T1DM patients (Group A) and sixteen healthy controls matched with age and sex (Group B) were enrolled in our study,and their peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated by Ficoll method.GAD65,internal control and Pediacel served as "five-for-one" vaccine were selected as the stimulating antigen.Different concentrations of IL-2 [0 U/mL (Group 1),0.5 U/mL (Group 2),2.5 U/mL (Group 3) and 12.5 U/mL (Group 4)] were added to the culture system.The CD4+ T cells of secreting interferon-gamma (IFN-γ) in the above groups were determined by ELISPOT.The spots number,net values and stimulating index (SI) were compared in GAD65 (signal) and internal control (background).Next,another 21 T1DM patients (Group C) and 12 healthy controls matched with age and sex (Group D) were enrolled,and the specific T cell response to the GAD65 antigen was detected.The net values and SI were compared between the best optimal concentration of IL-2 (2.5 U/mL,Group 5) and IL-7 (0.5 ng/mL,Group 6).Results:1) After adding IL-2 into the Group A,the amount of GAD65 reactive T cells in different groups increased compared with Group A1,while the background in the internal control also increased gradually with the increased concentration of IL-2.There was no significant difference in net value (signal-noise) in the different concentration between the Group A3 and the Group A4 (P＞0.05).The SI in the Group A3 (2.8),the highest one,was significantly higher than that in the Group B3 (1.3) (P＜0.05).2) Although the number of GAD65 spots in the Group C6 and the Group D6 were slightly higher than that in the Group C5 and the Group D5,respectively,the background in the Group C6 and the Group D6 also increased,without statistical significance (P＞0.05).The mean net value spot and SI in the Group C5 (net value:5.5;SI:2.8) were both significantly higher than those in the Group C6 (net value:4.3;SI:1.8) (bothP9＜0.05).Conclusion:The concentration of 2.5 U/mL for IL-2 is proved to be the best optimal concentration for GAD65 specific T-cell responses in ELISPOT in patients with T1DM.IL-2 is much better than IL-7 in improvement of the SI in the ELISPOT.%目的:探讨何种细胞因子(IL-2或IL-7)及其最佳浓度能够最有效地改善酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot,ELISPOT)检测1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)特异性T细胞反应的效率.方法:选取20例1型糖尿病患者(A组)及年龄和性别均匹配的16例正常对照者(B组);Ficoll法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以人GAD65、内对照、巴斯德五合一疫苗为抗原,加入不同浓度的IL-2[0 U/mL(1组)、0.5 U/mL(2组)、2.5 U/mL(3组)和12.5U/mL(4组)],ELISPOT检测上述各浓度组分泌干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)的CD4+T细胞,比较各浓度组的GAD65孔(信号)、内对照孔(背景)的斑点数、斑点净值以及刺激指数(即信噪比,stimulating index,SI);另选取21例1型糖尿病患者(C组)及12例正常对照者(D组),检测针对GAD65抗原的特异性T细胞反应,比较联合IL-2(2.5 U/mL,上述实验已证明其为最优浓度,5组)与联合IL-7(0.5 ng/mL,6组)所产的斑点数和SI.结果:1)A且在加入IL-2刺激后,各浓度组中GAD65反应性T细胞数均较A1组增高,而各浓度下的内对照孔的斑点数亦呈比例升高.各浓度组斑点净值比较显示:A4组与A3组差异无统计学意义(P＞0.05),而SI的比较则提示A3组最高;且仅A3组的SI(2.8)高于B3组(1.5),差异有统计学意义(P＜0.05).2)C6组及D6组的GAD65孔斑点数均分别略高于C5组及D5组,且C6组及D6组的斑点数增幅也分别高于C5组及D5组,但差异均无统计学意义(P＞0.05).C5组的斑点净值(5.5)和SI(2.8)均显著高于C6组的斑点净值(4.3)和SI(1.8),差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:2.5 U/mL为ELISPOT检测1型糖尿病患者GAD65特异性T细胞反应的IL-2最佳浓度;IL-2较IL-7更有利于改善ELISPOT检测的SI.

摘要： 探讨酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测健康人群及鼻咽癌患者放疗前后EBNA3A、3B及3C特异性细胞免疫水平为免疫治疗靶点的选择及放疗前后免疫状态的判定提供实验室依据.

摘要： 目的：通过随机双盲对照试验的方法,评价10μg和20μg重组CHO乙肝疫苗应用于成人后细胞免疫效果.rn 方法：选择18～45岁未接种过乙肝疫苗、乙肝五项指标均为阴性的642名成人作为研究对象,随机分为两组,按照0-1-6月的接种程序分别接种10μg和20μg重组CHO乙肝疫苗.每个研究对象在接种第3针1个月后采血,以雅培化学发光的方法检测抗-HBs滴度值,以评价体液免疫反应.选择153名研究对象采血分离淋巴细胞,以酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测体外刺激后淋巴细胞所产生的细胞因子IL-4、IFN-γ的斑点数,以评价细胞免疫反应.rn 结果：10μg和20μg两个剂量组抗-HBs阳转率分别为88.8％ (95％CI: 85.4％～92.2％)和95.3％ (95％CI: 93.0％～97.6％).20μg组IL-4免疫斑点数显著高于10μg组,并且随着抗-HBs水平升高,IL-4斑点水平也显著升高,两者呈正相关(Spearman秩相关系数=0.538,P＜0.0001);IFN-γ斑点数在两组中差异无统计学意义.rn 结论:20μg重组CHO乙肝疫苗体液免疫及细胞免疫效果均优于10μg重组CHO乙肝疫苗,成人乙肝免疫预防应优先选择20μg乙肝疫苗.

摘要： ElISPOT检测全名为enzyme-linkedimmunospot即酶联免疫斑点法,是近年来逐步建立起来的一种通过检测细胞因子评价T淋巴细胞功能和特异性的新方法.它能够对T淋巴细胞直接进行检测,不需要进行体外扩增,特异性和敏感性都有所提高,本研究用这一新方法检测9例HCV阳性患者外周血单个核细胞PBMC对5条HCVT细胞表位的反应性,为构建HCV治疗性疫苗免疫原提供重要参考。

摘要： 目的：比较甲乙型肝炎联合疫苗与单价重组乙型肝炎疫苗、甲型肝炎灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答特点。方法：4组小鼠 (BALB/c，H-2d)皮下接种甲乙型肝炎联合疫苗、单价重组乙型肝炎疫苗及甲型肝炎灭活疫苗，分别于免疫后14d分离脾单个核细胞 (MNC)，应用酶联斑点法 (ELISPOT) 测定MNCs体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数 (SFC)。刺激物为乙肝多肽或HBsAg、HAV。并分别于免疫后14d、28d检测小鼠血清甲肝抗体和抗-HBs水平。结果：应用ELISPOT法，甲乙肝联合疫苗免疫小鼠后诱导乙肝抗原特异性IFN-γ和IL-2分泌水平均高于单价乙肝疫苗组；联合疫苗诱导甲肝特异性IFN-γ分泌水平也高于单价甲肝疫苗组。联合疫苗组于免疫14d、28d诱导的抗-HBs几何均值(GMT)均高于乙肝疫苗组(93.6mIU/ml、26.5 mIU/ml ；476.8mIU/ml、237.8 mIU/ml)。结论：甲乙肝联合疫苗诱导抗原特异性细胞免疫应答反应优于单价乙肝疫苗和甲肝灭活疫苗；且在诱导抗-HBs水平方面，甲乙肝联合疫苗亦优于单价乙肝疫苗。

摘要： 目的：比较甲乙型肝炎联合疫苗与单价重组乙型肝炎疫苗、甲型肝炎灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答特点。方法：4组小鼠 (BALB/c，H-2d)皮下接种甲乙型肝炎联合疫苗、单价重组乙型肝炎疫苗及甲型肝炎灭活疫苗，分别于免疫后14d分离脾单个核细胞 (MNC)，应用酶联斑点法 (ELISPOT) 测定MNCs体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数 (SFC)。刺激物为乙肝多肽或HBsAg、HAV。并分别于免疫后14d、28d检测小鼠血清甲肝抗体和抗-HBs水平。结果：应用ELISPOT法，甲乙肝联合疫苗免疫小鼠后诱导乙肝抗原特异性IFN-γ和IL-2分泌水平均高于单价乙肝疫苗组；联合疫苗诱导甲肝特异性IFN-γ分泌水平也高于单价甲肝疫苗组。联合疫苗组于免疫14d、28d诱导的抗-HBs几何均值(GMT)均高于乙肝疫苗组(93.6mIU/ml、26.5 mIU/ml ；476.8mIU/ml、237.8 mIU/ml)。结论：甲乙肝联合疫苗诱导抗原特异性细胞免疫应答反应优于单价乙肝疫苗和甲肝灭活疫苗；且在诱导抗-HBs水平方面，甲乙肝联合疫苗亦优于单价乙肝疫苗。

摘要： 目的：比较甲乙型肝炎联合疫苗与单价重组乙型肝炎疫苗、甲型肝炎灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答特点。方法：4组小鼠 (BALB/c，H-2d)皮下接种甲乙型肝炎联合疫苗、单价重组乙型肝炎疫苗及甲型肝炎灭活疫苗，分别于免疫后14d分离脾单个核细胞 (MNC)，应用酶联斑点法 (ELISPOT) 测定MNCs体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数 (SFC)。刺激物为乙肝多肽或HBsAg、HAV。并分别于免疫后14d、28d检测小鼠血清甲肝抗体和抗-HBs水平。结果：应用ELISPOT法，甲乙肝联合疫苗免疫小鼠后诱导乙肝抗原特异性IFN-γ和IL-2分泌水平均高于单价乙肝疫苗组；联合疫苗诱导甲肝特异性IFN-γ分泌水平也高于单价甲肝疫苗组。联合疫苗组于免疫14d、28d诱导的抗-HBs几何均值(GMT)均高于乙肝疫苗组(93.6mIU/ml、26.5 mIU/ml ；476.8mIU/ml、237.8 mIU/ml)。结论：甲乙肝联合疫苗诱导抗原特异性细胞免疫应答反应优于单价乙肝疫苗和甲肝灭活疫苗；且在诱导抗-HBs水平方面，甲乙肝联合疫苗亦优于单价乙肝疫苗。

摘要： 目的：比较甲乙型肝炎联合疫苗与单价重组乙型肝炎疫苗、甲型肝炎灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答特点。方法：4组小鼠 (BALB/c，H-2d)皮下接种甲乙型肝炎联合疫苗、单价重组乙型肝炎疫苗及甲型肝炎灭活疫苗，分别于免疫后14d分离脾单个核细胞 (MNC)，应用酶联斑点法 (ELISPOT) 测定MNCs体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数 (SFC)。刺激物为乙肝多肽或HBsAg、HAV。并分别于免疫后14d、28d检测小鼠血清甲肝抗体和抗-HBs水平。结果：应用ELISPOT法，甲乙肝联合疫苗免疫小鼠后诱导乙肝抗原特异性IFN-γ和IL-2分泌水平均高于单价乙肝疫苗组；联合疫苗诱导甲肝特异性IFN-γ分泌水平也高于单价甲肝疫苗组。联合疫苗组于免疫14d、28d诱导的抗-HBs几何均值(GMT)均高于乙肝疫苗组(93.6mIU/ml、26.5 mIU/ml ；476.8mIU/ml、237.8 mIU/ml)。结论：甲乙肝联合疫苗诱导抗原特异性细胞免疫应答反应优于单价乙肝疫苗和甲肝灭活疫苗；且在诱导抗-HBs水平方面，甲乙肝联合疫苗亦优于单价乙肝疫苗。

摘要： 目的：比较甲乙型肝炎联合疫苗与单价重组乙型肝炎疫苗、甲型肝炎灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答特点。方法：4组小鼠 (BALB/c，H-2d)皮下接种甲乙型肝炎联合疫苗、单价重组乙型肝炎疫苗及甲型肝炎灭活疫苗，分别于免疫后14d分离脾单个核细胞 (MNC)，应用酶联斑点法 (ELISPOT) 测定MNCs体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数 (SFC)。刺激物为乙肝多肽或HBsAg、HAV。并分别于免疫后14d、28d检测小鼠血清甲肝抗体和抗-HBs水平。结果：应用ELISPOT法，甲乙肝联合疫苗免疫小鼠后诱导乙肝抗原特异性IFN-γ和IL-2分泌水平均高于单价乙肝疫苗组；联合疫苗诱导甲肝特异性IFN-γ分泌水平也高于单价甲肝疫苗组。联合疫苗组于免疫14d、28d诱导的抗-HBs几何均值(GMT)均高于乙肝疫苗组(93.6mIU/ml、26.5 mIU/ml ；476.8mIU/ml、237.8 mIU/ml)。结论：甲乙肝联合疫苗诱导抗原特异性细胞免疫应答反应优于单价乙肝疫苗和甲肝灭活疫苗；且在诱导抗-HBs水平方面，甲乙肝联合疫苗亦优于单价乙肝疫苗。

摘要： 目的：比较甲乙型肝炎联合疫苗与单价重组乙型肝炎疫苗、甲型肝炎灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答特点。方法：4组小鼠 (BALB/c，H-2d)皮下接种甲乙型肝炎联合疫苗、单价重组乙型肝炎疫苗及甲型肝炎灭活疫苗，分别于免疫后14d分离脾单个核细胞 (MNC)，应用酶联斑点法 (ELISPOT) 测定MNCs体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点形成细胞数 (SFC)。刺激物为乙肝多肽或HBsAg、HAV。并分别于免疫后14d、28d检测小鼠血清甲肝抗体和抗-HBs水平。结果：应用ELISPOT法，甲乙肝联合疫苗免疫小鼠后诱导乙肝抗原特异性IFN-γ和IL-2分泌水平均高于单价乙肝疫苗组；联合疫苗诱导甲肝特异性IFN-γ分泌水平也高于单价甲肝疫苗组。联合疫苗组于免疫14d、28d诱导的抗-HBs几何均值(GMT)均高于乙肝疫苗组(93.6mIU/ml、26.5 mIU/ml ；476.8mIU/ml、237.8 mIU/ml)。结论：甲乙肝联合疫苗诱导抗原特异性细胞免疫应答反应优于单价乙肝疫苗和甲肝灭活疫苗；且在诱导抗-HBs水平方面，甲乙肝联合疫苗亦优于单价乙肝疫苗。

摘要： 新发传染病(EID)是指在过去20年中发病率增加或在不久的将来可能增加的人类传染病，包含“回潮”的老传染病和新出现的传染病。本文从原理、具体实验操作、技术优势和在新发传染病疫苗研究中的应用等几方面对ELISPOT技术进行了介绍。

摘要： 本发明公开了一种基于酶联免疫斑点试验试剂盒计算ESAT‑6抗原孔平均斑点面积的方法，该方法首先将收集待测的外周血单个核细胞悬液加入包被有IFN‑γ抗体的微孔培养板内；并向待测的外周血单个核细胞悬液中加入ESAT‑6蛋白液培养，再向对应的微孔内加入IFN‑γ抗体酶标工作液孵育；每孔加入底物室温避光孵育、干燥；使用斑点计数仪计算微孔板内斑点形成细胞的平均斑点面积；本发明的方法通过ELISPOT技术检测结核特异性抗原ESAT‑6刺激条件下外周血单个核细胞释放IFN‑γ并通过显色形成的斑点的平均斑点面积，从而指导医生对活动性结核患者和潜伏性结核患者进行鉴别诊断。

摘要： 一种测定病毒滴度的酶免疫斑点法,它包括以下几个步骤:单层细胞准备,病毒稀释,感染细胞培养、固定、封闭,加入该病毒的特异性抗体,加酶标记的第二抗体,加酶底物、数分钟后有病变的部位即出现染色斑点,本方法通过引入酶免疫技术使微量板上出现的CPE部位形成特异的染色斑点,从而可用肉眼直接判定各孔是否出现CPE,免去显微镜下观察CPE造成的工作量增加,使结果客观、更直观,便于记录,快速,操作误差小,易于推广使用。

摘要： 本发明公开了一种酶联免疫斑点印迹的自身免疫检测试剂盒及其操作流程，酶联免疫斑点印迹的自身免疫检测试剂盒包括盒体、靶标分子及试剂，所述试剂盒是一种基于酶联免疫斑点印迹与富集相结合的技术，用于检测自身免疫功能的缺陷导致的血糖异常的试剂盒。酶联免疫斑点印迹的自身免疫检测试剂盒的操作流程包括制备靶标分子、制备靶标分子的覆被装置、制备细胞裂解液、制备抗人免疫细胞抗体及免疫细胞富集、制备扩增培养基、检测靶标分子及临床样品检测数据分析。本发明是一种免疫细胞富集技术结合具有高灵敏度和高特异性的酶联免疫斑点印迹技术，及对相应的靶标分子的精准分析，使得对的检测特异性升高和假阳性几率降低。

摘要： 本发明公开了酶联免疫斑点实验在氨苯砜综合征诊断中的应用。本发明提供了用于检测外周血单个核细胞在氨苯砜刺激下IFN‑γ和/或IL‑5释放Elispot实验是否为阳性的物质在制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用；所述物质包括如下：1)作为刺激药物的氨苯砜；2)获取受试者外周血单个核细胞的试剂和/或设备；3)用于检测IFN‑γ和/或IL‑5释放Elispot实验是否为阳性的试剂和/或设备。本发明成功建立了联合IFN‑γ/IL‑5释放Elispot实验，为氨苯砜综合征的诊断提供了有效的技术手段。

摘要： 本发明公开的一种酶联免疫斑点检测试剂盒，包括实验孔：包含anti‑CD28、IL‑2的培养基，多肽，细胞悬液；阴性对照：包含anti‑CD28、IL‑2的培养基，DMSO，细胞悬液；阳性对照：包含anti‑CD28、IL‑2的培养基，PMA+Ionomycin，细胞悬液；标准曲线：包含anti‑CD28、IL‑2的培养基，各浓度anti‑CD3，细胞悬液。其优点在于，提高酶联免疫斑点检测方法的灵敏度，并确保能够得到稳定可靠的检测结果。

摘要： 本发明属于电子医疗器械技术领域，具体的说是一种酶联免疫斑点分析装置及方法；包括底座和安装在底座一侧的支撑架，所述底座顶部设置有面光源，所述所述面光源上方设置有支撑台；本发明通过在试剂盒内安装有收调装置，只需要在某一时间段的初始时顺时针转动限位管，限位管带动动隔板靠近静隔板，将显色反应后漂浮在培养液表面的斑点拨动开，分隔板对先前形成的斑点进行遮挡，然后在接下来的一段时间内，再对动隔板与静隔板之外形成的斑点进行取景拍摄，无需再进行额外的比对，提高了分析效率；同时通过在相邻的动隔板与静隔板的间隙处滴入不同溶度的抗体试剂，降低了使用时的成本，适应不同测试条件的需要。

摘要： 本实用新型公开了一种酶联免疫斑点分析主机装置，涉及医疗设备技术领域，包括：底座；支撑架，两个所述支撑架安装于所述底座的顶端；支撑板，所述支撑板安装于所述支撑架的外壁一侧；相机。本实用新型通过设置第一传动机构和第二传动机构，实现通过启动第一电机带动，在限位座与第一限位轨的限位滑动作用下，第一连接座带动安装座移动，从而使安装座带动相机左右移动，通过启动第二电机使第二皮带转动带动第二连接座移动的同时，第二连接座带动安装板限位移动，安装板带动孔板载台移动的同时，带动检测试剂盒前后移动，从而通过以上零件的相互配合、协调运动，使相机可以对准检测试剂盒的个小孔中任何一个进行拍摄，从而大大提高效率。

摘要： 本发明涉及一种利用多重信号放大系统进行酶联免疫斑点法的检测的方法，包括下述步骤：(1)固相基质上固定包被抗体或者抗原；(2)加入待检测细胞，或同时加入待检测细胞和细胞刺激物，作用一段时间；(3)加入抗体‑DNA/RNA连接链或者加入抗原‑DNA/RNA连接链，作用一定时间；(4)加入DNA/RNA放大链，作用一定时间；(5)加入连接有修饰物a的DNA/RNA检测链，反应一定时间；(6)加入连接有结合物b的酶；(7)加入酶的底物；(8)定量分析固相基质上所形成的具有检测信号的免疫斑点的数量。本发明检测方法具有信号多重放大、检测限低、灵敏度更高、操作简便等优点。

摘要： 本发明涉及一种利用多重信号放大系统进行酶联免疫斑点法的检测的方法，包括下述步骤：(1)固相基质上固定包被抗体或者抗原；(2)加入待检测细胞，或同时加入待检测细胞和细胞刺激物，作用一段时间；(3)加入抗体‑DNA/RNA连接链或者加入抗原‑DNA/RNA连接链，作用一定时间；(4)加入DNA/RNA放大链，作用一定时间；(5)加入连接有修饰物a的DNA/RNA检测链，反应一定时间；(6)加入连接有结合物b的酶；(7)加入酶的底物；(8)定量分析固相基质上所形成的具有检测信号的免疫斑点的数量。本发明检测方法具有信号多重放大、检测限低、灵敏度更高、操作简便等优点。

摘要： 利用酶联免疫斑点法的结核效应T淋巴细胞检测方法，步骤包括：采集肝素锂抗凝外周血；离心后，吸取中间云雾状的单个核细胞层到离心管；离心后，弃去上清液，加入RPMI1640离心；弃去上清液，加入AIM-V培养液；制备稀释细胞工作液：向培养板中加入AIM-V培养液、抗原A、抗原B、阳性对照；用无菌PBS洗涤4遍，再以蒸馏水冲洗终止反应，放室温干燥培养板，用放大镜观察结果，进行斑点计数。本发明通过离心吸取红细胞与血浆之间的白细胞层提高淋巴细胞的数量，从而对抗凝全血中单个核细胞的收集做到最大效应的收集，显著提高了结核筛查的临床诊断应用效率和范围。