摘要:在哺乳动物细胞中建立RNA干扰技术,可以用于研究某些特定基因的功能,从而可以解决某些疾病的发病机制,同时对疾病尤其是对肿瘤的治疗也有一定的应用价值,并且RNA干扰技术所使用的剂量比反义寡核苷酸剂量小.如果对小双链RNA中改变1个核苷酸,就可使该RNAi靶向基因沉默作用消失,这样,就有可能将这一技术用于抑制某些过度表达基因的表达,而不影响正常基因的表达,所以在肿瘤的基因治疗方面,RNA干扰技术具有深远的意义和广阔的应用前景.目前认为bcl-2基因是一种新类型的癌基因,它不影响细胞的增殖,而是作为细胞凋亡的一个潜在抑制剂调节细胞的死亡.最近研究结果证实,抑制bcl-2基因的表达可以被用来治疗恶性肿瘤.为了使bcl-2基因在恶性肿瘤细胞中表达降低,促进肿瘤细胞的凋亡,就必须使bcl-2基因在转录或翻译的任何一个环节被阻断,所以,通过这些转录形成的小双链RNA可以靶向作用于bcl-2基因的mRNA,阻断其翻译的过程,达到使bcl-2基因表达降低的结果,从而实现治疗肿瘤的目的.在本研究中,我们选择了人bcl-2mRNA的一段基因,设计合成了其siRNA(siRNA-bcl-2);并构建了含有该siRNA基因的,可以表达产生发夹状bcl-2siRNA的表达质粒(pSilencer3.1H1-bcl-2).对siRNA-bcl-2以及可以产生发夹状bcl-2siRNA的pSilencer3.1H1-bcl-2进行了其抑制肿瘤细胞中bcl-2蛋白的表达及促进细胞凋亡的实验,发现siRNA-bcl-2和pSilencer3.1H1-bcl-2在体外都可以显著地抑制肿瘤细胞中bcl-2基因的表达,并可以明显促进细胞的凋亡.在pSilencer3.1H1-bcl-2的抑制小鼠H22肝癌细胞的在体实验中,当pSilencer3.1H1-bcl-2的量为0.8mg/只/天,连续尾静脉注射7天后,实验小鼠的肿瘤的抑瘤率为66.5﹪,并发现pSilencer3.1H1-bcl-2可以明显促进H22细胞的凋亡.在本研究中,我们还构建了含可以产生bcl-2siRNA的双向表达的载体,这为siRNA的研究提供了一些有益的探索.